α-半乳糖苷酶活性测定方法的研究
饲用α-半乳糖苷酶稳定性及酶学特性的研究
饲用α-半乳糖苷酶稳定性及酶学特性的研究王春林;陆文清【摘要】本试验系统研究了通过固态发酵法生产的饲用α-半乳糖苷酶粗酶的稳定性及其酶学特性.结果显示,该酶具有较强的耐酸性能,稳定pH范围在3.5～6.5.酶的最适温度在50～60℃,在70℃以下时基本稳定,酶在干热条件下稳定性比湿热高.α-半乳糖苷酶经过猪胃肠液处理活力下降,但仍能保持活力70%以上.较高浓度(1×10-3mol/L)的各种金属离子均抑制酶活,在低离子浓度(1×10-4mol/L)时,Co2+和Mn2+对酶活力有促进作用,两种浓度的Ag+和Hg2+均强烈抑制酶活.粗酶制剂在常温储存6个月时仍保留原始活力的90.30%,到9个月时有80.58%,可见酶制品在储存条件下稳定.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2010(000)006【总页数】3页(P14-16)【关键词】α-半乳糖苷酶;温度;pH;胃肠液【作者】王春林;陆文清【作者单位】中国农业大学动物科技学院;中国农业大学动物科技学院【正文语种】中文【中图分类】S816.7α-半乳糖苷酶是消除饲料原料中α-半乳糖苷聚糖类抗营养因子的饲用外源酶类（张丽英，2000；Leske和 Coon，1999）。
但酶在加工应用过程中先经受原料混合加工、高温制粒、运输和储存等环节后，才在动物胃肠道溶解发生作用，所以酶制剂的稳定性倍受关注。
α-半乳糖苷酶理化性质的研究对其在饲料中的应用具有指导意义。
本试验对α-半乳糖苷酶粗制品的耐酸、耐温和耐储存性能进行了测定，体外研究了动物消化液对酶活力的影响，探讨了粗酶-底物作用的动力学特征。
1 材料与方法1.1 酶样与酶活测定酶样取自青霉菌（Penicillium sp.MAFIC-6）固态发酵生产的α-半乳糖苷酶粗酶制剂，测试样品为原酶干粉或原酶稀释液。
酶活分析方法参照Wang等（2004）。
1.2 pH对酶活力及稳定性的影响用醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH 3.6 ～ 5.6，0.05 mol/L）、NaH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液（pH 5.7 ～8.0，0.10 mol/L）、Tris-盐酸缓冲溶液（pH 6.8 ～9.2，0.10 mol/L）和 Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液（pH 9.2～10.7，0.10 mol/L）配制pH为2.5～12.5的缓冲体系，测定相同酶液在不同pH条件下的酶活力，确定最适pH。
新型α-半乳糖苷酶的稳定性研究
［ 文章 编 号 ］ １ ０ ０ ９ — ０ ０ ０ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ６ — ０ ８ ５ ０ — ０ ３
Ｓ ｔ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ａ Ｎｏ ｖ ｅ ｌ ｃ ￣ － Ｇａ ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｓ ｉ ｄ ａ ｓ ｅ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｏ ｉ ｄ ｅ ｓ ｆ ｒ ａ ｇ ｉ ｌ ｉ ｓ
ｃ ｈ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ ｓ 。ａ ｔ ｔ ｗ ｏ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ （ １ ａ ｎ ｄ １ ０ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ ｒ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ） ．Ｔ ｈ ｅ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｗａ ｓ ｉ ｎ ｃ ｕ ｂ ａ ｔ ｅ ｄ
８ ５０
ＬＥＴＴＥＲ Ｉ Ｎ ＢＩ ＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ Ｖ 。 ｏ １ ｌ ． ・ ２４ 斗 Ｎ。． ｌ ０・ ６ Ｎｏ ｏ Ｏ ｖ Ｖ ． ， ２ ０１ ３ Ｔ Ｔ Ｓ
技 术 通 讯 ｖ
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ｉ ｎ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｐ Ｈ ｂ ｕ ｆ ｆ ｅｒ ，ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｔ ｅ ｍｐｅ ｒ ａ ｔ ｕｒ ｅ ａｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｌｕｅ ｆ ｎｃ ｅ ｏ ｆ ｄｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａ ｄ ｄｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｓ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｅ ｎｚ ｙ ｍｅ ．Ｍ ｅ ｔ ｈｏ ｄｓ： Ｔｈ ｅ
α半乳糖苷酶 标准
α半乳糖苷酶标准
α-半乳糖苷酶是一种重要的糖苷酶，它能够催化半乳糖苷水解为半乳糖和糖基。
以下是α-半乳糖苷酶的标准：
1. 定义：α-半乳糖苷酶是一种能够催化半乳糖苷水解为半乳糖和糖基的酶。
2. 分子量：该酶的分子量通常为40-50 kDa。
3. 活性：α-半乳糖苷酶的活性受到底物浓度的影响，当底物浓度增加时，酶的活性也会增加。
4. 特异性：该酶对半乳糖苷具有特异性，但对其他糖苷的亲和力较低。
5. 最适pH值：α-半乳糖苷酶的最适pH值通常为4.0-5.5。
6. 最适温度：该酶的最适温度通常为40-50℃。
7. 抑制剂：一些金属离子（如铜离子、锌离子）和酚类物质可以抑制α-半乳糖苷酶的活性。
8. 来源：α-半乳糖苷酶可以从不同的来源中提取，如细菌、真菌、植物和动物组织等。
9. 应用：α-半乳糖苷酶在食品工业、生物技术和医药等领域中具有广泛的应用。
以上是α-半乳糖苷酶的标准，希望能对您有所帮助。
重组人α-半乳糖苷酶在悬浮CHO-S细胞中的表达、纯化及功能活性鉴定
网络出版时间：２０２３－０３－２０１５：５４：２６ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３０３１９．２３５４．０５４．ｈｔｍｌ◇药检药理学◇重组人α 半乳糖苷酶在悬浮ＣＨＯ Ｓ细胞中的表达、纯化及功能活性鉴定邓木兰，周泓宇，郑可欣，李昭阳，郭婉怡，王艳苹，梁志成，李芳红，穆云萍，赵子建（广东工业大学生物医药学院，广东广州 ５１０００６）收稿日期：２０２２－１０－１０，修回日期：２０２３－０１－２２基金项目：国家重点研发计划项目（Ｎｏ２０１８ＹＦＡ０８００６０３）；广东省重点领域研发计划项目（Ｎｏ２０１９Ｂ０２０２０１０１５）；广东省“珠江人才计划”项目（Ｎｏ２０１６ＺＴ０６Ｙ４３２）；国家自然科学基金青年项目（Ｎｏ８２１０００６４）作者简介：邓木兰（１９９３－），女，博士生，研究方向：基因工程蛋白表达及溶酶体贮积症的治疗，Ｅ ｍａｉｌ：２１１１７０６１３９＠ｍａｉｌ２．ｇｄｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ；穆云萍（１９８８－），女，博士，讲师，硕士生导师，研究方向：心肺疾病及纤维化疾病发病机制及创新药物研发，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｍｕｙｕｎｐｉｎｇ２０１８＠ｇｄｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ；赵子建（１９６２－），男，博士，教授，博士生导师，研究方向：生殖、肥胖、代谢性疾病、肿瘤病理诊断和创新药物研发，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ａｚｚｈａｏ＠ｇｄｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０５０２２文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０４－０７７４－０８中国图书分类号：Ｒ３２９ ２４；Ｒ３４５ ６２；Ｒ３９４ ２；Ｒ５８９；Ｒ９７７ ３摘要：目的 运用无血清可高密度悬浮培养的中国仓鼠卵巢细胞（Ｃｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒｏｖａｒｙｃｅｌｌｓ，ＣＨＯ Ｓ）表达体系，分泌表达并纯化重组人α半乳糖苷酶（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎα ｇａｌａｃ ｔｏｓｉｄａｓｅＡ，ｒｈα ＧａｌＡ），验证其对法布雷病贮积底物神经酰胺三己糖苷（ｇｌｏｂｏｔｒｉａｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ，Ｇｂ３ｏｒＧＬ３）的清除效果。
α-半乳糖苷酶酶学性质及稳定性研究
５ ℃ 、 ℃ 、 ℃条件下检测产品活性 ， ５ ６ ０ ６ ５ 并计算酶
活 存 留率 （ ） ％ 。
１２ ３ 仅一半 乳糖 苷酶 稳定性 的研究 ．．
１ １ 试验 材料 ． 仅一半 乳 糖 苷 酶 由 山东 思 诺 拜 特 生 物 科 技 有 限公 司提供 。
１ ２ 试验 方法 ．
‘
该酶制 剂 的生产 和应 用提供 理 论依 据 。 关 键 词 ： 一半 乳糖 苷酶 ； 活 酶
Ｓｕ ｉｓｏ ｈ ｚ ｍｏｏ ｙＰ ｏ ｅｔｅ ｎ ｔ ｂｌ ｙｏ 一Ｇａａ ｔｓｄ ｓ ｔ ｄｅ ｎｔ ｅＥｎ ｙ ｌｇ ｒ ｐ ｒｉｓａ ｄ Ｓ ａ ｉｔ ｆ ｉ ｌｃｏｉａ ｅ
在 １ｍ ０ Ｌ原酶 液 中分别 加入 １ 、％ 、％ 和 ％ ３ ５ ７ （ ％ 质量分 数 ） 浓度 的氯 化钠 、 露 醇 、 ４种 甘 山梨
醇、 甘油保 护 剂 ， 保存 ７ 。测 定 不 同保 护 剂下 的 ｄ
为 １％ ， 温 度 分 别 为 ６ ￣ ６ ￣ ７ ￣ ７ ￣ ７ 在 ０Ｃ、５Ｃ、０Ｃ、５Ｃ、 ８℃ 、５Ｃ、０ 鼓 风 干 燥 箱 中 处 理 ５ ｉ， 后 ０ ８￣ ９℃ ｍｎ 然 测定 仅一半乳 糖 苷 酶 活 力 ， 以原 酶作 为 对 照 ， 计 算 酶活存 留率 （ ） ％ 。
能水 解非还 原性 末端 以 Ｏ一 ， ｔ １６一键结 合 的半乳
糖 苷 化合 物 ， 因此它 能水 解豆科 植 物 种 子 的 一
降解 释放 １￣ｏ对 硝 基 酚 所 需 的 酶量 为一 个 酶 ｍ ｌ ｐ
活单 位 （ 。 Ｕ） １２２ ． ． １２２ １ ． ． ． 一半乳糖 苷 酶酶 学性 质测 定 一半 乳糖 苷酶 ｐ 曲线 测定 Ｈ
仪一半乳 糖 苷 酶 （ｔ ａａｔｓ ａｅ Ｅ ． ． Ｏ—Ｇ ｌ ｏｉ ｓ ， Ｃ ３ ２ ｃ ｄ １２ ） ． ２ 也称 蜜 二糖 酶 ， 一 种 外 切 糖 苷 水 解 酶 。 是
α-半乳糖苷酶在畜禽日粮中的应用研究进展
适ｐ Ｈ为 ５１ ．；短双歧杆 菌 中提纯 到的Ｏ 半乳 糖苷 ／ 一 酶 ，最适 ｐ Ｈ为 ５５ ６５ ．～ ．，最适 反 应温 度 为 ３ ，在 ７℃
７ Ｏ℃ 时 失 活 ；青霉 中提取 的 一 半乳 糖苷 酶 最适 ｐ Ｈ
半 乳 糖 苷 酶 广 泛 存 在 于 动 物 、植 物 和微 生
１ ． 理 化 性 质 ２
一
催 化水解 多糖 、糖脂 、糖 蛋 白中糖链末 端 的 Ｏ １ Ｌ ，６ 一 半 乳糖 苷键 ，其不 仅 能水 解棉 籽糖 、水 苏 糖 和毛蕊
花 糖 等 低 聚 糖 ，还 能 水 解 含 一 乳 糖 苷 的 杂 多 半
糖 。近年 来 的研究 表 明 ，该酶 作 为一 种特 异性 外 源 酶 ，添加 于含 大 豆粕 的饲 料 中 ，可有 效促 进 饼粕 类 饲 料 原 料 中Ｏ 半 乳 糖 苷 物 质 的分 解 ，提 高 饲 料 营 ／ 一
１ 一 乳糖苷 酶 的 来源 及理 化性 质 半
１１ 来 源 ．
一
异 ，大 多数 半 乳 糖 苷 酶 的 最 适 ｐ 一 Ｈ为 ４ ７ 底 物 ～。
不 同 ，最 适 ｐ Ｈ会 发生 相 应 的变 化 ，另外 不 同方 法
制 得 的酶 也 有 不 同的最 适 温 度 和 ｐ Ｈ范 围 。蕃 茄 中 提 取 的Ｏ 半 乳 糖 苷酶 ，最 适 反 应 温 度 为 ４ ｔ 一 ８℃ ，最
பைடு நூலகம்
中０ 半乳糖苷物 质的分解 ，提 高饲料 营养素的利 用率。文章对 ｏ 半乳糖 苷酶应用 于畜禽 日粮 中的 最新研 究进展 【 一 ｔ 一
进 行 了综 述 。
关键词 ： 一 半乳糖 苷酶；理化性 质 ；畜禽 生产；应 用
中图 分 类 号 ： ￥ １ ．；￥ １ 文 献 标 志 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： １０ — ０ ４ ２ １） ５ ０ ３ — ３ ８ ６８ ８ ４ ０ １０ ８ （０ ２ ０ — ０ ４ ０
产α-半乳糖苷酶唾液乳杆菌XH4B筛选、性质、应用及高密度培养研究的开题报告
产α-半乳糖苷酶唾液乳杆菌XH4B筛选、性质、应用及高密度培养研究的开题报告1. 研究背景和意义α-半乳糖苷酶作为一种消化酶，在人类和动物的消化系统中起到关键作用。
同时它也是一种广泛用于食品、饲料工业和医疗领域的酶。
对于高效筛选和大规模生产α-半乳糖苷酶的菌株，具有重要意义。
唾液中含有大量细菌，其中乳杆菌是唾液中数目最多的细菌之一。
通过对唾液中乳杆菌的筛选，可以获得产α-半乳糖苷酶的高效菌株。
由此，本研究将从唾液样品中筛选出高效产α-半乳糖苷酶的厌氧乳杆菌XH4B，进一步探究其性质和应用，以及实现其高密度培养的研究，为α-半乳糖苷酶的应用和生产提供科学依据。
2. 研究内容和方法2.1 筛选产α-半乳糖苷酶的厌氧乳杆菌XH4B采集健康人唾液，利用微生物学方法筛选出产α-半乳糖苷酶的厌氧乳杆菌XH4B，并通过分子生物学方法鉴定其种属和亲缘关系。
2.2 分析产α-半乳糖苷酶的性质和应用通过对XH4B产α-半乳糖苷酶的生化特性、受底物和抑制剂的影响以及温度、pH等环境因素的影响进行分析，并探究其在食品工业和医疗领域的应用前景。
2.3 实现高密度培养研究通过优化培养基成分和培养条件，采用发酵罐等高密度培养设备，实现XH4B的高密度培养，并检测其产α-半乳糖苷酶的产量和活性。
3. 预期成果及意义3.1 预期成果本研究将从唾液中筛选出高效产α-半乳糖苷酶的厌氧乳杆菌XH4B，并对其性质和应用进行深入研究，同时实现其高密度培养，预计取得以下主要成果：（1）成功筛选并鉴定出产α-半乳糖苷酶的乳杆菌XH4B；（2）明确XH4B产α-半乳糖苷酶的物理化学性质和应用前景；（3）实现XH4B的高密度培养，提高产α-半乳糖苷酶的产量和活性。
3.2 意义本研究实现了从自然唾液中筛选出具有产α-半乳糖苷酶活性的乳杆菌，并探究了其性质和应用。
同时，通过高密度培养，实现了α-半乳糖苷酶的高效生产，并为其在食品、饲料和医疗领域的应用提供科学依据。
产α-半乳糖苷酶菌株的筛选、酶学特性和固定化研究
产α-半乳糖苷酶菌株的筛选、酶学特性和固定化研究
赵晴潇;魏群
【期刊名称】《东北电力大学学报》
【年(卷),期】2015(000)003
【摘要】为解决目前工业用α-半乳糖苷酶耗能大、成本高的难题,研究泡菜汁中筛选出产α-半乳糖苷酶的菌株,而后对其进行紫外诱变和亚硝酸钠进一步诱变,并在不同温度和不同pH下测定α-半乳糖苷酶酶活力。
结果表明：获得一株酶活高达36.9 U/mL的α-半乳糖苷酶菌株,该菌株所产α-半乳糖苷酶的最适反应温度为50℃,最适pH为5.5。
利用4%海藻酸钠做为固定剂对α-半乳糖苷酶进行固定化,可以使酶活保持在70%左右,此α-半乳糖苷酶高产菌株的发现及其酶学特性的研究为α-半乳糖苷酶的工业化应用奠定了基础。
【总页数】5页(P77-81)
【作者】赵晴潇;魏群
【作者单位】东北电力大学化学工程学院，吉林吉林132012;东北电力大学化学工程学院，吉林吉林132012
【正文语种】中文
【中图分类】Q93-33
【相关文献】
1.产低温β-半乳糖苷酶菌株的筛选及其酶学性质研究 [J], 史应武;娄恺;常玮;欧提库尔
2.产冷活性β-半乳糖苷酶的菌株的筛选、鉴定及酶特性研究 [J], 张博;张敏文;顾取良;李荷
3.一株瘤胃源产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及其酶学特性研究 [J], 张庆芳;王泽坤;姜南;于爽;迟乃玉
4.产普鲁兰降解酶菌株的分离筛选及酶学特性的研究 [J], 王儒恺;冯碧薇;范洁琼;周峻岗;吕红
5.产α-半乳糖苷酶菌株的筛选、鉴定及其酶学特性的研究 [J], 董岩岩;张燕婕;黄遵锡;周峻沛;唐湘华;李俊俊
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半乳糖苷酶活测定
1.5 β—半乳糖苷酶粗酶液的提取将菌株接种于产酶培养基中，30℃培养60h，过滤收集菌体，充分洗涤，加柠檬酸--磷酸氢二钠缓冲液（0.1mol/L，pH5.0）研磨，破壁菌液离心所得上清液即为粗酶液。
1.6 酶活力的测定在试管中加入100µl邻硝基苯酚-β-D半乳糖苷（ONPG），800µL 10.2mol/L柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，100µl酶液，混匀，50℃水浴中反应10分钟，加2ml 1mol/L终止反应，测定计算酶活力。
酶活力单位定义：在上述反应条件下，每分钟分解ONPG，生成1µ mol邻硝基苯酚（ONP）所需的酶量为1个酶活力单位（U）。
1.2.1 酶活力的测定以ο-NPG为底物测定β-半乳糖苷酶活力。
酶活力单位定义为以ο-NPG为底物37℃保温酶解，每分钟释放出1µmol/L邻硝基酚的酶量，定义为1个酶活力单位。
β-半乳糖苷酶活测定采用Genstar 的β-半乳糖苷酶检测试剂盒法。
在有β-半乳糖苷酶存在的条件下，无色的反应底物会转化生成黄色的硝基酚(o-nitrophenol)。
向各管中加入一定量的反应终止液，离心测定420 nm 和550 nm 下的吸光度。
β-半乳糖苷酶活性单位数(U)=1000- (OD420 -1.7 OD550)/Time(min)×V(mL)×1.5 酶活力测定方法将pH6.5的磷酸缓冲液500µl和0.25%的ONPG 200µl加入比色管,在25℃的温度下温浴5min,加入适当稀释的粗酶液0.5ml,反应10min,加入800µl 5%Na2CO3终止反应,蒸馏水定容至10ml,用分光光度计420nm测定OD值,通过标准曲线方程计算酶活。
在上述条件下1ml粗酶液1min催化水解ONPG生成1µmol邻硝基苯酚(ONP)的量,定义为1U。
1.2培养基初筛培养基：乳糖0.5%，硫酸镁0.007%，磷酸氢二钾0.01%，氯化钙0.004%，硫酸铵0.01%，琼脂1.5%，自然pH，每100mL培养基中加入20mg/mL X-gal溶液200µL；复筛培养基：乳糖1.5%，蛋白胨1.0%，酵母浸膏0.3%，氯化钠0.1%，pH值7.0；发酵培养基：乳糖3.0%，蛋白胨1.5%，酵母浸膏1.0%，氯化钠0.3%，pH值7.0。
α-半乳糖苷酶检测方法
α-半乳糖苷酶酶活力的测定方法1.α-半乳糖苷酶酶活力单位定义在pH5.5并37℃条件下，每分钟内底物降解释放1μmol对硝基酚所需要的酶量为一个酶活单位U。
2.测定原理α-半乳糖苷酶能将对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖降解成对硝基酚。
通过400nm比色测定释放的对硝基酚的量，可以计算反应液中α-半乳糖苷酶的活力。
3.试剂与溶液除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均符合GB/T6682中规定的三级水。
3.1 0.05mol/L醋酸钠缓冲液：A液：称取无水醋酸钠4.2g定容至1000mL；B液：冰醋酸3.0 mL定容至1000 mL。
用B液调节A液至pH5.5。
3.2 0.2mol/L碳酸钠溶液：准确称取21.198g无水碳酸钠，定容至1000mL。
3.3 对硝基酚标准溶:(10 mmol/ L)称取0. 1391 g对硝基苯酚，精确到0. 001 g ,用碳酸钠溶液定容至100 mL，低温保存。
依次移取对硝基苯酚标准贮备液1 mL 、2 mL 、3 mL 、4 mL 、5 mL 、7 mL 、9 mL ,用碳酸钠溶液定容至100 mL ,配成浓度为0.1 mmol/ L 、0.2 mmol/ L 、0.3mmol/ L 、0.4mmol/ L 、0.5mmol/ L 、0.7mmol/ L 、0.9mmol/ L 的对硝基苯酚标准工作液。
3.4 10mmol/L对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖溶液：称取3.031g对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖，用醋酸钠缓冲液定容至1000mL，置棕色试剂瓶于4 ℃以下保存。
4.仪器与设备4.1实验室用样品粉碎机或碾体。
4.2分样筛：孔径为0.25mm（60目）。
4.3分析天平：感量为0.001g。
4.4 pH计：精确至0.01。
4.5磁力搅拌器：附加热功能。
4.6电磁震荡器4.7烧结玻璃过滤器：孔径为0.45μm。
4.8离心机：2000g以上。
4.9恒温水浴锅：温度控制范围在30-60℃之间，精度为0.1℃。
饲料添加剂α—半乳糖苷酶活力的测定分光光度法
测定饲料添加剂α-半乳糖苷酶活力的常用方法之一是分光光度法。
下面是一个基本的分光光度法测定步骤的概述：
材料和试剂：
1. α-半乳糖苷酶底物（一般为对硝基苯基-α-D-半乳糖苷）。
2. 可能需要的缓冲液和辅助试剂，具体根据实验需求确定。
步骤：
1. 准备试样：将待测饲料添加剂样品制备成适当浓度的溶液。
如果需要，可以进行适当的稀释。
2. 准备标准曲线：准备一系列已知浓度的标准溶液，可用于构建α-半乳糖苷酶活力的标准曲线。
3. 反应体系的组装：在试管或微量板中，将一定量的饲料添加剂样品或标准溶液与α-半乳糖苷酶底物混合，加入适当的缓冲液和辅助试剂，确保反应体系的稳定和适宜的pH 值。
4. 反应时间：将反应体系放置在适当的温度下，通常为37°C，反应一定的时间（一般为15-60分钟），以使底物被酶催化水解。
5. 反应终止：通过加入适当的反应终止剂，如酸性试剂或其他试剂，来停止反应。
6. 分光光度测定：使用分光光度计在特定波长下测定反应体系的吸光度或发光强度。
具体波长取决于所使用的底物和产物。
7. 标准曲线分析：根据已知浓度的标准溶液的吸光度或发光强度，绘制α-半乳糖苷酶活力的标准曲线。
8. 求取样品活力：根据样品的吸光度或发光强度，使用标准曲线进行
插值或计算，得到饲料添加剂样品中α-半乳糖苷酶的活力。
请注意，实际的实验步骤和条件可能会因具体的分光光度仪器和试剂的不同而有所变化。
测定α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶活性的方法[发明专利]
![测定α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶活性的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/2d4f65b8312b3169a551a484.png)
专利名称：测定α－N－乙酰氨基半乳糖苷酶活性的方法专利类型：发明专利
发明人：山本信人
申请号：CN03148036.5
申请日：19960605
公开号：CN1510147A
公开日：
20040707
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：借助于杆状病毒载体克隆了维生素D结合蛋白(Gc蛋白质)和其小区域(约为Gc肽的1/5，已知称作为区域III)。
用固定化的β－半乳糖苷酶和唾液酸酶处理克隆的Gc蛋白质和克隆的区域(Cd)肽分别产生巨噬细胞激活因子GcMAFc和CdMAF。
这些克隆的巨噬细胞激活因子和GcMAF可用于治疗癌症，HIV感染和骨质疏松症，也用作为免疫和接种的佐剂。
研制了在癌症和HIV感染的患者中检测血清或血浆α－N－乙酰氨基半乳糖苷酶活性的方法和抗体－夹心ELISA试剂盒。
申请人：山本信人
地址：美国宾久法尼亚州
国籍：US
代理机构：永新专利商标代理有限公司
代理人：林晓红
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不同性别Fabry患者的α-半乳糖苷酶A活性研究
不同性别Fabry患者的α-半乳糖苷酶A活性研究李娟;张德莲;木拉力别克;李南方;杨学磊;郑灵玲;黄昱【摘要】目的：了解Fabry病中不同性别患者α‐半乳糖苷酶A （α‐Gal A ）活性情况。
方法选取一个Fabry病家系的8例患者和13例健康者，应用干血片法测定经过GLA基因检测确诊的Fabry病患者和健康者α‐Gal A活性并进行比较。
结果男性患者的α‐Gal A活性[（8．66±2．15）×10－15 mol／（d · spot）]为健康对照者[（188．31±42．23）×10－15mol／（d·spot）]的4．6％，女性患者[（149．93±46．56）×10－15mol／（d·spot）]则为健康对照者的79．62％。
男性半合子患者酶活性明显下降（ P＜0．05）。
α‐Gal A活性检测对男性半合子的灵敏度高于女性杂合子。
结论α‐半乳糖苷A活性下降程度存在性别差异，男性半合子Fabry病患者酶活性明显下降。
%Objective To investigate the activityof α‐galactosidase A(α‐Gal A) in different genders of the pa‐tients with Fabry disease .Methods 8 patients with Fabry disease GLA gene detection diagnosed by and 13 healthy members in a family were selected and detected theα‐Gal A activity by using the dried blood spotsm ethod .Results Theα‐GalAactivityinthemalepatientswithFabrydiseasewas[(8.66±2.15)×10-15mol/(d·spot)],whichwas only 4 .6% of [(188 .31 ± 42 .23) × 10-15mol/(d · spot)] in the healthy controls ,whereas female patients was 79 . 62% of [(149.93±46.56)×10-15mol/(d·spot)]inthehealthycontrols.Theα‐GalAactivityinhemizygousmale patients was significantlylowered(P<0 .05) ,theα‐Gal A activity detection had higher sensitivity in male hemizygote than female heterozygous .Conclusion The genderdifference exists in the d ecreased degree of α‐Gal A activity .The enzymatic activity is significant reduced in male patients with hemizygotie Fabry disease .【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2015(000)016【总页数】3页(P2323-2324,2327)【关键词】Fabry病;GLA基因;α-半乳糖苷酶【作者】李娟;张德莲;木拉力别克;李南方;杨学磊;郑灵玲;黄昱【作者单位】石河子大学医学院，新疆石河子 832000;新疆维吾尔自治区人民医院高血压中心/新疆高血压研究所，乌鲁木齐 830001;新疆维吾尔自治区人民医院高血压中心/新疆高血压研究所，乌鲁木齐 830001;新疆维吾尔自治区人民医院高血压中心/新疆高血压研究所，乌鲁木齐 830001;新疆维吾尔自治区人民医院临床医学研究中心，乌鲁木齐830001;新疆维吾尔自治区人民医院临床医学研究中心，乌鲁木齐 830001;北京大学医学部医学遗传学系，北京 100191【正文语种】中文Fabry病是1898年由Anderson和Johann Fabry提出,故名Anderson-Fabry 病,简称Fabry病。
α-半乳糖苷酶A活性检测与Fabry病诊断筛查
α-半乳糖苷酶A活性检测与Fabry病诊断筛查吕轶伦;陈佳韵;潘晓霞;陈晓农;张文;任红;陈楠【期刊名称】《诊断学理论与实践》【年(卷),期】2007(6)5【摘要】目的:建立α-半乳糖苷酶A(α-GalA)活性的检测方法,为Fabry病的诊断和筛查提供依据。
方法:分别采用外周血粒细胞和干燥血滴滤纸片(干血片)检测11个家系15例Fabry病患者和30名健康者的α-GalA活性,检测采用底物荧光法。
比较Fabry病患者组与健康对照组间、干血片法不同保存时间组间的酶活性,并建立酶活性正常参考范围,计算2种检测酶活性方法的灵敏度。
结果:正常人干血片酶活性为(3.68±0.98)nmol/(ml·h),粒细胞酶活性为(46.21±8.56)nmol/(h·mg),两者正常参考范围分别为≥1.68nmol/(ml·h)、≥25.45nmol/(h·mg)。
男性半合子患者酶活性显著下降(P<0.001),干血片酶活性值<0.15nmol/(ml·h)、粒细胞酶活性值<1nmol/(h·mg),酶活性的2种检测方法在男性半合子患者中的灵敏度为100%。
在女性杂合子患者酶活性部分下降,4例女性杂合子患者中3例干血片检测酶活性的结果、2例检测外周血粒细胞酶活性的结果处于正常范围,检测女性杂合子干血片和粒细胞酶活性的灵敏度分别为25%和50%。
干血片在室温下保存3、14和28d后酶活性值分别为(3.63±0.96)nmol/(ml·h)、(3.60±0.88)nmol/(ml·h)和(3.06±0.68)nmol/(ml·h),残余酶活性值大于基线值80%,显著高于男性半合子酶活性值(P<0.001)。
结论:干血片检测酶活性更简易、快速、经济,便于保存运输,可用于高危人群筛查,外周血粒细胞酶活性测定对女性杂合子灵敏度更高,测定值更精确,适于家系筛查研究。
α-半乳糖苷酶(α-GAL)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4222
α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法UPLC-MS-422250T/24S试剂名称规格保存条件提取液液体50mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2瓶-20℃保存试剂二液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体80mL×1瓶2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前取1瓶加入2.67mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；2、标准品：5μmol/mL的对硝基苯酚溶液。
α-GAL(EC3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能专一地催化α-半乳糖苷键的水解，主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。
α-GAL对于植物种子的萌发至关重要，种子萌发初期，其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗，为种子的萌发提供最初的能量来源，后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。
α-GAL分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GAL活性。
p-Nitrophenylα-D-Galactopyranoside α-GALp-Nitrophenol(400nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声破碎仪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每1000万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次），15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。
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>A @A @? 蛋白含量测定! -,3 法测 343 的蛋白含量， 以 -V3
>? 材料和方法
> 5 >? 材料与试剂 > 5 > 5 > ? 材 料 与 设 备 ! 对 硝 基2苯 基2!2O2吡 喃 半 乳 糖 苷 （ RWR4） 和对硝基苯酚 （ RWR ） 为 V>9;H 公司产品， -,3 蛋白 定量试剂盒购自 R>0GK0 公司， 其他试剂为国产分析纯。紫
#% 结果
# . !% 最佳反应条件的选择 # . ! . !% 最佳反应时间的选择! 取 "" 个小试管， 加入 ’ ( 测 活缓冲液 )%& !$、 ’ ##2$ 3 8 的底物 %&& !$、 水 %& !$， )*+ 孵 育 "& #,- 以上， 然后加入 )*+ 的 "9半乳糖苷酶的水溶液 （蛋 )&& !（ $ 各管操作依次相隔 ) #,- 进 白浓度为 &. &" #: 3 #$ ） 行） ， )*+ 孵育， 分别于 % ， "& ， "% ， )& ， )% ， ;& ， ’& ， %& ， *& #,- 取 出 &. % #$ 加入 %. % #$ 的终止液中终止反应， 用紫外9可见分 光光度计测定 ’&% -# 的光密度值。结果在 )& #,- 内酶反应 速度是恒定的， 此间酶活力与对硝基苯酚的生成量成正比。 本实验选定的酶促反应时间为 "& #,-。 # . ! . #% 最适反应 01 的选择 ! 最适反应 01 为 *. ’ ， 参见文 献 ［<］ 。 # . ! . $% 底物浓度的选择! 取 "’ 个小试管， 加入 ’ ( 测活缓 冲液 )%& !$、 不同浓度 （ & = "& ##2$ 3 8 ） 的 底 物 %&& !$、 水 %& !$， )*+ 孵育 "& #,- 以上， 然后加入 )*+ 的 "9半乳糖苷 酶的水溶液 （ 蛋白浓度为 &. &" #: 3 #$） )&& ! （ $ 各管操作依次 相隔 ) #,- 进行） ， )*+ 孵育 "& #,-， 迅速从中取出 &. % #$ 加 入%. % #$的终止液中终止反应， 用紫外9可见分光光度计测 定 ’&% -# 的光密度值。根据图 " ， 底物浓度在 " = ’ ##2$ 3 8 时， 酶促反应进入平台期。确定底物的浓度为 ) ##2$ 3 8。 # . #% 反应产物的特异性 为了检查酶促反应体系中所生成的产物是否是 565， 测 定了酶促反应产物在不同波长下的光密度值， 结果表明， 反 应产物在 ;>% = ’"& -# 处有最大吸收峰。与标准品的吸收 光谱一致 （ 图 )） ， 说明在 ’&% -# 波长下所测得的光密度值 可表示反应体系中 565 的生成量。 # . $% 批间、 批内精密度 同一批酶按照上述酶活检测方法重复测 * 次， 每次 "& 管， 计算批内变异系数， * 次 ?@? 活性测定结果的平均值之
［’］ 乳糖苷键 。在人、 动物、 植物及微生物Байду номын сангаас内均存在 343。
外2可见分光光度计 XY2’"## 为北京瑞丽分析仪器公司制 造。 > 5 > 5 @? 试剂配制 ! . Z 测活缓冲液 （ N[ $5 . ） ： 称取磷酸氢 二钠・’"[" U ))5 " 9， 柠檬酸・[" U ’"5 )" 9， 溶于水后， 定容 至 &## ;1。 底物贮存液： ’" ;;E1 : \ 的对硝基2苯基2!2O2吡喃半乳 糖苷水溶液。 终止液： #5 " ;E1 : \ 硼酸2氢氧化钠溶液 （ N[ )5 ( ） 。 >A @? 方法 >A @A >? 343 的制备 ! 343 是基因重组的酵母工程菌发酵 产物， 经超滤、 阳离子交换、 疏水层析、 阴离子交换纯化后， 保
［$］ 存于 .] 备用 。
重组的 343 被广泛应用于农产品加工、 人 - $ U 血型改造 制备通用型血、 清除动物及人之间的主要异种抗原以及治疗
［" 8 &］ 。此前， 我们报道了重组咖啡 遗传性疾病法布莱氏病等
豆 343 的 活 性 测 定 方 法
［$， *］
， 该 方 法 以 市 售 咖 啡 豆 343
［ 收稿日期］ ! "##$ % #& % ’( ［ 基金项目］ ! 国家重点基础研究发展规划 （ “ )*+ ” 计划） （ "##",-*’+(#. ） ［ 作者简介］ ! 高红伟 （ ’)*$ % ） ， 女， 山东省茌平县人， 硕士， 助 理研究员。 /01： #’#2$$)+’&.& !通讯联系人，
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!!半乳糖苷酶活性测定方法的研究
技术方法
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为标准物。 !" #" $% 酶活性的测定! 在总体积为 " #$ 的反应体系中， 加 入底物 %&& !$， ’ ( 测活缓冲液 )%& !$， 水 %& !$， )*+ 孵育 "& #,- 以 上， 加 入 适 当 稀 释 的 酶 液 )&& !$， 于 )*+ 孵 育 "& #,-后， 取 %&& !$ 立即加入%. % #$ 终止液中终止反应， 于 ’&% -# 处测定光密度值。同时设置底物对照和酶液对照。 产物对硝基苯酚显黄色， 在 ’&% -# 处有最大吸收峰。 " / 定义： “ 在 )* + ， 以最适底物浓度， 最适 01 等条件 下， " #,- 内生成 " !#2$ 底物的酶量为一个酶活性单位。 ” 酶活性计算公式： ! （ / 3 #$）4 " ( ) ( #$ % ( & ( ’$
（ V>9;H， ;< =%>+ 表达产物） 作为标准品， 绘制标准曲线， 根据 此外， 标准曲线确定待测 343 的活性。但标准品价格昂贵， 由于应用酶标仪方法检测时反应体系体积小 （ .# "1 ） ， 测活 误差较大。本研究在此基础上， 对 343 的测活方法进行改 进， 建立了一种简单易行的、 应用光谱分析法测定 343 活性 的实验方法。