恩替卡韦体外代谢初步研究

恩替卡韦体外代谢初步研究

药学院3051709008张玲娣药学

指导教师姚彤炜 教授浙大药学院

摘要

目的通过对恩替卡韦的体外代谢研究，获得恩替卡韦的主要代谢途径、酶动力学参数，及其异构体对恩替卡韦的代谢影响。方法择肝微粒体法体外代谢系统选，研究恩替卡韦的的一相、二相代谢。确证恩替卡韦的主要代谢途径，并对其主要代谢实验条件进行最佳化，在此条件下测定恩替卡韦及其异构体的酶动力学参数，以及异构体对恩替卡韦的代谢影响。孵育液中恩替卡韦及异构体剩余量采用HPLC法测定，色谱条件为：ODS分析柱。甲醇—水（20：80）为流动相，检测波长为254nm。结果HPLC法测定孵育液中的恩替卡韦具有较好的专属性，孵育液中其他峰不干扰恩替卡韦的定量分析；测得恩替卡韦浓度1～20μg/ml的范围内有良好的线性关系；不同浓度的提取回收率在84.9~95%之间（RSD<2%），日内精密度RSD<2%；稳定性考察结果，样品孵育液在260min内稳定（RSD<1%）。恩替卡韦的体外代谢研究结果表明，其体外代谢较弱，只观察到其二相代谢，几乎没有观察到其一相代谢反应。经对二相代谢条件最佳化结果，确定微粒体蛋白浓度为0.5mg/ml，孵育时间为5min。在此条件下测定恩替卡韦和它异构体的酶动力学参数。恩替卡韦：Km=21.63μM/L，Vmax=1250 μM/mg protein/min，Cl int=57.80 L/mg protein/min 异构体：Km=21μM/L，Vmax=1666.67 μM/mg protein/min，Cl int=79.37 L/mg protein/min。恩替卡韦与异构体相互作用：在选定条件下考察异构体对恩替卡韦代谢影响，结果发现，异构体对恩替卡韦的代谢基本上没有抑制或促进作用，即异构体不影响恩替卡韦的代谢。结论主要代谢途径为二相代谢，对恩替卡韦及其异构体的酶动力学参数进行测定发现它们具有相近的Km值，进一步对异构体代谢影响研究，发现异构体对恩替卡韦代谢有一定的抑制作用。

关键词：恩替卡韦；一相代谢；二相代谢；酶动力学