5-二苯胺显色法测定DNA含量ppt

岛津UV-120分光光度计
双波长分光光度计，该种机采用两个光源，可在可见光和紫外区对物质进行 分析，钨丝灯发出光的适宜范围在360－1000nm，氘灯发出光的适宜范围在 150－400nm。 通过两种光源的切换，可以在两种波长范围内使用。 使用石英杯作为比色杯。
岛津UV-120使用方法
打开电源，指示灯亮，调至UV，打开样品室盖 打开氘灯（向下按至Heat几秒后扳至ON） 预热10min 调节波长、灵敏度 旋扭调至“0-100%T”，放入空白管与样品，调0% T 盖上盖子，旋扭调至“ABS 0-2”，调0% A 拉出样品，读数。开盖，记录。
一般性实验-5
二苯胺显色法测定DNA含量
实验原理
DNA的α-脱氧核糖在酸性条件下转变成ω-羟基-r酮基戊醛，与二苯胺共热后 形成蓝色化合物，该化合物在595nm处最大吸收。 每ml含20－400µg范围内光密度与DNA的浓度成正比。反应液中加入少量乙 醛，可提高反应的灵敏度。
DNA
H＋
二苯胺 HO－CH2－C－CH2－CH2－CHO ＝ O 蓝色化合物
核酸紫外吸收光谱的测定
DNA和RNA都有吸收紫外光的性质，它们的吸收高峰在 260nm波长处。吸收紫外光的性质 是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质， 不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。 蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在 280nm波长 处，在260nm处的吸收值公为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中蛋白质含量较低时对 核酸的紫外测定影响不大。RNA的260nm与280nm吸收的比值在2.0以上；DNA的260nm与 280nm吸收的比值则在1.9左右。当样品中蛋白质含量较高时比值即下降。 A260/A280 ≈1.8 > 1.8 < 1.8 表示DNA纯 RNA含量高 蛋白含量高
实验操作
以0.01N NaOH 为空白管，在260nm和280nm波长处测定样品液的吸光度，求出样 品液的A260/A280比值和DNA浓度。
实验Байду номын сангаас作
取8支试管，按实验指导的表格加入试剂。 加毕置沸水浴10分钟，取出冷却；以0号管（空白管）调零点，于595nm波长比色。 以光密度为纵坐标，DNA含量（µg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。 将实验中所得到的兔肝DNA溶液作为待测样品，取两只试管，分别标“U”和“B”，按 表加入试剂。 混匀，置沸水中10min, 取出冷却。 在595nm处，以B管调零，测得待测液的光密度值，从标准曲线上查出相当于该光密度 值DNA的含量。