DHPLC筛查中国人G6PD基因常见突变

DHPLC筛查中国人常见G6PD基因突变型 技术平台的构建
中山大学基础医学院
医学遗传学教研室
蒋玮莹
G6PD缺乏症研究现状


临床
基础科研
一、临床

发病率高 临床表现 可预防 与其它疾病的关系
目前的产前筛查 生化方法为主 基因诊断 女性杂合子漏诊 经典的方法不适合
新方法
G6PD缺乏症研究现状
建立了筛查中国人常见G6PD变异型的图片库 建立了筛查中国人常见的G6PD变异型的策略
建立了筛查中国人常见的G6PD变异型的技术
平台 评价
Fig1. Screening for G6PD gene c.1388 G>A
Fig2.
Screening for G6PD gene c.1376 G>T
Fig3. Screening for G6PD gene c.1311 C>T and c.1503 T>C
Fig4.Screening for G6PD gene c.95A>G
Fig6.Screening for G6PD gene c.392 G>T
Fig5.Screening for G6PD gene c. 1024 C>T
序列。
（二）、 操作步骤：
PCR
DHPLC
（三）、DHPLC分析
实 验 流 程 图
（四）、DNA序列测定进行质量控制
对于DHPLC检测后出现色谱峰型异常者， PCR扩增产物进行双向DNA测序，应用Chromas 和Clustalx将测序结果与数据库中的序列资 料进行比对分析。
实验结果及讨论
Performance Liquid Chromatography, DHPLC)
研究目标

构建DHPLC筛查中国人G6PD常见基因突变型 的技术平台
研究方法
（一）、基因序列数据提取和引物设计
调取数据库GenBank中的X55448和UCSC Genome Browser中的X03674，做为人类G6PD基因参考
根据突变频率的高低来确定筛查的先后顺序可以
有效地提高检测效率。
待检样本
DHPLC——EXON11-12
Fig.中国人群G6PD常见基
因突变型DHPLC筛查策略
阴 性
阳
性
DHPLC——EXON2
阳ห้องสมุดไป่ตู้
性
阴
性
DHPLC—EXON5，EXON9
阳
性
阴
性
DHPLC——其余外显子 参照DHPLC图形数据库确定突变型 测序验证突变型
对DHPLC方法的评估
A、灵敏性和特异性：95%以上 B、省时、自动化 DHPLC筛查一个标本只需8.8分钟，并可
以自动、连续24小时运行，适合大规模的样
本分析。
C、低成本
根据我们目前的核算，DHPLC 筛查
一个样本的 成本为￥10左右。
Fig7. Screening for G6PD gene c.871 G>A
DHPLC筛查中国人G6PD基因常见突变型的策略
根据本课题组十几年来对1004例G6PD缺乏症病人
的检测确定筛查步骤。数据显示：1376和1388两种突
变占所有突变型的50%以上；加95突变后可达到70%以
上；若再综合392和1024突变则可达到90%以上。


临床
基础科研
二、基础科研
G6PD基因在国内外一直是研究热点

国外 SNPs 人类基因组进化 优势选择效应
单体型域

国内 集中于致病突变的检测 SNPs和单体型方面欠缺
G6PD缺乏症研究现状


临床
基础科研
新方法
突破口
新方法
新方法的选择

变性高效液相色谱分析(Denaturing High