食品科学论文外文翻译 中文译文

连续色谱和电喷雾电离质谱分析法对草鱼肌肉水解物的抗氧化肽的

纯化和鉴定

任娇燕a,赵眸明a,*, John Shi b,王金水a,江月明c,催春a，Yukio Kakuda a ,

Sophia Jun Xue b

a轻工与食品科学学院，中国科技大学，广州510640，中国

b圭尔夫食品研究中心，农业和农业食品,加拿大圭尔夫，安大略省，加拿大N1G5C9

c华南植物园，中国科学院研究所，广州，乐意居510650，中国

d食品科学研发部，圭尔夫大学，圭尔夫，安大略省,加拿大N1G2W1

2007年5月9日收到，2007年11月5日收到修订表格，2007年11月7日接受。

摘要

用多种蛋白酶（木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶，牛胰酶6.0，中性蛋白酶为1.5mg和碱性蛋白酶2.4L）水解草鱼肌肉以提取抗氧化肽。用羟自由基的清除能力和抑制脂质过氧化活性的方法来评估水解能力。准备过程中发现，用2.4L碱性蛋白酶的水解具有最高的抗氧化活性。使用超滤和连续的色谱法来纯化，包括离子交换色谱法，多层线圈高速逆流色谱法，凝胶过滤色谱法。纯化的多肽，作为一种强有力的抗氧化剂，可以使用在线RP-HPLC的电喷雾电离质谱确定丝氨酸-赖氨酸-色氨酸- 谷氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸- 缬氨酸（966.3 Da）。当然，才发现基本肽比酸性或中性肽有更大的清除羟自由基的能力，水解的疏水肽比亲水性肽贡献更多的抗氧化活动。此外，氨基酸中其抗氧化活性的肽序列可能发挥重要作用。

关键词

草鱼肌肉抗氧化肽，高速逆流色谱，电喷雾电离质谱分析。

1介绍

氧化在所有活的生物体中都是一种重要的反应。氧化代谢过程中自由基和其他活性氧（ROS）的形成是不可避免。这些活性自由基，起到重要的信号转导作用（汉考克，Desikan，奥尼尔，2001年）。然而，过剩的自由基对生物组织和食品能造成破坏性的影响（王，赵，赵江，2007）。在所有ROS中，羟基自由基被认为是最活泼的，并能在接触到活细胞的过程中破坏几乎任何化合物（卡斯特罗弗里曼，2001）。自由基链式反应可以启动膜脂质过氧化作用，这已被证明与许多疾病相关（哈勒威尔，2001年哈利维尔及怀特曼，2004）。脂质过氧化导致食品风味和口感变坏，保质期减少并形成潜在的毒性产品（Pihlanto，2006年）。合成抗氧化剂：如叔丁基对羟基茴香醚（BHA），丁基化的羟基甲苯（BHT），叔丁基氢醌（TBHQ），没食子酸丙酯已被广泛应用于延迟食品因氧化引起的变质（Wanita & Lorenz, 1996）。然而，由于其潜在的健康危害，他们被限制在一些国家（贝克尔，1993;膜，1975）。其结果是，安全和自然存在的抗氧化剂作为人造替代品的需求已经稳步发展了许多年。

近年来，各种蛋白质的消化产生的生物活性肽的抗氧化活性已经吸引了很多注意。从牛奶中的肽（布兰卡安娜·卢尔德＆Isidra，2007年），大豆（吉布斯，Zougman，穆利根，2004），米糠（帕拉多等，2006），油的种子（阿鲁科MONU 2003），鸡蛋（坂橘石原慎太郎Juneja，2004）和猪（赛加羚羊的，2003年）都被证明具有抗氧化活性。此外，水产品和副产物已被证明是良好的抗氧化肽来源。例如，来自蛋白（Amarowicz沙希迪，1997），鲭鱼蛋白（吴，陈，萧，2003），巨型鱿鱼皮（门迪斯，拉贾帕克萨，卞金，2005年），无须鳕帧蛋白（JE，

金，2007年）和唯一的黄帧蛋白质（6月，公园，荣格2004年）的毛鳞肽的研究曾报道存在显着的抗氧化活性。然而，据我们所知，很少有研究已经完成对淡水鱼衍生肽的抗氧化性能测试。草鱼是高产淡水鱼之一，目前在中国的总淡水鱼高达35-40％。然而，草鱼增值产品的发展没有得到充分利用。因此，从低使用率的草鱼制备抗氧化肽可能是生产高价值的食品配料的方法之一。

氨基酸序列（陈，村本，山口，藤本，Nokihara，1998年）的抗氧化活性与肽是密切相关的。众所周知抗氧化肽具有一些金属螯合或氢/电子还原活性，这可能使他们与自由基和终止自由基链反应，或形成保护（Wang等，2007）。疏水性氨基酸和一个或多个氨基酸：蛋氨酸，胱氨酸，色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸和蛋氨酸被认为可以增强抗氧化肽的活动（陈，村本，山内溥，Nokihara，1996; Da'valos，米格尔·巴托洛梅Lo'pez，2004;莱德斯马Herna0ndez，Da0valos Bartolome0，2005年）。然而，最近的一些研究结果重新阐明了这个主题。例如，最近报道谷氨酸-亮氨酸肽残留在清除自由基中发挥重要的作用（军等，2004）。因此，已知的抗氧化肽，甘氨酸-谷氨酰胺-丙氨酸-精氨酸，不包含任何上述质子在其序列的氨基酸残基中有所贡献（李，陈，王，吉武，2007）。似乎确实需要更多的研究来澄清肽结构与功能的关系。

高速逆流色谱法（HSCCC）作为有效的分离技术，已成功应用于天然产物化合物包括类黄酮，香豆素（Haqiwara，1997年）和皂素（Jerz Waibel的，2003年）的分离（鹏，范，吴，2005年）。高速逆流色谱主要使用在分离游离肽的标准混合物（马伊藤，1997），虽然很少对水解产物中的肽这样做。

这项研究的目的是确定和评估或表征低利用率的淡水鱼草鱼的抗氧化肽。此外，采用高速逆流色谱分离水解物中的肽对于隔离来自其他蛋白质的肽可以提供有用的信息。

2材料与方法

2.1材料

在中国广州，从本地市场获得健康的草鱼（草鱼，822±147克的重量，40.8±2.8厘米长）。草鱼（不包括头，尾，皮，骨，内脏器官和血液），在绞肉机MM12（韶关，食品机械有限公司，中国）上切片并形成肉末。肉末材料冷冻并储存在20℃的温度以进一步使用。用于水解实验的食品级酶（木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶，牛胰酶6.0，中性蛋白酶为1.5mg和碱性蛋白酶2.4升）由诺和诺德公司（中国北京）和明远有限公司（广州，中国）提供。用于凝胶过滤层析分子量校准的标准蛋白混合物由（GE，新泽西州Piscataway，，美国）提供。所有HPLC级氨基酸混合标准，谷胱甘肽（GSH），氧化型谷胱甘肽（GSSG），甲基叔丁基醚（MTBE），异硫氰酸苯酯（PITC）和乙腈，购自Sigma公司（北京，中国）。α-脱氧核糖（2 - 脱氧-D-核糖），购自Fluka公司（瑞典斯德哥尔摩）。所有其他试剂均为分析级。

2.2草鱼肌肉的制备

解冻冷冻的草鱼肌肉肉末（1250克）并与离子水（1250毫升）混合水解。获得的混合物五等分。用0.01M NaOH调节至所需的pH值，并在水浴中加热到应用（表1）的每一个的级分所需的温度。木瓜蛋白酶，牛胰酶6.0，菠萝，1.5mg的中性蛋白酶和碱性蛋白酶2.4L 溶解在去离子水中，并根据活性（见表1）按适当的比例进行添加。水解反应在摇床中进行（新不伦瑞克省，中国科学C24）。水解结束时，将混合物在沸水中加热10分钟以灭活蛋白酶。在GL-21M冷冻离心机以4125g（湘怡仪器有限公司，长沙，中国）离心水解物30分钟，然后上清液冻干，保存在干燥器中以进一步使用。