现代微生物技术检测技术(课堂PPT)
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《微生物检验技术》课件
食品中常见的微生物种类：细菌 、霉菌、酵母菌等。
微生物在食品中的分布特点：食 品的种类、加工方式、储存条件 等对微生物的分布有显著影响。
微生物的来源：食品生产、加工 、运输、储存等环节中可能引入
的微生物。
食品中微生物的检测方法与操作
01
02
03
04
传统检测方法
培养法、镜检法等。
现代检测技术
免疫分析法、PCR技术、生物 传感器等。
消毒灭菌效果的监测
对医院环境、医疗器械等进行 微生物学检测，评估消毒灭菌 效果，确保医疗安全。
抗菌药物敏感性试验
通过抗菌药物敏感性试验，指 导临床医生合理选用抗菌药物 ，降低耐药性的产生。
感染暴发调查
在发生医院感染暴发时，进行 流行病学调查和溯源分析，查 找感染源和传播途径，采取有
效控制措施。
疫苗的研究与开发
病原微生物的分离与鉴定
从患者体内分离出病原微生物，并进行鉴定，为疫苗的研制提供基础 资料。
疫苗株的筛选
通过微生物检验技术对病原微生物进行筛选，选择适合作为疫苗株的 菌株或病毒株。
疫苗制备过程的监控
在疫苗制备过程中，对原材料、半成品和成品进行质量检验和安全性 评估，确保疫苗的安全性和有效性。
疫苗效果评价
微生物的生长与繁殖
微生物的生长
微生物生长是指微生物细胞数目的增加和质量的增加。其生 长过程分为迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
微生物的繁殖
微生物繁殖是微生物生长的必然结果，繁殖方式包括二分裂 、出芽生殖、孢子生殖等。繁殖过程中，微生物的遗传物质 会复制并传递给后代。
微生物的生理生化特性
微生物的代谢
利用微生物降解污染物，处理废水、废气等，降低环境污染。
《微生物检测》课件
检测与鉴定
形态观察
通过显微镜观察微生物的形态、 大小、染色等特征，初步判断微
生物种类。
生化试验
对微生物进行生化试验，检测其代 谢产物和酶活性，进一步确定微生 物种类。
分子生物学方法
采用分子生物学方法，如PCR、基 因测序等，对微生物进行分子水平 上的检测和鉴定。
结果报告
报告内容
包括采样时间、地点、样品来源、检测方法、结 果及结论等。
总结词：染色技术
详细描述：采用不同的染色技术对微 生物进行染色，以便更好地观察其形 态和结构。
培养分离技术
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总结词：培养基
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详细描述：选择适宜的培养基，根据微生物的生理特性进 行培养，促进微生物的生长繁殖。
在此添加您的文本16字
总结词：分离纯化
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详细描述：从样本中提取微生物的DNA或RNA，作为 后续检测的基础。
详细描述：利用PCR技术对提取的DNA或RNA进行扩 增，获得足够的目标片段。
详细描述：将扩增后的DNA或RNA进行电泳分离，通 过凝胶上的条带判断微生物种类。
03
微生物检测流程
采样
采样原则
根据检测目的和要求，选 择具有代表性的样品进行 采集。
临床样本中微生物检测案例
案例概述
临床样本中微生物检测是诊断感染性疾病 的重要手段，通过检测临床样本中的病原
微生物，为临床医生提供诊断依据。
案例分析
分析临床样本中微生物检测的难点和挑战 ，如微生物的多样性和变异，以及检测方
法的灵敏度和特异性。
案例内容
介绍临床样本中常见的病原微生物种类， 如细菌、病毒、真菌等，以及检测这些微 生物的方法和流程。
微生物检测技术演示文稿ppt课件
2019
-
134
pH
低温保藏
腌制
微生物 食品
aw
干燥
高温保藏
2019
-
15
消毒 --杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达 到无害化的FF。
灭菌 --用物理和化学方法杀灭或清除传播媒介上一 切微生物的方法。
2019
-
16
利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方
细菌的特殊结构有荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
2019
-
32
大肠杆菌
2019
-
33
金黄色葡萄球菌
2019
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2019
-
35
2019
-
36
2、酵母
酵母菌（yeast）是一通俗名称，没有确切定义。 一般认为酵母菌具有以下五个特点： ➢ 个体一般以单细胞状态存在 ➢ 多数出芽繁殖，也有的裂殖 ➢ 能发酵糖类产能 ➢ 细胞壁常含有甘露聚糖 ➢ 喜在含糖量较高、酸度较大的环境中生长酸度较
法。高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活， 从而起灭菌作用。低温通常起抑菌作用。 嗜冷微生物适合于－ 10℃生活的细菌，最适生长温度在20℃左右。 嗜温微生物生 长温度在15～45℃之间，最适生长温度在37℃左右的细菌。
嗜热微生物生长温度在30～75℃之间，最适生长温度在55℃， 在100℃以上温度生长，称为嗜高热微生物。
2019
-
28
2. 快速酶触反应及代谢产物的检测
快速酶触反应是根据细菌在生长繁殖过程中 可合成和释放某些特异性的酶，根据酶的特性，选 用相应的底物和指示剂，反应的测定结果有助于细 菌快速诊断。如美国3M Petfifilm TM微生物测试片 可分别快速测定细菌总数、霉菌、酵母菌、大肠杆 菌、金黄色葡萄球菌、大肠菌群等。
微生物检验 PPT课件
技术逐渐推 广应用
第一节 免疫荧光抗体技术检测食品微生物
二、基本原理
抗体与荧光素结合后，并不影响其和相应抗原
发生特异性结合反应，事先将待测抗原固定于载玻
片上，滴加荧光标记抗体，若荧光标记抗体与相应 抗原发生特异性结合反应，不能被缓冲液冲掉，在 荧光显微镜下可观察到荧光，否则荧光抗体被缓冲 液冲掉，在荧光显微镜下观察不到荧光。
四乙基罗丹明 (RB200) 570
四甲基异硫氰酸罗丹明 (TRITC) 550
最大发射 光波长
520～530
595～600
620
荧光颜色
黄绿色
橘红色
橙红色
4.荧光抗体的制备
荧光抗体的制备程序： 制备免疫血清或McAb ↓ 抗体纯化 ↓ 抗体标记： 搅拌法、透析法 方法 ↓ 标记物提纯：去除游离荧光素 去除过度标记或未结合抗体 ↓ 标记物鉴定：含量、特异性、效价、F/P 鉴定 ↓ 实际应用
3.荧光色素的要求
（1）应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基因 （2） 荧光效率高 （3）荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明 （4）与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质 （5）标记方法简单，安全无毒 （6）与蛋白质的结合物稳定，易于保存
异硫氰酸荧光素 ( FITC) 最大吸收 光波长 490～495
第一节 免疫荧光抗体技术检测食品微生物
经典的免疫分析技术
凝集反应、沉淀反应、溶血反应、补体结合实验 特点：成本低、技术简单、结果易于判断，但不易于实 现自动化。
现代的免疫分析技术
荧光免疫标记、放射性免疫标记、酶免疫标记、镧系 （稀土）元素免疫标记、临床化学免疫分析技术、发光免 疫标记、流式免疫微球技术及生物传感器技术等。 特点：灵敏、特异、快速、易于测定及实现自动化。
微生物检验技术 PPT课件
菌种保藏的目的： 防止优良性状菌种的退化或变异。 注意：在实际工作中菌种的退化或变异是 难以避免的。微生物的遗传与变异是正常 的生物进化规律，变异是绝对的，稳定性 是相对的。
（一）菌种保藏的目的和意义
菌种保藏的意义： 微生物菌种是珍贵的自然资源，通过 分离纯化得到的微生物纯培养物，还必须 通过各种保藏技术使其在一定时间内不死 亡，不会被其他微生物污染，不会因发生 变异而丢失重要的生物学性状，否则就无 法真正保证微生物研究和应用工作的顺利 进行。因此，菌种或培养物保藏是一项最 重要的微生物学基础工作，具有重要意义。
（四） 菌种的衰退与复壮
2、菌种衰退的实质
菌种的衰退是发生在细胞群体中的一个由量 变到质变的逐步演变过程。 注意：开始时，在一个大群体中仅个别细胞发生 负变，这时如不及时发现并采取有效措施，而 一味移种传代，则群体中这种负变个体的比例 逐步增大，最后让它们占了优势，从而使整个 群体表现出严重的衰退。 所以，在开始时所谓“纯”的菌株，实际上其中 已包含着一定程度的不纯因素；同样，到了后 来，整个菌种虽已“衰退”了，但也是不纯的， 即其中还有少数尚未衰退的个体存在着。
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现 2、菌种衰退的实质 3、菌种的复壮
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现
（1）生长速度缓慢，产孢子越来越少。 （2）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下 降。 （3）其他原有的典型性状变得不典型，如：最易 觉察到的是菌落和细胞形态的改变。 （4）对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。 （5）抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能 力的减弱等。
Байду номын сангаас
（三）菌种保藏的方法
2、冷冻干燥保藏法 将微生物或孢子冷冻，然后在减压情 况下利用升华现象除去水分，使细胞的代 谢、生理等生命活动处在停止状态下进行 长期保藏。
（一）菌种保藏的目的和意义
菌种保藏的意义： 微生物菌种是珍贵的自然资源，通过 分离纯化得到的微生物纯培养物，还必须 通过各种保藏技术使其在一定时间内不死 亡，不会被其他微生物污染，不会因发生 变异而丢失重要的生物学性状，否则就无 法真正保证微生物研究和应用工作的顺利 进行。因此，菌种或培养物保藏是一项最 重要的微生物学基础工作，具有重要意义。
（四） 菌种的衰退与复壮
2、菌种衰退的实质
菌种的衰退是发生在细胞群体中的一个由量 变到质变的逐步演变过程。 注意：开始时，在一个大群体中仅个别细胞发生 负变，这时如不及时发现并采取有效措施，而 一味移种传代，则群体中这种负变个体的比例 逐步增大，最后让它们占了优势，从而使整个 群体表现出严重的衰退。 所以，在开始时所谓“纯”的菌株，实际上其中 已包含着一定程度的不纯因素；同样，到了后 来，整个菌种虽已“衰退”了，但也是不纯的， 即其中还有少数尚未衰退的个体存在着。
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现 2、菌种衰退的实质 3、菌种的复壮
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现
（1）生长速度缓慢，产孢子越来越少。 （2）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下 降。 （3）其他原有的典型性状变得不典型，如：最易 觉察到的是菌落和细胞形态的改变。 （4）对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。 （5）抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能 力的减弱等。
Байду номын сангаас
（三）菌种保藏的方法
2、冷冻干燥保藏法 将微生物或孢子冷冻，然后在减压情 况下利用升华现象除去水分，使细胞的代 谢、生理等生命活动处在停止状态下进行 长期保藏。
微生物快速检测技术ppt课件
采用流式细胞原 理。对微生物进 行核酸染色，用 流式细胞技术进 行计数
BactoScan FC的优缺点
• 优点：速度快(50-150样品/小时)
• 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较 高，仪器比较难保养。灵敏度不够高。
• 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。
美国Chemunex公司 微生物快速检测系统
其它即用胶，MPN改良法
主要用于 水样或澄 清样品的 大肠菌群 或大肠杆 菌检测 Simplate
colilert
• SimPlateTMTPC 法：基于食源性细菌的蛋白 质有特异性酶类，TPC培养基内含有多种细菌 酶类所对应的底物。检样被细菌污染时，只要 具有一种酶的活性即能与底物作用生成4-甲基 伞形酮，培养24h后，在紫外线照射下，发出 蓝色荧光。 • 食源性细菌悬浮于TPC培养基表面，在分隔的 小池内能迅速进行生化反应，若有检样颗粒亦 无干扰；它不是由48h形成的菌落来计数，而 是24h后在紫外灯照射下记录培养皿内能发出 蓝色荧光的阳性池数，进而由最大近似值 (MPN) 表查出细菌的MPN。阳性池数与 MPN 呈松泊分布。
基于ATP原理的用于成品检测的 微生物检测系统
• Charm LUM-96 （用于UHT产品-高温 瞬间灭菌） • Biotrace • Celsis（主要用于化妆品） • Millipore公司的MicroScan
Celsis和LUM-96
保温2天，检测30分钟（96个样）
ATP法检测成品的优缺点
• 美国Chemunex公司将流式细胞技术与活细胞荧 光探针标记及激光扫描技术相结合，推出的最 新一代的速度更快的Bactiflow以及更高端的 ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。 • 其最大的特点是只检测活细胞数，速度极快， 处理量大。与FOSS的BactoScan FC检测死活细 胞都检测不同。 • 是目前国际上正在认可的生物荧光定量检测微 生物数量的两种方法之一。另一种是Millipore 的一款叫MicroStar的基于ATP检测的产品。
微生物检验ppt课件
微生物检验ppt课件
目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
微生物检验PPT培训课件
特点是靶分子固定在细胞中，细胞固定在载玻 片上，以固定的细胞代替纯化的核酸，然后将 载玻片浸入溶有探针的溶液里，探针进入组织 细胞与靶分子杂交，而靶分子仍固定在细胞内。
检测特定生物有机体之间是否存在 亲缘关系
1.待检菌株的DNA双链 2.用碱或热变性使双链解开（DNA的变性） 3. 将单链DNA在硝酸纤维素膜上的固定 4.加放射性标记的DNA或RNA 5.保温（一般是66℃，24h）进行互补碱基配
应 用： (1)检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系； (2)用来揭示核酸片段中某一特定基因的存在与否、
拷贝数及表达丰度。
杂交的类型
（1）按杂交对象：
DNA-DNA RNA-DNA
（2）按作用环境：
固相杂交：是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支 持物上，一条反应核酸（标记探针）游离在溶液中。
二、核酸探针的工作原理
两条碱基互补的DNA链在适当条件下按碱 基配对原则形成杂交DNA分子。根据DNA遗 传序列的相对稳定性和互补原则，用已知特异 的碱基序列作成有标记的一小段单链(或核苷 酸序列)与被检测材料进行分子杂交。如果被 检测材料中病原的遗传序列与探针具有互补的 碱基序列，就会形成杂交双链，从而证明它们 之间具有一定程度的同源性。（p108）
感器的探针利用
第二节 PCR技术检测微生物
一、 PCR反应的基本原理
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)就是模板DNA、引物以及四种脱氧核糖核 苷三磷酸(dNTPs )在DNA聚合酶的催化作用下 所发生的酶促聚合反应，PCR反应是由变性--退 火--延伸三个基本反应步骤构成的。
对（杂交） 6.用缓冲溶液洗脱未杂交的部分 7.测定膜的放射性，计算杂交率
检测特定生物有机体之间是否存在 亲缘关系
1.待检菌株的DNA双链 2.用碱或热变性使双链解开（DNA的变性） 3. 将单链DNA在硝酸纤维素膜上的固定 4.加放射性标记的DNA或RNA 5.保温（一般是66℃，24h）进行互补碱基配
应 用： (1)检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系； (2)用来揭示核酸片段中某一特定基因的存在与否、
拷贝数及表达丰度。
杂交的类型
（1）按杂交对象：
DNA-DNA RNA-DNA
（2）按作用环境：
固相杂交：是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支 持物上，一条反应核酸（标记探针）游离在溶液中。
二、核酸探针的工作原理
两条碱基互补的DNA链在适当条件下按碱 基配对原则形成杂交DNA分子。根据DNA遗 传序列的相对稳定性和互补原则，用已知特异 的碱基序列作成有标记的一小段单链(或核苷 酸序列)与被检测材料进行分子杂交。如果被 检测材料中病原的遗传序列与探针具有互补的 碱基序列，就会形成杂交双链，从而证明它们 之间具有一定程度的同源性。（p108）
感器的探针利用
第二节 PCR技术检测微生物
一、 PCR反应的基本原理
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)就是模板DNA、引物以及四种脱氧核糖核 苷三磷酸(dNTPs )在DNA聚合酶的催化作用下 所发生的酶促聚合反应，PCR反应是由变性--退 火--延伸三个基本反应步骤构成的。
对（杂交） 6.用缓冲溶液洗脱未杂交的部分 7.测定膜的放射性，计算杂交率
第十一章微生物培养检验技术 ppt课件
❖ 奶酪：用灭菌刀削去部分外表封蜡，再 用点燃的酒精棉球消毒外表后，用灭菌 刀切开后，用无菌刀取表层及深层检样 少许，置灭菌乳钵内捣碎，加少许生理 盐水调成糊状。
❖ 4、蛋及蛋制品 ❖ 〔1〕样品采集 ❖ 鲜蛋：用流水冲洗外壳，再用95%酒精棉球涂
擦消毒后，放入灭菌袋内，加封作好标志送检。
❖ 全蛋粉、蛋黄粉、蛋白片：将包装开口处用 75%酒精棉球消毒再开盖，用灭菌的金属制双 层螺旋式套管采样器斜角插入箱底，使套管旋 转收取检样，提出箱外用灭菌小匙自上、中、 下部取样，装入灭菌广口瓶中，每个检样不少 于100克。
❖ 二、真菌学检验
❖ 〔一〕霉菌的测定
❖ 1、稀释培育法
❖ 测全菌 固样——捣碎稀释
❖
粉样、流体样——混合稀释
❖ 2、显微镜直接镜检法
❖ ①血球计数器计数法
❖ ②视野计数法
❖ 吸管、载片、盖玻等彻底消毒，用吸管准确测出1ml 菌液的滴数，并滴一滴于载玻片上，盖盖玻片〔菌液不 外溢或发生气泡〕，在显微镜下按以下顺序检视10个视 野，记录每个视野菌数，求出平均数，再用测微尺测定 视野直径，求出视野面积，同时算出盖玻片面积，那么：
❖ 二、样品的微生物镜检 ❖ 直接对样品进展镜检。 ❖ 三、培育检验 ❖ 〔一〕培育基的选择 ❖ 细菌 肉汤蛋白胨培育基 ❖ 酵母 用酵母菌培育基 ❖ 霉菌 用霉菌培育基并参与细菌抑制剂
〔孟加拉红70mg/100ml或链霉素 4000μg/100ml〕 ❖ 放线菌 用高氏一号培育基
❖ 〔二〕培育检验方法 ❖ 1、种植培育 ❖ 〔1〕方法：适用于粒状或块状试样的全菌和
❖ ③捣碎稀释 用组织捣碎器或研钵将定量无菌 水捣碎，试样经外表消毒后也可作内部菌分析。
❖ 〔2〕菌落计数
❖ 4、蛋及蛋制品 ❖ 〔1〕样品采集 ❖ 鲜蛋：用流水冲洗外壳，再用95%酒精棉球涂
擦消毒后，放入灭菌袋内，加封作好标志送检。
❖ 全蛋粉、蛋黄粉、蛋白片：将包装开口处用 75%酒精棉球消毒再开盖，用灭菌的金属制双 层螺旋式套管采样器斜角插入箱底，使套管旋 转收取检样，提出箱外用灭菌小匙自上、中、 下部取样，装入灭菌广口瓶中，每个检样不少 于100克。
❖ 二、真菌学检验
❖ 〔一〕霉菌的测定
❖ 1、稀释培育法
❖ 测全菌 固样——捣碎稀释
❖
粉样、流体样——混合稀释
❖ 2、显微镜直接镜检法
❖ ①血球计数器计数法
❖ ②视野计数法
❖ 吸管、载片、盖玻等彻底消毒，用吸管准确测出1ml 菌液的滴数，并滴一滴于载玻片上，盖盖玻片〔菌液不 外溢或发生气泡〕，在显微镜下按以下顺序检视10个视 野，记录每个视野菌数，求出平均数，再用测微尺测定 视野直径，求出视野面积，同时算出盖玻片面积，那么：
❖ 二、样品的微生物镜检 ❖ 直接对样品进展镜检。 ❖ 三、培育检验 ❖ 〔一〕培育基的选择 ❖ 细菌 肉汤蛋白胨培育基 ❖ 酵母 用酵母菌培育基 ❖ 霉菌 用霉菌培育基并参与细菌抑制剂
〔孟加拉红70mg/100ml或链霉素 4000μg/100ml〕 ❖ 放线菌 用高氏一号培育基
❖ 〔二〕培育检验方法 ❖ 1、种植培育 ❖ 〔1〕方法：适用于粒状或块状试样的全菌和
❖ ③捣碎稀释 用组织捣碎器或研钵将定量无菌 水捣碎，试样经外表消毒后也可作内部菌分析。
❖ 〔2〕菌落计数
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物
检
测
流
检验
程
结果报告
酶联免疫吸附试验(ELISA ）
原理:
1 包被
反应
2
加入待测抗体或 抗原和酶标抗原
或抗体
3 洗涤 使结合在固相上 的抗原抗体复合物 与未结合的分离
优点： 灵敏、特异、快速、
稳定以及易于自动化操作
缺点： 该技术的操作技巧性较强 交叉反应比较严重、假阳性多 该法检测限较高
4 底物显色
2.免疫学方法 免疫荧光标记 酶联免疫吸附实验（ELISA) 自动酶标免疫检测仪
3.分子生物学方法 核酸探针 PCR技术 基因芯片技术
4.联合检测方法 :PCR-ELISA、IMS-PCR等。
5. 物理学方法 电阻抗技术、微热量计技术、放射测量技术
生物传感器
样品的采集
常
规
的
样品的处理
微
（分离、筛选） 生
缺点： 食品中某些物质会干扰Taq 聚合酶的作用。
只能检测微生物的存在， 微生物产生的毒素则不能 检测出来
假阳性或假阴性结果的出现。
传统方法 过程繁琐 质量难控 费时费力 易发生主观片面错误
新型方法
操作简单
改进
准确、高灵敏度 快速检测 自动化检测
新型微生物检测技术
胶体金免疫层析检测条技术 ATP荧光法快速检测技术 微生物实时荧光光电检测技术 环介导等温扩增技术（不讲）
大肠杆菌O157
李斯特氏菌
沙门氏菌
特点：定性检测死菌和活菌、病毒，相对ELISA来说结果直观、准 确、快速，且无需专门的检测仪器。
该法被认为是微生物和传染病诊断技术标准化最有前途的新技 术之一。
ATP荧光法快速检测
原理：
• 根据萤火虫发光原理，在有氧的条件下，虫光素酶催化D-荧光
素和ATP之间发生氧化反应，形成氧化荧光素并发出荧光，其生
化反应式如下：
Mg2+
• APPTPi＋＋CDO-2荧＋光荧素光＋O2—虫—光—素—酶>AMP＋氧化荧光素＋
•在 虫光素酶
D—荧光素 均过量的情况下：
ATP的数量 ↑ 荧光强度 ↑
那么
测量相对 荧光值
微生物总数量
常见的荧光检测仪
单个样品检测（5min)
96个样品检测
保温2天，检测30分钟
ATP荧光法检测微生物特点： 可实现精准、稳定、快速检测微生物总数的需求，但设备比 较昂贵，对仪器的清洗保养要求特别高。检测时需做预处理， 去除胞外游离ATP 。
适应性强
环境
易变异
药品
······
食品
• 据世界卫生组织估计，全世界每年有数以亿计的 食源性疾病患者中，70%是由于各种致病性微生 物污染导致的。
• 我国每年发生的细菌性食物中毒事件占食物中毒 事件总数的30%～90%，中毒人数占食物中毒总 人数的60%～90%。
药品
• 据报道,1970年7月至 1971年3月,美国25家医院 由于输注了细菌污染的葡 萄糖致使378个患者得败 血症,40人死亡。
• 我国也在1991至1993年 因人血白蛋白污染,输注发 生了46例感染事件,死亡8 例。
环境
肺结核、百日咳、 流行性感冒
等疾病的传播
沙门氏杆菌病 霍乱 胃肠道疾病
空气污染
水体污染
土壤 化妆品 航空燃料 ······
其他污染
如何及时、有效的检出微生
物？
常用的微生物检测技术
1.常规的检测方法 平板分离、镜检、生化试验等
传统经典方法和现代微生物技术进行鉴定
选择药敏试验抗菌药物
青霉素类 头孢菌素类 β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂 糖肽类······
药敏试验
扩散法 稀释法 E 试验 联合药物敏感试验
参照NCCLS标准判断结果：
药敏结果
敏感：表示测试菌可被测定药物常规剂量给药 后的所达到的血药浓度所抑制或杀灭。
（抑菌扩圈散法直原径理、：将含有定量抗菌药物的纸片贴在测试菌
MIC值的和琼脂IC平值板等上，）纸片中所含的中药介物：吸指收测琼试脂菌中对的常水规分剂量用药后体液或组织
定性或定量的分析
PCR技术
PCR技术在微生物检测上的原理：
利用某一特定微生物特有的基因序列，设计特异性引 物进行PCR扩增。若有条带，则说明待测样品中含有目的 菌，且目的菌的含量与条带的亮度呈正相关；若无条带， 则说明待测样品中无目的菌。
优点： 特异性强 灵敏度高 速度快 简便、高效
PCR技术以其自身这 些优势作为食源性致 病微生物检测的关健 技术在食品中得到广 泛的应用
胶体金免疫层析检测条技术
胶体金是氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，聚合成一定大小的金颗粒， 由于静电相斥作用而成为稳定的胶体状态，胶体金颗粒对蛋白有很强 的吸附作用。
以乙肝病毒的检测为例
乙肝表面抗原 与胶体金结合
胶体金标记复合物
固定特异性抗体 （乙肝表面抗体）
金标垫 样品垫
NC膜
吸收垫
衬板
常见的胶体金免疫层析检测条
孵育区
黄色和蓝色 两种LED灯
荧光管
过滤膜
可将样本和微生物所在的孵育区与检 测区分开，保持检测区的清澈，同步 检测到颜色和荧光的变化，具有重要的防 干扰能力。
2. CO2传感器
检测区
CO2传感器
通过在一次性检测管底部嵌入一个透 明的CO2固体传感器来检测微生物生 长过程中所释放的CO2。当有CO2进 入时传感器会变色。只有气体可以穿透 这个传感器，而液体、微生物和固体颗 粒不能通过，从而避免了其它因素的干 扰。
Biolumix微生物实时荧光光电检测系统
检测仪器
可同时放32个检测管、 同温检测
一次性检测管
基于Windows系统的 分析软件
一台计算机可控制32台检 测仪、软件自动将仪器中 收集到的数据换算成CFU 浓度，对不合格样本提出 预警计算机以不同形式的 报告进行自动存档和处理
一次性检测管 两个基本技术： 1. 膜技术
微生物检测技术的应用及其实例
主要用于：
1
医学检测
2
食品检测
3
环境检测
4 Click to add title in here
一、医学检测
体外 培养
鉴定
药敏 试验
合理 用药
提倡联合用药,反对乱、 滥用抗生素,警惕人群 中耐药菌株的增加
鉴定
常见的微生物感染疾病：
已有固定的检查方法
不确诊的微生物感染疾病：
现代微生物检测技术
09级基地二班 冯俊霞 邹梓姣 李梅香 龙文英 刘芬芳 杨成志
主要内容
认识微生物 微生物污染 常用微生物检测技术 新型微生物检测技术
微生物检测的应用及实例
认识微生物
• 微生物：形体微小，结构简单的低等生物的统称。 包括病毒、细菌、放线菌、真菌···
பைடு நூலகம்特点：
种类多 分布广 繁殖快
食品