猪瘟病毒及疫苗应用研究概况

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青海畜牧兽医杂志　2010年第40卷第4期(总第208期)猪瘟病毒及疫苗应用研究概况

衣翠玲

(青海省畜牧兽医科学院,西宁,810016)

中图分类号:S859.79 文献标识码:A 文章编号:100327950(2010)0420050202

猪瘟(classical s wine fever,CSF)最早发生于1833年美国的俄亥俄州,初称猪霍乱,1903年被证明病原体是一种病毒,欧洲则称之为古典猪瘟。我国最早1925年在东南大学农科有免疫血清方面的研究报告。猪瘟是世界范围内猪的最严重的疾病之一,因而被O I E(国际兽医局)列为A类传染病。其病原为猪瘟病毒(CSF V)。以出血和发热为主要特征,呈急性或慢性经过,是一种对猪危害极大的传染病〔1～4〕。

1　猪瘟流行特点

从20世纪70年代末开始,各养猪国家猪瘟流行的特点以温和型猪瘟为主,为周期性,波浪型的地区散发流行〔3〕。其特点是无名高热,症状不典型,持续性感染。在我国猪瘟流行呈典型和非典型猪瘟共存;持续感染与隐性感染共存。本病呈世界性流行,为高度接触性传染病。

程喜莱报道〔5〕,2001年1～3月湖北某种猪场免疫猪群暴发了一种以高热,高死亡率为特征的传染病,经检查确诊为猪瘟。郭麦芳报道〔6〕,2008年初陕西某区养猪场免疫注射过的200余头后备猪发病,经实验室检查确诊为猪瘟和附红细胞体混合感染。一些发达国家采取严格卫生防疫措施和净化猪群来控制和消灭了猪瘟。如美国,加拿大,澳大利亚,日本,巴西等〔7〕造成猪瘟流行原因还有①疫苗的质量存在问题,免疫后,抗体水平不能防止亚临床感染水平,可使强毒在猪体内复制和散毒;②联苗效果不确实,据有关资料报道应用三联苗免疫的猪群不断出现免疫失败的病例,使养猪业造成较大的损失。

2　病原

CSF V是黄病毒科(Flaviviriclac)瘟病毒属(pcstivirus)中的一个成员,属于有囊膜的RNA病毒,基因组为单股正链,相对分子质量约为12300,含有一个大的开放性阅读框(openreading fra me,ORF),其两侧分别为5’-非翻译区(5’-UTR)和3’-非翻译区(3’-URT)CSF V的所有结构蛋白和非结构蛋白均由ORF所编码,翻译成1～3898个氨基酸的多聚前体蛋白,其结构蛋白和非结构蛋白在病毒RNA上的编码顺序为5’-N p r o、C、E0、E1、E2、P7、N s2、N s3、N s4A、N s4B、N s5—3’。其中C为核衣壳蛋白,E0、E1、E2为结构糖蛋白,其余均为非结构蛋白。在结构蛋白中最具有免疫防制研究价值的是E0和E2〔2,4〕。E0由227个氨基酸残基构成,相对分子质量为44000～48000,可诱导产生中和谱很窄的中和抗体。E0不仅是一种结构蛋白,而且也是一种功能蛋白,它与CSF V对宿主细胞的嗜性以及致病力有密切关系,可降解病毒和细胞的RNA,可导致免疫抑制,引起动物和淋巴细胞凋亡〔4〕。E2的相对分子质量约为了53000～55000,E2参与病毒对细胞的感染过程,携带有能刺激机体产生保护性免疫的抗原决定簇,其编码的gp55蛋白是猪瘟的主要保护性抗原。E2囊膜蛋白共包含371个氨基酸残基,是主要的抗原表位集中区。A/D区中69011～766aa区域是一段高抗原性的表位集中区〔8〕。刘珂等以E2基因阳性质粒为模板。PCR 扩增出E2囊膜糖蛋白上A/D抗原区B细胞表位8788aa～938aa,构建出表达质粒PEF AD,转化到BL21大肠埃希菌原核表达系统中进行诱导表达。猪瘟病毒的分离一般采取病死猪的脾或淋巴结等含毒量高的组织,研磨过滤,将滤液接种于原代细胞或细胞系进行病毒分离。CSF V能在猪肾细胞和其他一些哺乳动物细胞内增殖。〔9〕

3　猪瘟诊断方法

诊断方法有很多种,介绍几种常用方法。

3.1　病毒分离　猪瘟病毒的分离一般采取病死猪的脾或淋巴结等含毒量高的组织,研磨过滤,将滤液接种于原代细胞或细胞系进行病毒分离。CSF V能在猪肾细胞和其他一些哺乳动物细胞内增殖。〔9〕

此法具有准确诊断的优点,但不利于对病毒核酸序列的分析。

3.2　荧光抗体试验　Roberts on等〔10〕首次将荧光抗体(Fluorescent antibody,F A)运用于猪瘟病料和组织培养物的检测,利用高效价的特异性免疫血清,提取1gG,进行荧光标记。

F A法简单、快捷、可靠。许多国家将它作为猪瘟消灭计划的法定诊断试验〔11〕。

3.3　血清中和试验　该实验可检出动物体内的抗体。按不同稀释度血清抑制病毒产生细胞病变的瓶数,计算被检血清的中和效价。

3.4　间接血凝实验　用该方法检测猪瘟抗体消长动态。此方法操作简单,无需特殊仪器设备,特异性强而不与其他传染病阳性血清发生交叉凝聚,快速(2h内可判定结果)和重复性好等特点。

3.5　免疫酶测定技术　saunder等〔12〕报道应用快速酶标记抗体微量技术检测猪瘟抗体的方法。通过对640份血清进行检测表明,酶标记抗体法和血清中和试验的符合率在99%以上,而且仅需2h就可获得试验结果。

3.6　斑点E L I S A　此方法简便、快捷。谷均相等,利用次法对丹东种猪场2718头猪进行了检测,并根据抗体效价情况对其猪进行了免疫接种。

3.7　RT-PCR　是以病毒RNA为模版进行反转录后,再以PCR进行核酸扩增来检测CSF V的方法。具有特异性强、灵敏度高、重复性好、检测时间短等特点,适合临床应用。

3.8　鉴别PCR　此方法简化了检测步骤,缩短了检测时间,提高了病毒的检出率,可用于疾病的诊断和流行病学调查。

4　猪瘟疫苗的应用

20世纪40年代人们开始了对猪瘟病毒进行兔体适应的试验研究。1903年〔7〕DeSch weinitz和Dorset首次证明CSF V是一种滤过性病毒。人们采用各种免疫方法预防和控制猪瘟。其中应用最广泛的有中国的兔化弱毒疫苗株,又称中国株或C 株。日本的细胞弱毒疫苗株GPE及法国的Thivervat株。它们在猪瘟的控制中都发挥了重要作用〔13〕。大多数弱毒活疫苗是在C株的基础上开发形成的。孙伟等〔14〕对不同日龄的猪用不同剂量猪瘟兔化弱毒疫苗进行免疫,通过正向间接血凝试验进行猪抗体监测。结果表明:仔猪在吃乳前和60日龄进行免疫效果较好,其抗体使仔猪在整个饲养期内可以得到保护。所以猪瘟疫苗的三大品系疫苗(中国的C株,日本的CPE株和法国

①收稿日期:2010203220