DHPLC筛查中国人G6PD基因常见突变
人类葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分子生物学研究进展
指纹（ＧｘｘＧＧＤＬＡ，人类Ｇ６ＰＤ的第３８硝残基）；一
个是ＥＫＰｘＧ序列（人类Ｃ＿，６ＰＤ的第１７０．１７４残基）。 在９个残基的多肽中，天冬氨酸、组氨酸和赖氨酸显 示出了在ＬＭ Ｇ６ＰＤ中对于Ｇ６Ｐ的结合和催化作用 的重要性¨…。 １．２ ＮＡＤＰ＋结合位点：ＮＡＤＰ＋结合位点只在高等 有机体中发现，并且是保守的。在原核细胞替换数 目的增加和截短的Ｃ一末端尾意味着这个位点的缺 失。这个位点对于进化的重要性还不十分清楚。然 而属于第１型的变异型大量集中在ＮＡＤＰ＋结合位
根据ＷＨＯ的标准Ｈ Ｊ，Ｇ６ＰＤ缺乏的临床病例可 以分为以下５类：Ｉ型：酶活性为０，有慢性非球形 细胞性溶血性贫血；１１型：酶活性０～１０％，当食用 蚕豆或某些药物时发生溶血性贫血；Ⅲ型：酶活性为 １０％～６０％，除被一些强而潜在性的因素诱发，一般 没有溶血性贫血；ＩＶ型：酶活性为６０％～１５０％，没 有溶血性贫血，Ⅳ型又分为ａ和ｂ两种（ａ：酶活性 ６０％一１００％；ｂ：１００％一１５０％）；Ｖ型：酶活性过高
万方数据
点和一些可以被ＮＡＤＰ＋浓度重新激活的一些位点 的出现，显示ＮＡＤＰ＋的结合对于高等生物的酶动力 学活性是极为重要的，而且这个位点对ＮＡＤＰ＋的浓 度变化敏感。许多研究显示在对于造成靠近 ＮＡＤＰ＋位点变化的变异型的酶具有更低的热稳定 性，并且对于低浓度的ＮＡＤＰ＋显示出不同的敏感 性。在Ｇ６ＰＤ—ＮＡＤＰ＋中，如同Ｇ６ＰＤ Ｃａｎｔｏｎ中一 样，ＮＡＤＰ＋有效的嵌合于蛋白质中，占有一个带正 电荷的缝隙。酶蛋白质与ＮＡＤＰ＋的接触与在Ｇ６ＰＤ Ｃａｎｔｏｎ中一样重要，并且都是由亚单位侧链的原子 所组成的。此外ＮＡＤＰ＋与ＮＡＤＰ．２位点结合的紧密 性也可能受在一定距离外Ｇ６Ｐ与Ｃ，６Ｐ位点结合的 影响。 １．３脯氨酸１７２：保守的脯氨酸Ｐｒ０１７２（１４９）是保 守的ＥＫＰＸＧ肽的中央残基，它在△Ｇ６ＰＤ复合体中 被发现是顺式结构的，而在非复合的Ｇ６ＰＤ Ｃａｎｔｏｎ 结构中这个残基在８个亚单位中的７个亚单位是反 式的。在ＬＭ Ｇ６ＰＤ，Ｐｒ０１４９在所有的二元复合体中 均显示为顺式¨川，而在缺乏底物或辅酶时二聚体中 的一个亚单位是反式的。Ｐｒ０１７２的顺反式变化导 致了螺旋仪及螺旋￡的移动。在ＬＭ Ｇ６ＰＤ中的 Ｐ１４９Ｇ和Ｐ１４９Ｖ突变极大的减少了突变体的Ｋｃａｔ 值并影响了Ｇ６ＰＤ的所有动力学和降解参数。人类 变异型Ｐ１７２Ｓ（Ｖｏｌｅｎｏｄａｍ）显示为Ｉ型缺乏。Ｃｏｓｇｒｏｖｅ 等【ｌ引的结果显示了Ｐｒ０１７２直接参与底物和辅酶的 正确定位，在酶反应时对底物和辅酶的接近很重要。 导致残基无法采用顺式构造的基因突变将引起酶活 化的严重障碍，从而不能在酶反应的过程中有正确 的中间过渡态，最终导致酶功能的严重障碍。 １．４变异型与结构：几乎所有致Ｇ６ＰＤ缺乏症的变 异型都是单核苷酸的替换，极少数的缺失变异也是 ３个密码子的同时缺失导致氨基酸的缺失，而非移 码突变。大量的突变位点通常说明了大量的缺乏机 制。既使在比较少见的严重变异型，即引起慢性非 球形细胞溶血性贫血的变异型的所有病例中都或多 或少可以发现一些残留的酶活性，导致体细胞中酶 活性完全丧失的Ｇ６ＰＤ改变从来没有发现过。有关 的研究显示Ｇ６ＰＤ活性的完全缺失对于老鼠的胚胎 是致死性的¨２｜。虽然许多突变的生物化学属性已 被详细的描述，但只有结构上的信息才能从真正意 义上将表型和基因型联系起来。ＬＭ Ｇ６ＰＤ的三维 结构是一个与人类相似的二聚体模型，因此能更多 的了解Ｇ６ＰＤ缺乏症的发病机制。
G6PD缺乏症基因突变与临床伴发疾病关系的研究进展
G6PD缺乏症基因突变与临床伴发疾病关系的研究进展作者：何丽桥王俊利李妹燕陈发钦来源：《右江医学》2020年第10期【关键词】 G6PD缺乏症;基因突变;伴发疾病中图分类号：R722.11 文献标志码：A DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2020.10.013葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（Glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）是催化磷酸戊糖途径的一种限速酶，通过还原型辅酶Ⅱ（NADPH）调节细胞氧化还原稳态，以保护细胞免受氧化损伤。
G6PD缺乏症属于X染色体连锁不完全显性遗传，男性半合子酶活性呈显著性缺乏，女性杂合子酶活性变化范围较大，介于正常至重度降低之间[1]。
临床上表现多样，包括蚕豆病、药物性或感染性溶血、新生儿病理性黄疸进而神经系统损害甚至死亡，平时可无临床症状。
如何预防和避免溶血性疾病的发生和发展显得尤为重要，本文就该病基因突变的区域分布与临床伴发疾病关系的研究进展作如下综述。
1 G6PD缺乏症基因突变区域分布特征迄今为止，全球约有4亿人受累，约200种G6PD基因变异型已被鉴定，G6PD缺乏症高发地区与疟疾流行地区具有高度一致性，在非洲、亚洲、地中海和中东等地区，G6PD缺乏症的发生率最高，达15%～26%[2]。
由于人群渊源不同和自然选择、遗传漂变等因素的作用，我国不同地域和民族群体之间的G6PD缺乏症发生率相差甚远，呈“南高北低”分布，以广西、广东、海南为高发区，个别地区达40%以上[3]。
G6PD缺乏症在不同地区人群发生率和突变类型不尽相同，傣族（17.4%）和壮族（14.1%）的G6PD缺乏症发生率最高，其中G6PD Kaiping（c.1388G>A）、Canton （c.1376G>T）和Gaohe（c.95A>G）是导致中国人G6PD缺乏症的主要等位基因类型[4]。
云南省相近地区的傣族、彝族、苗族和白族，彼此之间的G6PD缺乏症发生率和突变谱相差甚远：西双版纳州的傣族G6PD缺乏症发生率9.73%，而大理的白族未发现该病存在;G6PD Valladilid（c.406C>T）仅发现于楚雄地区的彝族，而文山地区的苗族则可见高比例的G6PD Chinese-4（c.392G>T）;在同一民族的不同群体中，如广东中部和北部的汉族与江西南部赣州的汉族，G6PD缺乏症突变谱相近，但发生率有明显差异[5]。
MALDI-TOFMS快速检测六种常见G6PD突变型
中山大学硕士学位论文MALDI-TOFMS快速检测六种常见G6PD突变型姓名：***申请学位级别：硕士专业：法医物证学指导教师：***20040520中山大学硕士学位论文ＭＡＬＤＩ．ＴＯＦＭＳ快速檀舅六种常见Ｇ６ＰＤ突变堑中文摘要ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦＭＳ快速检测六种常见Ｇ６ＰＤ突变型专业：硕士生：导师：法医物证赵方伍新尧中文摘要葡萄糖一６一磷酸脱氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ一６一ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，Ｇ６ＰＤ）缺乏症是全球最常见的一种ｘ连锁不完全显性遗传性疾病，该病好发于非洲、地中海沿岸、东南亚及我国的华南和西南。
其中，在广东地区的发生率约为５％～１０％。
迄今已发现Ｇ６ＰＤ基因存在约１３０多种突变，在中国人中现已报告２０种，其中Ｇ１３８８Ａ，Ｇ１３７６Ｔ，Ａ９５Ｇ，Ｇ３９２Ｔ，Ｃ１０２４Ｔ，Ｃ１３１１Ｔ约占我国广东地区Ｇ６ＰＤ基因缺陷的９０％以上。
目前用于Ｇ６ＰＤ缺乏症已知突变型筛查的方法有五种：（１）序列特异性寡核苷酸探针杂交法（ｓｅｑｕｅｎｃｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｒｏｂｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＳＳＯＰ）；（２）ＰＣＲ一限制性酶切法（ＰＣＲ·ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ．ＰＣＲ—ＲＦＬＰ）；（３）难扩增突变检测系统（ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ＡＲＭＳ）；（４）测序（ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）；（５）基因芯片（ＤＮＡｍｉｅｒｏａｒｒａｙ）。
第１种方法需要标记，假阳性率和假阴性率较高。
第２种方法过程繁琐，某些限制性内切酶较为昂贵而使其推广受到限制。
第３种方法虽较前两种方法操作简单，但一次只能检查一个位点。
难以在短时间内Ｐ完成大样本的筛查。
第４种方法是目前分子生物学中应用最广泛的技术，但就点突变而言，测序很难覆盖整个基因，需就可能发生突变的区域分段进行测序，因工作量太大，难以在临床实践中推广。
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因4种突变及蛋白结构分析
1571 V ol.40 No.12 Dec. 2020上海交通大学学报（医学版）JOURNAL OF SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)论著·基础研究葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶基因4种突变及蛋白结构分析朱之星1, 2，纪 伟3，顾坚磊1, 4，吕 晖1, 2, 4，田国力31. 上海交通大学附属儿童医院，上海市儿童医院生物医学信息研究中心，上海 200040；2. 上海交通大学附属儿童医院儿童精准医学大数据工程技术研究中心，上海 200040；3. 上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心，上海 200040；4. 上海交通大学生命科学技术学院，上海交通大学－耶鲁大学生物统计与数据科学联合中心，上海 200240[摘要]目的·研究葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）基因突变对酶蛋白结构及功能的影响，了解G6PD突变与酶学结构、功能的关系。
方法·回顾性分析2014—2017年上海市儿童医院205 103例新生儿G6PD缺乏症筛查记录，Wilcoxon 检验分析酶活性与突变基因类型之间的关系。
采用Psipred、SOPMA、JPred4预测蛋白的二级结构，SWISS-MODEL 预测氨基酸链空间结构，Mupro、SDM、CUPSAT、mSCM、DUET、Dynamut预测蛋白突变前后稳定性变化，PROVEAN预测对蛋白功能的影响，PyMOL 和LigPlot+修饰蛋白空间结构预测图。
结果·230例样本酶活性检测阳性，对其中121例进行基因检测，共检出8种突变，除c.95A>G、c.1376G>T、c.1388G>A 3种常见突变，c.1024C>T也表现出高发生率。
4种突变均导致蛋白结构改变，稳定性降低，对功能有不良影响；此外，c.1388G>A突变导致其远离甘油配体结合区。
深圳盐田地区 G6PD 缺乏症发病率与基因突变调查
深圳盐田地区 G6PD 缺乏症发病率与基因突变调查蒋明;候家兴;李春龙;陈丕绩【摘要】目的：了解深圳盐田区G6PD缺乏症的流行现状、基因突变谱，探讨其诊断方法及流程。
方法采用G6PD/6PGD定量比值法检测G6PD酶活性，反向点杂交及DNA测序检测G6PD基因突变。
结果该区G6PD基因突变人群携带率为4．50％，基因突变以c ．1388G＞A、c ．1376G＞ T 和c ．95A＞ G为主。
结论该区为包含其他罕见或少见突变类型的复杂G6PD基因突变谱，基于G6PD酶活性的表型筛查有明显的漏检率，基因检测结合表型筛查可大大提高诊断准确性与可靠性。
%Objective To understand the prevalence and gene mutation spectrum of G6PD deficiency in Yan-tian district of Shenzhen City ,and discuss the diagnosis methods and processes of G6PD deficiency .Methods The G6PD enzyme activities were detected with G6PD/6PGD quantitative ratio method .The G6PD gene mutations were analyzed with reverse dot blotting and DNA sequencing method .Results The G6PD gene mutation carrying rate of this district was 4 .25% ,while the main gene mutations were C .1388G> A ,C .1376G > T and C .95 A>G .Conclu-sion The G6PD gene mutation spectrum of this district is complex which includes rare mutation types .The pheno-type screening strategy which based on G6PD enzyme activity has obvious omission rate ,and the combining of pheno-type screening with genetic testing can greatly improve diagnostic accuracy and reliability .【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2013(000)022【总页数】2页(P2958-2959)【关键词】G6PD缺乏;基因突变;筛查【作者】蒋明;候家兴;李春龙;陈丕绩【作者单位】广东省深圳市盐田区人民医院 518081;广东省深圳市盐田区人民医院 518081;广东省深圳市盐田区妇幼保健院 518081;广东省深圳市盐田区人民医院 518081【正文语种】中文葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症是全球最常见的一种X连锁不完全显性遗传性酶缺陷综合征，我国南方是此病高发区，其发病率在各地区和民族中有差异［1］。
中国人常见G6PD基因突变的快速检测
中国人常见G6PD基因突变的快速检测肖奇志;李哲;周玉球;郑勤【摘要】目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症是世界上最常见的遗传性红细胞酶缺陷病.本文探讨建立一种简便快速、准确可靠、经济实用的G6PD缺乏症分子诊断技术.方法采用DNA测序技术通过双盲法对所建立的单管多重PCR结合分子杂交技术进行方法学评价.结果所建立的新技术可成功地检出上述中国人常见的G6PD基因突变并能清楚区分男性杂合子、女性杂合子或纯合子或双重杂合子.盲法分析结果显示,该技术对经DNA直接测序确诊的G6PD标本的诊断准确度和重复性均达到100%.结论单管多重PCR结合分子杂交技术可准确、快速地检测中国人常见的G6PD基因突变且具有经济和实用的优点,非常适合于G6PD缺乏症的大人群分子筛查和临床样品的基因诊断.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2011(003)004【总页数】5页(P222-226)【关键词】葡萄糖-6-磷酸脱氢酶;基因突变;单管多重聚合酶链反应;反向点杂交【作者】肖奇志;李哲;周玉球;郑勤【作者单位】珠海市妇幼保健院检验科,珠海市医学遗传研究所,广东,珠海,519001;珠海市金湾区三灶医院检验科,广东,珠海,519040;珠海市妇幼保健院检验科,珠海市医学遗传研究所,广东,珠海,519001;珠海市妇幼保健院检验科,珠海市医学遗传研究所,广东,珠海,519001【正文语种】中文葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD）广泛存在于各种生物体内，它是糖酵解磷酸戊糖旁路中的一个关键酶和限速酶，其主要的功能是产生NADPH。
而NADPH对于维持细胞的正常生理功能和形态具有极为重要的作用。
G6PD缺乏症是世界上最常见的一种遗传性红细胞酶缺陷病，全球约有4亿人受累，该病高发于热带和亚热带地区，中国南方也是该病的高发区[1]。
g6pd基因型
g6pd基因型全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：G6PD基因型是指葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase, G6PD)基因在个体中的特定变异形式。
G6PD是一种重要的酶，参与体内红细胞内氧化还原反应，维持细胞内氧化还原平衡。
G6PD基因型的不同可能会导致G6PD酶的活性水平不同，进而影响个体对氧化性物质的应对能力。
G6PD基因型的主要变异类型有数十种，其中最常见的包括G6PD 缺陷型和G6PD正常型。
G6PD缺陷型又可以分为严重型和轻型，严重型主要是指G6PD酶活性极低或完全缺失，容易发生溶血危机，而轻型则是指G6PD酶活性虽然降低但不至于引起溶血。
在不同的人群中，G6PD缺陷的发生率也各有不同，例如在亚非地区的一些地方，G6PD 缺陷的患病率可高达10%以上。
G6PD缺陷型的发生主要是由于G6PD基因发生了某种突变，使得G6PD酶的结构或功能发生变化。
这种变异导致了G6PD酶在遇到氧化应激时无法正常发挥作用，从而导致红细胞溶解、贫血等情况。
一般来说，G6PD缺陷患者在接触到某些氧化性药物、食物或感染病原体时，会引发溶血反应，表现为贫血、黄疸、血红蛋白尿等症状。
对于G6PD缺陷患者来说，预防溶血危机是非常重要的。
需要了解自己的G6PD基因型，可以通过基因检测来确定。
要避免接触氧化性药物，如抗疟药、解热镇痛药、某些抗生素等。
要避免食用引起氧化应激的食物，如毛豆、油炸食品等。
在生活中要保持良好的生活习惯，多吃新鲜蔬菜水果，避免劳累和感染，保持良好的心情等。
除了G6PD缺陷型外，G6PD基因型的其他变异形式也可能会对个体健康产生影响。
一些研究表明某些G6PD基因型与疾病的易感性有关，如贫血、糖尿病、心血管疾病等。
了解自己的G6PD基因型，可以帮助个体更好地管理健康风险，预防疾病。
G6PD基因型在个体健康中起着重要作用。
了解自己的G6PD基因型，采取相应的预防措施，可以帮助预防溶血危机，减少疾病的发生风险。
G6PD缺陷症基因型分析:一种新的错义突变
G6PD缺陷症基因型分析：一种新的错义突变王也飞;夏文权;倪培华;胡翊群;姜叙诚【摘要】目的对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺陷症患者进行G6PD基因型分析,分析基因突变类型.方法选取经G6PD活性测定确诊为G6PD缺陷症的49例患者和100名G6PD活性正常的体检者的全血标本,PCR和DNA测序法对G6PD基因外显子2～13进行序列分析.结果 49例G6PD缺陷症患者中,共发现12种错义突变,其中常见的三种为G6PD G1388A(26.5%)、G1376T(28.6%)和A95G(14.3%),此三类基因型患者G6PD活性仅为正常人群的5%～18%.临床主要表现为新生儿黄疸、进食蚕豆后发生急性溶血性贫血等.其余突变类型包括C1024T(4.1%)、C1225T(2.0%)、C1159T(2.0%)、G487A(4.1%)、G392T(4.1%)、G1160A(6.1%)、G871A/C1311T(4.1%)和C406T/C1311T(2.0%);在外显子7上发现了一种新的错义突变即G691C,该突变造成G6PD第231位丙氨酸(Ala)被脯氨酸(Pro)替代.正常对照标本未发现相同的基因改变.结论 G6PD基因G1388A、G1376T和A95G是G6PD缺陷症患者最常见的三种突变类型.新发现的G691C 突变导致Ala231Pro,是引起红细胞G6PD活性降低,患者临床出现溶血症状的主要原因.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(030)006【总页数】5页(P698-702)【关键词】葡萄糖-6-磷酸脱氢酶;错义突变;G691C;Ala231Pro【作者】王也飞;夏文权;倪培华;胡翊群;姜叙诚【作者单位】上海交通大学,医学院瑞金医院检验系,上海,200025;上海交通大学,医学院瑞金医院检验系,上海,200025;上海交通大学,医学院瑞金医院检验系,上海,200025;上海交通大学,医学院瑞金医院检验系,上海,200025;上海交通大学,基础医学院病理学教研室,上海,200025【正文语种】中文【中图分类】R596;Q78葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD)是一个看家酶，也是磷酸戊糖旁路途径的第一个限速酶，能催化6-磷酸葡萄糖生成6-磷酸葡萄糖酸，同时生成还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)。
g6pd缺乏症诊断标准
g6pd缺乏症诊断标准G6PD缺乏症，全称葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症，是一种遗传性疾病，主要限于男性。
本文将介绍G6PD缺乏症的诊断标准及相关指引。
一、临床表现G6PD缺乏症在临床上可表现为溶血性贫血，其程度多因个体之间的差异而各异。
患者会出现贫血、黄疸、脾肿大等症状。
此外，患者还可能出现发热、腹痛、血尿等退行性溶血危象。
二、实验室检查对于临床怀疑G6PD缺乏症的患者，可通过实验室检查来确定诊断。
1. G6PD活性检测：G6PD缺乏症的诊断主要依靠G6PD活性测定。
可采用离心法、比色法或荧光测定法来测定红细胞中G6PD酶活性的水平。
2. 贫血检测：进行全血细胞计数，并检查红细胞相关指标，如红细胞计数、血红蛋白、红细胞比容等。
3. 溶血指标：检测患者的间接胆红素、血清铁蛋白、尿胆原等指标，以评估溶血程度。
4. 红细胞形态学检查：观察患者的红细胞形态，如有不规则形状或红细胞片状出现时，提示溶血性贫血可能与G6PD缺乏症相关。
三、诊断标准目前，关于G6PD缺乏症的诊断，尚无统一的国际标准，各国或地区会根据当地的人群特点和病情表现制定诊断标准。
1. 临床症状与体征：患者出现有贫血、黄疸、脾肿大等症状或体征。
2. G6PD活性：G6PD活性测定显示低于正常范围，但要注意，有些患者在发作期间G6PD活性水平可能正常。
3. 家族史：患者家族中有G6PD缺乏症的病史。
4. 基因检测：通过基因检测，发现G6PD酶编码基因突变，可以进一步确认G6PD缺乏症的诊断。
综上所述，要诊断G6PD缺乏症，需要结合临床症状与体征、G6PD活性测定、家族史和基因检测等综合判断。
四、鉴别诊断对于患者的临床症状与实验室检查结果存在疑惑时，需要进行鉴别诊断，以排除其他引起溶血性贫血的原因。
常见的鉴别诊断包括遗传性球形红细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血、感染性溶血性贫血等等。
五、治疗与管理针对G6PD缺乏症患者，治疗应采取综合措施。
在发作期间应注意休息、补充营养、预防感染等，同时避免接触引起溶血的药物和食物。
茂名地区婴幼儿G6PD 缺乏症基因突变分析
２０２１年１２月 第２８期论 著茂名地区婴幼儿Ｇ６ＰＤ缺乏症基因突变分析陈红玲1，谭满胜2*，谢清丰2，聂俊玮2，刘沃满21.茂名市人民医院检验科，广东 茂名 525000；2.茂名市妇幼保健院遗传优生优育中心，广东 茂名 525000【摘要】目的：分析茂名地区婴幼儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变的类型，为临床上诊断和预防G6PD缺乏症提供依据。
方法：从2018～2019年茂名地区G6PD活性筛查阳性召回的婴幼儿中抽取326例采用荧光PCR熔解曲线法进行基因突变检测。
结果：326例筛查阳性召回的标本中检出基因突变301例(92.33%)，包含10种基因突变类型，由多到少分别为c.1388 G>A(109例)，c.1376 G>T(93例)，c.95 A>G(33例)，c.871 G>A(25例)，c.392 G>T(14例)，c.1024 C>T(11例)，c.1360 C>T(3例)，c.517 T>C(2例)，c.1004 C>A(2例)，c.487 G>A(1例)；同时检出c.1376 G>T复合c.1388 G>A 突变3例，c.1388 G>A复合c.871 G>A突变2例，c.1376 G>T复合c.392 G>T 突变1例，c.95 A>G复合c.1024 C>T突变1例，c.1388 G>A复合c.1024 C>T 突变1例。
结论：茂名地区的G6PD基因突变以c.1388G>A、c.1376G>T和c.95A>G为主要类型，该研究为本地区流行病学调查、临床上诊断和预防G6PD缺乏症提供了有价值的参考依据。
【关键词】葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症；基因突变；荧光PCR熔解曲线法；流行病学调查[中图分类号]R59；R77 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2021)28-0008-02葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G l u c o s e-6-p h o s p h a t e dehydrogenase, G6PD)缺乏症俗称蚕豆病，指的是红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性降低和(或)酶性质改变导致以溶血为主要表现的一种X连锁隐性或不完全显性遗传性疾病[1]。
G6PD缺乏症基因突变检测的临床应用研究
G6PD 缺乏症基因突变检测的临床应用研究阮永钦（阳江市妇幼保健院，广东阳江529500）G6PD （hereditary glucose-6-phosphate dehydrogenase ，中文名称：遗传性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）缺乏症属于一种常见的遗传性疾病，被判定为遗传性酶缺乏病[1]。
该病为一种遗传代谢异常疾病，属于天生缺陷，且为不完全显性遗传。
由于G6PD 缺乏症变异型很多，临床表现差异极大，传统常用的G6PD 缺乏症筛查方法用于新生儿筛查时临界值时不能明确诊断[2]。
本文主要研究G6PD 缺乏症基因突变检测的临床应用价值，报道如下。
1资料与方法1.1临床资料收集2019年11月—2020年5月期间阳江市妇幼保健院产前门诊、儿科门诊、新生儿科就诊的贫血、黄疸查因或体检人员300例为研究对象，均进行G6PD 缺乏症基因突变检测。
本研究获得到医院医学伦理委员会批准和研究对象监护人的知情同意。
1.2方法对中国大陆南方人群最为常见的G6PD 基因突变14个突变位点（95M 、392M 、487M 、493M 、592M 、871M 、1004M 、1024M 、1311M 、1360M 、1376M 、1381M 、1387M 、1388M ）进行检测，根据其外周静脉血的G6PD 含量（葡萄糖-6-磷酸底物法，北京华宇亿康生物工程技术有限公司）及其基因（葡萄糖6-磷酸脱氢酶基因检测试剂盒PCR+导流杂交法，广东凯普生物科技股份有限公司生产）进行测定。
特异性扩增G6PD 基因突变区域，使用生物素标记引物开展扩增，并固定扩增物，促使在尼龙膜上的不同突变位点探针进行杂交，实施导流杂交（flow-through hybridization ），然后通过化学显色对结果进行判读。
2结果G6PD 基因突变类型包括：1388G →A 、1376G →T 、1024C →T 、1004C →T 、871G →A 和95A →G ，累计基因频率为86.0%以上。
关于g6pd基因检测的科普文章
关于g6pd基因检测的科普文章
关于G6PD基因检测的科普文章
G6PD基因编码的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶是人体红细胞内一种重要的酶,它在防御氧化应激中扮演关键角色。
一旦G6PD基因发生突变,就会导致该酶活性降低或缺失,从而引发一系列临床症状,如溶血性贫血、黄疸等。
G6PD缺陷症是一种常见的遗传代谢病,主要有以下几个特点:
1. 遗传方式:G6PD基因位于X染色体,因此主要表现为X-连锁遗传方式。
男性只需一个缺陷基因就会表现出症状,而女性需要两个缺陷基因才会发病。
2. 高发人群:G6PD缺陷症在一些地中海沿岸国家、非洲和东南亚等疟疾流行区域较为常见,这可能与G6PD缺陷症能够提供一定程度的抗疟保护有关。
3. 诱发因素:G6PD缺陷症的临床表现往往由某些诱因触发,如药物(抗生素、抗疟药等)、食物(蓝莓、芹菜等)、感染等。
4. 症状多样:轻度患者可能无明显症状,重度患者可能出现溶血性贫血、黄疸、血红蛋白尿等症状。
严重时还可能导致急性肾损伤和脑膜炎等并发症。
对于G6PD缺陷症的诊断,主要依赖于G6PD基因检测。
通过对编码
区进行测序分析,可以准确检测出致病突变,从而明确诊断。
此外,还可以通过测定红细胞内G6PD酶活性水平来初步筛查。
G6PD基因检测对于G6PD缺陷症的预防和治疗都具有重要意义。
对于怀孕期间发现G6PD基因缺陷的孕妇,产前基因诊断可以评估胎儿是否患病;对于已确诊的患者,则要注意避免诱发因素,必要时可采取相应的治疗措施。
G6PD基因检测有助于我们及时发现这种常见的遗传代谢病,从而采取有针对性的预防和治疗措施,避免并发症的发生,保障患者的健康。
东莞地区新生儿G6PD缺乏症发生率及基因突变分析
①广东省东莞市妇幼保健院 广东 东莞 523002通信作者：叶立新东莞地区新生儿G6PD缺乏症发生率及基因突变分析叶立新① 黄锐华① 莫润旺① 谢彩连① 蔡小娟①【摘要】 目的：了解东莞地区出生人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症发生率及其基因突变情况。
方法：选择2016年9月1日-2019年12月31日东莞市送检的新生儿疾病筛查标本，共432 820例，其中男232 254例，女200 566例，出生后72 h 采集足跟血制作成干血斑，采用荧光定量法进行G6PD 缺乏症筛查，对筛查阳性者召回采集静脉血采用G6PD/6PGD 比值法进行确诊，对部分确诊者采用荧光定量PCR 多色熔解曲线法（MMCA）进行G6PD 基因突变分析。
结果：东莞地区新生儿G6PD 缺乏症筛查总体阳性率为3.60%（15 588/432 820），其中男、女阳性率分别为5.06%（11 750/232 254）和1.91%（3 838/200 566），两者筛查阳性率比较，差异有统计学意义（χ2=3 067.24，P <0.001）；本市户籍、本省户籍、外省户籍新生儿筛查阳性率分别为3.50%（4 684/133 719）、5.79%（5 303/91 553）、2.70%（5 601/207 548），本市户籍新生儿筛查阳性率与本省户籍、外省户籍比较，差异均有统计学意义（χ2=672.31、179.95，P <0.001）。
筛查阳性新生儿召回7 044例，召回率45.19%，确诊5 907例，确诊符合率83.86%，推算东莞地区新生儿G6PD 缺乏症总体发生率为3.02%；男女的确诊符合率比较，差异有统计学意义（χ2=1 164.83，P <0.001）。
219例确诊G6PD 缺乏症新生儿中，检测出基因突变216例，共检出10种突变类型：67例（31.02%）c.1376G>T、67例（31.02%）c.1388G>A、26例（12.04%）c.871G>A、25例（11.57%）c.95A>G、7例（3.24%）c.1024C>T、7例（3.24%）c.392G>T、3例（1.39%）c.517T>C、2例（0.93%）c.1004C>A、1例（0.46%）c.1360C>T、1例（0.46%）c.592C>T 和7种复合突变。
佛山地区三种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型的研究
佛山地区三种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型的研究范联;付涌水;丁艳【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2003(019)004【摘要】目的:探讨佛山地区小儿G-6-PD缺乏症患儿基因突变类型.方法:使用突变特异性扩增系统(amplitication refractory mutation system, ARMS)方法测定经G-6-PD/6磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGD)比值法二次检验证实的患儿42例静脉血,并对其中3例阳性标本进行分子克隆核测序.结果:42例标本中,G1388A突变17例,占40.5%;G1 376T突变12例,占29%;A95G突变3例,占7.1%,未定型10例,经核苷酸序列分析证实检测正确.结论:ARMS法是一种用于检测G-6-PD基因突变较理想的方法.G-6-PD基因突变型G1388A、G1376T及A95G是佛山地区G-6-PD缺乏症的常见基因突变型.【总页数】3页(P407-409)【作者】范联;付涌水;丁艳【作者单位】528000,广东省佛山市妇儿医院;510095,广州血液中心;528000,广东省佛山市妇儿医院【正文语种】中文【中图分类】R394【相关文献】1.汕尾沿海地区3种常见葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型研究的初步分析 [J], 蔡映天2.广西崇左市葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变型研究 [J], 钟志娟;罗建明3.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶及其基因突变的研究[J], 郭静;田国力;王燕敏;周卓;纪伟4.昆明地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型研究 [J], 杨昭庆;郑淑芳;黄小琴;石世同;耿力;冯玉昆;褚嘉佑5.广东省茂名地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变型研究 [J], 李富;陈海玲;聂俊玮;唐玉芬;蓝金生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
云南阿昌族G6PD基因突变G487A在DF213中的表达
云南阿昌族G6PD基因突变G487A在DF213中的表达杨银峰;黄尤光;朱月春;李鸿钧;李治纲;吕会茹;李丹怡;崔映波;冯维杨;余果宇【期刊名称】《生物物理学报》【年(卷),期】2007(23)1【摘要】为获得阿昌族G6PDWT和G6PDG487A重组蛋白,研究G6PDG487A 的结构和功能改变,从云南省德宏州梁河县杞木寨乡湾中村阿昌族聚集地的G6PD 缺陷家系先证者和正常阿昌族个体全血提取RNA,经RT-巢式PCR得cDNA,将cDNA克隆至pMD18-T simple载体中并测序;错配碱基经定点突变修复后,目的基因亚克隆至pThioHis(A)载体,构建了阿昌族G6PD基因野生型和G487A突变型原核表达载体:pThioHis(A)-AChang-G6PDWT和pThioHis(A)-AChang-G6PDG487A.用重组质粒转化E.coli Competent Cells DF213(G6PD defeciency),经IPTG诱导G6PD表达、10%SDS-PAGE电泳检测表达蛋白和紫外340 nm定量测定G6PD活性的分析表明,pThioHis(A)-AChang-G6PDWr和pThioHis(A)-AChang-G6PDG487A在DF213中成功表达,分子量约为59 kDa.IPTG诱导0、3、6、9、和12 h后,G6PD活性逐渐增高,G6PD基因WT表达的酶活性约是G487A的20～25倍.表达载体的构建以及G6PD cDNA在DF213中成功表达,为重组酶G6PDG487A的进一步研究奠定了基础.【总页数】9页(P20-28)【作者】杨银峰;黄尤光;朱月春;李鸿钧;李治纲;吕会茹;李丹怡;崔映波;冯维杨;余果宇【作者单位】昆明医学院生化教研室,昆明,650031;昆明医学院生化教研室,昆明,650031;昆明医学院生化教研室,昆明,650031;中国医学科学院医学生物学研究所,昆明,650018;昆明医学院生化教研室,昆明,650031;昆明医学院生化教研室,昆明,650031;昆明医学院生化教研室,昆明,650031;昆明医学院生化教研室,昆明,650031;昆明医学院生化教研室,昆明,650031;昆明医学院生化教研室,昆明,650031【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.户撒刀:见证阿昌族文化——访云南省阿昌族户撒刀传承人李德永 [J], 殷俊燕2.广西地区地中海贫血合并G6PD缺乏症患儿G6PD基因突变型的初步研究 [J], 郑敏;罗建明3.阿昌族女性信仰变迁与民族文化关系研究——以云南德宏梁河阿昌族为例 [J], 曹路4.阿昌族聚居地区特色农业发展路径探析——以云南省阿昌族聚居地H乡为例 [J], 杨海东;杨会仙5.阿昌族的幸福跨越路——对话云南省民族学会阿昌族研究会会长曹先强 [J], 田芯竹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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序列。
（二）、 操作步骤：
PCR
DHPLC
（三）、DHPLC分析
实 验 流 程 图
（四）、DNA序列测定进行质量控制
对于DHPLC检测后出现色谱峰型异常者， PCR扩增产物进行双向DNA测序，应用Chromas 和Clustalx将测序结果与数据库中的序列资 料进行比对分析。
实验结果及讨论
Fig3. Screening for G6PD gene c.1311 C>T and c.1503 T>C
Fig4.Screening for G6PD gene c.95A>G
Fig6.Screening for G6PD gene c.392 G>T
Fig5.Screening for G6PD gene c. 1024 C>T
对DHPLC方法的评估
A、灵敏性和特异性：95%以上 B、省时、自动化 DHPLC筛查一个标本只需8.8分钟，并可
以自动、连续24小时运行，适合大规模的样
本分析。
C、低成本
根据我们目前的核算，DHPLC 筛查
一个样本的 成本为￥10左右。
DHPLC筛查中国人常见G6PD基因突变型 技术平台的构建
中山大学基础医学院
医学遗传学教研室
蒋玮莹
G6PD缺乏症研究现状
临床
基础科研
一、临床
发病率高 临床表现 可预防 与其它疾病的关系
目前的产前筛查 生化方法为主 基因诊断 女性杂合子漏诊 经典的方法不适合
新方法
G6PD缺乏症研究现状
根据突变频率的高低来确定筛查的先后顺序可以
有效地提高检测效率。
待检样本
DHPLC——EXON11-12
Fig.中国人群G6PD常见基
因突变型DHPLC筛查策略
阴 性
阳
性
DHPLC——EXON2
阳
性
阴
性
DHPLC—EXON5，EXON9
阳
性Hale Waihona Puke 阴性DHPLC——其余外显子 参照DHPLC图形数据库确定突变型 测序验证突变型
Fig7. Screening for G6PD gene c.871 G>A
DHPLC筛查中国人G6PD基因常见突变型的策略
根据本课题组十几年来对1004例G6PD缺乏症病人
的检测确定筛查步骤。数据显示：1376和1388两种突
变占所有突变型的50%以上；加95突变后可达到70%以
上；若再综合392和1024突变则可达到90%以上。
临床
基础科研
二、基础科研
G6PD基因在国内外一直是研究热点
国外 SNPs 人类基因组进化 优势选择效应
单体型域
国内 集中于致病突变的检测 SNPs和单体型方面欠缺
G6PD缺乏症研究现状
临床
基础科研
新方法
突破口
新方法
新方法的选择
变性高效液相色谱分析(Denaturing High
建立了筛查中国人常见G6PD变异型的图片库 建立了筛查中国人常见的G6PD变异型的策略
建立了筛查中国人常见的G6PD变异型的技术
平台 评价
Fig1. Screening for G6PD gene c.1388 G>A
Fig2.
Screening for G6PD gene c.1376 G>T
Performance Liquid Chromatography, DHPLC)
研究目标
构建DHPLC筛查中国人G6PD常见基因突变型 的技术平台
研究方法
（一）、基因序列数据提取和引物设计
调取数据库GenBank中的X55448和UCSC Genome Browser中的X03674，做为人类G6PD基因参考