重组人蛋白细胞因子的研究选择 - 细胞因子 - MedChemExpress
重组人粒细胞刺激因子蛋白特性及蛋白重折叠过程杂质研究
重组人粒细胞刺激因子蛋白特性及蛋白重折叠过程杂质研究作者：李潜李岩异侯丽媛张彩乔张卫婷来源：《科技风》2017年第07期摘要：重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）是用于治疗化疗所致的中性粒细胞减少症。
来源于基因工程的细胞表达的包涵体，包涵体经过变性、复性和分离纯化等步骤处理后得到药用级别的rhG-CSF。
本文根据重组人粒细胞刺激因子蛋白结构特性，对包涵体裂解复性过程中蛋白质重折叠过程进行总结，通过对其重折叠过程的研究，以便于找寻到更优化裂解复性条件，提高下游生产回收率，提高工业生产效益。
关键词：重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）；包涵体；裂解复性；蛋白质重折叠重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）是近20年来发展起来的最令人激动的新药物，也是世界上最畅销的五种重组类生物药物之一。
粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony stimulating factors，G-CSF）是能够在体内外特异地作用于中性粒细胞系，促进其增殖、分化，并能维持功能和存活的一种糖蛋白类生长因子[ 1 ]。
其在刺激造血细胞的增殖、分化和血细胞的功能活性中发挥着重要作用。
例如，它可以刺激相应的定向造血祖细胞分裂，预防细胞凋亡，并启动造血亚群发育并成熟。
1 重组人粒细胞刺激因子蛋白特性及在大肠杆菌中的表达特性成熟的人类G-CSF是一个由带有O 联糖链的174个氨基酸组成分子质量为19.0kd的糖蛋白，在Cys36-Cys42和Cys64-Cys74之间有一个分子内二硫键，有一个游离的半胱氨酸残基17。
天然的人粒细胞刺激因子在苏氨酸（Thr133）有一个O-糖基化位点，这个位点可以保护蛋白免受聚集，但该位点并不影响蛋白活性。
人G-CSF cDN A有两种不同的形式，分别编码174和177个氨基酸的成熟蛋白。
两种mRNA来源于同一前体分子，其形成机理是选择性剪接，两种不同的G-CSF cDNA分子生物学活性差别较大，174个氨基酸形式的G-CSF比177个氨基酸形式的G-CSF生物学活性高出50倍以上。
蛋白质结构与功能——细胞因子(共46张PPT)
第五节 细胞因子的应用领域及临床应用(了解）
一、细胞因子疗法
细胞因子添加疗法 细胞因子拮抗疗法
细胞因子基因疗法
细胞因子诱导的细胞介导的生物治疗
二、临床应用
1.感染性疾病
IL-1R拮抗剂、TNF-单抗： IFN-g：抗病毒感染
IL-5: 抗寄生虫感染
IL-12：纠正AIDS病人Th1细胞减少
。
细胞因子与移植排斥反应 在排斥反应发生时，局部和全身的某些细胞因子水平升高。 细胞因子与其他疾病 IL-3、CSF产生异常 与造血功能异常的疾病有关。TNF可诱发
急性肝坏死、恶液质。
2.肿瘤
IL-2/LAK细胞：
3.移植物排斥
抗IL-2/IL-2R
4.血细胞减少症
EPO 、GM-CSF
5.超敏反应 IL-4
6.自身免疫性疾病
IL-10 IL-2/IL-2R
临床应用中的实际问题
细胞因子与感染
感染后诱生的细胞因子既可参与机体抗感染免疫，也能引 起发热、参与急性期反应及感染性休克。
细胞因子与肿瘤
细胞因子对肿瘤的作用具有双重性，既能杀伤肿瘤，也能促 进肿瘤生长。
细胞因子与自身免疫病
某些细胞因子能促进某些自身组织细胞表达MHC-II类抗原，从
而使这些细胞具有抗原递呈功能，可激活T效应细胞导致自身组织 的损害
细胞因子与超敏反应 IL-4和IFN能调节IgE的生成和FcεRII的表达
JAK激酶的结构
催化结构域
STAT的结构
JAK-STAT信号转导途径
IL-2R
(2) MAP激酶途径
IL-2R
(3) PI-3K (磷酸酰肌醇-3-激酶)信号传导途径
重组人干细胞因子工艺研究
重组人干细胞因子工艺研究---------专业班级姓名学号摘要人干细胞因子(Human stem cell factor，hSCF)是一种重要的造血细胞因子，该文章在重组hSCF工程菌的基础上，通过高密度发酵培养、包涵体分离纯化、变复性、SP—Sepharose FF、Source 30RPC与Q—Sepharose FF层析等技术分离纯化出具有生物学活性的重组人干细胞因子，建立了适合大规模生产重组人干细胞因子的分离纯化工艺。
关键词组人干细胞因子包涵体复性分离与纯化生物学活性分离纯化工艺人干细胞因子(Human stem cell factor，hSCF) 又称为肥大细胞生长因子(mast cellgro、Ⅵh factoL MGF)、kit配体(kit ligand，KL)及steel因子(steel factoL SL)，为c．kit原癌基因编码受体的配体蛋白，是自1990年发现的一种重要的细胞因子。
它能够刺激早期造血干细胞及祖细胞增值，是造血干细胞增值分化的关键因子【1】。
hSCF能刺激造血细胞的生长、增生与分化。
它可以与其它造血因子共同发挥作用，如与白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6)、集落刺激因子(G-CSF)、促红细胞生成素(EPO)等表现出较强的协同效应，临床上SCF可用于治疗一系列原发性或继发性的(因毒性、辐射免疫损伤造成的)以髓细胞亚群数目减少为特征的干细胞功能异常等类型的疾病【2~4】。
具有广阔的应用前景和药用开发价值。
正是由于SCF具有广阔的应用前景，所以对它的需求也很大，但是其天然来源有限，成熟型可溶性SCF(SCF165)在人体或动物体内含量甚微，在血中的浓度为3.3ng/mL，故不可能从天然组织中分离纯化足够量的样品进行实验室和临床应用研究【5】。
大量实验证明，人SCF的糖基化对其活性不是必需的，如此就可以用基因工程方法，使用大肠杆菌等表达体系来生产重组人SCF(rhSCF)，以此来解决这个难题【6】。
CD39小分子抑制剂ARL67156增强NK细胞对胃癌细胞的杀伤作用
胃癌是一种常见的恶性消化道肿瘤，我国每年约有40万人死于该疾病［1,2］，胃癌治疗后的平均总生存时间（mOS ）为7.5~12月［3,4］。
常见的胃癌治疗手段有：传统方式（包括：手术、放疗、化疗）和新疗法（包括：靶向治疗、免疫治疗等）［5］。
然而，传统治疗方式有诸多不足，比如：对肿瘤组织的特异靶向性差，不能够有效区分正常组织和癌组织，常引发正常组织产生损伤，当胃癌发生转移后，很多传统方法难以用于一线治疗［5］。
近年来，肿瘤免疫治疗方法，因其靶向性好、特异性高、副作用小等优点，逐渐在临床胃癌治疗中广泛应用起来［5］。
胃癌肿瘤细胞表面表达多种肿瘤相关抗原，如：靶向肿瘤抗原Her2。
临床已应用多种特异性靶向肿瘤相关的抗体治疗胃癌，靶向Her2单克隆抗体已作为胃癌的一线治疗药物［6］。
但是肿瘤逃逸的机制，如：表达肿瘤抗原减ARL67156,a small-molecule CD39inhibitor,enhances natural killer cell cytotoxicity against gastric cancer cells in vitro and in nude miceGONG Ying 1,AIMAITI Ailifeire 1,HE Zongzhong 21Department of Laboratory Medicine,Nanfang Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China;2Department of Transfusion Medicine,Southern Theater Command General Hospital,Guangzhou 510010,China摘要：目的探讨CD39小分子抑制剂ARL67156增强NK 细胞杀伤胃癌细胞的影响及其机制。
方法采用磁珠抗体的方法外周血分离纯化人原代自然杀伤细胞（NK 细胞），用100µmol/L 的ARL67156处理NK 细胞24h 后，Western blot 蛋白印迹检测NK 细胞活化的信号通路，ELISA 检测NK 细胞与胃癌细胞共培养上清中细胞因子IFN-γ分泌情况，通过流式细胞术检测NK 细胞的CD107a 脱颗粒；流式细胞术体外检测NK 细胞与胃癌细胞共培养后的杀伤能力；将12只小鼠随机分为3组（4只/组）：PBS 组、NK 细胞组、NK 细胞+ARL67156组，建立皮下胃癌荷瘤小鼠模型，尾静脉回输NK 细胞，腹腔注射ARL67156，采用裸鼠皮下成瘤模型研究人原代NK 细胞杀伤胃癌细胞的疗效。
CCK8检测操作手册 - 细胞技术_MedChemExpress
WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品，如 XTT 、MTS 等相比有明显的优点。
第一，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解；而 WST-8 和 XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。
第二，WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。
第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠。
第四，WST-8 和 MTT 、XTT 等相比线性范围更宽，灵敏度更高，并且更加稳定。
WST-8 对细胞无明显毒性。
加入 CCK-8 溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定最佳测定时间。
产品编号HY-K0301-100T HY-K0301-500T HY-K0301-3000T HY-K0301-12000T包装1 mL 5 mL 5 mL × 6(5 mL × 6) × 4产品名称Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-81包装清单产品概述Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。
WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1) 。
细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数目呈线性关系 (图2) 。
重组细胞因子药物
（3）IL-2对LAK、TIL细胞的作用
IL-2可促进LAK （即淋巴因子激活的杀伤 细胞lymphokine activated killer cells）, TIL（肿瘤浸润性淋巴细胞）细 胞的体外存活、扩增及活化LAK。
α-干扰素的应用使慢粒的治疗上了新台阶， 干扰素可抑制有Ph染色体的肿瘤细胞克隆， 其中1/3患者Ph染色体明显减少，甚至消失， 恢复正常的造血功能。
目前多数学者认为α-干扰素治疗慢粒慢性 期病人疗效好于晚期病人；大剂量长疗程 好于间断给药；联合用药好于单一用药， 常用的联合用药有马利兰、羟基脲和阿糖 胞苷。国内慢粒协作组采用α-干扰素联合 羟基脲治疗慢粒70例，有效率94.3%。
织的修复 3.参与神经-内分泌系统和免疫系统间的信
号传递 4.参与细胞凋亡和抗肿瘤 5.参与炎症和免疫病理性损伤
二、白细胞介素类药物
白细胞介素用品
1.重组人白介素-2 （ Recombinant Human Interleukin , rhIL-2）
1)IL-2的生物活性
(1) IL-2对T细胞的作用 IL-2是T细胞生长因子，能使T细胞在试管内
【外文名】
Erythropoetin ,Erythropoietin, r-
HuEPO,Recombinant Human Erythropoietin,
Epoetinalfa
促红细胞生成素功能
1）促进多能造血干细胞向红系祖细胞分化增殖 2）促进红系祖细胞分化增殖 3）控制红细胞产生的速率 4）促进红细胞成熟 5）促进某些非红系祖细胞，如粒细胞核血小板
MPBIO各类细胞因子重组蛋白
MPBIO各类细胞因子重组蛋白-----探生科技产品概述：细胞因子（cytokine,CK）是指有免疫细胞（如单核-吞噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（如血管内皮细胞、表皮细胞、成纤维细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白。
优点：重组蛋白高纯度高活性低内毒素人，小鼠，大鼠按功能分，可分为以下几种：1.白细胞介素（Interleukin，IL）由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。
由于最初是由白细胞产生且又在白细胞间发挥作用，所以得名，现仍沿用此名。
2.干扰素（interferon，IFN）具有干扰病毒复制的能力，故得名。
其具有十分广泛的生物活性，在免疫应答和免疫调节中发挥重要作用，也是主要的促炎细胞因子之一。
干扰素分为：I型（7种，如IFN-α和IFN-β）和II型（仅有IFN-Y）3.肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）由于在体内外均可直接杀伤肿瘤细胞而得名。
其家族成员约有30个。
主要成员：1） TNF-α，一种单核因子主要由单核细胞和巨噬细胞产生2） TNF-β，一种淋巴因子，主要由淋巴细胞、NK细胞等产生，其生物学活性与TNF-α相类似4.集落刺激因子（colony stimulating factor，CSF）一组在体内外均可选择性刺激造血祖细胞增殖、分化并形成某一谱系细胞集落的细胞因子，包括巨噬细胞CSF、粒细胞CSF、巨噬细胞/粒细胞CSF、干细胞因子等。
5.生长因子（growth factor，GF）一类可介导不同类型细胞生长和分化的细胞因子，根据其功能和所作用细胞的不同，分别命名为转化生长因子（TGF）、神经生长因子（NGF）、表皮生长因子（EGF）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）等。
6.趋化性细胞因子（chemokine）一类对不同靶细胞具有趋化效应的细胞因子家族，可由白细胞和某些组织细胞分泌，是一个包括60多个成员的蛋白质家族。
细胞因子重组融合蛋白研究进展
１（ｅ １ ）Ｐｎ 等¨ 把 Ｉ一 ２ ｓ Ｌ２ ，ｅｇ Ｌ１ ｌ ２的 ｐ５和 ｐＤ ３ ４ 亚单 位 通过 多 ｜ 肽 接头连接 （４ ．ｎｅ．３ ） ｐＯ １ｋｒｐ５ 后再 与抗 Ｈ ｒ ｎｕ ｉ ｅ ／ ｅ 抗体重链 氨 ２
有特异性结合 Ｃ ３ 原和 Ｉ． Ｄ ０ｊ 元 Ｌ１ ２受体的能力 ， 能刺激 Ｔ细
胞分泌 ＩＮ＾ 并 高效诱 导 Ｎ Ｆ －， ， Ｋ细 胞溶 解 Ｃ ３ 胞。这 些 Ｄ０ 细 特性使 Ｈ Ｓ － Ｆ—ｉＬ１ 可用 于 Ｈ ｄｋ Ｒ ３ｓ ｖ － ． ｅ ｈＩ ２ ｏｇｉ ｎ氏淋 巴瘤 的特 异
一
他生 长因子一起发挥 协同作用 ， 好 的二联细 胞 因子融合 是最
蛋 白的备选 因子 。ＩＦＩ可刺激多 种组织 中细胞 的增 殖或分 Ｇ Ｉ
化。将 ＩＦⅡ Ｇ 与一段信号肽以及胰 岛素样的昆虫激素 ｂ． ｏ
ｍ ｘ 的 Ｎ端 序列融 合表达 ， 可 得到分 泌形 式 的具 有生 物 ｙｉ ｎ 便
脾脏 而发挥造血功 能。
毒素－ － 的融合蛋 白（ Ａ 螂 Ｉ－） 表 达 高亲 和力 Ｉ－ 受 Ｉ２ Ｌ ＤＢ Ｌ 对 ２ Ｌ２ 体 的细胞株起 毒性作用 ， 乏完整 的高 亲和 力受体 的细 胞 而缺
株 （ ｐ５亚单位而 无 ｐ５亚单 位 ） 有 ５ ７ 则对 该 融合 毒 素相 对 耐
活 性 的 Ｂ ＭＩ Ｆ ｌ Ｏ Ｇ Ｌ 。Ｄｆｌｏ等 制 备 了 一 种 Ｂ ＭＩ Ｆ和 ｉｃ ａ Ｏ Ｇ
类能直接杀伤靶 细胞 的免疫制剂 。体外 试验表 明 ， Ｊ 白喉
Ｉ－ Ｌ ３的融合蛋 白 ， 体外试 验 中它 可刺 激正常外 周血 细胞 中 的 骨髓干 细胞集落形成 ， 内试 验结果亦 显示 该融合 蛋 白能动 体 员具有 高度增殖活性 的骨髓 干细胞 进入 外周 血 ， 进而定 居至
《重组细胞因子药物》课件
04
重组细胞因子药物的挑战与 前景
重组细胞因子药物的疗效与安全性问题
疗效问题
重组细胞因子药物在某些疾病治疗中疗效不佳，需要进一步优化药物设计和治 疗策略。
安全性问题
重组细胞因子药物的副作用和不良反应需要关注，如免疫反应、肝肾损伤等。
重组细胞因子药物的产业化发展前景
市场需求
随着人口老龄化和疾病谱的变化，对重组细胞因子药物的需求逐渐增加，市场潜 力巨大。
利用基因工程技术，在适当的宿 主细胞中表达目的基因，并进行 大规模培养和生产。
药效学评价
对重组细胞因子药物进行药效学 评价，包括体内外实验，以评估 其治疗作用和安全性。
靶点筛选与验证
确定具有治疗潜力的细胞因子靶 点，通过实验验证其功能和作用 机制。
临床试验与上市
经过多阶段的上市。
重组细胞因子药物在其他疾病治疗中的成功案例
总结词
其他疾病治疗领域，重组细胞因子药物展现出广阔的 应用前景
详细描述
除了肿瘤和免疫治疗领域，重组细胞因子药物在其他 疾病治疗中也展现出广阔的应用前景。例如，在心血 管疾病的治疗中，血管内皮生长因子能够促进血管新 生，改善心肌缺血。在眼科疾病的治疗中，贝伐珠单 抗能够抑制血管内皮生长因子的活性，从而减轻视网 膜水肿和改善视力。这些成功案例表明，重组细胞因 子药物具有广泛的治疗潜力和临床应用价值。
THANKS
昆虫表达系统
原核表达系统
利用昆虫细胞作为宿主细胞，表达重组细 胞因子药物，具有高表达水平、易大规模 培养等优点。
利用原核生物（如大肠杆菌）作为宿主细 胞，表达重组细胞因子药物，具有成本低 、易大规模生产等优点。
重组细胞因子药物的纯化与质量控制
初步纯化
(推荐)II型细胞因子及其受体研究进展
II型细胞因子及其受体研究进展目前已经发现的细胞因子有200多种，随着基因测序技术的快速发展，相信会有更多的因子被发现，并且随着细胞工程技术和蛋白重组技术的发展，一定会有更多的细胞因子重组蛋白被纯化制备。
细胞因子功能多样，不同因子间可以相互作用，同一因子可以有不同的功能，因此，细胞因子构成了一个复杂的网络功能图。
而细胞因子想要发挥作用，必须与相应的受体结合行。
细胞因子与其受体结合后，会对细胞产生作用，可以刺激细胞生长增殖分化，调控机体免疫应答，为在细胞及分子水平研究某些自身免疫性疾病、肿瘤、免疫缺陷疾病的发病机理提供数据，为临床治疗和诊断提供指导依据。
细胞因子受体一般分成四个类型：Ⅰ型细胞因子受体（Type ⅠCytokine Receptor）、Ⅱ型细胞因子受体家族（Type ⅡCytokine Receptor）、TNF超家族受体以及趋化因子受体。
在本文，将主要介绍Ⅱ型细胞因子及其受体的研究进展及其应用。
Ⅱ型细胞因子受体家族（Type ⅡCytokine Receptor ），也称干扰素受体家族（Interferon receptors family）。
主要包含Ⅱ型白介素（IL-10，IL-19，IL-20，IL-22等）受体，Ⅰ型干扰素（IFNA，IFNB）受体和Ⅱ型干扰素（IFNG）受体。
此类受体的结构特点治是在膜外区近氨基端含有四个保守半胱氨酸残基细无Trp-Ser-X-Trp-Ser序列，一般为具有高亲和力的异二聚体或多聚体。
II型细胞因子受体的细胞外结构域由串联Ig样结构域组成，细胞内结构域通常与属于Janus激酶（JAK）家族的酪氨酸激酶相关。
Ⅱ型细胞因子及其受体研究最早和最深入的应该是干扰素（IFNs）及其受体。
干扰素主要有两种类型：I型和II型。
I型干扰素包含IFN-α、IFN-β、IFN-v、IFN-d和IFN-t，II型干扰素仅含有IFN-γ。
I型干扰素与其受体相互作用可以激活多种信号转导通路，发挥多种生物学功能，如抗病毒、抗增殖、免疫调节和发育活性等。
重组人il-2蛋白
重组人il-2蛋白
重组人IL-2蛋白是通过基因重组技术制造的一种人类白细胞介素2（IL-2）蛋白。
IL-2是一种细胞因子，对促进免疫反应、增强免疫细胞的生长和活力等方面都有重要作用。
制造重组人IL-2蛋白的常见方法是将含有人类IL-2基因的质粒转化到大肠杆菌等细菌中进行表达和纯化。
然后通过多种方法去除细菌残留物和其他杂质，使得得到的IL-2蛋白高纯度、高效率、无污染。
重组人IL-2蛋白可以用于医疗领域，例如作为免疫增强剂或治疗某些免疫系统相关疾病的药物。
同时，重组人IL-2蛋白的制造也具有研究意义，可以深入了解IL-2对免疫功能的影响和机制。
高表达MYH9通过激活AKT
肺癌是全球发病率第2，死亡率排名第1的癌症［1,2］。
非小细胞肺癌（NSCLC ）是肺癌中最常见的类型，占全部肺癌的80%~85%［3］。
患者生存率与肿瘤分期相关，晚期患者5年生存率不足10%［4］。
目前，NSCLC 的药物治疗主要包括化疗、分子靶向治疗和免疫治疗，采用药物治疗可以提高患者生存期，降低复发风险。
但是耐药的出现严重限制了治疗效果，导致肿瘤复发及远处转移［5］。
多项研究显示肿瘤对细胞凋亡的抵抗在耐药过程中发挥关键作用［6-9］。
因此，削弱肿瘤对凋亡的抵抗对逆转耐药提高化疗的成功率具有重要意义。
肌凝蛋白，也被称为肌球蛋白，是真核细胞中依赖ATP 的分子马达家族。
它们在细胞运动和细胞内物质High expression of MYH9inhibits apoptosis of non-small cell lung cancer cells through activating the AKT/c-Myc pathwayLIU Fang 1,PENG Lanzhu 2,XI Jingle 11Department of Oncology,Nanfang Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China;2Cancer Center,Integrated Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine,Southern Medical University,Guangzhou 510315,China摘要：目的探讨肌球蛋白重链9（MYH9）对非小细胞肺癌（NSCLC ）细胞增殖、凋亡和对顺铂敏感性的影响并探讨其作用机制。
方法常规培养6株NSCLC 细胞系（A549、H1299、H1975、SPCA1、H322、H460）和1株正常支气管上皮细胞系（16HBE ）采用Western blot 法检测MYH9的表达情况；采用免疫组织化学染色法检测NSCLC 患者组织MYH9的表达，实验分为癌组织（49例）和癌旁组织（43例）；常规培养H1299和H1975细胞系，使用CRISPR/Cas9技术构建MYH9敲除的NSCLC 细胞系，实验分为sgNC 组，sgMYH9组，采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、克隆形成实验检测敲除MYH9对肺癌细胞增殖的影响；Western blot 实验、细胞凋亡流式细胞术检测MYH9对细胞凋亡的影响；通过IC50法检测敲除MYH9的肺癌细胞对顺铂敏感性的影响，实验分为sgNC 组、sgMYH9组；培育小鼠肿瘤异种移植物模型验证MYH9体内生物学功能，实验分为sgNC 组、sgMYH9组。
重组细胞因子基因衍生蛋白注射液-详细说明书与重点
重组细胞因子基因衍生蛋白注射液【成份】重组细胞因子基因衍生蛋白，系用含有重组细胞因子基因衍生蛋白基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后制成。
辅料：氯化钠、聚山梨酯80、苯甲醇、乙酸铵、氢氧化钠、注射用水。
【适应症】用于治疗HBeAg 阳性的慢性乙型肝炎。
【用法用量】●肌肉注射，一次10 μg，一日1 次。
●连用12 周后改为隔日1 次，一周3 次，连用24 周。
【禁忌】⏹对本品及其所含成份有过敏史者禁用。
⏹患有严重心脏疾病。
⏹严重的肝、肾或骨髓功能不正常者。
⏹癫痫及中枢神经系统功能损伤者。
⏹有其它严重疾病不能耐受本品者，不宜使用。
【注意事项】患者发生的不良反应常出现在用药初期, 多为一过性和可逆性反应；如发生中等程度至严重的不良反应, 可考虑调整患者的用药剂量或对某些病例停止使用本品。
本品为无色透明液体, 如遇有浑浊、沉淀等异常现象，则不得使用。
包装瓶有损坏、过期失效不能使用。
【孕妇及哺乳期妇女用药】禁用。
【临床试验】一项随机、双盲、对照、多中心的III 期临床研究结果显示，与对照药普通干扰素α2b（300 万IU）比较，重组细胞因子基因衍生蛋白注射液治疗HBeAg 阳性慢性乙型肝炎受试者12 周，血清HBeAg 转阴率为27.11%（45/166），对照药的血清HBeAg 转阴率16.17%（27/167），重组细胞因子基因衍生蛋白注射液组的HBeAg 转阴率显著高于对照药。
延长用药时间至24 周（其中后12 周两组均使用重组细胞因子基因衍生蛋白注射液），重组细胞因子基因衍生蛋白注射液组的血清HBeAg 转阴率为41.30%（38/92）；用药12 周，重组细胞因子基因衍生蛋白注射液组与对照品组的HBV DNA 血清转阴率分别为16.47%（28/170）和12.21%（21/172），HBeAg 血清学转换率分别为21.08%（35 例）和13.77%（23 例），丙氨酸氨基转移酶（ALT）复常率分别为27.06% 和20.93%。
细胞因子
细胞因子有哪些/细胞因子种类点击次数：98 发布时间：2011-4-2 11:06:38为了维持机体的生理平衡，抵抗病原微生物的侵袭，防止肿瘤发生，机体的许多细胞，特别是免疫细胞合成和分泌许多种微量的多肽类因子。
它们在细胞之间传递信息，调节细胞的生理过程，提高机体的免疫力，在异常情况下也有可能引起发烧、炎症、休克等病理过程。
这样一大类因子已发现的有上百种，统称为细胞因子，包括淋巴细胞产生的淋巴因子、单核细胞产生的单核因子、各种生长因子等。
许多细胞因子是根据它们的功能命名的，如白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、集落刺激因子(CSF)、肿瘤坏死因子(TNF)、红细胞生成素(EPO)等。
细胞因子研究具有非常重要的理论和实用意义，它有助于阐明分子水平的免疫调节机理，有助于疾病的预防、诊断和治疗，特别是利用基因工程技术生产的重组细胞因子已用于治疗肿瘤、感染、炎症、造血功能障碍等，并收到良好疗效，具有非常广阔的应用前景。
从分子结构来看，细胞因子都是小分子的多肽，多数由100个左右氨基酸组成。
细胞因子都是通过与靶细胞表面的细胞因子受体特异结合后才能发挥其生物学效应，这些效应包括促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和杀肿瘤细胞效应，促进或抑制其他细胞因子的合成，促进炎症过程，影响细胞代谢等。
细胞因子的这些作用具有网络性的特点，即每种细胞因子可作用于多种细胞；每种细胞可受多种细胞因子的调节；不同细胞因子之间具有相互协同或相互制约的作用，由此构成了复杂的细胞因子免疫调节网络。
目前人们对这一网络的认识尚远未清晰明了。
最近几年，基因重组的细胞因子作为一种新型的生物应答调节剂在临床应用上取得了令人瞩目的成就。
例如，最早用于临床的干扰素α在治疗白血病和病毒感染中收到显著疗效。
中国的干扰素a1在1991年通过新药审评，已得到较为广泛的应用。
目前在国际上已批准生产的细胞因子药物还包括EPO、干扰素γ、GM-CSF、G-CSF、IL-2等。
重组人蛋白细胞因子的使用常见问题 - 细胞因子 - MedChemExpress
重组人蛋白细胞因子的使用常见问题- 细胞因子- MedChemExpress1．重组蛋白分类2．重组蛋白表达体系MCE 重组蛋白表达体系主要有：大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞和哺乳动物细胞。
3．重组蛋白纯度和浓度测定重组蛋白纯度测定方法：a. SDS-PAGE 测定法；b. HPLC 测定法；c. 银染测定法。
重组蛋白浓度测定方法：a. Bradford 蛋白定量测定法；b. BCA 蛋白定量测定法；c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。
4．重组蛋白运输状态MCE 的大部分重组蛋白产品为冻干粉，在室温环境中都是稳定的，一般采用蓝冰或是室温运输。
5．重组蛋白表达体系对比6．重组蛋白表达体系选择7重组蛋白开盖使用前处理为防止冻干粉产品的粉末沾在管壁或管盖上，使用前请勿开盖，离心(约13000 rpm)处理20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。
MCE 保证每管产品的蛋白总量达到标示含量。
8．重组蛋白复溶a. 使用前先离心(约13000 rpm)处理20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。
b. 严格依据说明书，使用推荐的溶液将蛋白冻干粉溶解至推荐的浓度。
大多数重组蛋白建议溶解在灭菌超纯水中，浓度不低于100 μg/mL，以便于后续进一步稀释至工作浓度。
c. 用移液枪轻吹混匀，或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀，低速离心数秒。
d. 复溶后的重组蛋白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。
9.重组蛋白储存由于每次冻融都会造成蛋白的部分变性，因此建议客户收到产品后适量分装避免反复冻融。
a. 短期储存：冻干粉状态产品在室温下存放3 周，不影响活性。
复溶后的产品在4℃ 可稳定储存1-2 周。
b. 长期储存：冻干粉状态产品在-20℃ 下，可稳定保存至少一年；推荐-80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。
可选择包含一定浓度载体蛋白(0.1% BSA，5% HSA，10% FBS，或5% 海藻糖)的溶液或培养基复溶产品，分装后冻存于-20℃ 下，可保存至少三个月；推荐-80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。
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重组人蛋白细胞因子的研究选择- 细胞因子-
MedChemExpress
1．重组蛋白表达体系
MCE 重组蛋白表达体系主要有：大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞和哺乳动物细胞。
2．重组蛋白纯度和浓度测定
重组蛋白纯度测定方法：a. SDS-PAGE 测定法；b. HPLC 测定法；c. 银染测定法。
重组蛋白浓度测定方法：a. Bradford 蛋白定量测定法；b. BCA 蛋白定量测
定法；c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。
3．重组蛋白表达体系对比
4．重组蛋白表达体系选择
5．重组蛋白开盖使用前处理
为防止冻干粉产品的粉末沾在管壁或管盖上，使用前请勿开盖，离心(约13000 rpm)处理20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。
MCE 保
证每管产品的蛋白总量达到标示含量。
6．重组蛋白复溶
a. 使用前先离心(约13000 rpm)处理20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。
b. 严格依据说明书，使用推荐的溶液将蛋白冻干粉溶解至推荐的浓度。
大
多数重组蛋白建议溶解在灭菌超纯水中，浓度不低于100 μg/mL，以便于
后续进一步稀释至工作浓度。
c. 用移液枪轻吹混匀，或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀，低速离心
数秒。
d. 复溶后的重组蛋白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。
7.重组蛋白储存
由于每次冻融都会造成蛋白的部分变性，因此建议客户收到产品后适量分
装避免反复冻融。
a. 短期储存：
冻干粉状态产品在室温下存放3 周，不影响活性。
复溶后的产品在4℃ 可稳定储存1-2 周。
b. 长期储存：
冻干粉状态产品在-20℃ 下，可稳定保存至少一年；推荐-80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。
可选择包含一定浓度载体蛋白(0.1% BSA，5% HSA，10% FBS，或5% 海藻糖)的溶液或培养基复溶产品，分装后冻存于-20℃ 下，可保存至少三个月；推荐-80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。
注：分装冻存时，蛋白浓度不低于100 ng/μL，且每管的体积不可小于20
μL。
8.重组蛋白标签影响
蛋白标签指重组蛋白制备过程中与目的蛋白融合表达的蛋白或多肽。
MCE 的重组蛋白产品大部分为无标签状态，但少数重组蛋白产品因为不同目的
需要加有标签。
a. 标签利于蛋白纯化。
b. 当目的蛋白无特定抗体直接鉴定，可利用标签进行Western Blot 或ELISA 分析方法鉴定。
c. Fc 标签可以提升重组蛋白的半衰期以提高分子的稳定性，同时也能够促
进重组蛋白形成活性二聚体。
重组蛋白标签对蛋白的生物学活性影响存在未知结论，但对大部分检测应
用中，重组蛋白的标签对蛋白本身生物学活性并无影响，所以无需移除。
MCE 对重组蛋白产品都已经做过生物学活性检测并将数据公示于COA 中。
9. 重组蛋白活力值与计算方法
MCE 重组蛋白的生物学活性(ED50) 测定数据在COA 中可以获得。
ED50 是Effective Dose 50 的缩写，是可诱导50% 最大反应的蛋白浓度(ng/mL)。
计算公式如下:
MCE 的重组蛋白产品并未采用WHO (National Institute for Biological
Standards and Control) 设定的标准来测定活力值，以上计算公式并不适
用于“International Units”和“ED50”的转换关系，需要采用国际标准品
对比相同实验获得该重组蛋白的IU 值。
10. 重组蛋白ED50 值的批间差
不同批次的产品或不同实验方法的测定都会导致重组蛋白产品的ED50 值变化，我们推荐客户根据自己的实验测定得到最合适的实际ED50 值。
11. 重组蛋白应用方案
MCE 重组蛋白产品的COA 中显示的实验方案只是确认该产品的ED50 值，但并不与终端客户的不同类型实验结果存在等效性。
如果客户需要应用在
不同于本公司产品测试的实验方法时，我们建议客户通过实际测试获得最
佳ED50 值。
12.重组蛋白的种属交叉活性
重组蛋白的种属交叉活性需要根据具体产品而定；建议尽量选择对应种属
的重组蛋白。
如实在无法匹配种属，以下信息供参考：
a. 大多数人细胞因子对小鼠细胞有效(仅少数例外)。
b. 多数小鼠细胞因子对人细胞有效，但特异性可能不强。
如小鼠的表皮生
长因子(EGF)对人的表皮细胞有活性，对人的其他种类细胞可能也有作用。
c. 干扰素、GM-CSF、IL-3、IL-4 具有种属特异性，即重组人的这些细胞因
子只能作用于人细胞，对小鼠和大鼠等其他种而重组小鼠的这些细胞因子
也仅用于小鼠，对人的细胞无效。
d. 成纤维细胞生长因子(FGFs)、神经营养素( Neurotrophins，如BDNGF、GDNF、CNTF、β-NGF 等)、TGF-β 等高度保守，各种属间交叉活性强。