实验二蛋白质含量的测定凯氏定氮法1
蛋白质含量测定(凯氏定氮法)
食品中蛋白质含量测定(凯氏定氮法）一、目的与要求1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理。
2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。
二、实验原理蛋白质是含氮的化合物。
食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化,使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数,即得蛋白质含量。
因为食品中除蛋白质外,还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。
三、仪器与试剂硫酸铜(CuSO4·5H20）硫酸钾硫酸（密度为1.8419g/L）硼酸溶液（20g/L）氢氧化钠溶液（400g/L）0。
01mol/L盐酸标准滴定溶液.混合指示试剂：0。
1%甲基红乙溶液液1份，与0。
1％溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合. 微量定氮蒸馏装置:如图3-所示。
图3-微量凯氏定氮装置1、电炉；2、水蒸气发生器(2L平底烧瓶)；3、螺旋夹a；4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处)；5、反应室；6、反应室外层;7、橡皮管及螺旋夹b;8、冷凝管；9、蒸馏液接收瓶.四、实验步骤1、样品消化称取样品约2.00g(±0.001g),移入干燥的100mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g 硫酸钾，稍摇匀后瓶口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热,待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0。
5h,取下放冷，小心加20mL水,放冷后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。
试剂空白实验:取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。
2、定氮装置的检查与洗涤检查微量定氮装置是否装好。
在蒸气发生瓶内装水约三分之二，加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠（或沸石）以防止暴沸.测定前定氮装置如下法洗涤2~3次：从样品进口入加水适量（约占反应管三分之一体积）通入蒸汽煮沸，产生的蒸汽冲洗冷凝管，数分钟后关闭夹子a ，使反应管中的废液倒吸流到反应室外层，打开夹子b 由橡皮管排出,如此数次，即可使用.3、碱化蒸馏量取硼酸试剂20mL 于三角瓶中，加入混合指示剂2~3滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在螺旋夹a 关闭,螺旋夹b 开启的状态下，准确吸取10。
实验二_蛋白质含量的测定-凯氏定氮法1
实验二_蛋白质含量的测定-凯氏定氮法1一、实验原理蛋白质是生物体内重要的营养成分，因此测定样品中蛋白质含量是生物学领域中的一项基础性工作。
凯氏定氮法是测定蛋白质含量的一种常用方法。
由于蛋白质中氮元素的含量较高，因此凯氏定氮法以氮元素计算蛋白质含量，具有简便、准确、重现性好等特点，广泛应用于蛋白质含量的测定中。
该法的基本原理是：将待测样品中蛋白质水解后，将产生的氨基酸再通过氧化还原反应以生成气态氨，利用碱性铜离子氧化氨生成蓝色化合物，蓝色化合物的浓度与样品中氮的含量成正比，从而计算出样品中蛋白质的含量。
二、实验仪器和试剂1. 仪器：水浴器、移液器、分析天平。
2. 试剂：包括0.1mol/L NaOH、1% CuSO4、1% KNaC4H4O6、1% Na2SO4、 Na2CO3和测定氯离子的盐酸铵铁Ⅲ溶液等。
三、实验步骤1. 准备样品：首先将待测样品去除水分，将10mg的样品放入烘箱中加热到60℃，持续4h使其干燥。
取出后冷却，称取约10mg-20mg样品，转移到干净、干燥的燃烧器中。
2. 水解：加入3ml的6mol/L HCl，进行加热水解。
将燃烧器放到水浴器中，加入适量的水，然后用酒精灯或燃气灯加热至沸腾。
持续水解1h，注意不要使燃烧器干燥，需要时加入适量的水。
3. 去除氨：过滤水解液，将滤液倒入容量瓶中，并加入足量的NaOH溶液，使pH值达到9-10。
再加入10ml的Na2SO4溶液，混匀。
然后将瓶口拔开，将瓶口放在水浴器中并加入适量的NaOH溶液，使瓶内的氨气完全挥发，待液面稳定后用盖子盖好。
4. 确定还原态铜离子的数量：取一定量的0.1mol/L NaOH溶液，加入CuSO4和KNaC4H4O6，混匀后加入约1g的Na2CO3，加水定容，制成标准CuSO4溶液。
5. 滴定：取出约5ml水解液，放入锥形瓶中加清水至刻度线，加入50μl的盐酸铵铁Ⅲ溶液，混匀。
用标准CuSO4溶液滴定至液体颜色由黄变蓝。
蛋白质的测定方法—凯氏定氮法
蛋白质的测定方法—凯氏定氮法一、原理食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。
二、试剂1、硫酸铜硫酸钾浓硫酸氢氧化钠2、硼酸溶液（20g/L）：称取20g硼酸，加水溶解并稀释至1000ml。
3、氢氧化钠溶液（400g/L）：称取400gNaOH加水溶解后，放冷，并稀释至1000ml。
4、盐酸标准溶液（0.05mol/L）5、甲基红乙醇溶液（1g/L）：称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100ml。
6、溴甲酚绿乙醇溶液（1g/L）：称取0.1g溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100ml。
7、甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：临用时以1:5混合。
三、测定1、试样处理（消化）：准确称取水解胶原蛋白0.5g,准确至0.0001g，硫酸铜0.2g，硫酸钾6g于干燥洁净的凯氏定氮管中，至消化炉上，加浓硫酸20ml，盖帽。
开启消化炉（温度设定为400℃），仪器大约20分钟达到设定温度，开始计时，样品消化需2-3h，至液体呈蓝绿色并澄清透明后。
断电，放冷。
2、蒸馏与吸收：将消化好的试样转移至100ml容量瓶中，加水（边加边缓慢振摇容量瓶，由于样品放热，操作时戴手套以免烫伤）稀释至100ml容量瓶中，摇匀，备用。
同时做空白试验。
向接收瓶中加入硼酸（20g/L）50ml及10D甲基红—溴甲酚绿混合指示剂。
打开凯氏定氮仪电源开关，打开冷却水，设置加碱（40%的NaOH 溶液）时间为7秒，蒸馏时间为6分钟，取定容后溶液10ml到消化管中，放置到相应位置。
关闭安全门，开机预热3分钟后按启动键开始加碱、蒸馏。
当吸收液呈中性时，停止吸收。
用0.05mol/L盐酸标准液滴定接收液，颜色由绿色变为灰红色即为滴定终点，记录消耗盐酸体积。
3、计算C*(V1-V0)*0.014X=----------------------*F*100M*10/100其中水解胶原蛋白换算系数F为5.791、注意事项1、开机预热3分钟，第一个样品测试用蒸馏水代替样品，加碱时间设置为0，使仪器预热。
凯氏定氮法实验报告
运动营养学实验报告姓名：___ _____ 学号：_____ 日期：_______实验名称凯氏定氮法测定食物中蛋白质的含量实验目的1.了解凯氏定氮法测定食物中蛋白质含量的原理2.掌握凯氏定氮法测定食物中蛋白质含量的方法以及注意事项实验原理蛋白质是含氮的有机化合物，样品与浓硫酸和催化剂一起加热消化，蛋白质分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
通过碱化蒸馏使氨游离，用过量硼酸吸收后在以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数即可算出蛋白质含量。
主要仪器和试剂消化炉、消化管、试管夹、蒸馏吸收器、锥形瓶、加样枪、盐酸标准液、豆浆、实验主要步骤1、消化往消化管中加入5ml豆浆,加2片消化片和浓硫酸10ml小心混匀。
将消化管置于消化炉上，接好排气系统。
设定参数温度为420度，时间为1小时，开始消化。
起初管内会出现炭化和泡沫，泡沫消失后管内成绿色，表明已消化完，冷却至室温。
2、蒸馏和吸收将冷却的消化管至于凯氏定氮仪上，设定系数，浓氢氧化钠30ml，硼酸60ml，打开开关即可放出氨气，氨气在加有硼酸和缓和指示剂的接收瓶中被吸收。
3.滴定接收瓶内的溶液用0.1mol/l的盐酸滴定至颜色变为浅红色即可，同时对另一空白管做同样操作。
4.计算根据公式X=（V-V1）*0.014*C*100*F/样品的重量（mg/ml）算出样品中蛋白质的含量实验结果X=(8-0.175)*0.014*0.1*100*5.71/5=1.251分析与讨论1、由于对仪器使用不是很熟悉，蒸馏过程中出现暂停现象。
2、因为有样品的对照滴定时估测到所需滴定的量，使操作变得简便。
结论100豆浆中所含蛋白质的量为1.251g。
凯氏定氮法测定蛋白质含量的步骤
凯氏定氮法测定蛋白质含量的步骤文档下载说明Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document 凯氏定氮法测定蛋白质含量的步骤can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to knowdifferent data formats and writing methods, please pay attention!凯氏定氮法（Kjeldahl method）是一种常用于测定样品中蛋白质含量的方法，它通过将样品中的氮转化为氨，并以氨的形式进行测定来计算蛋白质含量。
这个方法需要一系列的步骤来完成，下面是详细的步骤。
步骤一。
样品的准备。
1. 样品的称量。
首先，准备好待测样品。
样品的量通常是根据实验需求来确定的，通常在0.1到1克之间。
简述凯氏定氮法测定蛋白质的步骤
简述凯氏定氮法测定蛋白质的步骤
凯氏定氮法(Kjeldahl法)指的是用硫酸和氨水解液在催化剂的作用下将原料中蛋白质氮转化为氨，并把氨催化时形成的氢气反应吸收后，再以酸-碱滴定法滴定
氨气含量，从而计算出蛋白质氮含量，这种方法就是凯氏定氮法测定蛋白质的步骤。
凯氏定氮法测定蛋白质的步骤如下：
一、样品制备：将取得的样品(乳品、肉品或是其他类型的食物)分割、切碎成
相对细小的粉末，并确保碎片充足或浸入，然后将样品制成稀疏的悬浮液。
二、催化：将处理后的悬浮液放入定氮瓶中，使用有机催化剂，如甲酸钠、钠
邻苯二甲酸、钠邻苯三甲酸等，催化后的悬浮液中的蛋白质被氧化，形成氨气和水溶性的有机化合物。
三、氨气吸收：将催化后的悬浮液加入硫酸，使悬浮液放入高温循环气流，温
度由110℃升高至200℃，然后将催化后的悬浮液中的氨气吸收到硫酸中，使样品
中的氨气进入硫酸中，形成硫酸氨溶液。
四、滴定：将硫酸氨溶液滴定，可以使用酸性和碱性滴定，将硫酸氨溶液与
0.1mol/L的NaOH或HCl滴定，当滴定结束时，酸性滴定液变蓝色，而碱性滴定液
变红色，可以通过比较颜色的深度计算出氨气的浓度
五、计算：根据计量表可以计算出每升催化液中氨气含量，从而得出样品中蛋
白质的氮量。
总之，凯氏定氮法能够有效地测定蛋白质的氮量，是国际上最为普遍使用的蛋
白质分析方法。
岁的定氮法的步骤一般都是相同的，但是根据具体实验的不同，可能会有部分小的差别，而且我们在催化剂的选择上也需要多加慎重、针对性的考虑，以达到理想的测试效果。
01 生物化学实验--凯氏(Kjeldahl)微量定氮法测定血清蛋白质含量
凯氏（ Kjeldahl ）微量定氮法测定血清蛋白质含量【目的】1 ．掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括未知样品的消化蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。
2 ．熟悉微量凯氏定氮法的原理。
【原理】凯氏定氮法是蛋白质含量测定的经典方法，它是根据蛋白质分子中含氮量来测定的，各种蛋白质含氮量比较近似，平均约为 16 ％，即 1g 氮相当于 6.25g 蛋白质。
由测定出的氮量即可换算出蛋白质含量。
血清蛋白质或其它有机含氮物与浓硫酸加热进行消化 ( 氧化 ) 时，其中碳、氢、氧元素分别被氧化为二氧化碳和水，而氮原子则转变成氨，后者与硫酸结合生成硫酸铵，留在溶液中，为了加速有机物质的氧化分解，在消化时加入硫酸铜做为催化剂，加入硫酸钾以提高消化液的沸点。
硫酸铵与氢氧化钠作用，放出氨，通过水蒸气蒸馏将氨带入接收瓶中被硼酸溶液吸收，使溶液中氢离子浓度降低，指示剂颜色发生改变，用已知浓度的标准盐酸滴定，直至原来溶液中氢离子的浓度恢复，即指示剂变为原来的颜色。
根据所消耗的标准盐酸量，即可计算出样品中的总氮量。
化学反应式如下：1 ．消化含氮化合物 +H 2 SO 4 —→CO 2 ↑+H 2 O +(NH 4 ) 2 SO 4 +SO 2 ↑2 ．蒸馏(NH 4 ) 2 SO 4 + 2NaOH—→2NH 4 OH+Na 2 SO 4NH 4 OH—→NH 3 ↑+ H 2 O3NH 3 +H 3 BO 3 —→(NH 4 ) 3 BO 33 ．滴定(NH 4 ) 3 BO 3 +3HCl—→3NH 4 Cl+H 3 BO 3以上测定为样品中的总氮量，由总氮量减去非蛋白氮，即为蛋白质含氮量，再乘以 6 . 25 即为血清蛋白质含量。
【器材】1 ．电炉2 ．铁三角架3 ．酒精灯4 ．锥形瓶5 ．消化管（凯氏烧瓶）6 ．滴定管7 ．微量凯氏定氮器8 ．刻度吸量管9 ．玻璃珠10 ．漏斗11 ．血清【试剂】1 ．硫酸钾粉末2 ． 12 . 5 ％硫酸铜水溶液3 ．浓硫酸4 ． 2 ％硼酸水溶液5 ．混合指示剂取 0 . 1 ％溴甲酚绿乙醇溶液 10ml 与 0 . 1 ％甲基红乙醇溶液 4ml 混合6 ． 30 ％氢氧化钠溶液7 ． 0 . 0lmol / L 盐酸标准溶液【操作】一、消化取消化管二支，标明测定管与空白管，按下表进行操作：混匀，置于电炉上加热消化（图 3-1 ），开始有水蒸气逸出，继而溶液呈现棕色并冒出白烟 (SO 3 ) ，此时火力应减小，并在管口上盖一小漏斗，以免硫酸损失过多，再继续消化至溶液变为澄清的蓝绿色，即消化完毕 ( 此过程约需 25 分钟左右 ) ，冷却后加水 3 . 8ml ，使总量成为 5ml( 内有 1 . 2ml 硫酸 ) ，混匀，准备蒸馏。
凯氏定氮法测定蛋白质原理及操作
一、概述蛋白质是生命活动中不可或缺的重要物质，其含量的测定在生物化学研究和食品加工领域具有重要意义。
针对蛋白质含量的测定方法有许多种，其中凯氏定氮法是一种经典且常用的测定方法，本文将就凯氏定氮法测定蛋白质的原理及操作进行详细介绍。
二、凯氏定氮法原理1. 基本原理凯氏定氮法是通过测定样品中氨基氮的含量来间接测定蛋白质含量的方法。
蛋白质是由氨基酸构成的，而氨基酸中含有氮元素，故可以通过测定样品中氮元素的含量来推算出样品中蛋白质的含量。
2. 操作步骤（1）样品的预处理：将待测样品进行适当的预处理，通常是将样品中的有机物燃烧成气体，从而将其中的氮元素转化为氮气。
（2）氮气的收集：收集样品燃烧产生的氮气，通常是通过化学吸收剂的吸收来将氮气纯化。
（3）氮气的测定：将纯化后的氮气进行定量测定，得出氮气的含量。
（4）蛋白质含量的计算：根据氮气的含量，通过一定的计算公式来推算出样品中蛋白质的含量。
三、凯氏定氮法操作注意事项1. 样品的选择选择代表性好的样品进行测定，避免样品中含有其他干扰物质，影响测定结果的准确性。
2. 仪器的使用严格按照仪器的操作说明进行操作，保证测定过程的准确性和精确度。
3. 数据的处理对测定得到的数据进行严格的处理，计算过程中不应出现错误，以确保蛋白质含量的测定结果准确可靠。
四、凯氏定氮法测定蛋白质的优缺点1. 优点（1）测定范围广：凯氏定氮法可以适用于各种类型的样品，包括食品、饲料、生物组织等。
（2）测定结果可靠：经过严格的样品预处理和操作步骤，测定结果具有较高的准确性和精确度。
2. 缺点（1）操作繁琐：凯氏定氮法的操作步骤相对繁琐，需要较长的操作时间。
（2）不适用于含氮杂质的样品：如果样品中含有其他氮元素化合物的干扰物质，则可能影响凯氏定氮法的测定结果。
五、结语凯氏定氮法作为一种经典且常用的蛋白质测定方法，其原理和操作步骤相对简单明了，但需要严格遵守操作规范，以确保测定结果的准确性和可靠性。
凯氏定氮法测定蛋白质含量公式
凯氏定氮法测定蛋白质含量公式
蛋白质是有机物中最重要的成分之一，因此测定蛋白质含量是众多行业的必要技术手段。
凯氏定氮法曾被用于快速、经济、精确地测定蛋白质的含量和结构，是一种有效的测定和分析技术。
凯氏定氮法是一种由当今著名的美国化学家L.K.Cai发明的测
定蛋白质含量的方法。
根据凯氏定氮法，蛋白质含量可以用下面的公式来表示：
蛋白质含量（g/L）= N V/1000
其中，ε是每克氨基酸的氮量；N是一定量样品中氨基酸的精密含量，单位是毫克；V是样品体积，单位是升。
凯氏定氮法是一种可以快速准确测定蛋白质含量的方法，仪器的使用简单方便，非常适用于快速测定蛋白质含量的需求。
它检测的蛋白质含量反应迅速，且数据准确，尽管它在测量酶类有一定的不足。
除了测定蛋白质含量，凯氏定氮法也可以用于分析蛋白质的特定结构，特别是氨基酸的结构分析。
它使用一种含氮色谱室进行检测，能够检测样品中不同氨基酸的含量，从而方便蛋白质组成结构的分析。
此外，凯氏定氮法有可能破坏蛋白质的天然结构，因此只适用于解析蛋白质的碱基，而不适用于测定类蛋白和复杂蛋白的氨基酸含量。
总之，凯氏定氮法是一种快速、精确地测定蛋白质含量和结构的有效技术，将成为有机物测试和分析中不可或缺的一环。
它在测定蛋白质组成和不同样本之间的差异时尤为有用，是一种实用性非常高的技术。
即使凯氏定氮法有一些局限性，在蛋白质结构分析，特别是氨基酸组成分析方面，仍然是一种有效的技术。
它的简便快捷，实用性高，准确性也很强，可以在短时间内快速准确地测定蛋白质含量，是生物和分析化学方面重要的技术之一。
凯氏定氮法测定蛋白质含量
凯氏定氮法测定蛋白质含量【凯氏定氮法测定蛋白质含量】引言：蛋白质是生物体中非常重要的一类有机物质，它在细胞结构、代谢调节、酶催化等方面都起到至关重要的作用。
因此，准确测定蛋白质的含量对于研究生物体的生理功能和代谢过程十分重要。
凯氏定氮法是一种常用的测定蛋白质含量的方法，它利用蛋白质中的氮元素与含氮化合物反应，通过测定反应生成物中的氨基氮含量来确定蛋白质的含量。
本文将一步一步地介绍凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理、实验步骤以及注意事项。
一、原理：凯氏定氮法的原理基于蛋白质是含有较高比例的氮元素的化合物。
测定蛋白质的含量可以通过测定样品中氨基氮的含量来实现，其中氨基氮与蛋白质的含量呈线性关系。
凯氏定氮法的核心步骤是将蛋白质样品与含有氧化剂的酸溶液一起加热，使蛋白质中的氮元素被氧化转化为氨基氮，然后用氨盐指示剂反应形成带有颜色的化合物，最后通过比色分析来测定蛋白质中氮元素的含量。
二、实验步骤：1. 实验前准备：根据实验需求准备蛋白质样品、凯氏试剂、氨盐指示剂等。
2. 样品制备：将蛋白质样品称取适量，加入酸性溶液中溶解，使其完全溶解。
注意保持溶液的酸性，并避免样品中的氨基酸被过度氧化。
3. 氮元素的氧化：将样品溶液与凯氏试剂混合，在适当的温度下加热，使样品中的氮元素被氧化转化为氨基氮。
反应时间根据样品的性质而定，一般为1-2小时。
4. 反应结束：冷却样品溶液，使其达到室温。
反应结束后，样品中的蛋白质会被转化为氨基氮。
5. 比色分析：将反应溶液与氨盐指示剂进行反应，形成带有颜色的化合物。
然后使用分光光度计测定化合物的吸光值。
通过与标准曲线进行比较，可以确定样品中氨基氮的含量，进而计算出蛋白质的含量。
三、注意事项：1. 样品的选择：样品的选择取决于实验的目的，可以是纯蛋白质样品，也可以是含有蛋白质的复杂混合物。
样品的含量和浓度应该适当，以保证实验结果的准确性。
2. 温度和时间的控制：样品与凯氏试剂的加热温度一般为75-105摄氏度，反应时间根据样品的性质而定。
微量凯氏定氮法测定蛋白质含量 实验报告
微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告实验原理：
凯氏定氮法是通过测定含氮物质的数量，从而计算出样品中蛋白质的含量。
凯氏试剂是含钾离子和官能羰基的化合物，它与蛋白质中的氨基酸进行反应，在碱性条件下，产生深蓝色的染色。
然后该样品通过消化样品中的蛋白质，并测定生成的氨基酸，从而确定蛋白质含量。
实验步骤：
1、将待测样品称取1.0g，加入100ml蒸馏水中，加压漏斗过滤，过滤液用量筒调整至100ml。
2、分别取3个15ml离心管，分别加入0.5ml、1.0ml、1.5ml的上述过滤液，加入10ml去离子水，倒入3个含3ml凯氏试剂的小烧杯中混匀。
3、将上述混合液加热至沸腾，然后降温至室温。
4、取10ml反应液加入预先消化好的咪唑试液，加0.6ml甲酸（25%质量比），加入2ml亚硝酸钠（0.6mol/L，pH7.6），使溶液变成黄绿色，插入预先调整好的滴定管，滴定0.1mol/L氢氧化钠溶液，直到溶液变成淡黄色。
5、重复2~4步骤，做三次平均。
实验结果：
测得0.5ml、1.0ml、1.5ml三组样品分别消耗10.8ml、21.4ml和32.1ml的0.1mol/L 氢氧化钠溶液。
计算得出每份样品中蛋白质的含量分别为3.24mg、3.22mg和3.18mg，平均值为3.21mg。
实验结论：
本实验通过微量凯氏定氮法测定出样品中蛋白质含量为3.21mg/g，该方法操作简单、准确、重复性好，是一种快速测定蛋白质含量的有效方法。
凯氏定氮法测定蛋白质含量公式
凯氏定氮法测定蛋白质含量公式
1 凯氏定氮法
凯氏定氮法是一种常用的测定蛋白质含量的方法，由凯氏于1883
年提出。
它的原理是：将样品中的蛋白质氨基酸氧化分解为氨态水，
测定样品中氨态氮的含量，用凯氏定氮法公式计算蛋白质的实际含量。
2 凯氏定氮法的基本原理
凯氏定氮法的基本原理是将蛋白质氨基酸浓度通过离子交换树脂
提取，然后将氨基酸氧化分解为氨态水，再测定样品中氨态氮的含量，用凯氏定氮法公式计算蛋白质的实际含量，凯氏定氮法公式如下：
3 凯氏定氮法公式
蛋白质的实际含量=样品内的氨态氮的总量（毫克）÷6.25
其中6.25是认为蛋白质中的结构基元氨基酸的比例为1:6.25，也就是说，100毫克蛋白质中含有16毫克氨基酸，以此类推。
4 凯氏定氮法的优势
凯氏定氮法具有准确、快速、重现性好等特点，在实时测定立即
分析模式中，仍是最常用的技术。
从实验时间上看，凯氏定氮法比其
他定氮方式更加快捷，且准确率较高，受其实验程序简单、复杂材料
分离容易使用的优势受到广大研究人员的青睐。
5 凯氏定氮法的应用
凯氏定氮法大多用于测定含氨基酸的蛋白质，应用范围很广，一般应用在动物、植物的分子的氨基酸的分析，主要用于衡量蛋白质含量，便于计算组分，如果其他物质也能被氧化，也可以用它进行测定计算。
另外，凯氏定氮法也可以用于研究病毒、细菌等非蛋白质有机物的含氮量。
蛋白质测定-凯氏定氮法
在蒸馏过程中，要确保冷凝器 工作正常，以免造成氨气泄漏
。
在滴定过程中，要控制好滴定 速度，避免过快或过慢，影响
测定结果的准确性。
实验环境要求与维护
实验室应保持整洁、干燥、通风良好。
实验器具应妥善保管，避免损坏和污 染。
实验台面应定期清洁，保持无尘状态。
实验室的电源和加热设备应定期检查 和维护，确保安全可靠。
体积误差、氮换算系数误差等。
误差传递
02
根据误差来源，评估其对最终结果的影响程度，并计算误差传
递系数。
结果可靠性评估
03
根据误差传递结果，对测定结果的可靠性进行评估，判断是否
需要重新进行实验或采取其他措施来减小误差。
05
注意事项与安全
实验安全注意事项
01
实验操作应在通风橱中 进行，以避免吸入有害 气体。
结果计算
根据实验数据，计算样品 中的蛋白质含量。
误差分析
对实验结果进行误差分析， 确保测定结果的准确性和 可靠性。
04
结果分析与解读
数据记录与整理
实验数据
在实验过程中，需要准确记录每 个步骤中的数据，包括样品质量 、滴定体积、空白实验滴定体积 等。
数据整理
将实验数据整理成表格，列出每 个样品的各个测量值，以便后续 计算和分析。
限制
由于凯氏定氮法操作繁琐、耗时长、试剂消耗量大等缺点，对于一些低蛋白质含量的样 品或者特殊样品（如含有大量非蛋白质氮的样品），该方法可能不太适用。同时，凯氏 定氮法测定的结果受样品处理和操作过程的影响较大，需要严格控制实验条件和操作步
骤。
02
实验材料与设备
实验材料
硫酸铜
用于样品消化，提 供催化剂。
凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量
凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量食品种类很多,食品中pro的性质和含量各不相同,而且其他成分,如碳水化合物,脂肪和维生素的干扰成分很多,因此pro的测定通常利用经典的凯氏定氮法将样品消化成铵盐蒸馏,用标准酸液吸收,用标准酸或碱液滴定,由样品中含氮量计算出pro的含量。
由于食品中pro含量不同又分为凯氏定氮常量法、半微量法和微量法,但它们的基本原理都是一样的。
我们在检验食品中pro时,往往只限于测定总氮量,然后乘以pro核算等数,得到蛋白质含量,实际上包括核酸、生物碱、含氮类脂、叶啉和含氮色素等非蛋白质氮化合物,故称为粗pro。
1凯氏常量定氮法不论常量、半微量以及微量定氮法它们的原理都是一样的,首先第一个步骤是消化:样品与硫酸一起加热消化,硫酸使有机物脱水。
并破坏有机物,使有机物中的C、H氧化为CO2和H2O蒸汽逸出,而pro则分解氮,则与硫酸结合成硫酸铵,留在酸性溶液中。
在消化过程中添加硫酸钾可以提高温度加快有机物分解,它与硫酸反应生成硫酸氢钾,可提高反应温度,一般纯硫酸加热沸点330?,而添加硫酸钾后,温度可达400?,加速了整个反应过程。
此外,也可以加入硫酸钠,氢化钾盐类来提高沸点。
其理由随着消化过程硫酸的不断地被分解,水分的逸出而使硫酸钾的浓度增大,沸点增加。
加速了有机的分解。
但硫酸钾加入量不能太大,否则温度太高,生成的硫酸氢铵也会分解,放出氨而造成损失。
为了加速反应过程,还加入硫酸铜,氧化汞或硒粉作为催化剂以及加入少量过氧化氢,次氯酸钾作为氧化剂。
但为了防止污染通常使用硫酸铜。
所以有机物全部消化后,出现硫酸铜的兰绿色,它具有催化功能,还可以作为碱性反应指示剂。
使用仪器推荐:消化炉或者全自动定氮仪。
1.1蒸馏样液中的硫酸铵在碱性条件下释放出氨,在这操作中,一是加入氢氧化钠溶液要过量,二是要防止样液中氨气逸出。
吸收与滴定:蒸馏过程中放出的氨可用一定量的标准硫酸或标准盐酸溶液进行氨的吸收,然后再用标准氢氧化钠溶液反滴定过剩的硫酸或盐酸溶液,从而计算出总氮量。
凯氏定氮法
并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小 玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室 内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml 40%氢氧化钠溶 液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，夹紧 螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进 入接收瓶内，蒸馏5min。移动接收瓶，使冷凝管下端离开 液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。 取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液定至灰色或 蓝紫色为终点。 同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。
三 实验试剂:
1 硫酸铜 硫酸钾 浓硫酸 400g/L氢氧化钠溶 液 0.1000mol/L硫酸标准溶液 2 4 0g/L硼酸吸溶液。 3 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份 2g/L溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合 1份0.1%次甲 基蓝乙醇溶液临用时混合。
四 操作步奏:
1、样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品 或吸取10-20ml液体样品，移入干燥的100ml或500ml定氮瓶 中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于 瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上， 小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火 力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后， 再继续加热30min。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移 入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶 中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫 酸铜、硫酸钾、浓硫酸同一方法做试剂空白试验。
六、注意事项:
1、严禁酸碱污染吸收液、所用去离子水及管道等。
2、固体样品消化时防止挂壁且注意梯度升温。 3、硫酸钾提高反应温度，但不可过多，否则温度过多，引起生成的 铵盐分解产生氨，影响结果。 4、硫酸铜起催化剂作用并可指示消化终点。 5、注意标记。 6、取消化瓶时防止烫伤。 7、吸收前确保管口插入液面，吸收结束后使冷凝管下端离开液 面， 并用去离子水将管口冲洗干净并回收至接收瓶。 8、规范滴定操作，且终点判定要一致。
凯氏定氮法测定蛋白质含量
凯氏定氮法测定蛋白质含量
凯氏定氮法是一种常用的方法，用于测定蛋白质的含量。
该方法基于蛋白质中氮的含量与蛋白质的质量之间的关系。
根据凯氏定氮法的原理，蛋白质中的氮会转化为氨气，并通过与硫酸反应形成铵盐。
通过测量反应产生的氨气量，可以计算出样品中蛋白质的含量。
凯氏定氮法的具体步骤如下：
1. 将待测的样品进行消化处理，使其中的蛋白质完全释放出氮。
2. 将消化后的样品与碱性溶液混合，将其中蛋白质中的氮转化为氨气。
3. 将产生的氨气通过蒸馏等方式收集起来。
4. 收集的氨气通过与硫酸反应形成铵盐。
5. 使用酸碱滴定法测定生成的铵盐中的硫酸含量，从而计算出样品中的氮含量。
6. 将氮含量转化为蛋白质含量，通过乘以一个合适的系数，根据不同类型的蛋白质样品选择对应的系数。
凯氏定氮法是一种经典的方法，可以用于测定多种类型的蛋白质样品，但在具体操作时需要注意控制样品中其他可能含有氮的物质的影响，以及选择合适的系数来转化氮含量为蛋白质含量。
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关键：搞清水管系统
蒸馏器的洗涤
１.接通冷凝水，向蒸汽发生器中加入 一定量的水(以排水口高度为宜)，酒 精灯加热烧开。
２.水的自动喷出： 将蒸馏水从加样室加入反应室 将酒精灯移开片刻，反应室内水 自动喷出到蒸汽发生器 打开蒸汽发生器出水口，放水。 如此反复清洗3-5次。
CH2NH2COOH+3H2SO4
2CO2+3SO2十4H2O十NH3
2NH3+H2SO4
(NH4)2SO4
蒸馏吸收：浓碱使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，
借水蒸汽将产生的氨蒸馏到硼酸溶液中，硼酸吸氨后使溶
液中的氢离子浓度降低，指示剂变色
(NH4)2SO4 + 2NaOH → Na2SO4 + 2H2O + 2NH3↑ NH3 + HBO2→ NH4BO2 （H3BO3 → HBO2 + H2O）
滴定：标准HCl滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度
为止，根据所用标准酸的摩尔数(相当于待测物中氨的摩 尔数)，计算出样品中的总氮量。
NH4BO2 + HCl → HBO2+NH4Cl
消化 蒸馏、吸收
滴定
三、试剂与器材
1、消化液：H2O2：H2S04 ：H2O=3：2：1 2、粉末硫酸钾―硫酸铜混合物
0.1％甲基红乙醇溶液混合配成，棕色瓶贮存。
等等
酸性时为紫红色，碱性时为绿色。变色
范围很窄且灵敏。
7、待测样品
四、操作方法
1. 消化前样品处理 固体样品: 某一固体样品中的含氮量是 用100g该物质(干重)中所含氮的g数来 表示(％)。 固体样品105℃烘干至恒重。
用坩埚钳将称量瓶放人干燥器内，待降至 室温后称重，按上述操作继续烘干样品。 每干燥1小时后，称重一次，直到两次称量 数值不变，即达恒重。
小心照看，防止反应液喷出 防止烧到橡胶管
冷凝管末端不用时防在干净的烧杯中，防止NaOH污染 空白：蒸10分钟未变色，再蒸3分钟 铁架台：夹子口朝上
思考题
1、何谓消化？如何判断消化终点？ 2、在实验中加入粉末硫酸钾―硫酸铜混合物的作用是什么？ 3、固体样品为什么要烘干？ 4、蒸馏时冷凝管下端为什么要浸没在液体中？ 5、如何证明蒸馏器洗涤干净？ 6、本实验应如何避免误差？
３.清洗后在冷凝管下端放一锥形瓶盛 有5 mL，2％硼酸溶液和1～2滴指示 剂的混合液。如不变色则表明蒸馏装 置内部已洗涤干净。
蒸馏吸收
准备: 取50 mL锥形瓶3个，各加入5 mL 硼酸溶液和1滴指示剂，溶液呈淡紫色，表面 皿覆盖备用。 关闭冷凝水，打开自由夹，使蒸汽发生器与大气相通。将锥形瓶放在冷凝器下， 冷凝器下端浸没在液体内。
若样品为液体(如血清等)，可取一定体 积样品直接消化测定。
取凯氏烧瓶 标号。各加几颗玻璃珠; 1及2号瓶中各加样品0.1g，催化剂
2、消化
200 mg，消化液5 mL。3及4号瓶中 加样时应直接送人瓶底，不 各加相同量的催化剂和消化液-----对照， 要沾在瓶口和瓶颈上。
以测定试剂中可能含有的微量含氮物
加样:
移液管取3 mL消化液（空白液和样品消化液分别做），加入反应室，用小量筒
加NaOH溶液5mL，关闭自由夹，少量水封口。 蒸馏:
关闭自由夹，打开冷凝水。 点燃酒精灯，蒸馏开始，锥形瓶中溶液由淡紫色变绿时(约2-3分钟)开始计时，蒸
馏3分钟，移开锥形瓶，使冷凝器下端离开液面约1cm，继续蒸馏1分钟，取下锥 形瓶，表面皿覆盖。 蒸馏完毕后，应立即清洗反应室，方法如前所述。 重复3次。最后将自由夹同时 打开，将蒸汽发生器内的全部废水换掉，继续下一次蒸馏。
4、滴定
全部蒸馏完毕后，用标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量， 硼酸指示剂溶液由绿变淡紫色为滴定终点。
注意：使用前检查酸式滴定管漏不漏？漏的话，涂凡士林
滴定时一边滴一边摇，防止滴定过头！
及时记录读数
要求：空白液1次，样品消化液2次
总氮量 (％) =
5、计算
c为标准盐酸溶液摩尔浓度(0.0098M)；
V1为滴定样品消化液用去的盐酸溶液平均mL数； V2为滴定空白液用去的盐酸溶液mL数；
w为样品重量(1g)。
14为氮的相对量子质量。
消化液总量500ml, 蒸馏时消化液用量3ml
样品蛋白质含量(％)=总氮量×6.25
注意事项
冷凝水的开、关 自由夹：中间 酒精灯：加到2/3，防止燃烧中途不够 蒸汽发生器中：水到瓶颈凹陷处 火焰
质。
消化开始时应控制火力，不使液体
冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完，硫酸开
始分解并放出SO2白烟后，适当加强火 力消化，直至消化液呈透明淡绿色。
定容：冷却后，加蒸馏水(慢加，随加 随摇)。将瓶中液体倾入50 mL或100 mL容量瓶，并以蒸馏水洗烧瓶数次， 洗液并入容量瓶，定容。
3、蒸馏吸收： 改进型凯氏定氮仪
K2S04与CuS04.5H20以 3：1混合 3、30％氢氧化钠溶液 4、2％硼酸溶液 5、标准盐酸溶液(约0.01 mol／L) 6、混合指示剂(田氏指示剂)
1.凯氏烧瓶 2.凯氏定氮仪 3.分析天平 4.酸式滴定管 5.烘箱 6.消化炉
由50mL 0.1％甲烯蓝乙醇溶液与200mL 7.容量瓶
实验二 蛋白质含量的测定―凯氏定氮法
一 目的： 学习凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理 掌握蒸馏、滴定操作技术
三聚氰胺 C3N6H6
“蛋白精”
二、原理：蛋白质含N量约为16％，测出含氮量推知蛋白含量。
消化：有机物与浓硫酸供热，使有机氮全部转化为无机氮-
--硫酸铵。添加硫酸铜和硫酸钾的混合物，前者为催化剂， 后者提高硫酸沸点。