胚胎培养
胚胎培养
胚胎培养一、胚胎培养的概念1.胚胎：植物在受精后，受精卵形成合子，随即进行第一次分裂，进而形成分生组织和幼胚，再发育成成熟胚。
2.胚胎培养：胚胎培养是植物组织培养的一个主要领域。
植物胚胎培养是指对植物的胚（种胚）及胚器官（如子房，胚珠）进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。
二、胚胎培养的种类以及方法1.胚培养⑴幼胚培养①定义：将子叶期以前的具胚结构的幼小胚从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下使其进一步生长发育形成幼苗的技术。
②特点：幼胚培养完全是异养的，离体条件下培养要求培养基成分复杂，培养不易成功。
附：以下几种发育方式：a、胚性发育，此种方式不能萌发成苗b、早熟萌发，长成的苗十分瘦弱c、产生愈伤组织，再由愈伤组织分化形成胚或不定芽⑵成熟胚培养①特点：成熟胚培养是自养的，培养基需要简单。
②主要目的：a、研究胚发育过程的形态建成b、生长调节物质的作用c、胚与胚乳相互关系和营养要求③培养方法：将受精后成熟或未成熟种子或果实，用70%-75%酒精表面消毒几分钟；用0.1%升汞溶液或饱和漂白粉溶液消毒10min，无菌水反复冲洗；无菌操作台上，直接或在解剖镜下剥取胚接种在培养基上。
2、胚乳培养⑴定义：指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株的技术。
⑵胚乳是由两个单倍的极核和一个单倍的精子结合而成的3倍体组织。
由它可获得无子结实的3倍体植株，进而可将它加倍成6倍体植株。
不同胚乳发育类型及发育时期直接影响外植体取材时期以及胚乳细胞产生愈伤组织频率。
胚乳培养的后代，常发生细胞染色体数目变化，形成多倍体、非整倍体等。
⑶培养的方法：取授粉4-8d后的幼果，常规消毒；无菌条件下切开果实，取出种子，分离出胚乳；接种在培养基上（MS、White等培养基，附加2，4-D或NAA 0.5～2.0，BA0.1～1.0。
），在25-270C和黑暗条件或散光下培养想成愈伤组织；转到分化培养基（MS培养基附加0.5～3.0 mg/l的BA及少量的NAA。
植物胚胎培养
（二） 子房培养 1、子房培养的意义 、
★有效地挽救杂种胚的败育 ★单倍体植株的培育 ★离体授粉的需要 ★离体条件形成果实 ★花被功能研究
2、子房培养的方法 、
授粉前或授 粉后的子房
表面消毒
接种培养
受精后的子房仍需进行表面消毒后再 接种。而未受精子房可将花被表面消毒后， 接种。而未受精子房可将花被表面消毒后， 在无菌条件下直接剥取子房接种。 在无菌条件下直接剥取子房接种。 子房培养只需较简单的培养基即可形 成果实，并含成熟种子。 成果实，并含成熟种子。
（一） 胚珠培养
1、胚珠培养的意义 、
有利于合子和早期原胚的培养 胚分化不全的种子的胚培养 获得杂交后代和优良品种 离体授粉的需要 获得无病毒苗
2、胚珠培养的方法 、
长度小于3mm的胚珠， 的胚珠， 长度小于 的胚珠 难与直接解剖， 难与直接解剖，可先接 种于液体培养基中， 种于液体培养基中，根 据培养情况采取相应培 养条件。 养条件。
培养方法： （三） 培养方法： A、取授粉 、取授粉4-8d后的幼果，常规消毒 后的幼果， 后的幼果 B、无菌条件下切开果实，取出种子，分离出胚乳 、无菌条件下切开果实，取出种子， C、接种在培养基上，在25-27℃和黑暗条件或散射 、接种在培养基上， ℃ 光下培养形成愈伤组织 D、转到分化培养基上，待愈伤组织长出芽后，切下 、转到分化培养基上，待愈伤组织长出芽后， 不定芽 E、插入生根培养基中，光下培养 、插入生根培养基中，光下培养10-15d，切口处长 ， 出白色的不定根
二、胚胎培养的应用
1、克服远缘杂交的不育性，获稀有杂种植物 、克服远缘杂交的不育性， 2、打破种子休眠，提早结实，缩短育种年限 、打破种子休眠，提早结实， 3、使生活力低下或无生活力的种子萌发 、 4、使柑橘类植物合子胚正常发育 、 5、测定种子生活力 、 6、获三倍体或单倍体植株 、 7、快速繁殖特殊植物 、 8、用于理论研究 、
胚胎体外培养及胚胎评估的培训PPT
培养基的选择与优化。针对不同来源的卵子和胚胎，选择适合的培养基至关重要 。科研人员需不断探索和改进培养基成分，以满足胚胎发育过程中对营养物质的 需求，提高胚胎质量。
06
未来展望与研究方向
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
胚胎体外培养技术的发展趋势
优化培养环境
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW ERA
04
胚胎体外培养及胚胎评估的实际操作
胚胎体外培养的操作流程
0102Βιβλιοθήκη 0304准备培养环境
确保培养箱温度、湿度、气体 浓度等参数适宜，准备好所需
的培养液和细胞。
细胞接种
将胚胎细胞分散并接种到培养 皿或培养瓶中，确保细胞贴壁
良好。
胚胎评估技术的改进方向
高分辨率成像技术
利用高分辨率显微镜和成像技术 ，对胚胎形态、细胞结构和染色 体等进行更精确的观察和评估。
多参数联合评估
结合胚胎的形态、代谢和分子生物 学等多方面参数进行综合评估，提 高评估的准确性和可靠性。
无损检测技术
开发无创、无损的检测方法，减少 对胚胎的损伤，提高评估的安全性 。
胚胎体外培养及胚胎评估
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
的培训
汇报人：可编辑 2024-01-11
• 胚胎体外培养技术概述 • 胚胎体外培养技术的基本原理 • 胚胎评估的方法与标准 • 胚胎体外培养及胚胎评估的实际操作 • 案例分析与实践经验分享 • 未来展望与研究方向
综合评估
结合胚胎的形态学和遗传学检 测结果，进行综合评估，为患 者提供合适的胚胎移植建议。
第4章-胚胎培养PPT演示课件
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复习思考题：
1、植物胚胎培养分为哪些类型？各有何种特点 和要求？
2、胚胎培养有何意义？
3.花器官培养通常指花的哪些部分培养?常用的 基本培养基是什么?
4.在进行幼胚培养时，由于幼胚过小而分离困 难，可采取什么途径解决?
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温度。 C.光照：通常弱光培养。光暗交替有利幼胚生
长
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原胚(幼胚)的培养的条件
➢ 无机氮：
包括硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐；
➢ 渗透压：
蔗糖，8%-10%，不同发育期，渗透压不一 样，初期高（WHY）。因为自然条件下，原 胚被一ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ高渗液体包围着。
➢ 复杂的天然提取物：
椰乳 CM有促进幼胚生长和分化的作用
4.培养：
加入生长素和CTK，诱 导形成愈伤组织或胚状 体，再分化成植株。
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•52
二、种子培养
优点： 1.植株分化容易，无菌操作方便，
打破休眠。 2.使杂种败育种子正常萌发。
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种子结构
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培养方法：
1.种子消毒：
◇种皮厚或不饱满的用0.1%升汞浸10-20min， 或用10%次氯酸钠浸15-20min。
（2N）
•8
一.培养类型
1、离体胚培养时期 A.异养期 B.自养期
A.异养期，完全依赖于周围细胞中的代谢，而 且依赖于周围胚乳消耗的养料。B.自养期，胚 能吸收培养基中的无机盐和糖，经过自身的代 谢作用合成其生长所必需的物质。
•9
2、离体胚培养类型 ⑴成熟胚培养 ⑵幼胚培养
•10
2、离体胚培养类型
完全成熟的胚乳，生理活动很弱，在诱导脱分化前， 必须借助于原位胚的萌发，使其活化。
《胚胎培养》复习题及参考答案
第4章《胚胎培养》复习题参考答案一、填空：1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。
2、离体胚的培养分为二种类型：成熟胚培养和幼胚培养。
3、幼胚培养时，其发育过程有三种方式：胚性发育、早熟萌发、产生愈伤组织。
4、由胚乳培养得到的植株，除少数是三倍体外，多数是由各种倍性细胞组成的嵌合体。
5、胚珠培养分二类：受精胚乳的培养和未受精胚珠的培养。
受精胚珠培养的目的：一是用来打破种子的休眠，二是挽救胚的发育，以获得杂交种。
未受精胚珠培养的目的是获得单倍体植株。
6、子房培养分授粉子房培养和未授粉子房的培养。
前者培养的目的是挽救杂种胚，后者培养的目的是获得单倍体植株。
二、名词解释：1、胚胎培养（embryo culture）：是指将植物的胚胎与母体分离，培养在人工的培养基上形成幼苗的过程，包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。
2、胚性发育(embryonal development)：植物幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。
3、早熟萌发(early mature sprouting): 幼胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为早熟萌发。
4、胚培养（embryo culture）：是指将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，在进行组织培养，使其生长发育形成幼苗的过程。
5、胚乳培养（endosperm culture）：是指将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。
6、胚珠培养（ovule culture）：是指将胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。
7、子房培养（ovary culture）：是指将子房从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。
动物胚胎培育技术的操作指南
动物胚胎培育技术的操作指南随着科学技术的不断发展，动物胚胎培育技术在畜牧业和生物医学领域扮演着重要的角色。
胚胎培育技术可以帮助我们研究生殖生物学、改良家畜品种，甚至是克隆动物。
在这篇文章中，我们将介绍动物胚胎培育技术的操作指南，以帮助读者更好地理解和掌握这一技术。
胚胎培育技术主要包括体外受精（IVF）和胚胎移植两个步骤。
在体外受精阶段，首先需要从母体动物中收集卵子和精子。
对于较大的动物，如牛、猪和马，可以通过超声波引导下的卵巢穿刺采集卵子。
对于较小的动物，如小鼠或小鸟，可以通过解剖手术或通过特殊仪器采集卵子。
精子可以通过自然排出或通过人工方式采集。
采集到卵子和精子后，需要进行体外受精。
首先，将卵子和精子放入含有适当培养液的离心管中。
然后，通过离心或通过特殊仪器的帮助，使卵子和精子接触，促进受精的发生。
接下来，将受精卵转移到培养皿中，并将其置于恒温灭菌的培养箱中。
培养皿中的培养液需要定期更换，以提供所需的营养物质和生长因子。
胚胎培养的下一步是胚胎移植。
胚胎移植是将成熟的胚胎植入到母体动物的子宫内，使其继续发育。
在进行胚胎移植前，需要将母体动物的子宫内膜准备好，以提供适宜的环境供胚胎着床。
这可以通过激素治疗或手术操作来实现。
在胚胎移植过程中，需要将培养的胚胎转移到母体动物的子宫内。
这可以通过经阴道插管或腹腔手术来完成。
移植后，需要密切观察胚胎在母体内的发育情况。
一些胚胎可能无法成功着床或在早期发展阶段产生问题，这是正常现象。
但一旦胚胎着床成功并进一步发育，将会带来新生仔动物。
动物胚胎培育技术的操作需要具备一定的专业知识和技能。
操作时，需要注意保持手术场所的清洁和无菌，以避免感染。
培养液的配制和保存也需要严格按照制定的方案进行。
此外，在胚胎移植过程中，要小心处理胚胎，以防止对其造成损伤。
动物胚胎培育技术的应用十分广泛。
不仅可以帮助畜牧业提高品种质量和数量，还可以为生物医学领域提供重要的研究工具和资源。
植物胚胎培养
幼胚培养时，其发育过程有以下几种 发育方式： a、胚性发育，此种方式不能萌发成苗 b、早熟萌发，长成的苗十分瘦弱 c、产生愈伤组织，再由愈伤组织分化形 成胚或不定芽
幼胚离体培养的生长发育方式
(1)、胚性发育(embryonal development) 幼胚接种
到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发
大麦：授粉后10 ~ 20 d
玉米和小麦：授粉后8 ~ 12 d
一般情况下：接近成熟或完全成熟的胚乳callus诱导率很低， 甚至无callus 木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和诱 导产生callus
B、培养基和激素的影响 培养基：MS、B5、MT、White、LS等 水解酪蛋白、酵母提取物也很必要
成熟胚
700（最 大极限）
四、胚乳培养
胚乳是由两个单倍的极核和一个单倍的精子 结合而成的3倍体组织。由它可获得无子结实的3 倍体植株，进而可将它加倍成6倍体植株。
不同胚乳发育类型及发育时期直接影响外植 体取材时期以及胚乳细胞产生愈伤组织频率。
胚乳培养的后代，常发生细胞染色体数目变 化，形成多倍体、非整倍体等。
培养方法： A、将受精后成熟或未成熟种子或果实， 用70%—75%酒精表面消毒消毒几分钟 B、用0.1%升汞溶液或饱和漂白粉溶液消 毒10min，无菌水反复冲洗 C、无菌操作台上，直接或在解剖镜下剥 取胚接种在培养基上
荠菜不同发育时期胚培养的营养需要
胚龄 早球形胚 后球形胚 心形胚 鱼雷胚 胚长度 （μ m） 20~60 61~80 81~450 451~700 营养需要（培养基营养） 小于40μ m长的胚所需营养尚不清楚 大量元素、微量元素、VB1、VB6、烟酸、糖2%、 IAA0.1mg/L+KT0.01mg/L 大量元素、微量元素、VB1、VB6、烟酸、糖2% Ca（NO3）2480mg/L、KNO363mg/L、KCl 42mg/L、 MgSO463mg/L、KH2PO442mg/L、VB1、VB6、烟酸、 糖2% Ca（NO3）2480mg/L、KNO363mg/L、KCl 42mg/L、 MgSO463mg/L、糖2%
胚的培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握胚胎培养的基本原理和操作步骤。
2. 学习在体外条件下模拟胚胎发育过程，观察胚胎的形态变化和生长情况。
3. 探讨不同培养条件对胚胎发育的影响。
二、实验原理胚胎培养是指将受精卵或早期胚胎置于体外的人工培养系统中，模拟体内环境，使其继续发育和生长。
通过胚胎培养，可以研究胚胎发育的规律，筛选优良胚胎，以及进行胚胎基因编辑等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 受精卵或早期胚胎- 培养基：DMEM/F12、KSR、Hams F12- 胎牛血清（FBS）- 促性腺激素（如hCG）- 透明质酸酶- 胚胎培养皿- 显微镜- CO2培养箱- 移液器- 计时器2. 实验仪器：- 超净工作台- 恒温箱- 高压灭菌器- 电子天平四、实验步骤1. 准备培养基：- 将DMEM/F12、KSR、Hams F12培养基按照说明书比例配制，并加入胎牛血清（FBS）。
- 将培养基在无菌条件下过滤除菌，并分装于培养皿中，备用。
2. 胚胎处理：- 将受精卵或早期胚胎置于超净工作台中，用消毒后的移液器吸取一定量的透明质酸酶，轻轻涂抹在胚胎表面。
- 适当放置一段时间，使透明质酸酶作用于胚胎表面，使其分散成单个细胞。
3. 胚胎培养：- 将处理后的胚胎放入装有培养基的培养皿中，放入CO2培养箱中培养。
- 每天观察胚胎的生长情况，记录胚胎的形态变化和细胞分裂情况。
4. 不同培养条件实验：- 将胚胎分别置于不同浓度的胎牛血清（FBS）培养基中培养，观察胚胎的生长情况。
- 将胚胎置于不同温度、pH值、氧气浓度等条件下培养，观察胚胎的生长情况。
5. 结果记录与分析：- 记录不同培养条件下胚胎的形态变化、细胞分裂情况以及生长速度。
- 对实验结果进行统计分析，探讨不同培养条件对胚胎发育的影响。
五、实验结果1. 正常培养条件下：- 胚胎在正常培养条件下能够正常发育，细胞分裂速度较快，形态变化明显。
2. 不同胎牛血清（FBS）浓度条件下：- 随着胎牛血清（FBS）浓度的增加，胚胎的生长速度和细胞分裂速度逐渐加快。
体外受精和早期胚胎培养
体外受精和早期胚胎培养什么是体外受精？体外受精，也称为试管受孕，是一种辅助生殖技术，通常用于治疗不育或生育困难的夫妇。
这种技术涉及将精子和卵子结合在实验室中，培育成胚胎，然后将胚胎植入母体内部。
在体外受精中，女性接受某种类型的生殖激素治疗，以刺激卵巢产生多个成熟卵子。
然后，医生使用一种称为卵巢刺激素的药物来取出成熟卵子，而不是等待它们排出体外。
接下来，医生将成熟的卵子与男性捐献的精子结合在一起，使其在实验室中受精。
经过一段时间的培育，科学家会将形成的多个胚胎中的最佳品质的胚胎选择出来，并移植到女性子宫内，以期着床并产生婴儿。
早期胚胎培养是什么？早期胚胎培养是指将结合健康成熟卵子和精子形成的早期胚胎（通常在1-5天内）培养和孵化在实验室中。
这种技术可以帮助医生选择最好的胚胎进行移植，以提高着床和发育成功的可能性。
早期胚胎培养的一个重要目标是保持胚胎在一个稳定的环境中，以允许它们自然地发展和成长。
胚胎须在温度恒定、PH值平衡、氧气含量和营养物质充足的情况下生长，以确保高品质的生长和发展。
这需要使用专业的实验设备、培养基和技术，以确保最佳环境条件的维持和保持胚胎发展的轨迹。
早期胚胎培养的优势早期胚胎培养带来很多大大优势，包括：更好地选择最佳胚胎早期胚胎培养可以帮助医生选择最好的品质的胚胎来实现更高的成功率，这是通过对早期胚胎的外观、生长速度以及基因组成进行评估来实现的。
更安全的患者体验与传统的胚胎移植技术相比，早期胚胎培养技术可以更安全地孵化胚胎并选择最好的品质。
然后，医生将最好的胚胎植入母体，减少了患者在移植周期过程中的风险。
更高的成功率早期胚胎培养可以通过提高选择最佳胚胎的准确性和质量来提高成功的概率。
这种技术可以大大增加试管婴儿的受孕率和活产率，同时降低流产率。
也可以降低孪生和多胞胎妊娠的风险，进一步提高生育治疗的成功率。
体外受精和早期胚胎培养技术在治疗不孕症方面是非常成功和高效的。
通过使用最先进的技术，医生可以选择最佳品质和数量的胚胎并增加成功率，从而为许多夫妇实现梦想的孕育孩子提供机会。
胚胎培养步骤
胚胎培养步骤嘿，朋友们！你们知道吗？胚胎培养这事儿可神奇啦！今天我就来给大家讲讲这其中的步骤，顺便跟你们分享一件我亲身经历的超有趣的事儿。
话说有一次，我去参观一个胚胎实验室（别问我为啥去，就是好奇呗）。
一进去，哇塞，那里面各种仪器设备，感觉超级高大上。
我就像个好奇宝宝一样，眼睛都看不过来了。
首先呢，胚胎培养的第一步是获取卵子和精子。
这就好比是在为一场特别的“聚会” 做准备，要邀请最重要的“嘉宾”。
医生会通过一些特殊的方法，从妈妈的身体里取出卵子，这卵子可小啦，就像个小小的透明泡泡。
然后呢，再把爸爸的精子收集起来。
这个过程可精细了，一点都不能马虎。
我当时就在旁边看着，心里想着，这小小的卵子和精子，可承载着大大的希望呢！接下来，就是让卵子和精子“相遇” 啦，这个过程叫做受精。
实验室的工作人员就像个神奇的“红娘”，把它们放在一起，让它们自然地结合。
我看着显微镜下的它们，感觉就像在看一场浪漫的邂逅。
这时候，就祈祷着它们能顺利“牵手”，形成一个可爱的胚胎。
然后呢，胚胎就开始在培养箱里成长啦。
这个培养箱就像是一个温暖的“小窝”，为胚胎提供了最适宜的环境。
工作人员会时刻关注着培养箱里的情况，调节温度、湿度啥的，可细心了。
我就想啊，这胚胎在里面肯定觉得很舒服，就像我们在温暖的被窝里一样。
在培养的过程中，胚胎会不断地分裂、发育。
从一个小小的细胞，慢慢变成多个细胞的小团体。
这个过程就像是一场神奇的变身秀，每天都有新的变化。
我有一天去看的时候，发现胚胎已经有了一些小小的模样，心里那叫一个激动啊！就好像看着一个小生命在一点点地成长，那种感觉真的很奇妙。
经过一段时间的培养，胚胎就会逐渐发育成熟。
这时候，医生会对胚胎进行评估，看看哪个胚胎是最健康、最有潜力的。
就像在选一个“小冠军” 一样，要挑出最棒的那个。
这个评估过程可严格了，一点瑕疵都不能有。
最后呢，如果一切顺利，这个健康的胚胎就会被移植到妈妈的子宫里，开始它在妈妈肚子里的奇妙旅程。
植物胚胎
2、母体组织的影响 柱头可影响某些植物受精，应切除柱 头和花柱。 而有些植物则需要保留，更有利于离 体受精，如烟草。 3、花粉萌发和花粉管生长 离体花粉萌发率和花粉生长速度直接 影响试管受精成功率。
幼胚离体培养的生长发育方式
(1)、胚性发育(embryonal development) 幼胚接种
到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发
育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然 后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径 发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。
(2)、早熟萌发(early mature sprou培养条件和营 养的要求都较高。 需要多种的营养和 适宜的培养条件。
影响幼胚培养成功的因素主要包括 幼胚发育时期、培养基及培养条件等。
（1）天然提取物及某些蛋白制品； 1934年银杏幼胚培养中添加银杏胚乳 有促进作用；1941年曼佗罗幼胚培养中 发现添加椰子乳能很好的促进幼胚的发 育(200-500um的幼胚)。 此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母 提取物、水解酪蛋白等都能促进幼胚的 发育。
★单倍体植株的培育 ★离体授粉的需要 ★离体条件形成果实 ★花被功能研究
2、子房培养的方法
授粉前或授 粉后的子房
表面消毒
接种培养
受精后的子房仍需进行表面消毒后再 接种。而未受精子房可将花被表面消毒后， 在无菌条件下直接剥取子房接种。
子房培养只需较简单的培养基即可形 成果实，并含成熟种子。
影响因素
三、胚的培养
指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离 出来，置于培养基上进行离体培养的方法。
第02章-胚胎培养
第二章胚胎培养金晓丽12第一节胚培养第二节胚珠和子房培养第三节胚乳培养第一节胚培养含义：采用人工的方法将胚及具胚的器官（例如子房、胚珠等）分Array离出来，在离体无菌条件下，发育成幼苗的技术。
培养对象：胚胎发生过程中的不同发育时期的胚和具胚的器官。
如：成熟胚、幼胚、胚珠培养、子房培养。
34一、胚培养的意义克服远缘杂交不亲和性和杂种不育性，获得种间或属杂种：种间和属间杂交中，受精作用能正常完成，胚也能进行早期的发育，但由于胚乳发育不良，杂种胚最终将会夭折，因而不能形成有发芽能力的种子。
研究合子胚的胚胎发育：离体培养的胚胎发育主要与三个因素有关：接种时胚体的大小、培养基的成分、接种前在胚珠中停留的长短。
如果接种的是球形胚，就会形成很多不正常胚，因为胚越小，对培养基的成分越敏感；如果接种的是心形或心形期以后的胚，胚的发育与体内发育相似。
克服种子休眠，提早结实：植物休眠影响育种和繁育工作胚培养常常可以克服这一类种子发育上的障碍，促进胚的生长发育。
通过胚的离体培养，可使休眠期缩短。
56获得单倍体植株：栽培大麦与球茎大麦进行杂交，部分染色体被淘汰，剩余为大麦单倍体。
由于只有大麦染色体的单倍体胚生长相当缓慢，且受精后2~5天胚乳逐渐解体，自然条件下难于获得大麦单倍体。
为此，必须把幼胚剥离出来培养。
缩短育种周期，提高育种效率：蔷薇属植物的栽培品种常需1年才能开花。
从离体培养胚获得的幼苗只需2~3个月即可开花，而利用这种花作父本，1年内可产生2个世代，大大地提高育种进程。
7稀有植物的繁殖：果实成熟初期，胚尚未发育成熟，种子不能萌发，利用胚培养可对这些不育种子进行培养。
例如：Makapuno椰子、焦核龙眼。
种子生活力的快速测定：萌发试验测定休眠的种子生活力所需时间很长，必须要预先进行后熟处理，后熟的种子和后熟的种子的胚在离体培养条件下的发芽速度相同。
8诱导胚性愈伤组织：胚是人工诱导胚性愈伤组织的优良外植体。
转基因技术在基础研究和育种中的应用越来越广泛，植物的转化再生体系是基因遗传转化的一个关键技术。
植物的胚胎培养
养。
分为两种类型：授粉胚珠培养
未授粉胚珠培养
（1）胚珠培养的意义:
➢ 防止杂种胚早期败育，获得杂种植株；也为拯救 心型期胚或心型期以前的胚胎提供了新的途径。
➢ 授粉前胚珠培养，可作为试管受精的基础； ➢ 未授粉胚珠培养，能培养获得单倍体植株，用于
单倍体育种。
（2）胚珠培养方法: A、材料的选择和灭菌： 未授粉胚珠：开花前1-6天， 授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚 时期有利于胚的发育。 灭菌：先对子房或外表组织消毒灭菌后， 后取出胚珠培养。
越小，糖浓度要求越高，成熟胚，2%；而幼胚，4％甚至 更高浓度的蔗糖。如曼陀罗的前心形期胚培养要求8%的蔗 糖含量，而鱼雷期要降到%～0.5%。
氨基酸：谷氨酰胺是促进离体胚生长最有效的氨基酸； 酪蛋白水解物（CH），不同物种的离体胚对
CH的浓度要求不同 。 胚乳提取物。一般认为，八分成熟的椰乳对幼胚培养作
成小植株，因此，培养基相对简单，一般只需要大 量元素和糖即可，有些培养为了打破种子休眠也加 入一些植物激素。
水稻成熟胚培养
观赏与药用（紫杉醇） 种子有休眠特性
台湾红豆杉成熟胚培养
种子有休眠特性 （种皮与未完成 后熟的原因）
牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖
Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony
(3) 克服种子休眠
有些植物种子休眠期很长，如鸢尾（lris），一
般种子成熟后要休眠2～3年才能萌发，在培养基 上几天内种子就能萌发。 植物种子休眠的原因可能来自胚乳，因为离体胚 如果带着胚乳培养，胚的生长就受到抑制。具有 休眠特性的种子，其胚离体培养时，在培养基中 加入1～2 mg/L的赤霉素，对打破种子休眠有显 著作用。
植物生物技术-第三章 胚胎培养
单子叶植物胚的发 育
从合子至原胚的发育过程与双子叶的相似，以后只发育出一片 子叶
15Байду номын сангаас
2 、离体胚培养时，胚的发育的几种途径： （ 1 ）胚胎发育途径：幼胚经过心形期，再发育到鱼雷形期，
进而进入子叶期，最后萌发成苗。这是幼胚培养成功的途径 （ 2 ）胚性发育途径： 幼胚增大到正常大小，但不能成苗，通
过调节渗透压或Th长素可正常Th长
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（ 3 ）早熟萌发途径：幼胚从心形期发育到鱼雷形期后，不经 过子叶期直接发育成苗，即跳过某一个发育阶段，这样的幼 苗 往往很弱小，组织不健全，且难于培养成正常的植株
（ 4 ）产Th愈伤组织：幼胚培养过程中细胞脱分化产Th愈伤组 织。通过幼胚培养产Th的愈伤组织，经植株再Th同样可得到 远 缘杂种。据报道，由胚培养产Th的愈伤组织较其它外植体 容易 得到再Th植株。
方法 例如蔷薇属植物的栽培品种常需 1 年才能开花。从离体培养 胚获得的幼苗只需 2 － 3 个月即可开花，而利用这种花作父 本 ， 1 年内可产Th 2 个世代，大大地提高育种进程
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5 、种子Th活力的快速测 定 • 应用一般的萌发试验测定休眠的种子Th活力所需时间很长，必
须要预先进行后熟处理 • Tukey （ 1994 年）发现未后熟的种子和后熟的种子的胚在离
• 植物胚胎培养的定义： 是对植物的胚 ( 种胚 ) 及胚器官 ( 如 子房，胚珠 ) 进行人工离体无菌培养 , 使其发育成幼苗 的技 术
• 胚胎培养类型：胚培养、胚珠培养、子房培养、胚乳培 养
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本章主要内 容
第一节、胚培养 第二节、胚珠和子房的培养 第三节、胚乳培养 第四节、离体授粉
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本章教学目的与要求
植物的胚胎培养
表8-1 荠菜胚胎不同发育时期对营养旳需求（引自Torrey，19
胚发育时期 胚长（μm）营养要求
球形胚早期 22-60 球形胚晚期 61-80
心形胚期 81-450
不不小于40 μm旳胚对营养旳需求不详
基本培养基（大量元素①+微量元素②+维生 素③+2%蔗糖）+IAA（0.1 mg/L）+KT （0.001 mg/L）+硫胺腺嘌呤（0.001 mg/L）
植物旳胚胎培养是指对植物旳胚、子房、胚珠和胚 乳等胚胎组织进行离体培养，使其发育成完整植株 或者离体研究植物胚胎发生机理旳生物技术。
胚乳
胚 子房 胚珠
8.1 离体胚培养 8.2 植物胚珠和子房培养 8.3 离体授粉、受精与合子培养 8.4 胚乳培养
8. 1.1 离体胚培养旳概念 离体胚培养（embryo culture）指从植物种子中分
离体胚培养还可用于许多重大理论问题旳研 究，如胚胎发育过程，影响胚发育旳多种原因， 胚乳作用以及与胚发育有关旳代谢和生理变化等。
(7) 脱分化与再分化培养
以幼胚或成熟胚为外植体诱导愈伤组织，建 立胚性无性系，不但能够应用于研究体细胞胚胎 发生、分离原生质体，还可应用于植物体细胞遗 传饰变和转基因技术旳研究等。
水稻成熟胚培养
欣赏与药用（紫杉醇） 种子有休眠特征
台湾红豆杉成熟胚培养
种子有休眠特征 （种皮与未完毕 后熟旳原因）
牡丹成熟胚旳离体培养与迅速繁殖
Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony
8.1.3 幼胚培养（immature embryo culture） 是指对发育早期胚或未成熟胚旳培养，即供给一
体外受精和胚胎培养技术
体外受精和胚胎培养技术近年来，随着生殖医学技术的不断发展，体外受精和胚胎培养技术已经成为了一种常见的辅助生殖手段。
这一技术的出现，不仅给那些因疾病或其他原因无法自然受孕的夫妇带来了希望，同时也让很多人对于生殖医学的未来充满期待。
本文将探讨一下体外受精和胚胎培养技术的相关知识。
一、体外受精体外受精又被称作“试管受精”，其基本原理是将女性的卵子和男性的精子在体外组合成受精卵，然后再将受精卵移植回女性体内。
这项技术是一种辅助生殖技术，主要用于治疗输卵管不畅，精子数量或活力不足，子宫内膜异位症等导致不孕不育的疾病。
体外受精分为常规体外受精和微创体外受精两种。
常规体外受精是在女性卵巢排卵后，通过阴道壁直接取出卵子，然后将卵子和已采集的精子在体外培养皿内让其自然受精，培育出受精卵。
微创体外受精则是在女性卵泡成熟之后，用特殊的装置将精子注射进卵母细胞内进行受精。
二、胚胎培养技术胚胎培养技术是在体外受精的基础上，通过一系列的培养步骤，将卵子受精后分裂成数个细胞的胚胎培养至达到移植的标准。
这项技术是真正意义上的辅助生殖技术的标志，是人类生殖技术发展的一个里程碑。
在胚胎培养过程中，胚胎的生长状况要由专业且经验丰富的医生和医生团队监测。
目前，胚胎培养技术通常分为 2-5 天的胚胎培养和冷冻胚胎培养两类。
2-5 天的胚胎培养通常发生在体外受精后的前 5 天中，而冷冻胚胎培养是在培养和冷冻前将胚胎培养到可以移植的阶段，然后冷冻保留。
三、体外受精和胚胎培养技术的成功率体外受精和胚胎培养技术不同于自然受孕，它是一种辅助生殖技术，所以对于成功率的要求相对较高。
而这其中的成功率，很大程度上取决于患者的身体状况、技术水平、医生的经验和操作技巧等。
目前，体外受精和胚胎培养技术的成功率大致在25%-50%之间。
其中，年龄、剩余卵子数量、男性精子质量以及胚胎发育状况等因素都会影响成功率。
需要注意的是，体外受精和胚胎培养技术的成功率并不等于怀孕的成功率，因为有时候，移植后的胚胎可能会因为种种原因无法存活下来。
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1. 培养基：
White Rangwang MS B5 Nitsch
无机盐+糖(3-5%)+生长辅助物质(维生素、AA、 椰乳等)
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荠菜不同发育时期胚培养的营养需要
胚长度 胚龄 （μm）
营养需要（培养基营养）
早球形胚 20~60 小于40μm长的胚所需营养尚不清楚
后球形胚 61~80 大量元素、微量元素、VB1、VB6、烟酸、糖2%、 IL
心形胚 鱼雷胚
成熟胚
81~450 大量元素、微量元素、VB1、VB6、烟酸、糖2% 451~700 Ca（NO3）2480mg/L、KNO363mg/L、KCl
胚
（2N）
一.培养类型
1、离体胚培养时期 A.异养期 B.自养期
A.异养期，完全依赖于周围细胞中的代谢，而 且依赖于周围胚乳消耗的养料。B.自养期，胚 能吸收培养基中的无机盐和糖，经过自身的代 谢作用合成其生长所必需的物质。
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2、离体胚培养类型 ⑴成熟胚培养 ⑵幼胚培养
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2、离体胚培养类型
据培养目的不同
➢ 无机氮：
包括硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐；
➢ 渗透压：
蔗糖，8%-10%，不同发育期，渗透压不一 样，初期高（WHY）。因为自然条件下，原 胚被一层高渗液体包围着。
➢ 复杂的天然提取物：
椰乳 CM有促进幼胚生长和分化的作用
➢ 活性炭：吸附有毒. 物质
3 . 有利幼胚培养的因素
胚乳看护培养，利于原胚的生长有明显的促进 作用。 胚柄的存在对于幼胚的存活至关重要： 胚柄促进生长的活性，心形早期活性最高。而 且保留胚柄减少对胚的直接损失。
含义
❖ 将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工 环境条件下，让其进一步生长发育，以至形 成幼苗的过程。
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胚乳培养的意义
➢ 胚乳培养再生植株证明了全能性理论； ➢ 研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能； ➢ 再生植株多为三倍体，产生无籽果实； ➢ 可以从胚乳愈伤中分离和筛选各种类型的非整倍
体植株。 ➢ 胚乳细胞是研究淀粉、蛋白质和脂类天然产物代
有利，光照不利于胚根生长。
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幼胚需高无机盐、高AA、高蔗糖、高渗透 压。
液体培养基利于幼胚培养，固体培养基利 于成熟胚培养。
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2.培养条件：
A.pH值在5.2-6.3，与植物有关。 B.温度：多数胚25℃，有的需变温或较低较高
温度。 C.光照：通常弱光培养。光暗交替有利幼胚生
长
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原胚(幼胚)的培养的条件
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应用
①克服远缘杂种的不 育性。
败育
胚培养
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②使胚发育不全的植物获得后代。 ③缩短育种年限。 ④研究与胚发育有关的内外因素。
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第二节胚乳培养
1. 胚乳
X＝3（2♀极核＋1♂精子） 是营养组织，影响胚的发育。 有些植物在胚发育过程中把胚 乳消耗尽（豆科和葫芦科）； 有些植物，胚乳在成熟种子中 存在，贮存大量营养物质（禾 谷类，椰子，咖啡） .
胚胎培养
主讲教师 荣海燕
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主要内容
含义 第一节 胚培养 第二节胚乳培养 第三节胚珠和子房培养 第四节 其它生殖器官培养 复习思考题
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含义
采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中 分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一 步生长发育，以至形成幼苗的过程。
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胚 电 镜 扫 描 图 片
胚培养
剥取的离体胚发育时 期的不同
幼胚培养（子叶
形成之前）
成熟胚培养
（子叶形成以后）
成熟胚培养一般较易获得成功
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二.胚培养过程
1.幼胚培养过程 2.成熟胚培养过程
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1.幼胚培养过程
（1）子房表面消毒后，在无菌条件和高倍解 剖镜下切取完整胚，然后接种。
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适 70
%
宜 时 间 摘 取 子 房
酒 精 表 面 消 毒
离体胚 愈伤组织 胚状体或不定芽 小植株 激素浓度高 分化培养基
.
2.成熟胚培养过程
培养方法： A、将受精后成熟或未成熟种子或果实， 用70%—75%酒精表面消毒消毒几分钟 B、用0.1%升汞溶液或饱和漂白粉溶液 消毒10min，无菌水反复冲洗 C、无菌操作台上，直接或在解剖镜下 剥取胚接种在培养基上
30
%
5
次无无
氯菌菌
酸水条
钠冲件
液洗下
中数取
灭次出
菌
胚
剥 去 珠 被 取 出 幼 胚
接 种 于 固 体 培 养 基
培 养
S
10
珠
分
基本培养基：
钟
. MS Nistch White
（2）幼胚培养的发育途径
按正常胚胎发育途径形成植株 胚“早熟萌发” 脱分化形成愈伤组织
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①按正常胚胎发育途径形成植株
谢途径的理想系统。
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胚乳培养的方法
➢ 胚乳愈伤组织的建立 绝大多数经历愈伤组织阶段（器官发生），极
少数直接从胚乳直接分化器官(胚状体)。 ➢ 胚乳发育时期
发育早期的胚乳，接种不方便，愈伤组 织的诱导频率很低。
处于旺盛生长期的胚乳，离体条件下最 易诱导产生愈伤组织。
接近成熟或完全成熟的胚乳，愈伤组织 诱导频率很低。
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三、培养基与培养条件
• 成熟胚是自养的，培养基需要简单。 • 未成熟的幼胚，当它在胚囊里生长时，不仅
依赖于周围细胞中的代谢，而且依赖于周围 胚乳消耗的养料。与成熟胚的相对自养性比 较，幼胚则完全是异养的，在离体情况下， 要求更复杂的培养基。除了一般的无机盐成 分外，还要加入微量元素和各种生长辅助物 质。胚龄越小，要求的培养基成分就越复杂。
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第一节 胚培养
一、培养类型 二、培养过程 三、培养基与培养条件 四、胚培养的应用
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一、培养类型
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荠菜胚的发育过程
受 精 分裂一次 卵
子叶
顶细胞 多次分裂 球状胚体 分裂
（2N）
（2N）
分化
胚芽 胚轴
基细胞 几次分裂 胚柄 （2N） 胚根
（近珠孔）
1．吸收养料供胚发育
（2N） . 2．产生激素促进胚发育
•成熟胚 正常发育形成小苗 •未成熟胚 维持胚的生长，进行正常的胚胎发
育成熟，完成胚胎发育的全过程。
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② 胚“ 早熟萌发”
离体的幼胚在培养基上不能长出成熟胚的各种 结构，越过正常胚胎发生过程中的若干阶段， 直接长成幼苗。
畸形苗
分离变异体
未成熟幼胚
发育不正常而死（即胚性发育）
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③脱分化形成愈伤组织