生物化学实验讲义
《生物化学试验基础》PPT课件
•紫外光：远紫外光〔10-200 nm〕和近紫外 光〔200-400 nm〕的电磁辐射。 •可见光：400-800 nm的电磁辐射。溶液中物 质选择性的吸收可见光中某种颜色的光，溶液 就会呈现出一定的颜色。 • 比色分析法：比较有色物质溶液颜色深浅来 确定物质含量的方法。 • 分光光度法：使用分光光度计进展吸收光谱 分析的方法。
5 实验须知
实验前应作好预习，认真阅读实验指导。明 确实验目标，能简述实验内容及主要的操作 步骤。
实验过程中，应根据实验指导及教师的要求， 认真操作，细心观察，如实记录。严禁捏造 实验数据，提倡实事求是的科学态度，实验 做错应要求重做，反对弄虚作假。
实验完毕后，要认真书写实验报告，及时交 教师批阅。
1)生物化学实验不同于化学和生物学实验，而有其独特的实验技能和根本操作。课 前必须认真预习，明确实验目的、原理、操作关键步骤及本卷须知。 2)要十分注意实验平安，未经实验指导教师允许不得开、关任何电源和仪器设备开 关〔按钮〕。 3)实验时应本着认真、积极的态度，在教师的指导下完成每次实验。注意观察实验 过程中出现的现象和结果，并对实验结果展开讨论。结果不良时，必须重做。 4)实验中，听从教师指导，严格遵守操作规程，取用试剂时，应仔细辨明标签，以免 取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处，切忌乱拿乱放，“张冠李戴〞。 并应及时将实验结果和原始数据如实记录在实验报告上，按时写出实验报告。 5)实验后，必须把仪器洗净放入仪器柜内；清扫实验台面、地面；试剂瓶要摆放整齐。 要经常保持实验室内清洁，不乱丢纸屑及所有固体废弃物。 6)自觉遵守课堂纪律，不迟到早退；保持室内安静；不高声谈笑。同学间应互助友爱。
《生物化学试验基础》 PPT课件
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生物化学实验讲义
生物化学实验报告姓名：专业：院系：学号：实验一蛋白质分子量测定------凝胶层析法一、实验原理凝胶层析法是利用凝胶把分子大小不同的物质分开的一种方法，又叫做分子筛层析法，排阻层析法。
凝胶本身是一种分子筛，它可以把分子按大小不同进行分离，如同过筛可以把大颗粒与小颗粒分开一样。
但这种“过筛”与普通的过筛不一样。
将凝胶颗粒放在适宜溶剂中浸泡，使其充分戏液膨胀，然后装入层析柱中，加入欲分离的混合物后，再以同一溶剂洗脱，在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的缝隙最先流出柱外，而小分子可以进入凝胶内部，流速缓慢，以致最后流出柱外，从而使样品中分子大小不同的物质得到分离。
凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体物质，无论是天然凝胶还是人工凝胶，它们的内部都具有很微细的多孔网状结构。
凝胶层析法常用的天然凝胶是琼脂糖凝胶，人工合成的凝胶是聚丙烯酰胺凝胶和葡聚糖凝胶，后者的商品名为Sephadex型的各种交联葡聚糖凝胶，它具有不同孔隙度的立体网状结构的凝胶，不溶于水。
这种聚合物的立体网状结构，其孔隙大小与被分离物质分子的大小有相应的数量级。
在凝胶充分溶胀后，交联度高的，孔隙小，只有相应的小分子可以通过，适于分离小分子物质。
相反，交联度低得孔隙大，适于分离大分子物质。
利用这种性质可分离不同分子量的物质。
以下进一步来说明凝胶层析的原理。
将凝胶装载柱后，柱床总体积称为“总体积”，以Vt表示。
实质上Vt是由Vo，Vi与Vg三部分组成，即Vt=Vi+Vg+Vo。
Vo称为“孔隙体积”或“外体积”又称“外水体积”，即存在于柱床内凝胶颗粒外面孔隙之间的水相体积，相应于一般层析柱法中内流动相体积；Vi为内体积，即凝胶颗粒内部所含水相的体积，Vg为凝胶本身的体积，因此Vt-Vo等于Vi+Vg。
洗脱体积与Vo及Vi之间的关系可用下式表示：Ve=Vo+KdVi式中Ve为洗脱体积，自加入样品时算起，到组分最大浓度（峰）出现时所流出的体积；Kd为样品组分在二相间的分配系数，也可以说Kd是分子量不同的溶质在凝胶内部和外部的分配系数。
生物化学实验讲稿
实验一血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳【实验目的】1．了解电泳法分离蛋白质的基本原理2. 掌握醋酸薄膜电泳分离血清蛋白质的方法【实验原理】采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
电泳过程中带电颗粒的移动速度与其电荷数量、相对分子量的大小、电场强度及介质的粘度有关。
蛋白质是两性电解质，等电点不同，在一定的pH缓冲液中，缓冲液的pH大于该蛋白质的等电点时其带负电荷，电泳时在电场中向阳极泳动，反之，带正电荷向阴极泳动。
此外，血清中各种蛋白质的分子大小、形状也不相同，在电场中就会以不同的速度向正极移动。
经一定电压和时间的电泳，不同的血浆蛋白所带电荷不同相对分子质量不同，其泳动方向和速度不同，可分离出各自的区带。
【试剂和器材】一、试剂1.新鲜血清——无溶血现象。
2.巴比妥——巴比妥钠缓冲液(pH8.6，0.07M，离子强度0.06)：称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于少量蒸馏水后定容1000ml。
3.染色液：称取氨基黑10B0.5g，加入蒸馏水40ml，甲醇50ml和冰乙酸10ml，混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
4.漂洗液：取95％乙醇45ml，冰乙酸５ml和蒸馏水50ml。
混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
二、器材1、醋酸纤维素薄膜2、培养皿3、盖玻片4、直尺和铅笔5、镊子6、电泳仪和电泳槽7、滤纸【实验步骤】一、仪器和薄膜的准备1.准备醋酸纤维素薄膜：将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内，使它漂浮在液面。
若迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则表明薄膜质地均匀；若润湿时，薄膜上出现深浅不一的条纹或斑点等，则为薄厚不匀的薄膜。
实验中应选用质地均匀的薄膜。
因为，纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。
例如，膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。
2.将选用的薄膜用镊子轻压，使它全部浸入缓冲液内，待膜完全浸透（约半小时）后取出，夹在清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，同时分辨出光泽面和无光泽面。
(精)生物化学与分子生物学实验讲义
生物化学与分子生物学实验指导实验一维生素C的含量测定一、实验目的1.掌握碘量法测定维生素C的原理和方法；2.了解维生素C常用的含量测定方法。
二、实验原理维生素C又称抗坏血酸、系人体一种重要营养素。
为水溶性，主要存在于新鲜蔬菜、水果中(其中西红柿、鲜枣、山楂、辣椒、桔子中含量最多)。
其主要生理功能是：促进体内胶元蛋白及粘多糖合成;增加毛细血管壁致密性，减低其脆性与通透性;参加体内氧化还原反应;有解毒作用。
如缺乏维生素C可发生坏血病。
临床用于各种维生素C缺乏症、肝脏疾病、中毒等。
本试验是利用碘酸钾做氧化剂。
即在一定量的盐酸酸性试液中加碘化钾—淀粉指示剂，用已知浓度的碘酸钾滴定。
当碘酸钾滴入后即释放出游离的碘，此碘被维生素C还原，直至维生素C完全氧化后，再滴以碘酸钾液时，释放出的碘因无维生素C的作用，可使淀粉指示剂呈蓝色，即为中点，其反应如下：KIO3 + 5KI + 6HCl→6KCl + 3H2O + 3 I2三、实验材料柑橘或辣椒、研钵、天平、2%盐酸、0.5%KI、0.001N KIO3、1%淀粉溶液、蒸馏水、100mL容量瓶、纱布、50mL烧杯、移液管、滴定管四、实验方法（一）样品液的制备将柑橘或辣椒样品先纵切为4-8等分，除去不能食用部分，切碎，取20g作分析用。
将称取的样品放入研钵中，加2%的盐酸5-10mL，研磨至呈浆状，小心无损地移研钵中样品于100mL容量瓶中，研钵用2%盐酸液冲洗后，亦倒入量瓶中，并加2%盐酸至100mL，充分混合，用清洁干燥二层纱布过滤入干燥的烧杯中，滤液作测定用。
（二）样品液的分析在50mL的烧杯中，用移液管注入0.5%的KI溶液1mL，1%淀粉液1mL，以及上述制得的试液5mL；再加蒸馏水至总体积10mL。
用0.001N KIO3溶液滴定，要一滴一滴加入，并时时摇动烧杯，至微蓝色不褪为终点（一分钟不褪为止）。
记录所用KIO3溶液毫升数。
同上法再测定3次，取各次测定的平均值，按下式计算维生素C含量。
《生物化学实验教案》课件
《生物化学实验教案》课件第一章：生物化学实验基本原理1.1 实验目的了解生物化学实验的基本原理和方法，掌握实验操作技巧。
1.2 实验原理介绍生物化学实验的基本原理，如光谱原理、色谱原理、电泳原理等。
1.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。
1.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。
1.5 实验注意事项提醒实验过程中需要特别注意的事项，以确保实验顺利进行。
第二章：蛋白质实验2.1 实验目的学习蛋白质的提取、分离和纯化，了解蛋白质的性质。
2.2 实验原理介绍蛋白质提取、分离和纯化的原理，如盐析、凝胶色谱等。
2.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。
2.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。
2.5 实验注意事项第三章：酶实验3.1 实验目的学习酶的活力测定和性质研究，了解酶的作用机制。
3.2 实验原理介绍酶活力测定和性质研究的基本原理，如动力学方法、抑制剂作用等。
3.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。
3.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。
3.5 实验注意事项提醒实验过程中需要特别注意的事项，以确保实验顺利进行。
第四章：糖类实验4.1 实验目的学习糖类的提取、分离和鉴定，了解糖类的性质和功能。
4.2 实验原理介绍糖类提取、分离和鉴定的原理，如糖的降解、糖醇的鉴定等。
4.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。
4.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。
4.5 实验注意事项第五章：脂质实验5.1 实验目的学习脂质的提取、分离和鉴定，了解脂质的性质和功能。
5.2 实验原理介绍脂质提取、分离和鉴定的原理，如脂质的水解、脂肪酸的鉴定等。
5.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。
5.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。
动物生物化学实验讲义
动物生物化学实验讲义东北农业大学动物生化教研室实验项目1 γ–球蛋白的别离实验项目2 γ–球蛋白含量测定〔光度分析法〕实验项目3 凝胶柱层析法〔γ–球蛋白纯化〕实验项目4 SDS–聚丙烯酰胺凝胶电泳〔SDS–PAGE〕实验项目5 动物组织中DNA的制备实验项目6 多聚酶链反响〔PCR扩增反响〕实验项目7 琼脂糖凝胶电泳别离DNA实验项目8 转氨酶GPT活性的测定实验项目9 氨基酸薄层层析实验项目10 琥珀酸脱氢酶与丙二酸的抑制作用实验一γ–球蛋白的别离【原理】中性盐〔如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠、硫酸镁等〕对球状蛋白质的溶解度有显著影响。
随着中性盐浓度的增加，离子强度也增加。
当溶液离子强度增加到一定数值时，溶液中蛋白质的溶解度开场下降。
离子强度增加到足够高时，蛋白质可从水溶液中沉淀出来，这种现象叫做盐析。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的高浓度盐溶液来沉淀别离各种蛋白质。
蛋白质是一种生物大分子，它具有不能通过半透膜的性质。
透析就是利用这种性质使之与其它小分子物质如无机盐、单糖等分开。
本次实验应用的是脱盐透析，即盐析后，将含大量盐类的蛋白质溶液放在半透膜的袋内，再将透析袋浸入蒸馏水中。
经过一段时间，袋内的盐类浓度即逐渐降低。
假设经常更换袋外的液体，最后即可使袋内的蛋白质溶液中所含的盐类除净，从而到达脱盐的目的。
应用不同浓度硫酸铵分段盐析法将血清中γ–球蛋白与α、β球蛋白别离，最后用透析法脱盐，即可得到纯度较高的γ–球蛋白。
【试剂和器材】一试剂1．pH 7.2，0.01mol/L磷酸盐缓冲液生理盐水〔简称PBS〕：取0.2mol/L Na2HPO4溶液36.0ml，0.2mol /L NaH2PO4溶液14.0ml混合，加NaCl 8.5克，用蒸馏水稀释至1 000ml。
0.2mol/L Na2HPO4溶液：取28.4g Na2HPO4或71.6g Na2HPO4·12H2O用蒸馏水溶解稀释至1 000 ml。
生物化学实验课讲义
实验一二苯胺法测定DNA含量【实验目的】1．掌握721型分光光度计的工作原理及操作方法。
2．掌握二苯胺法测DNA含量的原理和方法。
【实验原理】DNA酸解后生成嘧啶核苷酸、嘌呤、磷酸和脱氧核糖。
脱氧核糖在酸性环境中脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，它与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。
样品中DNA浓度50～500μg/mL范围内，光密度与DNA的浓度成正比，可用比色法测定。
【实验仪器与试剂】1．仪器(1)试管、吸量管、容量瓶、试管架(2)721分光光度计(3)恒温水浴锅(4)分析天平2．试剂(1)DNA标准溶液：取DNA钠盐(经定磷确定其纯度)用5mmol/LNaOH配成200µg／mL的溶液。
(2)二苯胺试剂：称取纯二苯胺（如不纯，需在70％乙醇中重结晶2次）1g溶于100mL冰醋酸(A．R)中，再加入10mL过氯酸(A．R，60％以上)，混匀待用。
临用前加入1mL1.6％乙醛溶液，所配得试剂应为无色，贮于棕色瓶中。
(3)1.6％乙醛：取47％乙醛3．4mL，加重蒸水定容至100mL(保存于冰箱中，一周内使用)。
(4)DNA样液：将DNA干燥粗制品以5mmol/LNaOH溶液配制成100µg／mL的溶液。
【实验操作】1．标准曲线的制作：取14支试管，分为2组（管号为：0～6，0´～6´）按下表操作。
以DNA含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
2．样品的测定：取2支试管（7号和7´号）各加入2mL样品液(内含DNA应在标准曲线的可测范围之内)，按下表操作。
表1DNA含量的测定【计算】根据测得的光密度值，从标准曲线上查DNA的含量，按下式计算制品中DNA的百分含量：实验二酵母RNA的提取与鉴定【实验目的】掌握RNA的提取及鉴定核酸组分的方法【实验原理】酵母中RNA含量较高。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
生物化学实验讲义
目录1.生物化学实验室规则2.实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法3.实验二蛋白质含量的测定4.实验三去污剂对红血球细胞膜稳定性的影响5.实验四盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白6.实验五动物组织核糖核酸的制备及测定7.实验六脲酶K m值的简易测定8.实验七粗脂肪提取9.实验八 ATP的生物合成10.实验九动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定11.实验十胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响生物化学实验室规则1 每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。
2 实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3 实验过程中要听从教员的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教员检查签字同意，方可离开实验实。
4实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用毕，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教员，不得擅自动手检修。
6 实验室内严禁吸烟！注意水电安全，离开实验室前，必须关好水龙头，拉下电闸，严防发生事故！7 废液倒入专门的废液桶，固体废物和带残渣的废物不得倒入水槽或到处乱扔。
8 仪器损坏时，应如实向教员报告，并填写损坏仪器登记表，然后补领。
9 实验室内一切物品，未经本室负责教员批准，严禁携出室外，借物必须办理登记手续。
10每次实验课由班长负责安排值日生。
值日生的职责是负责当天实验室的安全、卫生和一切服务性的工作。
实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法实验目的1了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2学习求标准曲线方程—最小二乘法3掌握分光光度计的使用实验原理蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
《生物化学实验教案》课件
《生物化学实验教案》课件一、实验目的与要求1. 实验目的(1) 了解生物化学实验的基本原理和操作技巧。
(2) 掌握生物化学实验中常用试剂和仪器的使用方法。
(3) 培养实验操作的规范性和准确性。
2. 实验要求(1) 学生需提前预习实验内容，了解实验原理和步骤。
(2) 实验过程中，要求学生认真观察实验现象，记录实验数据。
二、实验原理与步骤1. 实验原理(1) 介绍本实验所涉及到的生物化学原理，如酶的活性测定、蛋白质的定量分析等。
(2) 解释实验中使用的试剂和仪器的作用。
2. 实验步骤(1) 详细描述实验操作的顺序，如样品处理、试剂添加、实验仪器使用等。
(2) 强调实验过程中的注意事项，如操作规范、安全防护等。
三、实验材料与试剂1. 实验材料(1) 生物组织或细胞样品。
(2) 实验所需的仪器设备。
2. 实验试剂(1) 介绍实验中所需试剂的名称、浓度和作用。
(2) 说明试剂的配制方法和保存条件。
四、实验仪器与设备1. 实验仪器(1) 介绍实验中所需仪器的名称、型号和功能。
(2) 说明仪器的使用方法和注意事项。
2. 实验设备(1) 实验室常用设备，如试管、烧杯、移液器等。
(2) 强调设备的使用安全和清洁保养。
五、实验结果与分析1. 实验结果(1) 学生需观察并记录实验过程中出现的现象。
(2) 描述实验数据的记录和处理方法。
2. 实验分析(1) 引导学生运用生物化学知识分析实验结果。
(2) 探讨实验中可能出现的问题和解决方法。
1. 实验数据处理(1) 介绍实验数据的处理方法，如统计分析、图表绘制等。
(2) 强调数据处理的准确性和可靠性。
(2) 强调实验报告的规范性和完整性。
七、实验安全与环保1. 实验安全(1) 介绍实验中可能存在的危险因素，如化学品、生物制剂等。
(2) 强调实验安全操作规程和紧急处理方法。
2. 实验环保(1) 引导学生关注实验过程中的环境保护，如废弃物处理、节能减排等。
(2) 强调实验环保意识和责任。
动物生物化学实验讲义
实验讲义（霍金龙老师）实验一实验基本知识与基本操作，血液样品的处理及组织匀浆的制备实验二考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验三琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验四血液葡萄糖的测定（福林—吴宪氏法）实验五核酸的定量测定（紫外吸收法）实验六全血基因组DNA的提取（离心柱型试剂盒提取法）实验七PCR扩增基因实验八琼脂糖凝胶电泳实验九凝胶层析法分离血红蛋白和胰岛素实验十生物化学实验技术理论讲授核酸蛋白层析分离系统实验工作流程一，准备工作1，核酸蛋白检测仪（紫外检测仪） 1台2，色谱采集器 1套3，自动部分收集器 1台4，恒流泵 1台5, 层析柱 1支6，溶液容器和试剂样品二，开机调试1，核酸蛋白检测仪应提前开机半小时预热，然后按仪器使用说明书来调整仪器的透光度，灵敏度，使其稳定在：“100”或“0”上。
2，设定自动部分收集器收集样品的所需时间。
3，设定恒流泵的所需流量。
三，进行实验前的洗脱工作等仪器都设置完成，检测仪工作稳定后，进行样品池实验冲洗，并调整透过率（T100%）和灵敏度A在0.5上检测仪显示读数为“0”（基线）。
四，数据采集及计算分析把样品加入层析柱进行实验，并连接电脑（或记录仪），打开信号采集器，打开电脑上装入电脑层析的应用软件，并进行记录保存。
然后再对实验所记录的数据进行分析和计算。
以上为一个完整的实验操作过程实验一实验基本知识与操作一.目的1.熟悉实验室规则及常用生化仪器。
2.掌握各种仪器的正规操作。
3.清点洗刷实验用具。
二．实验内容（一）常用生化仪器量器：量筒、容量瓶、吸量管、离心管、微量取液器玻璃仪器容器：烧杯、试管、锥形瓶、滴管仪器：离心机、水浴箱、电泳仪、分光光度计等（二）玻璃仪器的洗涤1、初用的玻璃仪器的清洗：表面附有碱性物质，先用去污粉洗，再用自来水冲洗干净，然后浸于盐酸溶液浸泡过夜，再用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，80℃烤干备用。
2、使用过的玻璃仪器洗涤（1）一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，洗净之器皿倒置干净处晾干或烘箱烤干（量筒不可烘烤）。
生物化学实验讲义
生物化学实验讲义2009年5月实验一糖的颜色反应和还原反应1．糖的颜色反应[实验目的及要求]1. 掌握莫式（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。
2. 掌握塞式（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法。
3. 掌握杜式(Tollen)试验鉴定戊糖的原理和方法。
[实验原理]1．莫式试验：糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与а-萘酚生成紫红色缩合物。
2．塞式试验：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液。
3．杜式试验：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后者与间苯三酚结合成樱桃红色物质。
[实验仪器及用品]仪器：水浴锅。
器皿：吸管、试管。
实验药品：蔗糖、葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、半乳糖、а-萘酚、浓硫酸、95%乙醇、间苯二酚、盐酸、间苯三酚。
[实验试剂]莫式试剂：а-萘酚5g,溶于95%乙醇并稀释至100ml。
现用现配，并贮于棕色试剂瓶中。
塞式试剂：间苯二酚50mg，溶于100ml盐酸（V H2O：V HCl=2:1），现用现配。
杜式试剂：2%间苯三酚乙醇溶液（2g间苯三酚溶于100ml95%乙醇中）3ml,缓缓加入浓盐酸15ml及蒸馏水9ml。
临用时配制。
[实验内容及步骤]一、莫式实验于4支试管中，分别加入1 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1 ml水中），然后各加莫式试剂2滴，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5 ml（切勿振摇！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
二、塞式试验于4支试管中，分别加入0.5 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，然后各加塞式试剂2.5ml，摇匀，同时置沸水浴内，比较各管颜色及红色出现的先后顺序。
三、杜式试验于3支试管中加入杜式试剂1ml，再分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖溶液和1%阿拉伯糖溶液，混匀。
生物化学实验讲稿
实验四双缩脲法测定蛋白质浓度[实验原理]具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与铜离子形成紫色配合物，在540nm处有最大吸收。
在一定浓度的范围内，蛋白质和浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比，可用比色法定量测定。
[实验仪器及用品]实验器材：容量瓶、试管、吸管、722型（或7220型）分光光度计。
实验试剂：双缩脲试剂；卵清蛋白质溶液；未知液[实验内容及步骤]一、标准曲线的绘制将6只10ml容量瓶编号，按下表加入试剂，即得6种不同浓度的蛋白质溶液。
取干净试管7只，按0、1、2、3、4、5、6编号，1-6号管分别加入上述不同浓度的蛋白质液3.0ml。
0号为对照管，加入3.0ml蒸馏水。
各管加入双缩脲试剂2.0ml，充分混匀，即有紫色出现，用540nm光测定各管吸光度，绘制浓度-吸光度曲线。
二、样液的测定取未知浓度的蛋白质溶液3.0ml臵试管内，加入双缩脲试剂2.0ml，混匀，测其540nm吸光度。
三、数据记录和处理根据标准溶液的吸光度，在坐标纸上绘制出浓度-吸光度曲线，测出位知液的吸光度后，在标准曲线上查出未知液的浓度。
实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、目的了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、原理酵母核酸中RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、器材1．乳钵 2．150mL锥形瓶3．水浴4．量筒5．布氏漏斗及抽滤瓶6．吸管 7．滴管8．试管及试管架 9．烧杯 10．离心机11．漏斗四、试剂和材料1．0．04 mol／L氢氧化钠溶液1000 mL2．酸性乙醇溶液500mL将0．3毫升浓盐酸加入30毫升乙醇中。
3．95％乙醇1000mL4．乙醚500 mL5．1．5 mol／L硫酸溶液200mL6．浓氨水50 mL7．0．1 mol／L硝酸银溶液50mL8．氯化铁浓盐酸溶液80mL将2mLl0％三氯化铁溶液(用FeCl3?6H2O配制)加入到400mL浓盐酸中。
《生物化学实验》PPT课件
缓冲 液
浓缩胶
分离胶
蛋白质样品进入分离胶后
pH增大(pH 8.9)，Gly－解离度增 大，不存在快、慢离子之分， 蛋白质样品在均一电场强度和 pH条件下泳动。
由于各种蛋白质pI不同，所载有 效电荷不同，因此质点的 有效 迁移率不同，形成不同区带。
交联剂：甲叉双丙稀酰胺交联剂(Bis)
O
O
CH2=CH-C-NH -CH2-NH-C-CH=CH2
催化剂 聚合形成的三维网状结构。
催化剂
（1）过硫酸铵-TEMED系统 碱性条件下催化作用 温度与聚合快慢成正比 （2）核黄素-TEMED系统 光激发的催化反应 用量少，对分析样品无影响 聚合时间可自由控制
4
2
64
64
48
32
20
12
322
40
40
8
20
30
4
12
2
纸层析
纸层析是最简单的液一液相分配层析。 滤纸是纸层析的支持物。当支持物被水饱和时，
大部分水分子被滤纸的纤维素牢牢吸附，因此， 纸及其饱和水为层析的固定相，与固定相不相 混溶的有机溶剂为层析的流动相。 对某些特定化合物，在特定的展层系统，一定 的温度条件下，Rf是个常数。
大分子物质; 高压电泳(500—1000V). 20—200V/cm，几分钟；氨基酸、小肽、
核苷酸等小分子物质; （2）溶液的pH值 pH距待分离物质的pI越远，泳动速度越大； （3）溶液离子强度 离子强度越小,电动势越大,泳动速度越快。 （4）电渗现象：在电场中，液体对于固体支持物的相对移动。
在不同条件 下，占主要地位的作用力可能不同，也可能几种力同 时起作用
生物化学实验讲义(DOC)
生化实验讲义综合型实验生物科学与工程学院溶菌酶的提取和系列性质测定在研究酶的性质、作用、反应动力学等问题时都需要使用高度纯化的酶制剂以避免干扰。
酶的提纯工作往往要求多种方法交替应用，才能得到较为满意的效果。
常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。
酶蛋白在分离提纯过程中易变性失活，为能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性如在低温下操作等，这样才能收到较好的分离提纯效果。
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶、球蛋白G，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。
主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。
溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。
溶菌酶相对分子质量约为1.44×104，是一种强碱性蛋白质，等电点在10.0以上，并对温度和酸不敏感。
在自然界中，普遍存在于鸟类和家禽的蛋清中，哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿液、淋巴液等细胞中，植物卷心菜、萝卜、木瓜等，以蛋清含量最丰富，约为0.3%。
本实验用鸡蛋为原理，通过阳离子交换层析，硫酸铵沉淀，分子筛层析等步骤提取溶菌酶。
实验安排第一天实验理论第二天配试剂、离子交换剂的再生、平衡第三天蛋清样品上样、洗脱、硫酸铵沉淀第四天分子筛层析第五天酶活和蛋白浓度的测定第六天酶促动力学第七天 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳生化技术重要理论蛋白质提取分离技术以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。
蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。
一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。
生物化学实验课件讲解
⽣物化学实验课件讲解实验⼀⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法测定总糖含量（4学时）⼀、实验⽬的（1）掌握⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法测定总糖的原理。
（2）学习分光光度计的使⽤⽅法。
（3）掌握⽐⾊定糖法操作技术。
⼆、实验原理在碱性条件下，还原糖与3，5-⼆硝基⽔杨酸共热，3，5-⼆硝基⽔杨酸被还原为3-氨基-5硝基⽔杨酸（棕红⾊物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物，在⼀定范围内，还原糖的量与棕红⾊物质颜⾊深浅的程度成⼀定⽐例关系，在540nm波长下测定棕红⾊物质的吸光度，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖的含量。
总糖可在强酸条件下⽔解，得到还原糖，从⽽间接求出样品中总糖的含量。
三、实验仪器（1）刻度试管：25 mL；（2）烧杯：100 mL；（3）三⾓瓶：100 mL；（4）容量瓶：100 mL；（5）刻度吸管：1 mL，2 mL，10mL；（6）恒温⽔浴；（7）沸⽔浴；（8）离⼼机（过滤法不⽤此设备），离⼼管或玻璃漏⽃，电⼦天平，分光光度计。
四、实验试剂（1）1 mg/mL葡萄糖标准液：准确称取0.250 g分析纯葡萄糖（预先80℃烘⾄恒重），置于⼩烧杯中，⽤少量蒸馏⽔溶解后，定量转移到250 mL容量瓶中，以蒸馏⽔定容⾄刻度，摇匀，冰箱中保存备⽤。
（2）3，5-⼆硝基⽔杨酸试剂：将6.3 g 3，5-⼆硝基⽔杨酸和262 mL 2mol/L的NaOH溶液，加到500 mL含有185 g酒⽯酸钾钠的热⽔溶液中，再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏⽔定容⾄1000 mL，贮于棕⾊瓶中备⽤。
（3）碘-碘化钾溶液：称取5.0 g碘、10 .0g碘化钾，⽤蒸馏⽔溶解⾄100mL。
（4）酚酞指⽰剂：称取0.1 g酚酞溶于70%⼄醇⾄250 mL。
（5）6 mol/L HCl，6 mol/L NaOH。
（6）⼩麦淀粉，⾷⽤⾯粉。
五、实验操作1．制作葡萄糖标准曲线取7⽀刻度试管，按下表操作。
管号0 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏⽔/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3，5-⼆硝基⽔杨酸/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 将各管内液体混匀，在100 ℃⽔浴中加热5 min，取出冷却⾄27~30 ℃后以蒸馏⽔定容⾄25 mL，将各管摇匀，将分光光度计调⾄540 nm 波长，⽤零号管调零，再读取1~6号管的吸光度，然后将读取的吸光度为纵坐标，葡萄糖mg数为横坐标，绘制出标准曲线。
《生物化学实验教案》课件
《生物化学实验教案》PPT课件第一章：生物化学实验基本原理与技能1.1 生物化学实验的目的与意义解释生物化学实验在生物学和医学研究中的重要性强调实验对于理论知识的巩固和应用的作用1.2 生物化学实验的基本原则介绍实验设计的科学性和合理性强调实验操作的准确性和可重复性1.3 生物化学实验的基本技能介绍实验室安全操作规程演示实验室常用仪器的使用方法第二章：生物化学实验数据处理与分析2.1 实验数据的记录与处理讲解实验数据的记录方法和注意事项介绍数据处理的基本原则和方法2.2 实验数据的分析与解读讲解实验结果的统计分析方法强调数据分析在实验结果解释中的重要性第三章：生物化学实验操作技巧与实例3.1 生物化学实验操作技巧讲解实验操作中的注意事项和技巧强调实验操作的精确性和规范性3.2 生物化学实验实例解析介绍经典生物化学实验案例分析实验操作步骤和结果的关联性第四章：生物化学实验常用仪器与设备4.1 生物化学实验常用仪器介绍实验室常用仪器的作用和操作方法强调仪器使用中的注意事项和维护保养4.2 生物化学实验常用设备讲解实验室常用设备的结构与功能强调设备操作的安全性和正确性第五章：生物化学实验安全与环保5.1 生物化学实验安全知识讲解实验室安全的基本原则和措施强调实验操作中的安全意识和风险控制5.2 生物化学实验环保知识介绍实验室废物的分类和处理方法强调实验室环保的重要性和责任意识第六章：蛋白质实验6.1 蛋白质的提取与分离介绍蛋白质提取和分离的基本原理演示蛋白质提取和分离的实验步骤6.2 蛋白质的纯化与鉴定讲解蛋白质纯化方法和技术介绍蛋白质鉴定的方法和原理第七章：酶实验7.1 酶的提取与纯化讲解酶提取和纯化的方法和原理强调酶活性检测的重要性7.2 酶活性的测定与分析介绍酶活性测定的方法和原理讲解酶活性数据分析的方法和技巧第八章：碳水化合物实验8.1 碳水化合物的提取与分析介绍碳水化合物提取和分析的方法强调碳水化合物在生物体中的重要性8.2 碳水化合物的代谢实验讲解碳水化合物代谢的实验方法和原理介绍碳水化合物代谢产物的检测方法第九章：脂质实验9.1 脂质的提取与分析讲解脂质提取和分析的方法强调脂质在生物体中的功能和作用9.2 脂质代谢实验介绍脂质代谢的实验方法和原理讲解脂质代谢产物的检测方法第十章：核酸实验10.1 核酸的提取与纯化介绍核酸提取和纯化的方法和原理强调核酸在生物体中的重要性10.2 核酸的检测与分析讲解核酸检测和分析的方法和原理介绍核酸序列测定和分析的方法重点和难点解析1. 生物化学实验基本原理与技能：理解实验设计的原则和实验操作的准确性是进行生物化学实验的基础。
生物化学实验讲义资料
生物化学实验讲义目录1.实验须知及实验教学要求2.实验室常用器具3.实验一糖的颜色反应4.实验二总糖的测定5.实验四酪蛋白的制备6.实验五酵母核酸的分离7.实验六核酸的琼脂糖凝胶电泳8.实验七离子交换柱层析法分离氨基酸9.实验八维生素C的测定10.实验九蛋白质的两性性质和等电点11.实验十温度、PH对酶活性的影响12.常用设备使用说明13.1离心机13.2分光光度计13.3电泳仪器13.4 部分收集器13.5 紫外检测设备13.6 蠕动泵14．常用溶液的配置实验须知生物化学实验课是教学的重要环节。
通过实验教学，观察某些生化与分子生物学反应现象，联系并加深对理论内容的理解，验证和巩固理论知识；掌握生化与分子生物学实验的基本操作、实验原理和一般仪器的使用；培养科学实验技能和严谨的科学态度，准确记录，科学分析并作出实事求是的实验报告，逐步提高观察问题、分析问题和解决问题的能力，为今后学习生物医学专业后续课程打好必要的基础。
为此，要求学生在实验前必须预习、理解基本原理和实验基本操作步骤、注意事项，列出所需试剂和仪器，实验中组织安排好时间，严肃认真地进行操作，细致观察变化，如实作好记录、书写实验报告等。
一、实验记录实验记录要整洁、字迹清楚。
实验中观察到的现象、结果和数据，要及时地直接记在记录本上。
原始记录必须准确、简练、详尽、清楚。
记录时，应如实正确地记录实验结果，不可夹杂主观因素。
在实验条件下观察到的现象，也应如实仔细地记录下来。
在定量实验中测得的数据，如称量物的重量、滴定管的读数、光电比色计的光密度值等，都应设计一定的表格准确记录，并根据仪器的精确度准确记录有效数字。
要求对实验的每个结果都应正确无遗漏地做好记录。
实验中使用的仪器类型、试剂规格、化学反应式、分子量、浓度等，都应记录清楚。
实验过程中，应一丝不苟，努力培养严谨的科学作风。
完整的实验记录应包括日期、实验题目、目的、操作、结果。
二、实验报告实验结束后，应及时整理和总结实验结果及记录，写出实验报告。
生物化学实验讲义
生物化学实验讲义生物工程教研室2009-02实验学时数：32 课程类别：基础课应开实验项目数：8 开课学期：5面向专业：生物工程专业考核办法：考查实验教材名称：生物化学实验讲义（自编）制定大纲的依据：专业方向及生物化学教学大纲实验课教学目标：验证及巩固课堂基本理论知识，培养学生动手能力和分析问题能力。
实验教学基本要求：了解实验目的、原理、方法、步骤、设备结构及仪器的使用方法；要求学生具备对新实验的基本设计能力，准确测定和读取数据，整理数据，最后得出正确的结论。
目录实验一双缩脲法测蛋白质含量 (4)实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 (6)实验三酶的特异性（专一性） (9)实验四激活剂、抑制剂、pH、温度对酶活性的影响 (11)实验五酵母核糖核酸的水解及其组成成分的鉴定 (15)实验六包埋法固定化酵母细胞 (17)实验七维生素C的定量测定（磷钼酸法） (19)实验八综合设计实验（二选一） (21)实验一：双缩脲法测蛋白质含量一、 实验目的了解并掌握双缩脲法测蛋白质浓度的原理和方法 二、 实验原理具有两个或两个以上肽键（-CO-NH-）的化合物皆有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与+2Cu 形成紫色配合物，此反应和两个尿素分子缩合后生成的双脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。
这种紫红色络合物在540nm 处有最大吸收。
在一定浓度范围内，蛋白质浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比，可用比色法定量测定。
双缩脲法最常用于需要快速但不要求十分精确的测定。
硫酸铵不干扰此呈色反应，但+2Cu 离子容易被还原，有时会出现红色沉淀。
三、实验器材1． 试管1.5cm ×15cm 8支。
2． 试管架：1个3． 吸量管：5.0ml 3支、2.0ml 1支、 1.0ml 1支。
4． S22pc 型分光光度计。
四、 实验试剂1． 双缩脲试剂：溶解 1.50g 硫酸铜（O H C u S O 245⋅）和 6.0g 酒石酸钾钠（O H O H NaKC 26444⋅）于500毫升水中，在搅拌下加入300毫升10％氢氧化钠溶液，用水稀释到1升，贮存在内壁涂以石蜡的瓶中。
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的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
2. 材料与试剂
① 尿素。
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② 10%氢氧化钠溶液。 ③ 1%硫酸铜溶液。 ④ 2%卵清蛋白溶液。 3. 操作方法 ① 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。当熔化的 尿素开始硬化时，停止加热，这时尿素放出氨，形成双缩脲。将得到的物质放置 冷却后，加 10%氢氧化钠溶液约 1mL，振荡混匀，再加 1%硫酸铜溶液 1 滴，边振 荡边观察出现的粉红颜色。实验中避免添加过量硫酸铜，否则生成的蓝色氢氧化 铜溶液会掩盖粉红色的出现。 ② 向另一试管加卵清蛋白溶液约 1mL 和 10%氢氧化钠溶液约 2mL，摇匀后 加入 1%硫酸铜溶液 2 滴，边加边振荡并观察紫玫瑰色的出现。
1．使用方法
（1）将温度计插入插孔内（一般在箱顶放气调节器中部）。 （2）通电，打开电源开关，红色指示灯亮，开始加热。开启鼓风开关，促 使热空气对流。 （3）注意观察温度计。当温度计温度将要达到需要温度时，调节自动控温 旋钮，使绿色指示灯正好亮。10min 后再观察温度计和指示灯，如果温度计上所 指温度超过所需温度，而红色指示灯仍亮，则将自动控温旋钮略向反时针方向旋 转，直调到要需要的温度上，并且指示灯轮番显示红色和绿色为止。自动恒温器 旋钮在箱体正面左上方或右下方。它的刻度板不能作让温度标准指示，只能作为 调节的标记。
具体反应如下：
双缩脲反应不仅在含有两个以上肽键的物质出现，在含有一个肽键和一个 -CS-NH2，-CH2-NH2-，-CRH-NH2-，-CH2-NH2-CHNH2-CH2OH 或-CHOHCH2NH2 等基团及含
有乙二酰二氨（
）等物质也有此反应。另外，NH3 能干扰此反应，
因为 NH3 与 Cu2+可生成暗蓝色的络离子 Cu(NH3)42+，因此，一切蛋白质或二肽以上
6. 讨论部分是对整个实验过程、实验结果的总结、分析。对得到的正常结果和 出现的异常现象以及教师提出的思考题的探讨、研究。
二、容量玻璃器皿的使用方法
吸管是生物化学实验中常用的卸量容器。移取溶液时，如吸管不干燥，应预 先用所吸取的溶液将吸管润洗 2-3 次，以确保所吸取的操作溶液浓度不变。吸取 溶液时，一般用右手的大拇指和中指拿住管颈刻度线上方，把管尖插入溶液中， 左手拿吸耳球先把球内空气压出，然后把吸耳球尖端接在吸管口，慢慢松开左手 指，使溶液吸入管内。当液面升高至刻度以上时，移开吸耳球，立即用右手的食 指按住管口，大拇指和中指拿住吸管刻度线上方再使吸管离液的弯月面与刻度标 线相切时，立即用食指压紧管口，取出吸管，插入接受器中，管尖仍靠在接受器 内壁，此时吸管应垂直，接受器约呈现 15°夹角。松开食指让管内溶液自然地
一、 目的
① 了解蛋白质的基本组成成分及氨基酸间相互连接的主要方式。 ② 了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 ③ 学习集中常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二、 呈色反应
（一） 双缩脲反应
1. 原理 尿素加热至 180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中
能与 Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键， 其结构与双缩脲相似，也能发生此反应，因此可用此反应定性或定量测定蛋白质。
4. 操作方法
在 3 支试管中各加入杜氏试剂 1mL，再分别加入 1 滴 1%葡萄糖溶液，1%半乳
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糖或 1%阿拉伯糖溶液，混匀。将各试管同时放入沸水浴中，观察颜色的变化， 并记录颜色变化的时间。
5. 作业
1. 用什么方法鉴定糖？ 2. 用什么方法鉴定酮糖？
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实验二 蛋白质性质——蛋白质及氨基酸的呈色反应
(2)吹出式：标有“吹”字的为吹出式，使用时最后应吹出管尖内遗留的液
(3)不完全流出式：有零刻度也有总量刻度的为不完全流出式。使用时全速 流出至相应的容量标刻线处。
（一）干燥箱和恒温箱使用说明
干燥箱用于物品的干燥和干热灭菌，恒温箱用于生物材料的培养。这两种仪 器的结构和使用方法相似，干燥箱的使用温度范围为 50－250℃，常用鼓风式电 热箱以加速升温。恒温箱的最高工作温度为 60℃。
一 生物化学实验记录及报告
由于生物化学实验的对象是生命体或是生物活性物质，在实验中很容易受外 界环境条件的影响，而引起实验结果的差异。因此，在实验记录和写实验报告时， 需要实验者做到仔细、认真、实事求是，只有这样才能获得真实可靠的实验结果。
在实验课前应认真预习，初步了解验目的、实验原理，对操作方法及步骤要 做到心中有数，最好写一个预习提纲，将实验步骤简要的写出来。
在同样工作条件下测定未知样品，用所得的数据从标准工作曲线中查出未知样品
的浓度。作图时，首先要在坐标纸上标出坐标轴，标明轴的名称和单位，然后在
横轴和纵轴上一一找出实验交叉点，用“×”或“·”标注上，再用直线或平滑
线将各点连接起来。图线不一定经过所有实验数据点，但要求线必须尽量通过或
靠近大多数数据点。个别偏离过大的点应舍弃，或重复试验进行校正。此外在图
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（4）工作一定时间后，可开启顶部中央的放气调节器将潮气排除，也可以 开启鼓风机。
（5） 使用完毕，关闭开关。将电源插头拔下。
2. 注意事项
（1）检查电源，要有良好的地线。 （2）切勿将易燃易爆物品及挥发性物品放入箱内加热。箱体附近不可置易燃 物品。 （3）箱内应保持清洁，放物网不得有锈，否则影响玻璃皿洁净度。 （4）烘烤洗刷完的器具时，应尽量将水珠甩干再放入烘箱内。干燥后，应等 到温度降至 60℃以下方可取出物品。塑料、有机玻璃制品的加热能超过 60℃， 玻璃器皿的加热温度不能超过 180℃。 （5）鼓风机的电动机轴承应每半年加油一次。 （6）放物品时要避免碰撞感温器，否则温度不稳定。 （7）检修时应切断电源，防止带电操作。
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5. 将实验中的现象、数据进行整理、分析，得出相应的结论。在生物化学实验 中最常用的多以图表法来表示实验结果，这样列分析测定，制作图表或绘制标准曲线等，为以 后待测样品的分析提供方便的条件。如通过实验值在图表中直接查出结果。现将
(1)列表法：通常将实验所得的出表格。通常在表格的第一行和第一列标出
2. 实验器材
① 棉花。 ② 滤纸。 ③ 吸管：1mL、2mL。 ④ 试管。
3. 材料与试剂
① 莫氏试剂：称取α -萘酚 5g，溶于 95%酒精中。此实际需新鲜配制，并 储存于棕色瓶中。
② 1%蔗糖：称取蔗糖 1g，溶于 100mL 蒸馏水。 ③ 1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖 1g，溶于 100mL 蒸馏水。 ④ 1%淀粉溶液：将 1g 可溶性淀粉与少量蒸馏水混合成浆状物，然后缓缓 倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至 100mL。
① 杜氏试剂：2%间苯三酚乙醇（95%）溶液 3mL，缓缓加入浓盐酸 15mL 及蒸 馏水 9mL。临用时配制。
② 1%阿拉伯糖溶液：称取阿拉伯糖 1g，溶于 100mL 蒸馏水。 ③ 1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖 1g，溶于 100mL 蒸馏水。 ④ 1%半乳糖溶液：称取 1g 半乳糖溶于 100mL 蒸馏水。
② 1%果糖溶液：称取果糖 1g，溶于蒸馏水定容至 100mL。 ③ 1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖 1g，溶于 100mL 蒸馏水 ④ 1%蔗糖溶液：称取蔗糖 1g，溶于 100mL 蒸馏水。
4. 操作方法
在 3 支试管中分别加入 1%葡萄糖溶液，1%蔗糖溶液或 1%果糖溶液 0.5mL， 各加塞氏试剂 2.5mL，摇匀，同时置沸水浴内。比较各管颜色变化及红色出现的 先后次序。记录试验现象。
（2）将调温旋钮沿顺时针旋转到适当温度位置。 （3）打开电源开关，接通电源，红灯亮表示电炉丝通电开始加热。 （4）在加热过程中，当读数达到所需温度时，红灯熄灭，绿灯亮，表示恒 温控制发生作用。水浴锅将保持恒温。 （5）调温旋钮度盘的数字并不表示恒温水浴内的实际温度。随时记录调温 旋钮在度盘上的位置与恒温水浴内指示湿度的关系，记录两者差值，标定刻度盘 的温度。 （6）使用完毕，关闭电源开关，拔下插头。 （7）若较长时间不使用，应将调温旋钮退回原位，并打开放水阀门，放尽 水浴槽内的全部存水。
二、实验报告
实验结束后，应及时整理和总结实验数据，写出实验报告。一份好的实验报 告包括以下内容。
1. 标题应包括实验时间、实验地点、实验组号、实验者姓名、实验室条件(如 温度、湿度) 2. 3. 应简明扼要地阐述实验的理论指导，使未做过实验的人看后对该实验有一个
4. 要描述自己的操作过程及方法，不能完全照抄实验指导书，可简明扼要地把 实验步骤一步步写出，也可用工艺流程图或表格形式按照先后顺序表示。实验步
（二）电热恒温水浴使用说明
电热恒温水浴（槽）用于加热及蒸发等。常用的有 2 孔、4 孔、6 孔和 8 孔， 单列式或双列式。工作温度从室温上以至 100℃，恒温波动±1℃－±5℃。
1．使用方法
（1）关闭水浴底部外侧放水阀门，将水浴内注入蒸馏水至适当的深度。加 蒸馏水是为了防止水浴槽体（铝板或铜板）被侵蚀。
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沿器壁流下。遗留在吸管尖端的溶液及停留的时间要根据吸管的种类进行不同处
1.无分度吸管(单刻度吸管，移液管) 使用普通无分度吸管卸量时，管尖所遗留的少量溶液不要吹出，停留等待 3s 2.分度吸管(多刻度吸管、直管吸管)
(1)完全流出式：上有零刻度，下方无总量刻度的，或上有总量刻度，下无 零刻度的为完全流出式。这种吸管又分为慢流速、快流速两种。按其容量和精密 度不同，慢流速吸管又分为 A 级与 B 级，快流速吸管只有 B 级。使用时 A 级最 后 停留 15s，B 级停留 3s，同时转动吸管，尖端遗留液体不要吹出。但由于产品 质量不同，如按上述操作，每次停留 15s 或 3s 会造成卸量不同。出现误差(甚至 是很大的误差)。因此，因根据实验条件，采取全部吹出的方式。这样会减小平
三、 杜氏（Tollen）试验