血红蛋白测定办法
血红蛋白检验操作SOP
1.目的
建立血红蛋白测定的操作步骤，以保证试验的顺利进行和结果的真实可靠。
2.适用范围
适用于血清制品血红蛋白的测定（分光光度计法）
3.职责
检验人员。
4.定义
无
5.引用标准
《中国药典》2015版四部通则3604
6.材料及设备
6.1 751分光光度计
6.2 1-cm光路的比色杯
6.3 蒸馏水
7.流程图
无
8.内容
8.1.以蒸馏水为空白对照。
8.2 使用1-cm光路的比色杯，直接测定牛血清样品在576nm、623nm及700nm
波长下的吸光值。
8.3 每个样品至少测定2次。
8.4 计算平均测定值
8.5 按照下式计算样品中血红蛋白含量：
血红蛋白含量（mg/dl）=[(A576×115)−(A623×102)−(A700×39.1)] ×10。
8.6 其中；A576、A623、A700是样品在576nm、623nm及700nm波长下的平均
吸光值。
9.注意事项
9.1. 严格按照仪器说明书进行操作。
9.2. 比色杯要保持清洁，定期在盐酸液中进行浸泡。
9.3. 试验完毕将所有物品放归原处。
10.附录及派生记录
10.1. 血红蛋白检测记录F-SOP-ZL004-01
11.相关文件
无
12.修订记录。
血红蛋白的检测
一血红蛋白的提取和分离实验的方法：1：实验材料，仪器，试剂及试剂的配制（1）实验材料：新鲜的鸡血（2）实验仪器：离心机，烧杯（100ml），胶头滴管，玻璃棒，离心管架，漏斗，纱布等。
（3）实验试剂：饱和（NH4）2SO4溶液（PH=6.0~7.0），柠檬酸钠溶液，生理盐水，蒸馏水。
（4）试剂的配制：1. 饱和（NH4）2SO4溶液的配制：100ml蒸馏水中溶解76g（NH4）2SO4，用氨水滴PH值至6.5左右；2.生理盐水的配制：取9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中。
3.柠檬酸钠溶液的配制：6g柠檬酸钠溶于100ml生理盐水中（可收集100ml鸡血）。
2：实验步骤：（1）收集并清洗鸡血：用盛有柠檬酸钠溶液的烧杯装新鲜的鸡血（防止鸡血凝固），然后将鸡血用300ml生理盐水稀释，充分搅拌后转移到50ml离心管中，离心（V=5000rpm）5min（此步可除去血清蛋白）。
（2）破碎鸡血细胞：小心倒掉上清，下层细胞加入50ml的蒸馏水，剧烈震荡10min，离心（V=5000rpm）10min.。
取上清溶液，即血红蛋白的溶液，用多层纱布过滤。
（3）盐析分离血红蛋白：向滤液中逐渐加入（NH4）2SO4饱和溶液，边加边摇，约加入与血红蛋白溶液相同体积时，溶液出现浑浊。
静止20min，离心10min(v=5000rpm).。
红色沉淀就是分离出来的血红蛋白。
血红蛋白溶液通过盐析并离心后得到红色沉淀，此时上清溶液基本无色，表明该沉淀就是我们分离得到的血红蛋白，无需用其他方式进行验证。
下面就几点进行讨论;1我们购买鸡血时，为了防止鸡血凝固，把鸡血收集到事先准备好的盛有柠檬酸钠溶液的瓶子里，可以放置一白天，若要过夜，温度须控制在4摄氏度。
2我们用蒸馏水使细胞涨破而不用甲苯（有毒），既简单又安全，同时还可以将血红蛋白溶液进行稀释。
3用盐析法进行蛋白质分离试验，比通过色谱柱，减少了实验难度，降低了试验成本，缩短的试验时间。
血红蛋白测定方法
6.1 血红蛋白测定（氰化高铁法）消光系数法和标准曲线法任选其一测定血红蛋白。
１.6.1.1 光系数法１.6.1.1.1 原理血红蛋白(haemoglobin，Hb)被铁氰化钾氧化后生成高铁血红蛋白，再生氰离子结合形成氰化高铁血红蛋白（红色），氰化高铁血红蛋白（红色）极为稳定，在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。
１.6.1.1.2 仪器721型或其它型号的分光光度比色计。
10微升量吸管。
１.6.1.1.3 试剂称取碳酸氢纳（）140毫克\铁氰化钾200毫克、氰化钾50毫克，用水溶解并稀释到1000毫升。
贮存於棕色试剂瓶内，在暗处或冰箱（+4℃）保存，至少可稳定数月到一年。
１.6.1.1.4 实验步骤１.6.1.1.4.1 试剂2.5毫升於5毫升带盖试管中，加入10微升血液，混匀后，放置15分钟。
１.6.1.1.4.2 选用0.5厘米光径比色杯，于540nm波长下，以试剂调零点，将所得样品管之光密度乘以73.6，即为血红蛋白之浓度（克%）。
计算公式如下：Ct=待测的血红蛋白（克%）浓度。
D 540 = 氰化高铁血红蛋白在540nm波长下测出的光密度。
HICN251=测定时血液的稀释倍数（血10微升加入试剂2.5毫升中）44=氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数0.5=比色杯的光径10000=将（毫克/升）换算成（克%）的数字１.6.1.1.5 注意事项１.6.1.1.5.1 试剂不要放在聚乙烯瓶内，以免因氰离子与其反应而使试剂作用降低。
１.6.1.1.5.2 仪器因mM消光系数法完全依靠仪器的吸光度来计算,故此法要求所用的仪器性能要符合要求(如仪器的波长准确与否,以及灵敏度及线性等),否则将直接影响测定的结果。
1.6.1.1.5.3仪器在使用前最好以WHO规定的氰化高铁血红蛋白参考液校正后再使用。
参考液最好选用ICSH9国际血液学标准化委员会）确定的由RIV（莅国立公共卫生研究院）制定的氰化高铁血红蛋白参考液或上海医学化验所制血的氰化高铁血红蛋白标准液。
血红蛋白测定实验报告
血红蛋白测定实验报告实验目的：本实验旨在通过测定血液中的血红蛋白浓度，了解血液的营养状况，评估身体的健康状况。
实验原理：血红蛋白是红细胞内的主要蛋白质，它含有铁元素，能与氧结合形成氧合血红蛋白，负责运输氧气到全身各个组织。
测定血红蛋白浓度是评估贫血程度的一种常用方法。
本实验采用西林法测定血红蛋白浓度。
西林法是一种经典的测定血红蛋白浓度的方法，它利用了草酸亚铁与血红蛋白的特异性反应，生成淡紫色的铁蓝衍生物。
通过比色法测定溶液的吸光度，再根据标准曲线计算出血红蛋白浓度。
实验材料和设备：1. 血红蛋白测定试剂盒2. 安全眼镜和手套3. 量筒、试管、移液管等常见实验器具4. 分光光度计实验步骤：1. 将血液样本放置于离心管中，以3000转/分钟的速度离心10分钟，获取上清血浆。
2. 根据试剂盒说明书，将血浆与试剂按比例混合，并搅拌均匀。
3. 将混合液转移至试管中，并在光度计中测量吸光度值，记录下各个浓度的吸光度值。
4. 绘制标准曲线，将吸光度值作为横坐标，血红蛋白浓度作为纵坐标，绘制出吸光度-浓度曲线。
5. 测量待测样本的吸光度，并根据标准曲线计算出血红蛋白浓度。
实验结果：根据实验中测量的吸光度值和标准曲线，计算出待测样本的血红蛋白浓度为X g/L。
实验讨论：通过本实验测定的血红蛋白浓度，可以初步判断一个人的贫血程度。
同时，血红蛋白浓度还可以用于监测治疗效果，评估疾病的恢复情况。
然而，血红蛋白浓度只是评估身体健康的一个指标，综合考虑其他因素，如红细胞计数和红细胞压积等，才能全面了解一个人的血液情况。
实验结论：通过血红蛋白测定实验，测得待测样本的血红蛋白浓度为X g/L，初步判断其贫血程度为（正常/轻/中/重）。
但需要结合其他指标综合判断。
测定血红蛋白的方法
测定血红蛋白的方法
测定血红蛋白的方法有多种，常用的包括：
1. 血红蛋白测定仪：利用光的吸收特性测定血红蛋白的浓度。
这种方法简单快捷，常用于临床血液检测。
2. 血红蛋白电泳：将血红蛋白在电场中分离，并根据不同类型的血红蛋白的迁移率判断其种类和含量。
这种方法常用于血红蛋白病变的诊断。
3. 血红蛋白比色法：通常使用氰化亚铁或盐酸血红蛋白比色法，将血红蛋白转化成可测量的化合物，并通过比色或比较色标定，测定血红蛋白浓度。
4. 血红蛋白溶血法：通过将红细胞破坏并释放出来的血红蛋白与特定试剂作用，从而测定血红蛋白的浓度。
这些方法各有优劣，具体选用的方法取决于实验目的和条件。
红细胞比容血红蛋白测定
• 血液与抗ห้องสมุดไป่ตู้剂混合、注血时应避免动作剧 烈引起红细胞破裂。
• 温氏分血管内壁要充分干燥。血液进入毛 细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有 气泡。
二、血红蛋白的测定
• 目的 掌握用比色法测定动物的血红蛋白的含量。
• 原理 血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。 但当用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为 稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋 白（或高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准 色进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液 中含血红蛋白克数（g·L-1）。
离心后血液分层
layer after blood centrifugated
方法与步骤
改进的温氏分血管比容法 • 采血（加入抗凝剂肝素钠，抗凝血） • 用移液器取1 ml抗凝血，放入EP管中。 • 离心：将分血管以3000 r/min离心30 min，
取出分血管，读取红细胞柱的高度。
[注意事项] • 选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、
具体测定方法如下：
①用滴管加5～6滴，0.1 mol·L-1 HCl到刻度 管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。
②用微量采血管吸血至20μl，仔细揩去吸管外 的血液。
③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部， 再吸上清液洗吸管3次。操作时勿产生气泡,以 免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐 酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血 红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。
方法与步骤
沙里氏血红蛋白计测定 • 沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁
血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。 • 沙里血红蛋白计 主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方
hb含量检测方法
hb含量检测方法HB（Hemoglobin）是一种重要的蛋白质，主要存在于人体的红细胞中，它负责运输氧气到身体各个部位。
因此，HB含量的检测对于判断人体血液中氧气的供应情况以及身体健康状况具有重要意义。
本文将介绍几种常见的HB含量检测方法。
一、血红蛋白计数法血红蛋白计数法是一种常用的HB含量检测方法。
该方法利用特定的试剂与血液中的HB发生反应，生成可测量的产物，并通过光学方法测定产物的浓度来间接测量HB含量。
血红蛋白计数法操作简便、快速，适用于临床快速检测。
二、血红蛋白电泳法血红蛋白电泳法是一种常见的定性和定量检测HB含量的方法。
该方法通过电泳的原理，将血液中的HB分离出来，根据其在电泳胶中的迁移速度来判断其种类以及含量。
血红蛋白电泳法能够检测出各种血红蛋白变异，对于一些遗传性疾病的诊断具有重要意义。
三、血红蛋白比色法血红蛋白比色法是一种常见的HB含量检测方法。
该方法利用特定试剂与HB发生反应，生成可见光的吸收峰，通过比色计测定吸光度来间接测量HB含量。
血红蛋白比色法操作简单、快速，适用于大规模的血红蛋白检测。
四、全自动血细胞分析仪全自动血细胞分析仪是一种高精度、高通量的HB含量检测方法。
该仪器能够自动化地对血液样品进行细胞计数和分类，并通过光学原理测定血红蛋白含量。
全自动血细胞分析仪具有高度的准确性和重复性，广泛应用于临床检验。
五、脉搏血氧仪脉搏血氧仪是一种常见的非侵入式HB含量检测方法。
该仪器通过红外光和红光的吸收差异来测量血液中的HB含量。
脉搏血氧仪操作简便，适用于家庭使用和临床监测。
HB含量的检测方法多种多样，根据实际需求选择合适的方法进行检测非常重要。
无论是在临床医学还是个人健康管理中，准确测量HB 含量对于判断身体健康状况具有重要意义。
不同的检测方法各有优劣，根据具体情况选择适合的方法进行检测，可以更好地了解人体的健康状况。
《血红蛋白含量测定》实验综述报告
血红蛋白含量测定实验综述报告前言血红蛋白（Hb）是人体内比较常见的一种蛋白质，它负责携带氧气和二氧化碳，在维持人的生命活动和健康方面起着重要的作用。
因此，对于血红蛋白含量的测定，具有重要的临床意义。
本文主要介绍了血红蛋白含量测定的一些相关实验方法和步骤。
实验材料1.血糖试剂盒2.血红蛋白含量测定仪器3.暗室4.血液样本（采集自参加实验的志愿者）实验方法步骤1：血液样本处理采集完血液样本后，需要先进行一些必要的处理。
首先，需要将采集到的血液样本与血糖试剂盒中的试剂混合均匀，并置于暗室内培养15分钟。
步骤2：测定吸光度在血液样本和试剂混合物培养完毕后，需要使用血红蛋白含量测定仪器测定样品的吸光度。
这里介绍一下使用光度计进行吸光度测定的具体步骤：1.取出测定仪，并将其插到电源插座上，接通电源后打开电源开关。
2.选择合适的波长。
这里以540 nm为例。
3.利用去离子水调零，将样品装入比色皿并置于光度计中，读取吸光度值。
步骤3：计算血红蛋白含量通过上述步骤，我们可以得到样品的吸光度值，接下来需要根据吸光度值来进行血红蛋白含量的计算。
具体来说，可以使用以下公式进行计算：血红蛋白浓度（g/L）=吸光度值（nm）/系数A总血红蛋白（g/L）=血红蛋白浓度（g/L）×Dilution Ratio×Correction Factor（其中系数A、Dilution Ratio和Correction Factor具体数值因测量仪器不同而异）实验注意事项1.在进行操作时，需要按照正常的实验操作流程进行，比如避免测量过程中的干扰因素。
2.对于各项材料的使用和实验过程中的注意事项等，需要仔细阅读使用说明书。
实验结果我们在实验中使用的是三大健康人群的血液样本。
通过计算，得出他们的血红蛋白浓度如下：志愿者编号血红蛋白浓度（g/L）001 128.4002 146.7003 135.9实验结论通过实验，我们可以得出三名志愿者的血红蛋白含量，对三名志愿者的血红蛋白含量进行比较，发现存在一定差异。
运动生物化学(9.5.1)--血红蛋白的测定
540nm 比色 , 空白调零读取测定管光密度值
移液管的使用
1. 选管原则： (0.5ml,1ml,2ml,5ml,10ml) 选择与所需量相等的或大于并与所需量最接近的移液 管 2. 持管手势：一手的拇指和中指拿移液管的上端， 使食指能灵活捂住管口，其它手指能轻轻转动。
采血的过程
血红蛋白的定量测定
（氰化高铁血红蛋白法）
实验目的（内容）
1. 了解血红蛋白测定的意义； 2. 学习测定血红蛋白的方法、实验原理
和操作方法； 3. 掌握移液管的使用、指尖采血的技能
并 初步掌握 S22PC 分光光度计的使用； 4. 根据实验结果分析讨论写出实验报告 。
1. 血红蛋白测定的意义：
血红蛋白 (Hb) 也称血色素，主要功 能 : 运输氧气和二氧化碳，维持体液酸碱 平衡。 正常参考值：
成年男性 120-160g/L ； 成年女性 110-150g/L ； 14 岁以下儿童的 血红蛋白含量比成人的 低
. 血红蛋白的实验方法、原理
方法：氰化高铁血红蛋白法
原理： Hb 被高铁氰化钾氧化成高 铁血红蛋白（ Hi ）， Hi 与氰离子结合 成氰化高铁血红蛋白（ HiCN ），它在 540nm 处有一吸收峰，测其光密度， 可得 Hb 的含量。
采血时注意清洁消毒，皮肤破损处禁止采 血；皮肤消毒后一定要擦干酒精，否则不易
实验报告书写要求
实验题目
一、实验目的和意义 二、实验原理 三、试剂和器材 四、实验操作步骤 五、结果计算 六、分析讨论
分析讨论要求
正常参考值（男、女）。 血红蛋白的功能、在运训中的作用。 结果分析 结合实验操作、身体机能、运动负荷分析
； Hb 含量过高的原因：稀释过度；取血过
吸光值测血红蛋白浓度的方法
吸光值测血红蛋白浓度的方法
吸光值测血红蛋白浓度的方法通常采用分光光度法。
分光光度法是利用物质对特定波长光的吸收特性来测定溶液中物质的浓度。
具体测量血红蛋白浓度的步骤如下：
1. 选择适当的波长：根据血红蛋白的特性，通常选择波长为540纳米处进行吸光值的测量。
2. 准备标准曲线：准备一系列已知浓度的血红蛋白溶液，分别测量它们在540纳米处的吸光值，并绘制血红蛋白浓度与吸光值之间的标准曲线。
3. 取待测样品：将待测血液样品加入测量皿中。
4. 吸光值测量：使用分光光度计，在540纳米处测量待测样品的吸光值。
5. 血红蛋白浓度计算：根据标准曲线上的吸光值与血红蛋白浓度的关系，可以推算出待测样品中血红蛋白的浓度。
需要注意的是，吸光值测量血红蛋白浓度的方法只能应用于血红蛋白本身的浓度测定，不能反映其他成分对测量结果的干扰。
另外，不同的实验室和设备可能会有一些差异，因此在具体操作时还需要参考实验室所使用的方法和设备的要求。
血红蛋白测定方法
6.1 血红蛋白测定（氰化高铁法）消光系数法和标准曲线法任选其一测定血红蛋白。
１.6.1.1 光系数法１.6.1.1.1 原理血红蛋白(haemoglobin，Hb)被铁氰化钾氧化后生成高铁血红蛋白，再生氰离子结合形成氰化高铁血红蛋白（红色），氰化高铁血红蛋白（红色）极为稳定，在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。
１.6.1.1.2 仪器721型或其它型号的分光光度比色计。
10微升量吸管。
１.6.1.1.3 试剂称取碳酸氢纳（）140毫克\铁氰化钾200毫克、氰化钾50毫克，用水溶解并稀释到1000毫升。
贮存於棕色试剂瓶内，在暗处或冰箱（+4℃）保存，至少可稳定数月到一年。
１.6.1.1.4 实验步骤１.6.1.1.4.1 试剂2.5毫升於5毫升带盖试管中，加入10微升血液，混匀后，放置15分钟。
１.6.1.1.4.2 选用0.5厘米光径比色杯，于540nm波长下，以试剂调零点，将所得样品管之光密度乘以73.6，即为血红蛋白之浓度（克%）。
计算公式如下：Ct=待测的血红蛋白（克%）浓度。
D 540 = 氰化高铁血红蛋白在540nm波长下测出的光密度。
HICN251=测定时血液的稀释倍数（血10微升加入试剂2.5毫升中）44=氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数0.5=比色杯的光径10000=将（毫克/升）换算成（克%）的数字１.6.1.1.5 注意事项１.6.1.1.5.1 试剂不要放在聚乙烯瓶内，以免因氰离子与其反应而使试剂作用降低。
１.6.1.1.5.2 仪器因mM消光系数法完全依靠仪器的吸光度来计算,故此法要求所用的仪器性能要符合要求(如仪器的波长准确与否,以及灵敏度及线性等),否则将直接影响测定的结果。
1.6.1.1.5.3仪器在使用前最好以WHO规定的氰化高铁血红蛋白参考液校正后再使用。
参考液最好选用ICSH9国际血液学标准化委员会）确定的由RIV（莅国立公共卫生研究院）制定的氰化高铁血红蛋白参考液或上海医学化验所制血的氰化高铁血红蛋白标准液。
血红蛋白测定
苏州大学附属第二医院检验科
郭 敏 王 敏
一.血红蛋白的分子结构和组成
亚铁血红素（包括原卟啉，铁），珠蛋白
二.血红蛋白测定
（氰化高铁血红蛋白测定法----HiCN法).
HiCN法检测原理：
血红蛋白（SHb除外）中的亚铁离子（Fe2+）被 高铁氰化钾氧化为高铁离子（Fe3+），血红蛋白转 化成高铁血红蛋白（Hi）。Hi与氰化钾（KCN）中 的氰离子反应生成HiCN。HiCN最大吸收波峰为 540nm，波谷为504nm。在特定条件下，HiCN毫摩 尔消光系数为44L/（mmol•cm）。HiCN在540nm处 的吸光度与浓度成正比，根据测得吸光度可求得血 红蛋白浓度。
方法学评价
HiCN法的质量控制
1.标本 2.器材
脂血标本、高WBC、高PLT 定期校准
3.采血部位
4.操作
6.试剂
混匀
延长转化时间
5.反应时间
质量
7.标准曲线
参考范围
男：120~160 g/L；
女：110~150 g/L ； 新生儿：170~200 g/L。
临床意义
一.增高（同红细胞计数） 二.降低：见于各种原因的贫血 贫血的定义：血红蛋白低于参考范围。 贫血程度的判断： 轻度贫血：90~120（110） g/L 中度贫血：60~90 g/L 重度贫血：30~60 g/L 极度贫血：<30 g/L 贫血程度判断时应注意：大量失血未补充液体时 血红蛋白浓度变化不大，不能正确反映失血程度 。 失水时，使血红蛋白浓度升高，贫血亦不明显。
样本（uL ） 0 0 10 工作试剂（mL） 2.50 2.50 2.50 混匀，并在室温中放置5min. 4.用分光光度计在波长540nm处以空白管调零点，读取各管 吸光度。 计算方法 测定管Au 血红蛋白（g/L）=——————— X 标准管血红蛋白浓度 标准管As （g/L）
血红蛋白测定及注意事项
（2）以上述同样的方法取血，并使血红蛋白转化为氰化高铁血红蛋白。
然后以转化液作空白，测定标本吸光度A。
（3）通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用K值来计算血红蛋白浓度，即Hb（g·L-1）=K×A (6.2-2)3.使用沙里氏血红蛋白计测定沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。
（1）沙里血红蛋白计主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。
比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。
为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。
（2）具体测定方法如下：①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。
②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔细揩去吸管外的血液。
③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。
操作时勿产生气泡,以免影响比色。
用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。
④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。
⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。
用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。
⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。
比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。
换算成每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。
[注意事项]1.取血前要做好充分的消毒。
2.血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。
血红蛋白的测定
血红蛋白的测定——沙利氏比色法测定血红蛋白的方法很多，常见的有直接比色法，光电比色法，沙利氏(Sahli) 目视比色法（间接比色法）。
Sahli氏目视比色法虽然精确度较差，但方法简便快速。
【目的】了解Hb测定方法，练习测定Hb含量的沙利氏比色法，理解Hb测定原理。
【原理】血液与盐酸作用后，释放出血红蛋白，Hb被酸化后变为褐色的盐酸高铁血红蛋白，与标准色柱相比，便可测出其含量。
【器材与试剂】（1）沙利氏血红蛋白计一套吸管为一厚壁毛细玻璃管，其上有10微升和20微升两个刻度，上端接一橡皮吸管。
比色架内有标准色柱。
测定管上有两种刻度，从下往上，一侧有2—24的刻度，表示100m1血液中所含血红蛋白克数，以g/dl 表示；另一侧有20—160的刻度，表示100ml 血液中血红蛋白的百分数。
国产的血红蛋白计是以每100ml血液含14.5g血红蛋白为100％而设制。
（2）0.1M盐酸（3）75%酒精棉球、干棉球、采血针、蒸馏水【步骤】（1）将测定管和吸管依次用自来水、９５％酒精洗净，干燥备用。
（2）向测定管内加入0.1M盐酸5-6滴，约加到管下端刻度“2”为止。
（3）采血、比色：先消毒无名指尖，再用采血针在无名指尖处采血，用干棉球擦去第一滴血，待第二滴血自然流出一大滴时，用吸管取血液20ul。
擦去吸管外血液后，轻轻加入测定管底部，并回吸数次以洗出吸管中的血液。
轻轻振动比色管，使血液与盐酸充分混合。
（4）静置10min，待血液变成褐色后，缓缓滴加蒸馏水，每加1滴，用细玻璃棒搅动一次，直到颜色与标准色柱完全相同为止。
液柱凹面所指的刻度数，即为每百毫升血液中血红蛋白的克数，用g/dl或g％表示。
血红蛋白含量的测定
实验器材
Hubei Normal University
• 血红蛋白计、0.1mol/LHCl、刺血针、滤纸 片、酒精棉球、乙醚、95%酒精、蒸馏水。
College of Life Sciences
方法与步骤
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• 血红蛋白计包括 ①标准比色架，架的两侧镶有 两个棕色标准玻璃色柱。 ②血红蛋白稀释管，有方形也 有圆形的。两侧有刻度，一侧 以g为计数单位，对侧以百分 率计，按我国情况，是以每 100ml血液内含血红蛋白14.5g 为100%。③20mm3血红蛋白吸 管，还有玻璃棒、滴管。 • 用滴管加0.1mol/LHCl于血红 蛋白稀释管内，到刻度10处。 • 用刺血针刺破指尖采血，血滴 宜大些。用血红蛋白吸管的尖 端接触血滴，吸血至刻度 20mm3处（0.02ml）。
血红蛋白含量的测定
动物学教研室
实验目的要求
Hubei Normal University
• 掌握比色法测定血红蛋白含量的方法。
College of Life Sciences
基本原理
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• 血红蛋白是红细胞的主要成分，在正常情况下，每个红细胞均含有一 定量的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白 质。血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白外，尚能与某些物质作 用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸光谱，在临床 上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症和血红蛋白的定量测定。 • 测定血红蛋白含量的方法很多，实验常用比色法。其原理是在一定量 的血液中，血红蛋白经少量盐酸的作用，使亚铁血红素变成高铁血红 素，呈现较稳定的棕色。用水稀释后与标准色比较，求出每100ml血 液中所含的血红蛋白克数。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g， 女子为13.1g。
血红蛋白的测定
实验四血红蛋白的测定1．本次实验的目的和要求了解和练习沙利氏比色法测定血红蛋白含量。
2．实验内容或原理血液加入稀盐酸后，血红蛋白转化成不易变色的棕色的高铁血红蛋白，可与标准比色板进行比色，从而测得血红蛋白含量。
3．需用的仪器或试剂等人或动物。
沙利氏血红蛋白计、酒精棉球、０.１mol/L盐酸、蒸馏水等。
4．实验步骤（1）先检查血红蛋白计的测定管和吸血管是否清洁，如不清洁则依次用自来水、蒸馏水(３次)、９５％酒精(２次)和乙醚(１～２次)清洗。
（2）将０.１mol/L盐酸加入测定管中至刻度“２”或“１０％”处。
（3）用酒精棉球消毒采血部位，以采血针采血，用吸血管插入流出的血滴深处，吸血至刻度２０ul处，拭净外壁，将血液立即吹入测定管的盐酸中。
反复吸吹，使吸血管中血液全部进入盐酸液中(避免起气泡)。
混匀，１０min后，逐滴加入蒸馏水使液体颜色变浅，边加边混匀并与标准比色板比较，至二者颜色相同止。
（4）读出测定管内液体凹面最低处的刻度，即为每１００mL血液中血红蛋白的克数。
另一方面刻度表示百分率，可参照血红蛋白计的说明换成克数以核对读数。
实验五红细胞脆性的测定、1．本次实验的目的和要求测定红细胞膜对不同低渗溶液的渗透抵抗力．亦即测定正常动物红细胞的渗透脆性。
了解红细胞沉降率并掌握其测定方法。
了解红细胞凝集现象，并掌握测定血型的方法。
2．实验内容或原理内容：实验室可完成红细胞脆性实验，血红蛋白含量检测的实验内容。
做到改变某些因素时的检测内容，结合实验理解红细胞脆性的概念，分析论证产生的结果。
原理：（1）通过实验了解正常的红细胞悬于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞失去内部液体而皱缩，反之，置于低渗溶液内则水分进入红细胞，使红细胞两面凹陷的圆盘型变为球型，如继续膨大，即发生破裂溶解，形成溶血。
（2）红细胞膜含有凝集原，血浆内含有凝集素。
当相应的凝集原和凝集寨相互作用时，就产生红细胞的凝集现象。
3．需用的仪器或试剂等电子天平、水浴箱、电子称、低速离心机、微量移液器、标准枪架等。
血中高铁血红蛋白测定方法
血中高铁血红蛋白测定方法
血中高铁血红蛋白测定方法主要包括以下几种：
1. 高铁血红蛋白定量法：根据高铁血红蛋白与碱性染料亚甲蓝反应形成紫蓝色的配合物，通过分光光度计测定其吸光度来定量高铁血红蛋白浓度。
2. 甲醛染色法：使用甲醛处理血液样本，然后用碱性染料苏丹Ⅲ染色，并用显微镜观察血液中的红细胞形态，根据高铁血红蛋白使红细胞变圆形的特征来判断高铁血红蛋白的存在与浓度。
3. 放射性同位素法：使用放射性同位素标记的铁离子注射到血液中，然后通过血液样本的放射性测量来测定高铁血红蛋白的浓度。
这些方法各有其优缺点，具体选择哪种方法取决于实验室设备和操作条件的限制，以及测定的准确性和灵敏度的要求。
血红蛋白测定的主要方法
血红蛋白测定的主要方法The main methods of hemoglobin measurement include laboratory testing and point-of-care testing.血红蛋白测定的主要方法包括实验室测试和点-护测试。
Laboratory testing is a precise and accurate method of measuring hemoglobin levels. This involves collecting a blood sample from the patient and analyzing it in a laboratory setting using automated hematology analyzers.实验室测试是衡量血红蛋白水平的一种精确和准确的方法。
这涉及从患者收集血样，并在实验室环境中使用自动血液学分析仪器进行分析。
Point-of-care testing, on the other hand, provides rapid results at the patient's bedside or in a clinical setting. This method is especially useful in emergency situations or in settings where immediate results are needed.另一方面，点-护测试则在患者床边或临床环境中提供快速结果。
这种方法在紧急情况或需要即时结果的情况下尤为有用。
In terms of reliability, laboratory testing is often considered the gold standard for hemoglobin measurement. It provides highly accurate results and is suitable for monitoring patients with chronic conditions or for diagnostic purposes.就可信度而言，实验室测试通常被认为是血红蛋白测定的黄金标准。
血红蛋白测定参考方法
纯 度 检 查 1.59≤ 镳
≤ 1.63
浊 度 检查 A鸵N≤ 0.003
6.3 血 红 蛋 白浓 度计 箅
6.3.1 血红 蛋 白浓 度计 算 公 式见 式 (1):
c=
式中:
c
— — 血 红 蛋 白浓 度 ,单 位 为 克 每 升 (g/L);
Байду номын сангаас
A髁N — — HCN溶 液在 540nm时 的吸光度 ;
总则为了保证参考方法检测结果的准确性建立参考方法的实验室应与其他参考实验室进行结果比原理血红蛋白分子中的亚铁离子fe2在溶液中被高铁氰化钾氧化成高铁离子fe形成高铁血红蛋白hi其后又与氰离子cn反应生成氰化高铁血红蛋白hicnhicn在波长540nm大吸收峰hicn吸光度严格遵循朗伯一比尔定律即hicn在波长540nm的吸光度值与hicn浓度成正比血红蛋白浓度可由分光光度计所测定的吸光度值计算得出
5.3.3 血 液 加 人 抗 凝 管后 ,管 内剩余 空 间 至少 占试 管体 积 的 ⒛ %,以 利 于血标 本 的混 匀 。 5.3.4 标 本 采 集 后 应 在 当天 完成 测 定 。
6 测定步骤
6.1 标 本 稀 释
6.1.1 取 文-齐 氏液加 至容 量 为 25mL的 A级 容 量 瓶 中 ,将 试 剂 液 面调 至 刻度 线 。 6.1.2 用 正 向置 换 移 液器 吸取 100uL混 匀 全 血 ,使 用 蘸 有 盐 水 的纱 布 小 心 快 速 地 擦 掉 毛 细 管 外 壁 残
16114.5— — 血红蛋 白单体 的相对分 子质量 (4个 单体 组成 的血红蛋 白的相对分子质量为 64娟 8);
F
——血液 的稀释倍数 ;
11.0 —— HCN溶 液在 540nm时 的 1/4毫 摩 尔消光系数 ;
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2）十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白（SLS-Hb）法：除SHb外，血液中各种Hb均可与低浓度十二烷基月桂酰硫酸钠（SLS）作用，生成SLS-Hb棕红色化合物。SLS-Hb最大吸收波峰538nm，波谷500nm，肩峰560nm.由于摩尔消光系数尚未最后确认，因此不能用吸光度“A”值直接计算血红蛋白浓度。本法操作简单，呈色稳定，准确性和精确性符合要求，且无公害。但SDS质量差异较大，并且SDS可破坏白细胞，不适合进行白细胞计数的血液分析仪使用。
血红蛋白是一种色素蛋白，可以用比色法测定。血液中血红蛋白以各种形式存在，包括氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白或其他衍生物。
1）氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法：血液中除了SHb以外，其他各种血红蛋白均可被试剂转化、生成HiCN，其最大的吸收峰为540nm波长，可经比色测定。此法为国际血液学标准化委员会 （ICSH）推荐的国际标准参考方法，操作简单，显色快且结果稳定医`学教育网搜集整理；但本法试剂中KCN有剧毒，测定过程中高白细胞和高球蛋白血症易致混浊，HbCO转化较慢。
近年来，多参数血细胞分析仪的应用，使Hb测定逐步以仪器法取代手工法，其优点是操作简单、快速，同时可以获得多项红细胞的参数，血液分析仪法测定血红蛋白的原理与手工法原理相似，多采用HiCN法，但由于各型号仪器使用的溶血剂不同，形成Hb的衍生物不同医`学教育网搜集整理。某些溶血剂形成的衍生物稳定性较差，因此要严格控制溶血剂加入量及溶血时间，特别是半自动血细胞分析仪应严格控制实验条件。有些溶血剂内虽加入了KCN，但其衍生物并非是HiCN，仪器要经过HiCN标准液校正后，才能进行Hb测定。仪器法测定血红蛋白精确度CV约为1%.
3）叠氮高铁血红蛋白（HiN3）测定法：与HiCN法相似，5nm）测定法：试剂简单、不含有毒试剂、呈色稳定，但由于其吸收峰在575nm，限制了此法在血液分析仪的使用。
5）溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法： 该法试剂溶血性强又不破坏白细胞，可同时进行白细胞计数，可用于血细胞分析仪自动检测Hb和白细胞。缺点是对Hb测定结果的准确度和精密度较低。