2.植物硝态氮的比色测定

中国海洋大学实验报告

2015年11月02号姓名：白杰专业年级： 2014级生物科学学号： 14050011001同组者：曹昱

课程：植物生理学实验题目：植物硝态氮的比色测定

一、实验目的

学会硝态氮的测定方法，学会分光光度计的使用。

二、实验原理

用蒸馏水将植物组织中的硝酸盐和亚硝酸盐提取出来，加入锌粉将硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸生成重氮盐，再与α-萘胺结合生成玫瑰红色的偶氮染料，在520nm波长处有吸收峰，并且在一定范围内其颜色的深浅与溶液中硝态氮含量成正比，可以用分光光度法进行测定。

三、仪器试剂

1、仪器及用品

分光光度计，研钵，容量瓶，比色管（50ml），试管，移液管，烧杯，三角瓶（100ml）。

2、试剂

（1）硝酸盐标准溶液：取恒重硝酸钠0.6071g溶于一升水中，配成100μg/ml硝态氮溶液储存于冰箱中（0ºC~5ºC）备用。

（2）20％冰醋酸溶液（V/V）：取20ml分析纯冰醋酸加80ml水。

（3）混合粉剂：含硫酸钡100g，α-萘胺2g，锌粉2g，对氨基苯磺酸4g，硫酸锰10g，柠檬酸75g。

3、实验材料：植物叶柄

四、实验步骤

1、标准曲线的绘制

将硝酸盐标准溶液稀释成0μg/ml，4μg/ml , 8μg/ml，12μg/ml,16μg/ml,20μg/ml 浓度的硝态氮溶液各10ml，摇匀后分别吸取2ml转入到50ml比色管中，加冰醋酸溶液18ml，再加0.4g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，用双层滤纸过滤于洁净的试管中，以蒸馏水作对照，测定其520nm波长处的吸光光度值，以浓度为横坐标，标准样品的吸光度值为纵

坐标绘制标准曲线或做出回归曲线。

2、植物组织中硝态氮的提取

称取待测的植物功能叶柄0.5g左右，剪成1~2mm的碎片，置于干燥的100ml三角瓶中，加入蒸馏水20ml，加塞进行激烈振荡1~3分钟，放置10分钟。澄清后，取上部清液2ml，按标准曲线的步骤进行显色和必比色，测定植物样品的吸光度值。

五、数据处理

叶柄：0.533g

将y=0.084代入上式得：x=7.25

植物组织中硝态氮含量：c×V=7.25×40=290μg/g

六、思考题

1、通过你的实验你认为本实验的主要误差来源有哪些？

1）剧烈晃动因摇动的人不一样，所以可能产生一些误差

2）过滤时更换滤纸可能造成一定误差

3）植物剪得不够碎

2、在配置标准溶液时应注意哪些问题？

加液时间要大概相等，摇晃尽量让一个人去做，烧杯、试管、移液管要及时清洗干净，过滤时应保证正常。