微生物菌种的筛选与保藏
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法一、原理：1.休眠状态：微生物菌种在低温下可进入休眠状态，减缓代谢活动，延长存活时间。
2.冷冻保存：通过降低温度到零下或较低的温度，减慢微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
3.干燥保存：通过去除菌种周围的水分，降低微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
4.冻干保存：先冷冻再干燥保存，通过冷冻降低微生物体内的水分活性，再通过干燥去除冻结水，使菌种能在实验室条件下保存较长时间。
二、方法：1.冷冻保存：（1）使用离心管或培养管制备菌种的蛋白质保护液，可以是细胞培养基、缓冲液等。
（2）将培养物转移到保护液中，使其悬浮均匀。
（3）加入保护剂，如甘油或DMSO（二甲亚砜），提高菌种的冷冻抵抗力。
（4）将混合物分装到小容器或冻存管中。
（5）使用特定的冷冻方案，将菌种快速冷冻，并存储在低温下，通常为零下80℃或更低的温度。
2.干燥保存：（1）用无菌技术转移到无菌条件下的试管中。
（2）将菌种培养在无菌的固体培养基上。
（3）收集培养物，将其平均分布在无菌试管或培养皿中。
（4）将试管或培养皿放在无菌的通风柜中，使培养物在无菌环境下干燥。
（5）将干燥的培养物贮存在干燥无菌容器中。
3.冻干保存：（1）将培养物转移到无菌离心管或培养皿中。
（2）使用细菌培养基将菌种制备为细菌悬浮液。
（3）在细菌悬浮液中加入保护剂，如蔗糖或甘露醇。
（4）将混合物分装到冻干瓶中。
（5）使用低温冷冻机将菌种冷冻为固体，再将其放入冻结干燥机中进行冻干。
（6）将冻干的菌种贮存在密封的冻干瓶中。
4.长期保存：通常，冷冻保存和冻干保存可以实现长期保存，但仍需定期检测和维护保存条件。
在微生物菌种保藏过程中，还需注意以下几点：1.选择合适的保存条件：根据菌种的特性和要求，选择适宜的保存方法和温度。
2.制备合适的保存液：保存液的配方和pH值应与菌种相适应，以保证菌种的存活和精确性。
3.保持无菌操作：在菌种保藏过程中，需保持无菌操作，以防止细菌污染。
从自然界中筛选微生物菌种的方法和步骤
从自然界中筛选微生物菌种的方法和步骤【最新版4篇】《从自然界中筛选微生物菌种的方法和步骤》篇1从自然界中筛选微生物菌种是一项重要的任务，可以用于研究新的微生物物种、寻找具有特定功能的微生物、以及发掘新的抗生素等。
以下是从自然界中筛选微生物菌种的一般方法和步骤：1. 采集样本：采集样本是筛选微生物菌种的第一步。
可以从不同的环境中采集样本，如土壤、水、空气、生物组织等。
采集样本时需要注意保持样品的完整性和避免污染。
2. 富集培养：采集到的样本中微生物的数量通常很少，需要进行富集培养以增加微生物的数量。
富集培养可以使用选择性培养基，以促进目标微生物的生长。
3. 纯种分离：通过富集培养后，需要将混合的微生物分离成单个菌落，以便进行进一步的研究和分析。
分离纯种可以使用平板划线法、涂布法等。
4. 性能测定：对分离得到的微生物进行性能测定，以确定其是否符合筛选的目标。
性能测定可以包括微生物的生长速度、形态、生理代谢特性等。
5. 筛选出目标菌种：根据性能测定的结果，筛选出符合目标的微生物菌种。
6. 鉴定和保藏：对筛选出的微生物进行鉴定，包括形态、生理、生化、分子生物学等方面的鉴定。
同时，需要将筛选出的微生物保藏，以便后续的研究和应用。
需要注意的是，不同的筛选目标和应用场景可能需要不同的筛选方法和步骤。
《从自然界中筛选微生物菌种的方法和步骤》篇2从自然界中筛选微生物菌种是一项重要的任务，可以用于研究微生物的生态学、生理学、遗传学等方面，也可以用于应用领域，如食品、医药、农业等。
以下是从自然界中筛选微生物菌种的一般方法和步骤：1. 采集样本：首先需要采集自然界中的样本，如土壤、水、植物、动物等，采集时需要注意样本的代表性和可靠性。
2. 富集培养：将采集到的样本放入含有营养物质的培养基中，进行富集培养，以增加目标微生物的数量。
3. 分离纯种：通过不同的分离技术，如涂布平板法、倾注法、斜面法等，将目标微生物从其他微生物中分离出来，并进行纯种培养。
微生物菌种的选育和保藏--诱变育种
四、诱变育种
2 诱变育种基本过程 ➢诱变处理： ➢诱变剂的处理方式： ✔单因子处理：采用单一诱变剂处理出发菌株； ✔复合因子处理：两种以上诱变因子共同诱发菌体突变，包括①两种或多种 诱变剂先后使用；②同一种诱变剂的重复使用；③两种或多种诱变剂的同时使用。 ➢诱变剂的处理方法： ✔直接处理方法：将菌悬液用物理、化学因子处理，然后涂平板分离突变株； ✔生长过程处理法：适用于诱变作用强而杀菌率较低的诱变剂，或在分裂过 程中只对DNA起作用的诱变剂，如NTG、LiCl、 秋水仙碱等；方法：可将诱变剂 加入培养基后涂平板；或先把培养基制成平板，将一定浓度的诱变剂和菌体加入平 板； 或摇瓶振荡培养处理；
四、诱变育种
2 诱变育种基本过程 ➢ 制备单孢子(或单细胞)悬液： ➢ 目的：获得单孢子(或单细胞)均匀的悬液；
➢ 原因: 分散状态的细胞可以均匀地接触诱变剂，又可避免长出不纯菌落；
➢ 方法:✔菌龄:对数期细胞、刚成熟的孢子母菌细胞悬浮液的浓度为106个/mL、
四、诱变育种
2 诱变育种基本过程 ➢ 突变株的分离与筛选： ➢ 筛选方案:
➢ 筛选方法： ✔初筛：a.随机筛选：也称摇瓶筛选；随机挑选的平板菌落进行摇瓶筛选； b.平板菌落预筛：在培养皿上诱变后从试样检出突变体的一种
琼脂平板筛选法,有纸片培养显色法、透明圈法、琼脂块培养法等; ✔复筛:对突变株的生产性能作比较精确的定量测定工作，代表方法：琼脂
放线 菌或细菌的浓度为108个/ mL左右;
✔菌悬液配制方法:离心洗涤前培养物，用冷生理盐水或缓冲液制备菌悬 液，放在盛有玻璃珠的三角瓶内振荡10min,令其分散，用无菌脱脂棉或滤纸过滤。 通过菌体计数，调整菌悬液的浓度供诱变处理。
四、诱变育种
2 诱变育种基本过程 ➢ 诱变处理： ➢ 诱变剂种类的选择：物理诱变剂和化学诱变剂 ✔物理诱变剂：紫外线、χ射线、γ射线、等离子、快中子、ɑ射线、β射线、 超声波等； ✔化学诱变剂: 碱基类似物、烷化剂、羟胺、吖定类化合物等； ➢ 最适诱变剂量选择： ✔诱变剂剂量表示方式：a.UV的剂量指强度与作用时间的乘积； b.化学诱变剂剂量：诱变剂的浓度和作用 时间的乘 积来表示； c.在育种实践中，常以杀菌率来作诱变剂 的相对剂量； ✔最适诱变剂量确定：a.依据：最适剂量应该使所希望得到的突变株在存活 群体中占有最大的比例； b.方法：通过比较剂量--存活率曲线和剂量-
微生物菌种保藏方法及关键技术
目录
01 一、微生物菌种保藏 方法
02
二、微生物菌种保藏 关键技术
03
三、应用实践及注意 问题
04 四、结论
05 参考内容
微生物菌种是生物科学领域中的重要资源，它们具有广泛的工业和医学应用价 值。然而，微生物菌种的保存和保藏是一项充满挑战性的任务，因为微生物细 胞的生命周期短暂，且对环境条件极为敏感。为了更好地利用和保护这些珍贵 的资源，本次演示将详细介绍微生物菌种保藏方法及关键技术。
2、需要根据菌种的特性和应用需求，选择合适的培养基和培养条件，以保证 菌种的活性和稳定性。
3、在使用液氮保藏方法时，需要注意液氮的纯度和保存容器的密封性等问题， 以免影响菌种的存活率和保藏效果。
4、在菌种保藏过程中，需要注意防止杂菌污染和交叉感染等问题，以保证菌 种的纯度和质量。
5、需要注意菌种的定期检测和维护，及时发现并处理衰退和失活的菌种，以 保持菌种种群的健康和稳定。
三、应用实践及注意问题
在实际应用中，不同微生物菌种的保藏方法具有各自的优势和适用范围。一般 来说，对于一些常见的微生物种类，如细菌、酵母和霉菌等，冷冻保藏和液氮 保藏是常用的保藏方法。在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的保藏方 法和操作条件。此外，还需要注意以下问题：
1、在菌种保藏过程中，需要注意菌种的来源和背景信息的记录和整理，以便 更好地了解菌种的特性和进行相应的管理。
2、种子管理
种子管理是微生物菌种保藏的关键环节之一。良好的种子管理包括对菌种的纯 度、质量、稳定性和活性的监控和维护。在菌种保藏过程中，需要定期对菌种 进行纯度检测，确保菌种的纯度和质量。同时，需要根据菌种的生长特性和环 境条件，制定相应的管理措施，包括培养基的选择、培养温度和湿度的控制等， 以维持菌种的稳定性和活性。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法微生物菌种保藏方法主要包括冷冻保存、冷冻干燥保存和鉴定保存等多种方式。
以下将逐一介绍这些方法。
冷冻保存是一种常用的微生物菌种保藏方法，它的原理是通过将菌种置于低温环境中，减缓细胞新陈代谢和繁殖，使菌株处于休眠状态，从而达到长期保藏的目的。
冷冻保存的步骤包括：培养优良菌株、制备菌种冻存液、冻存及复苏。
制备冻存液时，通常使用亲水性保护剂如甘油、乳糖等，以及抗冻剂如酪蛋白、卵黄等，混合菌株培养物与冻存液，并移液到冻存管中，放置于低温冷冻器中迅速冷冻。
复苏时，将冻存液迅速复苏并接种于适宜的培养基上，培养条件要注意逐步恢复菌株的新陈代谢活力，以避免菌株死亡。
冷冻干燥保存是一种将菌种置于低温和低压条件下脱水处理的保存方法。
冷冻干燥保存的原理是通过脱水将菌株处于休眠状态，并使用适当的干燥保护剂，如蛋白质、糖类等，保护菌株的细胞结构和功能。
制备冷冻干燥菌种的步骤包括：菌株预处理、菌株悬浮液制备、脱水处理、真空干燥、密封保存等。
制备菌株悬浮液时，通常使用含有保护剂的培养基，将菌株培养到对数期，制备含有菌株的悬浮液。
脱水处理时，将菌株悬浮液置于脱水试剂中，使其渐渐减少，最终减至约1%的含水量。
真空干燥时，将脱水后的菌株置于真空干燥器中，利用低温低压的条件下，使菌株中的水分转化为气态水分，实现菌株的干燥。
最后，将干燥的菌株装入密封容器中保存。
鉴定保存是一种将微生物菌株保藏在鉴定标本库中的方法。
该方法适用于那些已经得到准确鉴定和分类的菌株。
鉴定保存的步骤包括：菌株鉴定、鉴定数据记录、鉴定标本制备及识别、存储方法选择和管理等。
菌株鉴定时，通常使用形态学观察、生理生化特性分析以及16S rRNA序列分析等方法，确保菌株的准确性和可重复性。
鉴定数据记录时，要详细记录菌株的相关数据，如菌株来源、鉴定结果、鉴定依据等。
鉴定标本制备及识别时，可以通过制备菌株培养物、制备冻存液等方式保存菌株，并制备鉴定标本。
存储方法选择和管理时，要根据菌株类型和特性选择适当的保存方法，同时要做好菌株信息的管理和查询。
菌种保藏的方法
菌种保藏的方法菌种保藏是一种重要的微生物资源保护方式，对于研究、应用和开发微生物具有重要意义。
以下是几种常见的菌种保藏方法及其操作步骤。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻是一种常用的微生物保藏方法，适用于大多数真菌、细菌和酵母菌。
其主要原理是将菌株保存在低温下，使其生理活动缓慢，以延长菌种的保藏时间。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，常用的保存液有甘油、甘露醇等。
4. 菌种保存：将菌株用保鲜膜包裹，放入保存管中，加入保存液，密封保存管。
5. 冷冻保存：将保存管放入低温冰箱或液氮罐中进行冷冻保存。
二、干燥保藏法干燥保藏法是一种简便、经济的保藏方法，适用于真菌、细菌、放线菌等微生物。
其基本原理是将菌种与干燥剂混合，使其水分含量降低，从而实现微生物的休眠状态。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备干燥剂：根据不同菌株的需要，选择合适的干燥剂，如硅胶、氧化钙等。
4. 菌种混合：将菌株与干燥剂按照一定比例混合均匀。
5. 干燥保存：将混合物均匀地散布在无菌培养基上，置于通风干燥的环境中进行保存。
三、冷冻冻干保存法冷冻冻干保存法是一种较为复杂的菌株保藏方法，适用于难保存的微生物，如厌氧菌、放线菌等。
其主要原理是将菌株在低温下冻结干燥，从而保护微生物的活力。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，如甘油、甘露醇等。
4. 冷冻过程：将菌株加入保存液中，放入冷冻机冷冻至低温（通常为-80℃）。
5. 冻干过程：将冷冻的菌株经过真空排气、结冰降温等步骤进行冻干处理。
生产中常用菌种的分离、选育和保藏
生产中常用菌种的分离、选育和保藏在生产中，分离、选育和保藏常用菌种是非常重要的步骤，这些菌种可以用于各种不同的应用，如发酵过程中的生物转化、抗生素的生产以及食品工业中的乳酸发酵等。
以下是常用菌种的分离、选育和保藏的基本步骤：1. 分离：分离菌种是指从自然环境中分离出纯种菌株的过程。
首先，需要选择合适的样品来源，如土壤、水样或食品样品等。
然后，将样品进行稀释、接种到固体培养基上，培养出菌落。
最后，从菌落中挑选单一菌株，并进行纯化培养，得到纯种菌株。
2. 选育：选育是指对已有菌种进行进一步培养和筛选，选出优良品系。
在选育过程中，可以根据所需特性进行筛选，如产量高、抗性强或代谢产物优良等。
通过连续传代培养和筛选，可以逐步培育出符合要求的优良品系。
3. 保藏：保藏是为了长期储存和保存已经分离和选育得到的菌种。
常用的保藏方法包括冷冻保存和冷冻干燥等。
冷冻保存是将菌种保存在低温 (-80℃或液氮温度下)，可以长期保存并保持菌株的生物学性状。
而冷冻干燥则是在低温下将菌种先冷冻，然后通过真空蒸发使其脱水，最后用密封容器保存。
冷冻干燥具有长期保存时间和较小的储存体积的优点。
在菌种的分离、选育和保藏过程中，需要注意的是严格遵守无菌操作规范，以防止杂菌污染。
另外，应该建立相应的菌种信息管理系统，记录并标注每个菌株的来源、特性以及保藏条件等重要信息，以便日后使用和查询。
菌种的分离、选育和保藏在生产中扮演着极其重要的角色。
下面将进一步探讨这些过程，并介绍一些常用的菌种及其应用领域。
在分离菌种的过程中，重要的是选择适当的样品来源。
不同的环境中存在着各种微生物，如土壤、水体、植物、动物及其制品等。
通过采集不同来源的样品，可以获得不同类型和特性的微生物，从而得到多样性的菌株资源。
在接种前，样品经过稀释，使微生物适当分散。
然后将稀释液均匀接种于固体培养基上，并进行孵育。
在培养过程中，微生物通过分裂繁殖形成菌落，而每个菌落代表一个菌株。
动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法（2022年修订）-农业农村部令2022年第1号
动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法（2022年修订）正文：----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法（2008年11月26日农业部令第16号公布，2016年5月30日农业部令2016年第3号、2022年1月7日农业农村部令2022年第1号修订。
）第一章总则第一条为了加强动物病原微生物菌（毒）种和样本保藏管理，依据《中华人民共和国动物防疫法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《兽药管理条例》等法律法规，制定本办法。
第二条本办法适用于中华人民共和国境内菌（毒）种和样本的保藏活动及其监督管理。
第三条本办法所称菌（毒）种，是指具有保藏价值的动物细菌、真菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次氏体、螺旋体、病毒等微生物。
本办法所称样本，是指人工采集的、经鉴定具有保藏价值的含有动物病原微生物的体液、组织、排泄物、分泌物、污染物等物质。
本办法所称保藏机构，是指承担菌（毒）种和样本保藏任务，并向合法从事动物病原微生物相关活动的实验室或者兽用生物制品企业提供菌（毒）种或者样本的单位。
菌（毒）种和样本的分类按照《动物病原微生物分类名录》的规定执行。
第四条农业农村部主管全国菌（毒）种和样本保藏管理工作。
县级以上地方人民政府畜牧兽医主管部门负责本行政区域内的菌（毒）种和样本保藏监督管理工作。
第五条国家对实验活动用菌（毒）种和样本实行集中保藏，保藏机构以外的任何单位和个人不得保藏菌（毒）种或者样本。
第二章保藏机构第六条保藏机构分为国家级保藏中心和省级保藏中心。
保藏机构由农业农村部指定。
保藏机构保藏的菌（毒）种和样本的种类由农业农村部核定。
微生物菌种的选育方法(两篇)
引言：微生物菌种的选育是一项重要的研究领域，其在农业、医药、环境保护等多个领域具有广泛的应用价值。
本文结合相关研究成果，探讨了微生物菌种选育的方法，旨在为相关领域的科研工作者提供参考。
概述：微生物菌种的选育是指通过对微生物的筛选和培养，选择出具有特殊功能或者优良特性的微生物菌株。
其方法包括了菌种筛选、培养条件优化等多个环节。
本文将以此为主线，结合实际案例，详细阐述微生物菌种选育的方法。
正文内容：1. 菌种筛选1.1 传统筛选方法传统筛选方法包括菌落形态观察、生理生化指标检测、抗性测定等。
通过对菌落形态和生理生化特性的观察，可以初步确定菌株的特性。
同时，通过对菌株的抗性测定，可以筛选出具有耐药或者耐环境逆境特性的菌株。
1.2 分子生物学方法分子生物学方法可以应用PCR等技术，快速检测目标菌株的特定基因或者特性。
这些特定基因可能与目标菌株的优良性状相关，通过筛选出含有这些特定基因的菌株，可以更加精确地进行微生物菌种的选育。
2. 菌种培养条件优化2.1 培养基配方优化培养基是微生物菌种培养的基础，其配方的优化对于菌种的生长和代谢具有重要影响。
通过调整培养基中的碳源、氮源、矿质元素等成分，可以优化菌株的生长条件。
2.2 培养条件控制培养条件的控制对于微生物菌株的生长和产生特定代谢产物等方面具有重要影响。
温度、pH值、培养时间等因素的调控，可以使菌株在适宜的环境中进行生长和代谢，从而保证其优良特性的表达。
3. 菌株遗传改良3.1 重组DNA技术重组DNA技术可以通过将目标基因导入到菌株中，使其具有特定的功能特性。
通过引入外源基因，可以使菌株产生特定的代谢产物，或者具有特定的酶活性等特性。
3.2 融合技术融合技术是指将两个或者多个菌株进行融合，从而形成新的菌株。
融合后的菌株可能具有不同菌株的优点，如抗性能力、代谢能力等，从而提高菌株的综合性能。
4. 菌株功能验证4.1 体外实验通过在实验室中建立靶点验证体系，对选育出的菌株进行功能验证。
医学微生物菌种保藏管理方法
医学微生物菌种保藏管理方法一、菌种保藏的基本原则1.保鲜原则：菌种在采集和分离过程中应尽量保持其原汁原味，避免外源菌的混入和污染。
2.单株原则：保藏时应保证每支菌株是单株，以保证其纯度和稳定性。
3.多种原则：对同一种微生物的不同菌株应采取多中多位保藏，以增加菌种的多样性。
4.全程可控原则：采取全程可追溯和可控制的管理方法，确保菌种的安全保藏和利用。
5.国际标准原则：按照相关国际标准和规范进行菌种保藏和管理，以提高交流和合作的效率。
二、菌种保藏的方法1.冷冻保存法：将纯菌株悬浮液或细胞片通过添加保护剂如甘油或DMSO等，将菌株冷冻保存在低温下，通常是-70°C或液氮中。
此方法简单易行，适用于细菌和真菌的保存。
2.干燥保存法：将菌落或菌株通过无菌技术处理后，放在无菌培养基上晾干后保存。
此法适用于真菌和酵母菌等耐干燥的菌种，保存条件较为简单。
3.血清冻干保存法：将微生物菌株通过添加保护剂的方法制备成冻干粉末，然后放置在低温干燥器中冻干保存。
此法适用于需长时间保存且具有较高生物学活性的病毒和细菌。
4.深层培养保存法：将纯菌株制备成深层培养基中的斜面培养或沉淀法保存。
此法适用于常规保存，保存条件较为简单。
5.液体亚培养保存法：将菌种接种到液体培养基中，通过调整培养基成分，采取亚培养保存的方式，保持菌种的生存状态。
此法适用于对菌株的要求较高的特殊菌株。
2.制度规范：建立菌种保藏和管理的工作制度和操作规范，明确工作流程和责任分工，保证工作的科学性和规范性。
3.定期检测：对保存的菌种进行定期检测，保证其纯度、活性和遗传稳定性，及时发现和处理菌种变异和污染等问题。
4.定期更新：对长时间保存的菌种进行定期更新，保持菌种的活力和可持续利用能力，与其他菌种资源中心进行流通和交换。
5.安全保障：建立菌种保藏和管理的安全保障制度，包括物理安全、信息安全和生物安全等方面的管理措施，保证菌种和研究人员的安全。
综上所述，医学微生物菌种保藏管理是一项综合性较强的工作，需要遵循基本原则，采用适合的保存方法，并且进行科学的管理和规范的操作，以确保菌种的质量和可持续利用能力。
微生物菌种常规保藏技术规程
微生物菌种常规保藏技术规程一、引言微生物菌种的保藏是微生物学研究中至关重要的环节之一。
通过合理的保藏技术，可以确保微生物菌种的长期存活和保存，为后续的研究提供可靠的物质基础。
本文旨在介绍微生物菌种常规保藏技术规程，以期提供一个标准化的操作指南。
二、菌种的采集和处理1. 采集菌种时，应选择生长旺盛、纯度高的菌落或液体培养物。
2. 采集后的菌落应立即进行处理，避免外界污染。
3. 处理前应先进行菌种的鉴定和纯化，确保菌种的准确性和纯度。
三、菌种的保存方法1. 冷冻法：将菌种悬液加入20%甘油溶液中，制备成冷冻菌种。
存放于-80℃的冰箱中。
2. 干燥法：将菌种培养物均匀涂布在无菌滤纸上，放置于无菌培养皿中，置于干燥箱中进行干燥。
3. 冷冻干燥法：将菌种悬液加入5%蔗糖溶液中，制备成冷冻干燥菌种。
存放于低温干燥器中。
四、菌种的保存条件1. 冷冻菌种应存放于-80℃的冰箱中，避免频繁解冻。
2. 干燥菌种应存放于干燥、通风、避光的地方，避免潮湿和高温。
3. 冷冻干燥菌种应存放于-20℃的冰箱中，避免频繁解冻。
五、菌种的复苏和活化1. 冷冻菌种的复苏：将冷冻菌种悬液快速解冻后，加入适量培养基，进行孵育。
2. 干燥菌种的复苏：将干燥菌种涂布于含有适量水分的培养基上，进行孵育。
3. 冷冻干燥菌种的复苏：将冷冻干燥菌种悬液快速溶解后，加入适量培养基，进行孵育。
六、菌种的质量控制1. 质量控制应包括菌种的纯度、活力和遗传稳定性等指标的检测。
2. 检测方法可包括菌落形态观察、生理生化特性测定、PCR扩增和测序等。
七、菌种的分发和共享1. 分发前应对菌种进行复苏和活化，确保其活力和纯度。
2. 分发时应注意避免菌种的交叉污染和变异。
八、结论微生物菌种常规保藏技术规程是保证菌种长期保存和共享的重要保障。
通过规范的操作流程和条件控制，可以确保菌种的质量和可靠性。
在菌种的保藏和使用过程中，还应注意遵守相关法律法规和伦理规范，保护知识产权和科学道德。
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在一定的条件下，以确保其持久的存活和繁殖能力。
微生物菌种的保藏可以用于科学研究、工业应用和生物资源保护等领域。
本文将介绍微生物菌种保藏的原理和方法。
微生物菌种保藏的原理主要包括冷冻保藏、干燥保藏和液氮冷冻保藏等。
冷冻保藏是将微生物菌种保存在低温条件下，常见的温度为-70℃或-80℃。
低温可以减缓微生物的新陈代谢过程，降低细胞内酶的活性，从而延缓细胞的老化和死亡。
冷冻保藏的关键是要使用适当的保藏液，如冻干保藏液、甘油保藏液等，以保护细胞在冷冻过程中的完整性和活力。
干燥保藏是将微生物菌种保存在无水或低水分条件下。
干燥可以通过脱水或真空干燥等方法实现。
干燥保藏的原理是通过降低细胞内水分含量，使微生物处于休眠状态，从而延缓细胞的代谢活动和老化过程。
干燥保藏的关键是要选择适当的干燥剂，如硅胶、脱水剂等，以吸附和吸收细胞内的水分。
液氮冷冻保藏是将微生物菌种保存在液氮温度下，常见的温度为-196℃。
液氮冷冻保藏的原理是通过极低的温度和极低的氧气浓度，使微生物处于极度低温和低代谢状态，从而延缓细胞的老化和死亡。
液氮冷冻保藏的关键是要使用适当的冷冻容器，如液氮罐、冷冻管等，以确保微生物菌种的长期保存。
微生物菌种保藏的方法包括冻干法、冷冻法、液氮冷冻法等。
冻干法是将微生物菌种培养物冻干后保存。
冻干法的步骤包括培养微生物菌种、制备冻干保藏液、将菌种混合冻干保藏液后冻干、密封保存。
冻干法保存的菌种可以长期保存，并且对于某些对冷冻保存敏感的微生物有一定的保护作用。
冷冻法是将微生物菌种保存在低温条件下。
冷冻法的步骤包括培养微生物菌种、制备冷冻保藏液、将菌种混合冷冻保藏液后冷冻、保存在低温条件下。
冷冻法保存的菌种可以长期保存，并且对于某些对冷冻保存敏感的微生物有一定的保护作用。
液氮冷冻法是将微生物菌种保存在液氮温度下。
液氮冷冻法的步骤包括培养微生物菌种、制备液氮保藏液、将菌种混合液氮保藏液后保存在液氮温度下。
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在适宜的条件下，以保证其长期存活和遗传特性的保持。
微生物菌种的保藏有着重要的科研意义和应用价值，可以用于微生物学研究、新药研发、环境修复等领域。
微生物菌种保藏的原理主要包括冷冻保存和冷冻干燥保存两种方法。
冷冻保存是将微生物菌种存放在低温环境下，通过降低菌种代谢活动的速度来保持其存活和遗传特性。
冷冻保存的主要步骤包括选择合适的保藏液、培养菌种、制备冷冻物等。
保藏液一般是由无菌培养基和一定浓度的甘油或蔗糖组成，可以提供菌种所需的养分和保护菌体免受冷冻引起的损伤。
培养菌种时需要选择处于活跃生长期的菌株，通过适当的培养条件来使其保持较高的活力。
制备冷冻物时，可以将菌株转移到保藏液中，并在超低温环境下迅速冷冻。
冷冻干燥保存是将微生物菌种冻结后，通过真空干燥的方法除去水分，将菌种转变为无水状态，以提高其耐久性和保存时间。
冷冻干燥保存主要包括培养菌种、冻干物制备和密封保存等步骤。
培养菌种的方法与冷冻保存类似，选择合适的培养基和培养条件来培养活跃菌株。
冻干物制备时，将菌株转移到含有保护剂的培养基中，并通过冻结和真空干燥的过程除去水分，形成冻干物。
最后，将冻干物密封保存，避免受潮和污染。
微生物菌种保藏在实际操作中需要注意一些关键技术和管理要求。
首先，要确保保存的微生物菌株是原始菌株的纯种，并且具有所需的遗传特性。
其次，保藏液或冻干物储存容器应该具备良好的密封性能，以防止水分的进入和菌株的污染。
另外，保存的温度应该稳定在低温，通常为-80℃或更低的温度，以保证菌株的长期存活。
此外，对于长时间保存的菌株，应定期进行复苏培养，以确保其存活和活力。
总之，微生物菌种保藏是一项重要的技术，为微生物资源的保存和利用提供了有效的手段。
通过冷冻保存和冷冻干燥保存等方法，可以长期保留微生物菌种的遗传特性和活力，为微生物学研究和应用提供了可靠的资源。
在实际操作中，应遵循正确的步骤和管理要求，以确保菌种的质量和保存效果。
微生物菌种选育技术和保藏
矿物盐、丙酸钠、硫胺素（M3 琼脂）
链霉菌，微单孢菌 马杜拉放线菌、小双孢菌、
链孢囊菌 诺卡氏菌
红球菌、小单孢菌
广泛应用的选择培养基。
①、几丁质培养基： 分离土壤和水中放线菌。 但测试过的500株链霉菌和其他放线菌中，只有
25％的菌种具有强的水解几丁质的能力。 许多放线菌生长在能利用几丁质的可作为放线菌
接种已富集的培养物到固体培养基，可将优势微生物分离 出来。
方法的原理是给混合菌群提供一些有利于所需菌株生 长或不利于其他菌型生长的条件。
移种时间是关键，应在所需菌占优势时移种。
例如，供给特殊的基质或加入某些抑制剂。 但应注意的是，所需类型的菌种生长的结果有时 会改变培养基的性质，从而改变选择压力，使其 他微生物也能生长。通过把富集培养物接种到新 鲜的同一培养基可以重新建立选择压力。
菌种选育是一门应用科学技术，其理论基础是微生物遗 传学、生物化学等，而其研究目的是微生物产品的高产优质 和发展新品种，为生产不断地提供优良菌种，从而促进生产 发展。所以，育种工作者要充分掌握微生物学、生物化学、 遗传学的基本原理和国内外有关的先进科学技术，灵活而巧 妙地将其运用到育种中去，使菌种选育技术不断更新和发展。
用涂石蜡的棒置于碳源 培养基中 花粉 蛇皮 人的头发
水、土壤、粪 肥
土壤、根土
水
海水、污泥 发霉的稻草
土壤 土壤
土壤 土壤 土壤 土壤
分离出的菌体
嗜粪红球、小单孢菌 属等
链霉菌属、马拉杜菌 属、小双孢菌属
小Байду номын сангаас孢菌属、内孢高 温放线菌 链霉菌属 嗜热放线菌
链霉菌属 链霉菌属
诺卡氏菌 游动放线菌属
微生物菌种的选育和保藏--基因突变
三、基因突变
2 基因突变类型-按表型分类 ➢ 营养缺陷型：因突变而丧失产生某种生物合成酶的能力，并因而成为必须在培养基中添 加某种物质才能生长的突变类型； ➢ 抗性突变型：因突变而产生了对某种化学药物或致死物理因子的抗性； ➢ 条件致死突变型：突变后在某种条件下可正常生长繁殖，而在另一条件下却无法生长 繁殖的突变型；如E.coli的某些菌株37℃下生长，42℃不能正常 生长；
三、基因突变
4 基因突变的特点-自发性和不对应性的证明 ➢ 涂布试验：12只平板上各涂数目 相等的敏感于噬菌体T1的E.coli， 培养5h后6皿直接喷上T1，另6皿 涂布混匀后再喷T1，培养过夜后 发现重新涂布后的6皿上长出的抗 性菌落数比未经涂布的平皿上高得 多； ➢ 试验结果：如果是接触T1后才产 生抗性菌落，涂布与未涂布的平板 上抗性菌落数应该一样多；故 E.coli在接触噬菌体之前某次细胞 分裂过程中已自发产生突变；
微生物学基础
单元八 微生物菌种的 选育和保藏
项目一 微生物菌种的选育
三、基因突变
１
基因突变概述
➢ 基因：是一段具有特定功能和结构的连续DNA片段，是编码蛋白质或RNA分子遗传信息
的基本遗传单位；它能控制遗传性状的发育，也是突变、重组、交换的基本单位；
➢ 突变：指生物体的表型突然发生的可遗传的变化；
三、基因突变
5 基因突变的机制 ➢ 基因突变的原因多样，可以是自发的或诱发的，诱变又可分为点突变和畸变，归纳如下：
三、基因突变
5 基因突变的机制-诱发突变 ➢ 诱发突变中的诱变剂：凡能提高突变率的任何理化因子，称为诱变剂；种类多，作用方 式多； ➢ 碱基置换：✔属于一种染色体的微小损伤，一般也称点突变；它只涉及一对碱基被另 一对碱基所置换；分为转换和颠换； ✔转换：一个嘌呤被另一个嘌呤或是一个嘧啶被另一个嘧啶所置换； ✔颠换：一个嘌呤被一个嘧啶,或是一个嘧啶被一个嘌呤所置换；
食品发酵工程-2(微生物菌种的选育及保藏)
02
微生物菌种保藏
低温保藏法
总结词
通过降低温度来抑制微生物的生长和代谢，从而延长菌种保 藏时间。
详细描述
将微生物菌种保存在低温环境下，通常为-18℃至-70℃，可以 显著减缓菌种的生长和代谢速度，从而延长菌种保藏时间。低 温保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存。
干燥保藏法
总结词
通过去除水分来降低微生物的生存能 力，从而延长菌种保藏时间。
详细描述
将微生物菌种干燥至一定含水量，通常 为5%-10%，以降低菌种的生存能力。 干燥保藏法适用于耐干燥的微生物菌种， 如霉菌和酵母菌等。
冷冻真空干燥干燥保藏法
总结词
结合低温、干燥和真空条件来更有效地延长菌种保藏时间。
详细描述
在冷冻真空干燥机中，将微生物菌种在低温、真空条件下进行干燥处理，去除 水分，从而延长菌种保藏时间。冷冻真空干燥保藏法适用于对湿度敏感的微生 物菌种，如病毒和细菌等。
03
微生物菌种鉴定
形态学鉴定
总结词
通过观察微生物的形态、大小、颜色、生长速度等特征，初步判断微生物的种类。
详细描述
形态学鉴定是微生物鉴定的基础方法，通过显微观察，可以了解微生物的形态、大小、排列、运动性等特征，从 而判断其大致的分类。
生理生化鉴定
总结词
通过测定微生物对不同碳源、氮源、能源的利用以及产生的代谢产物，进一步确定微生物的种类。
详细描述
根据产物的性质选择合适的分离纯化方法，如离心、 过滤、萃取、沉淀等。通过实验确定最佳的工艺参数 和操作条件，以提高产物的纯度和收率。同时，可以 探索联合使用多种分离方法，以达到更好的分离效果 。
THANKS
感谢观看
的时间和较大的培养规模。
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刘光磊
liugl@
College of Marine Life Sciences, Ocean University of China
第六章 微生物菌种的筛 选与保藏
本章要点
如何按目的要求筛选菌株
微生物菌种保藏方法 了解国内外各大菌种保藏机构
种 （speci es）
第二节 菌种退化、复壮与保藏
在生物进化中： 遗传性的变异是绝对的，稳定性是相对的； 在变异中： 退化性的变异是大量的，进化性的变异是个别的。
一.菌种的退化 1、菌种退化degeneration的表现
生产性状的劣化,遗传标记的丢失, 原有的典型性状的 不典型等 菌落及细胞形态的改变 生长速度缓慢 代谢产物生产能力下降，即负突变 致病菌对宿主侵染力下降 抗不良环境条件（抗噬菌体，抗低温）能力减弱
累的产物 菌落形态明显不同于目的菌
方法：106~107 工具菌与样品稀释液一起涂布至琼脂 培养基表面，具有生长圈的菌落即为目的菌 适用：氨基酸，核苷酸，维生素产生菌的选育
（5）抑制圈
适用：抗生素产生菌的选育 工具菌：对目的抗生素敏感的微生物 例：目的菌为产生抗G+细菌的抗生素的菌株 工具菌可使用金黄色葡萄球菌 方法 目的菌分离：稀释分离法，培养长出菌落 代谢物积累：用打孔器（6CM）将菌落连同周围琼 脂培养基一起取下，放一无菌空培养皿内，保湿培 养4-5天，使新产生抗生素积累于小琼脂块中 测定：取107工具菌涂布于球脂培养基，将小琼脂 块放于上面培养过夜，抑菌圈的出现，说明琼脂块 中有抗生素，大小说明抗生素单位的高低
2、复筛：每株3~5瓶，可提前培养种子，使接种
量比较一致，3~5%接种量， 培养条件可同初筛 分析测定：定量，注意副产物 复筛可进行多次，逐步淘汰，留下3~5株甚至最好 的1株
好氧培养
五、培养工艺条件试验与生产试验 1、摇瓶发酵条件
培养基组成，初始pH，通风量（装液量），接 种量，培养温度… 2、小型台式发酵罐发酵工艺条件 溶解氧控制，pH值控制，原料添加模式，消泡 剂…
3、砂土管保藏法
方法：孢子或芽孢悬液 → 加入无菌砂土管中→ 干 燥→ 封口 → 保藏 措施：无营养，缺氧，干燥 适用：产孢子（芽孢）微生物 保藏期：1~10年 4、冷冻干燥保藏 方法：菌种培养 → 用保护剂悬浮 → 加入安醅管 中→低温冻结（-25—-40℃）→抽真空（至 0.01mmHg） → 真空封口 → 检查真空度 → 保藏 措施：低温、干燥，缺氧，有保护剂 适用：各大类 保藏期：5~15年或更长
（四）菌种保藏机构 1、中国微生物菌种保藏管理委员会
CCCCM
中国普通微生物菌种保藏中心CGMCC(归口中国科学 院) 中国科学院微生物研究所(AS) 中国科学院武汉病毒研究所(AS-IV) 中国农业微生物菌种保藏中心ACCC(归口中国农业科 学院) 中国农业科学院土壤与肥料研究所(ISF) 中国工业微生物菌种保藏中心CICC(归口轻工业总会) 中国食品发酵工业研究所(IFFI)
措施
低温：生长温度低限约为-30℃，水溶液中酶促 反应温度低限-140℃ 干燥 缺氧 避光 缺乏营养 添加保护剂：甘油、脱脂牛奶、血清白蛋白、海 藻糖。 添加酸度中和剂
（三）菌种保藏方法 1、斜面保藏法 方法：接种适宜斜面培养基
→ 培养 → 4℃保藏
措施：低温：4℃ 适用：各大类 保藏期：1~6个月 用橡皮塞代替棉塞，可适当延长保藏时间 2、石蜡油封藏法 方法：斜面或半固体接种 → 培养 → 加无菌液蜡 高出培养 基1cm→4~15℃保藏 措施：低温，隔氧 适用：不能利用石油的各大类 保藏期：1~2年 优点：简便
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菌株 （strain）
第一节 从自然界中分离筛选菌种
生产菌株来源 1、索取或购买
2、自己选育
(1) 用原有菌株进行遗传改造进行育种
①
诱变育种 ② 基因重组育种
(2) 向菌种保藏机构索取、购买出发菌株进行选育 (3) 从自然界中分离菌种
从自然界中分离菌种就是从自然界微生物资源中
3、淘汰已衰退的个体
对S. microflavus“5406”农用抗生菌的分生孢子 采用-10~-30℃的低温处理5~7天，使其死亡率达到 80%左右，结果会在抗低温的存活个体中留下未退化 的个体，从而达到复壮的效果。
三.
菌种的保藏 （一）目的 使微生物菌种保持原来的性状和活力不退化、不 死亡、不被污染，便于研究、交换和使用 。 （二）原理 挑选典型培养物（typical culture）的优良纯种， 并创造最有利于休眠的环境条件，使微生物处于代谢 不活泼、生长受抑制的休眠状态。
2、通过宿主体复壮：病原菌
对于寄生性微生物的衰退菌株，可通过接种到相应昆 虫或动植物宿主体内来提高菌株的毒性。例如，苏云 金芽孢杆菌经过长期人工培养会发生毒力减退、杀虫 率降低等现象，可用退化的菌株去感染菜青虫的幼虫， 然后再从病死的虫体内重新分离典型菌株。如此反复 多次，就可提高菌株的杀虫率。根瘤菌属经人工移接, 结瘤固氮能力减退,将其回接到相应豆科宿主植物上, 令其侵染结瘤,再从根瘤中分离出根瘤菌,其结瘤固氮 性能就可恢复甚至提高。
（2）透明圈法
（3）变色圈法
淀粉平板喷稀碘液：透明圈，液化型淀粉酶 支链淀粉平板喷稀碘液： 蓝色圈：异淀粉酶 无色圈：液化型淀粉酶 葡聚糖平板加刚果红：葡聚糖酶 木聚糖平板加刚果红：木聚糖酶 工具菌：
营养缺酸型，不能合成的物质（生长因素）为目的菌积
（4）生长圈法
细 菌：营养琼脂 放线菌：高氏一号 霉 菌：察氏培养基 酵母菌：YPD
（3）利用不易衰退的细胞传代：霉菌、放线菌：
无性孢子或有性孢子 （4）采用有效的菌种保藏方法
二.
菌种的复壮 rejuvenation 狭义复壮 在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和测 定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛 选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性 状的相应措施；
刃天青
偶氮间苯四酚 resazurin
氧化还原指示剂，在缺氧环境下由粉红变为无色。
（2）创造无氧环境
物理除氧
空气臵换法：干燥器或厌氧培养罐 抽真空 76mmHg→充入N2 （反复3次）→充入CO2 10% +H2 10% + N2 80% H2 + O2 → H2O (钯作催化剂） GASPAK罐除氧：硼氢化钠、柠檬酸，碳酸氢钠化学 反应产生H2 和CO2，H2与O2反应生成水 厌氧指示剂
（5）添加抑制剂 10%酚数滴：抑制细菌霉菌生长，增殖放线菌 抗生素：抑制细菌放线菌，增殖酵母、霉菌 多粘菌素B：抑制G-细菌 青霉素：抑制G+细菌 制毒菌素：抑制真菌 放线菌酮：抑制真菌
三.
纯种分离 目的：将目的菌从混杂的微生物中分离出来，获得 纯培养 1、纯种分离的一般方法
2.
菌种退化的原因：基因自发突变
退化是发生在群体细胞中的一个从量变到质变的逐步 演变过程。 自发突变率10-8~10-9 加速退化的因素:传代次数过多;不适宜的培养条件。
3.防止退化的措施 （1）控制传代次数 （2）创造良好的培养条件：培养基；培养温度等
保藏培养基：
化学除氧
（3）厌氧分离（培养）技术
高层琼脂柱技术 厌氧罐技术 厌氧手套箱技术
厌氧培养箱
四
、筛选 1、初筛：通风发酵菌种，通过摇瓶发酵进行，每 株一瓶 目的：淘汰80%-90%的分离菌株中的低产菌
（1）培养条件：主要通过查阅资料及需要而预先决 定：如培养基组成，通风量（装液量，摇瓶机转数）， pH、温度、培养时间等。 （2）分析测定：最好定量，如较困难时可采取半定 量方法
广义复壮
在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常 有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期 从中选择到自发的正突变个体。也称生产育种。
复壮方法 1、纯种分离法
平板表面涂布法 菌落纯 （菌种纯） 纯种分离法 细胞纯 （菌株纯） 平板划线分离法
琼脂培养基浇注法
用“分离小室”进行单细胞分离 用显微操纵器进行单细胞分离 用菌丝尖端切割法进行单细胞分 离
有目的、快速、准确地选出所需要的菌种。
从自然界中分离筛选菌种的一般步骤 筛选目标→设计方案
采样
增殖培养
平板分离
性能考察(生 产性能试验、 菌种鉴定）
筛选(初筛、 复筛)
单株纯种分 离
一、采样
从自然界种采集含目的菌的样品
1.
环境条件对土样本中微生物分布的影响
（1）营养环境 ①高糖环境（加工蜜饯、糖果、蜂蜜的环境）土壤 中：耐渗透压酵母，柠檬能产生菌，氨基能产生菌； ②富含淀粉环境污泥、水沟旁土壤中：淀粉酶产生 菌； ③森林中腐叶烂草下土壤：纤维素酶产生菌； ④含蛋白质（蚕丝、豆饼、生皮晒厂）土壤中：蛋 白酶产生菌； ⑤油田土：石油分解菌 ；
2、平皿反应快速检出法——定性或半定量 （1）纸片培养显色法
滤纸饱浸含有指示剂的液体培养基 用接种环接种 保湿恒温培养 据菌落周围变色圈和菌落直径比值判别目的物产量 根据琼脂培养上透明圈/菌落直径大小判别目的产 物的产量 淀粉平板透明圈：淀粉酶 碳酸钙平板透明圈：产酸 酪素（蛋白）透明圈：蛋白酶