第十章 分析方法的建立与考察141205
新分析方法建立的一般过程1
新分析方法建立的一般过程由于工业分析对象广泛，分析项目和测定要求是多种多样的，因此分析方法也是多种多样的。
[1]色谱法是近代分析化学中发展最快、应用最广的分离分析技术，在化学、生物学等领域发挥着越来越重要的作用，并正发展成为一门新兴学科。
现代色谱分析将分离和连续测定结合，也可以浓缩、分离、测定联用，对复杂体系中组分、价态、化学性质相近的元素和化合物进行分析。
色谱分析仍是残留分析技术发展的主流。
下面以色谱分析法为例说明残留分析方法建立的基本步骤。
1 文献检索文献检索通常仅能显示最适宜的分析方法，并提供样品处理、分离和检测方面的粗略信息。
通过查阅文献可以对以往分析方法进行比较和借鉴，了解与方法设计相关的背景资料。
这些工作对于研究者根据具体的试验条件调整、改进或新建立符合要求的分析方法都十分重要。
设计全新的分析方法时，如针对新对象或采用新技术，可以从较早发表的化学合成文献得到待测物理化性质或分离方面的原始资料，或从具有相近结构或官能团化合物的分析方法中获得某些信息或启示。
2 建立测定方法首先建立测定方法和线性范围，为各种后续工作提供分析手段，最后根据干扰和使用情况逐步确立测定条件和建立标准曲线。
3 建立样品处理方法一般采用纯水作为样品基质进行预试，目的是了解液-液萃取（LLE）或固相萃取（SPE）条件、试剂干扰和回收率情况，然后再依次用空白样品和标准品添加样品进行研究。
4 标准曲线测定条件确定后，即可配制系列浓度的标准液制备标准曲线。
至少设4个浓度，每个浓度水平设3次重复。
制备标准曲线的浓度须涵盖样品可能的浓度范围，不进行外推计算。
可以采用外标法或内标法定量。
残留样品浓度波动范围和测定误差较大，宜采用标准曲线或回归方程计算含量。
在使用过程中需每日对标准曲线进行校正。
5 稳定性试验一般包括标准溶液和样品在贮存条件下的稳定性试验，如室温、冷冻和反复冷冻—解冻条件下的稳定性。
6 分析方法评价为保证分析结果的质量，任何一种分析方法根据分析对象和要求都必须满足一定的效能指标，如准确度、精密度、灵敏度等。
药品分析方法建立及验证培训教材
分析方法验证——验证项目
参数（parameler) 专属性/特异性（specificity）
选择性（selectivity） 精密度（precision） 重复性（repeatability） 中间精密度（intermediate precision） 重现性（reproducibility） 准确度（accuracy）
开发什么方法
适用于所有分子的方法 蛋白浓度或含量
紫外/可见光光度法（基于消光系数，灵敏度低，干 扰物多）
高效液相色谱法（基于标准样校正） BCA/TCA/G250（基于标准样校正，基质有可能干
扰)
电荷概括
离子交换色谱（原始状态） 毛细管等电聚焦法（原始状态和局部变性状态）
被结构所保护的易受影响基团延缓了降解过程（氧 化、脱酰胺基、切断和聚合）
完整结构使得分析方法很难检测到内部的变化
在某些分析中保持三维结构是很重要的（如SEC）， 但在其他一些分析中则需拆开折叠结构（如变性凝 胶电泳）
方法开发考虑
如何解释不是针对完整分子而是针对裂解部分所进行的 检测而获得的数据
生物制品需要多项检测来检量其多种特性，如电荷、 分子大小等
如果一个分子包含多种修饰，则它将被多次计算， 但是降解的分子仍然只有一个
所以不同检测所得到的值是不能累加的
方法开发考虑
很多时候，峰并不能达到基线分离 可容许实验误差较大 定量限较高
对于所要分析的蛋白质物种，通常无法获得纯的样品 用来进行加样/回收的物质是所要分析的蛋白质物种
分析方法验证——验证项目
验证项目 ChP
准确性 精密度 耐用性 线性 范围 专属性 检测限 定量限
鉴别试验 杂质定量
分析方法的建立 PPT课件
Isocratic vs. Gradient 等度 VS. 梯度
Method Development 方法开发 – Initial Chromatographic Conditions Initial 色谱条件
– HPLC Mobile Phase 流动相
Strong solvent component: 强溶剂组份 Methanol 甲醇 Acetonitrile 乙腈 Tetrahydrofuran 四氢呋喃
Weak solvent component: 弱溶剂组份 Water 水 Buffer 缓冲液 Diluted acid (0.1% H3PO4)
紫外光谱 Process impurities
工艺杂质 Possible degradation impurities
可能的降解杂质 Literature References
参考文献 MSDS – Material safety data sheets
安全数据表
Method Development 方法开发 – Resource Planning & Gathering 资源计划收集
Pore size, Surface area, End capping 孔径，表面积，封尾
Method Development 方法开发 – HPLC Column色谱柱：考考你 ???
Particle Size 粒径Length长度 Expected N 要求
3.5 µm
5 cm
4200
3.5 µm
Solvents and reagents 溶剂和试剂
(完整word版)色谱分析方法的建立
色谱分析方法的建立第一部分色谱法系统的选择与应用第二部分气相色谱法的建立第三部分液相色谱法的建立第一部分色谱法系统的选择与应用第一章气相色谱法的特点第二章高效液相色谱法的特点第三章气相色谱和液相色谱的比较第四章分析条件的确定第五章样品的制备第六章定量第七章仪器选购的原则第二部分气相色谱法的建立第一章前言第二章色谱分离条件选择的指标第三章初始操作条件的确定第四章填充柱的选择要点第五章毛细管柱的选择第六章检测器操作条件的选择第七章程序升温操作条件的选择第三部分液相色谱法的建立第一章结论第二章分离的基础第三章检测灵敏度与选择性第四章色谱柱第五章反相HPLC第六章梯度洗脱第七章常规样品反相分离的系统方法第一部分色谱法系统的选择与应用第一章气相色谱法的特点1，色谱柱内现象单纯，可以从理论上理解.2,若用非极性柱，组分按沸点顺序流出.因此，在分配气相色谱法中，若已知化合物，则可预测流出顺序。
3,能较容易地制备具有高分离能力的色谱柱，并可在较长时间内保持稳定的性能。
4，因为移动相是气体，其粘度小，所以增加色谱柱长度可改善分离能力.5，样品组分在固定相和移动相中易扩散，能迅速达到分配平衡，故可提高移动相的流速以缩短分析时间。
6，检测惰性气体中的样品组分时，可以使用各种高灵敏检测器，所以能做极微量分析和特定组分的高灵敏度的选择性检测。
7，使用通用型检测器时，可以预测注入样品在多大程度上能作为色谱峰流出并被检测，所以分析的可信度高。
在不要求精度时，也可以把峰面积百分数近似作为组成百分数，进行快速定量分析。
8，容易与质谱仪或付里叶变换红外光谱仪联用，便于多组分混合物的分离和鉴定.9,适于分析的物质仅限于在某种形式下为热稳定的挥发性物质。
所以从全部化合物来看，适用范围较窄，约为20%。
10，用选择性检测器做微量分析时，样品必须经过前处理以除去干扰组分.第二章高效液相色谱法的特点1，适用样品范围广，80%的分析对象可借此法分析。
HPLC分析方法的建立与开发ppt课件
（2)硅氮型（=Si-N=）共价键合固定相
（3）硅烷化（≡ Si-O-Si-R）键合固定相
使用键合固定相应注意的问题 ♫ 硅胶键合相的稳定性 ♫ 键合相色谱分离的重现性 ♫ 键合相色谱分离的选择性 ♫ 键合相色谱柱的再生
ppt课件.
化学键合相色谱法
ppt课件.
ppt课件.
固定相
化学键合固定相 方法：通过化学反应将有机分子键合在载体表面形成
柱填（约有3/4以上分离问题是在化学键合固定相上进行） 特点：稳定、流失小、适于梯度淋洗 分离机理：兼有吸附、分配两种分离模式。化学键合
的表面覆盖度决定哪种机理起主要作用。对多数键 合相来说，以分配机理为主。
ppt课件.
此溶剂的选择对分离十分重要。
1、 理想的溶剂应有下列特性
1）化学稳定性好，与固定相不互溶、不发生反应
2）必须和检测器相适应
★使用UV检测器时，溶剂截止波长要小于测量波长
★使用折光率检测器，溶剂的折光率要与待测物的
折光率有较大差别
ppt课件.
3）对待测物具一定极性和选择性 4）高纯度。否则基线不稳或产生杂峰，同时可使截
正相色谱和反相色谱
反相色谱的定义：在非极性的固定相上，用极性较大 的液体作流动相进行物质分离分析的方法。即：反 相色谱中键合固定相的极性要小于流动相的极性
正相色谱的定义：在极性的固定相上，用极性较小的 液体作流动相进行物质分离分析的方法。即：正相 色谱中键合固定相的极性要大于流动相的极性
ppt课件.
ppt课件.
硅胶-烷基键合相中烷基链长对反相色谱分离的影响
固定相：C1
固定相：C8
固定相：C18
时间，min
分析方法建立的基本思路
分析方法建立的基本思路摘要：专属信息表现为其他成分，比如杂质、降解产物、辅料等采取的分析方式，能够正确检验被检测物的能力，这种意识表现为被检测物。
基于其他成分的干扰之下获取准确的数据，除了被检测物之外，其他所有的成分都是干扰源。
文章中以含量检测举例说明，被检测物是组成分除此之外，供试品溶液中的一切其他成分都是干扰，包含了残留溶剂、无机盐等研究不可能覆盖全部的可能性，只需要研究高风险因素即可，辅料和有关物质都是专属性的高风险因素。
在本篇文章中主要论述了分析方式建立的基本思路。
关键词：分析方式；基本思路当前阶段，分析方式可以把混乱、无序、零散的想法转变为条理清楚的结构性思路，为有效展开数据分析提供良好的依据。
就比如建房子一样，在施工之前，需要制作房屋的设计图，只有制作了设计图以后才可以创建出好的房子。
其中，分析方式包含了逻辑数分析、多维度拆解分析、对比分析和假设检验分析等。
在具体应用过程中，可以将这些分析方式结合到一起应用，确保分析过程的完善性。
1、概念根据分析方法学验证各项目的定义及其要求专属性是指可能存在某些组分如杂质、降解物、基质等时，对被分析物准确可靠测定的能力。
其中，专属性有以下含义。
分别是鉴别：确证被分析物符合其特性。
纯度检查：确保采用的分析方法可检出被分析物中杂质的准确含量，具体包含了物质、重金属、溶剂残留量等。
含量测定：提供样品中被分析物的含量或效价的准确结果。
专属性需要明确注意事项：第一，定位分离试验。
②主峰峰纯度的确定。
在专属性验证的相关实验中，主成分峰需要考察峰纯度，明确主成分峰为单一成分的峰。
具体做法是采取DAD检测器进行峰纯度扫描或者用LC-MS确认没有其他成分。
②稀释剂。
应考察稀释剂对被测物的干扰，空白稀释剂出的峰应不干扰被测物。
具体做法是按照质量标准规定的进样量进样空白稀释剂，记录色谱图。
③辅料。
取出质量标准规定量的供试品中等量的空白辅料，依照规定要求进行分析处理，记录色谱图，空白辅料峰应不干扰被测物。
分析手法的建立
一、主旨：工程师于自己担当工程常遇到许多问题点，如何快速有效将问题点掌控，迅速区分重要、不重要；紧急、不紧急，常使工程师困扰，以下就此作探讨。
二、说明：1.主题选定：生产运作持续进行，故障问题点多发。
工程师常遇倒是主管要求不良尽速对策并消除，但往往是不知重点为何，变成每一项都去关照，都想去一次解决却适得其反，无法在有限的时间内将重点完成。
注意当您无法在限期内完成长官交办事项，即使其它拉拉杂杂(强调虽然也要做、也必须做)做了再多，您当下的绩效是零。
所以现况掌握包含两个意义，一是工程内的重大不良或突发或信赖性相关这当然是工程师必须要去解决，且是您职责所在，责无旁贷。
(本文主要是针对此部份)；一是长官们觉得紧急须马上处理，这哩为何不强调重要，一般而言上级觉得紧急主要是就其多年经验认为重要，判断若不注意处理可能会因小失大，偷鸡不着蚀把米，故下令须限期内完成。
若是您疏忽而未加注意且是重要当然回前述第一点须马上处理，若真得是依您专业的素养判断不重要，这时对工程师、中间主管均是一考验，如何说服主管是一们学问，一般主管英明的多但肯马上承认自己错误的少，如何让两造双方都有台阶下且又不浪费太多时间，是艺术也是一们学问。
做工程均相信数字会说话，您必须仅可能搜集数据或以前的流品或有力人证，依此作说明强调(1)一直都有不是突发(2)无信赖性问题(3)比例趋势同之前，做完上述说明后切不可幸灾乐祸一副看笑话的表情，须表示这个问题是 good question会日后有时间再针对学理、实际做验证。
如此不但解决且做得漂亮，一、二次过后获得主管的信任类似问题将愈来愈少，大忌是他急您不急且又不作说明，将造成双方互信亦加薄弱，你两将时常处于火爆边界，于事于身体均无补。
切记！切记！回到最初的问题点如何从重点工作下手，一般大多以柏拉图(此为意大利学者命名为一经济专家，一开始是用其于收入金额与人数关系上)将重点比率突显出，即是从效果大地方着手，如同打蛇须打七寸处，虽可能因经验、武器、环境等主客观影响无法直接命中，但总要朝对的方向着手。
《分析方法标准知识》课件
分析方法标准制定和实施的经验和教训
01
经验
02 分析方法标准的制定和实施需要充分调研和论证 ，确保标准的科学性和实用性。
03 加强与国际先进标准的对接，提高我国分析方法 标准的国际竞争力。
分析方法标准制定和实施的经验和教训
• 建立完善的标准制定和实施机制，确保标 准的及时更新和维护。
《分析方法标准知识》ppt课 件
目录
CONTENTS
• 引言 • 分析方法标准基础知识 • 分析方法标准的应用 • 分析方法标准的制定和实施案例 • 总结与展望
01 引言
CHAPTER
目的和背景
目的
介绍分析方法标准知识，提高分析人 员的技术水平和分析结果的准确性。
背景
随着科技的发展，分析方法在各个领 域的应用越来越广泛，掌握分析方法 标准知识对于分析人员至关重要。
VS
分类
根据分析原理和应用领域，分析方法可分 为无机分析和有机分析、常量分析和微量 分析等。
分析方法标准的制定和实施
制定
分析方法标准的制定需要经过科学验证和实践检验，确保方法的准确性和可靠性。
实施
实施分析方法标准需要遵循标准规定的操作步骤、仪器设备、试剂材料等要求，以确保结果的准确性和可比性。
分析方法标准的更新和修订
02
03
产品检验与验收
持续改进
在产品出厂前进行质量检验，确 保产品符合相关标准和客户要求 。
通过分析质量数据和反馈，不断 优化生产工艺和分析方法，提高 产品质量和稳定性。
分析方法标准在环境保护领域的应用
污染物排放检测
对工业排放的废水、废气和固体 废弃物进行检测，确保符合环保 标准和排放要求。
《分析方法》PPT课件
精选课件ppt
6
（1） 铁光谱比较法
注意：判断某元素是否存在，必须检查该 元素2条以上不受干扰的最后线或灵敏线 。
思考：为什么要以Fe谱作标尺（波长标尺 ）？
答：Fe谱线丰富（有数千条）、均匀（强 度及间距）、每条谱线波长已知。
精选课件ppt
7
（2） 标样光谱比较法
判断样品中某元素是否存在，可 将该元素的纯物质或其化合物与样 品并列摄谱于同一谱板（此时不用 铁谱），于映谱仪上检查该元素是 否存在。
精选课件ppt
10
三、光谱定量分析
谱线的自吸与自蚀
在一般光源中，是在弧焰中 产生的，弧焰具有一定的厚 度，如图：
精选课件ppt
11
谱线的自吸与自蚀
弧焰中心a的温度最高，边缘b的温度较
低。由弧焰中心发射出来的辐射光，必
须通过整个弧焰才能射出，由于弧层边
缘的温度较低，因而这里处于基态的同
类原子较多。这些低能态的同类原子能
loR gblocg K
三标准试样法
光电直读光谱法，该式为：
lgU =lgU-lgU0=blgc+lgA 摄谱法，该式变为：S = S-S0 = blgc + lgA
即以 S 或 lgU 对 lgc 作图，可制作标准曲线
，并求得浓度值。
精选课件ppt
19
3.光谱定量分析方法
（2）标准加入法
cx, cx+c1, cx+c2 , cx+c3 , … , cx+ci loR gblocg K R
中某一个被测元素含量近似相等的判断。
精选课件ppt
9
三、光谱定量分析
1. 赛伯－罗马金公式
第一讲：分析方法
∙要素比较法∙评分法∙因素比较法∙因素评价法要素比较法要素比较法（Factor Comparison）是一种比较常见的工作评价数量方法，也是难度较大的一种评价方法。
具体办法和步骤如下：第一步，提供工作信息。
该方法需要细致和完备的工作分析。
包括：对评估委员会进行评估的各要素进行描述和说明，这些要素可以称之为要素指标。
通常包括：智力要求、体力要求、技能要求、责任和工作条件等方面。
第二步：选择标准工作。
有工作评定委员会选择15~25个关键的、有代表性的工作（工种）。
以这些工作作为工作分级和排序的依据。
第三步：把工作要素指标排序。
例如，把选择出来的5个要素指标排序。
排列的依据是对工作的描述和工作种类。
实施中，每个评为单独对工作要素进行评分和排序，然后将所有评委的结果综合起来。
（见下表）工作要素评价各工种对各要素指标的要求不同，权数也不同。
例如，一般操作工的体力要求较高，但智力要求较低；而一些工作人员的责任重大，体力要求相对较低。
第四步：分要素的配置工资率。
工资率确定是依据5个要素值确定的，一般来讲，一些关键性工作，要素值高，工资率相对也高，下表是西方国家一般性劳动者（以体力劳动为主）的要素小时工资率：工作要素与小时工资率第五步：按照配置给每个要素的工资值进行工作分级，见下表：不同工种工资率及其要素构成单位：美元第六步：将所有的步骤综合在一起，就构建成一张工资要素级别比较表。
该表显示不同种类工作，因为工作要素的地位不同，或者说要素值和价格相同，会有同样的工资率，如下表所示：工资要素级别比较表评分法评分法也称点数法，是目前大多数国家最常用的方法。
这种方法预先选定若干因素，并采用一定分值表示某一因素。
然后按事先规定的衡量标准，对现有岗位的每个因素逐一评比、估价、求得分值，经过加权求和，最后得到各个岗位的总分值。
在实际实施中，大多数评分法方案都是借鉴几个著名的传统方案，并根据具体情况加以调整来制定的。
其中一个方案曾在30年代末，在美国两个有影响的行业委员会“全国电气制造协会”（NEMA）和“全国金属贸易协会”（NMTA）中实行，而至今经过某些修改仍在很多企业使用。
4.1 分析方法的设计和建立-素材
❖体内药物分析方法的选择依据 ❖体内药物分析方法建立的一般步骤
一、分析方法的选择
1、色谱分析法 主要包括气相色谱法（GC）、高效液相 色谱法（HPLC）、毛细管电泳法 （CE）、色谱-质谱联用法（LC-MS， LC-MS/MS，GC-MS，GC-MS/MS）等。
色谱法具有较高的灵敏度、准确度和准 确性，可用于大多数小分子药物的检测。
代谢产物在人或动物体内浓度随时间的变化，
要求方法具有较高的特异性和灵敏度（10-
9g/ml以下）；同时还要求检测方法具有较宽
的线性范围。因此，
分析方法的选择上多 Cmax
采用准确、灵敏、具
有分离分析功能的色 谱及其联用技术。
Cmax的 1/20
⚫临床治疗药物监测：药物浓度通常为有 效治疗浓度范围，要求及时得到浓度并 反馈到临床，在分析方法上更注重简便、 易行、快速、自动化，以适用于长期、 批量样品的测定；同时，临床患者普遍 有合并用药的现象，分析方法应具有更 好的特异性和选择性，常选用免疫法、 光谱法。
空白生物介质 待测药物的标准工 作液
空白生物介质 独立配制的待测药 物标准工作液
标准样品（calibration standard），至少6个浓度
质控样品（Quality control， QC），高、中、低三个浓度
3. 实际样品的测试 在分析方法初步建立后，需要进行实际生物 样品的测定，进一步验证方法的可行性。如 果不符合要求，则需对以上各步骤做进一步 改进，包括预处理方法、分析测定条件，甚 至改变整个测定方法。
3、生物学方法 生物学方法（如微生物学方法）常能反映药效
学的本质，可用于抗生素类药物的体内分析 。 但生物学方法一般特异性较差，常需采用特异 性高的方法（如色谱分析法）进行平行监测 。而对于多组分及体内存在活性代谢产物的 抗生素的体内分析宜用色谱分析法。
分析方法最新课件
实现
既存累 的重用
渐进式 的实现
测试 实例
求精和 维护
分析方法最新课件
渐进式 的测试
三、应用开发过程
分析阶段 高层阶段 类的开发 实例的建立 组装测试 维护
分析方法最新课件
1.分析阶段 分为2个步骤：论域分析和应用分析 论域分析是抽象的和开放的 应用分析是对论域分析结果的细化和选择 2.高层设计：设计应用的顶层视图 3.类的开发：是开发的主体 4.实例的建立：建立个对象的实例 5.组装测试：将各个类和对象作为完整的应用系统
将面向对象思想和方法引入系统设计，形成面 向对象的设计；
将面向对象思想和方法扩展到系统分析，产生 了面向对象分析。
分析方法最新课件
2.面向对象的开发方法
Booch方法（1983年） 提供了基本的对象认定方法－基于词法分析：名词映射 为对象；动词映射为方法。
Coad方法（1989年） 形成了完整的OOA和OOD,但没有明确类的概念。
语义数据模型非常类似于关系数据模型，分为外 部模型、概念模型和内部模型
外部模型体现了用户对问题的理解，在这一层主 要用类对应用户活动的操作规格说明
概念模型主要表现实体间的关系 内部模型定义类的数据和服务
分析方法最新课件
在语义数据模型中的关系
一般化 通过检查一组概念，识别这组概念的共同元素来实 现
分析方法最新课件
7.示例
传感器控制系统 P94-95
分析方法最新课件
4.4 OMT分析方法
一、OMT方法的发展 二、三种模型介绍 三、OMT方法的分析过程
分析方法最新课件
一、OMT方法的发展
Object Modeling Technique是一套系统开发 方法，通过对象模型、动态模型和功能模型3个相 关模型来获得关于问题的全面认识。
《分析方法概述》PPT课件
已知对照试验
B．定量验证 * 方法目的 以空白溶剂为零，将已知品溶液 按 一定间隔，从少到多制备一系列梯度溶 液，分 别进行测定。考察测得值与已知量 之间的函数 关系是否适用于测定。 * 单纯已知品试验（不经分离净化等过程） 对 方法本身进行验证。包括定量函数关系、 测定范围、检测限、准确度、• 准确度 指多次测得值的平均值与真实值 之间相互接近的程度。两者之间的差值称 “误差”。误差小的方法，准确性高。 精密度好，说明测定的重现性好；但精密 度好，并不能说明准确度就好。准确度好 而精密度差，凭一、二次测定也很难的出 可信的结果。 测定方法两者都必须达到一定要求。
已知对照试验
* 单纯已知品试验（经过分离净化等过程） 验 证包括前处理过程的整套方法是否适用于测 定。 * 空白模拟材料经分离后加已知品 验证检材处 理过程中是否引入干扰因素及对测定结果的 影响。 * 先将已知品加入模拟材料，再经过完整的检 验过程。对整个方法实行验证。 * 多种毒物同时存在的试验 验证相互之间有无 干扰。
空白试验（空白对照试验）
A．单纯性空白试验 * 方法 不用模拟检材，只加试剂，操作与实际方法同。 * 用途 验证所用试剂或操作的可靠性。 B. 模拟空白试验 * 方法 用模拟材料做检材的空白试验。 * 用途 验证是否有来自检材的干扰物。 C.干扰物空白试验 * 方法 在上述两种空白试验的基础上，加入性质与待 测物相近似的物质或可能产生干扰的物质。 * 用途 验证所用方法是否能区别待测物和干扰物。
2.准确性
定性认证准确性 测值的准确性
精密度 准确度
* 认证准确性 指检材中确实存在，且应该能检识 的药毒物或其代谢物（有一定量，有方法），必 须能得到认定，并证实不是别的物质。 * 精密度 指多次测得值之间相互接近的程度。常 以多次测定值的标准差（RSD）表示，其值越小， 精密度越高，说明每次测得值与平均值越接近。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
通过组份自蒸馏水中的萃 取试验可获得以下信息： ①初步确定合适的萃取条件(萃取溶剂种类、 用量、水相 pH，以及挥干、浓集的条件 等)；②考察萃取过程中使用的溶剂、试剂 的纯度是否合适；
由此可初步获得以下信息：
①药物、代谢物和内标分离所需的色谱条件； ②合适的检测器和检测波长；
③药物、代谢物和内标进样量与响应值(峰高
或峰面积)的关系，大致了解最低检测量和所 需加入的内标量。
萃取条件的选择
药物等组份自蒸馏水中的萃取试验
选择合适的萃取方案时，可先考察组份自
蒸馏水中的萃取情况，具体方法是将几种组份
③初步了解被测组份的萃取回收率。
药物等组份自血浆中的萃取试验
将各组份(药物、代谢物和内标)同时加入 空白血浆中混匀使成一定浓度，然后按照前 面试验时确定的萃取方法和色谱条件作预处 理后进样分析，观察色谱图上的组份峰和杂 质峰情况。
通过上面被测组份自血浆中的萃取试验， 可获得以下信息： ①确定被测组份自血浆中萃取时合适的萃 取条件和分析时合适的色谱条件； ②考察被测组份自血浆中的萃取回收率；
无论从人体或动物体内获得的样品，内含 药物浓度通常都很低，而可采取的样品量又很 少，供分析的样品量相应受到限制，加之一些
样品内药浓波动范围又很大，所以测定低药浓
样品时对分析方法的灵敏度要求较高。
目前生物药物分析中常用的分析方法有光谱 法、色谱法和免疫分析法等三大类。具体选 择分析方法时，除强调分析方法的灵敏度外，
10.2 仪器分析方法的方法学考察 （1） 提取条件的选定
方法：
冷浸、热浸回流、索氏提取器提取、超声波提取等
提取液的取舍：
①取全量，即充分洗净残渣，并将洗涤液合并于提取液中； ②取一定量，即在提取前精密加入定量溶剂，称重，提取后， 再补充提取过程损失的溶剂，摇匀，过滤。精密吸取一定 量的提取液，进行含量测定，最后结果按相当的样品量计 算，即得。
度。特别是气相、液相色谱分析更应注意
此点，以提高分析准确性并可保护色谱柱。
（3）测定条件的选择
如比色法、高效液相、薄层扫描法中最大吸
收波长的选择，液相色 谱法中固定相、流动 相的选择，薄层扫描法层析与扫描条件的选 择、高效毛细管电泳法缓冲液、毛细管柱、 电压的选择等。
(4)空白试验
在色谱法中常用阴阳对照法，即以被测成分或药 材与除去该成分或该药材 的成药作对照，可考察被测 成分的斑点(或峰)位臵是否与干扰组分重迭，以确证 测定指标(如吸收度、峰面积)是否仅为被测成分的响 应，防止假阳性的误判。紫外分光光度法或比色法中 的空白对照液常见的有溶剂空白、试剂空白(溶剂加显 色剂)，对复方制剂也须同色谱法做阴性对照，确证吸 收度仅为被测成分的响应。对单一成分或大类成分测 定，均须做此试验。
提取条件的确定
—般要有不同溶剂、不同提取方式、不同 时间以及不同温度、pH值等条件比较而定，可
参考文献，重点对比某种条件，也可用正交试
验全面优选条件，再配合回收率试验或与经典 方法比较，从而估计方法的可靠性。
（2） 分离纯化
根据被测成分的性质，采用一定方法， 排除干扰物质，使供试样品达到一定纯净
第十章 分析方法的建立与质量控制
主要内容：
10.1 分析方法的选择和建立
10.2 仪器分析方法的方法学考察
① 提取条件的选定 ② 分离纯化 ③ 测定条件的选择 ④ 空白实验 ⑤ 标准曲线的制备 ⑥ ⑦ ⑧ ⑨ ⑩ 测定方法稳定性试验 精密度试验 重复性试验 检测灵敏度及检测下限的测定 回收率实验
10.1 分析方法的选择和建立
建立分析方法前应了解的内容
被分析物的主要理化性质（如药物的极 性、酸碱性(pKa)、溶解度、稳定性，以
及对光的吸收或荧光性质等 ）；
药物体内存在状况、体内代谢以及主要 药代动力学参数, 药物是否呈葡萄糖醛酸 结合物形式存在等；
分析方法应用的目的：
度 ) 的方法，不强调快速、简便，但要求有较 高的灵敏度和准确度；
③初步了解可测定的最低血浆药浓。
标准曲线建立与样品测定
当确定了合适的萃取条件和色谱条件之后， 可将定量的被测组份 (药物、代谢物)标准品加入 空白血浆中混匀，配制成一组(5～6个)呈梯度药 浓的标准血浆样品，若采用内标法定量，还应于 各份中加入等量内标，混匀后按照前面确定的预 处理方法和色谱条件分析，建立标准曲线，并同 时分析一批真实样品，为后面的分析方法评价积 累一些实验数据。
移植或改进现有文献方法— 此为经常面
临的任务，可参照文献报道的方法并根
据现有的实验条件直接引用，或只需稍
加改进后使用。
完全由分析工作者建立新方法
了解现有分析方法情况以供借鉴和参考， 查阅文献与熟悉文献是十分必要的。文献资 料除检索国内期刊外，便捷的方法可查阅分 析文摘(analytical abstracts)，可获得足够的 信息供参考。虽然建立一种全新的分析方法 尚无资料可供借鉴，但文献报道的其他化学 结构相近或主要官能团相同的药物，它们使 用的分析方法也可供参考
①应用于新药体内研究(如药代动力学、生物利用
②应用于常规治疗药物监测的分析方法，则在具 有一定准确度和灵敏度基础上，应着重强调快 速、简便，以便及时为临床提供药浓数据。
分析方法的选择
一般而言，生物样品中被分析成分浓度高低是首要因 素，选择的分析方法具有的灵敏度必须与样品中药物浓度 相适应(几种分析方法的灵敏度比较见下图)。
色谱条件的选择
若分析的对象是药物和代谢物，则取药 物和代谢物纯品适量，若采用内标法定量， 还需取内标适量，分别将药物、代谢物和内 标用适当的溶剂溶解后直接进样，参照文献 或自行拟定的色谱条件进行层析。根据层析 情况，调整色谱参数或流动相组成，必要时 还应更换色谱柱，使药物、代谢物和内标在 色谱图上有合适的保留时间且峰形尖锐、对 称，并且各峰之间完全分离。
还应考虑各种分析方法的其他特点(如选择性)，
以及现有仪器、设备条件等，即应综合各方 面因素后确定应选择的分析方法。
分析方法的建立
各类分析方法的建立过程有一定差异。在
前面介绍的三类分析方法中，光谱法应用较少， 且前面已经介绍，而免疫分析法一般是使用商品 化的药盒，只要使用质量有保证的药盒并注意正 确使用，即可得到满意的分析结果。本章着重以 色谱法 (HPLC、GC) 测定血浆样品为例，说明 建立分析方法的主要步骤和应当注意的问题。