细菌染色技术 ppt课件

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染色过程
涂片
干燥
固定
水洗、吸干
镜检
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染色
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细菌基本形态结构
➢ 基本形态
球菌 杆菌 弧菌
➢ 特殊结构
芽孢：枯草杆菌、破伤风梭菌 荚膜：肺炎链球菌 鞭毛：变形杆菌
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标本处理
➢ 痰液：用无菌棉签挑取干酪样或脓性痰部分0.05-0.1ml，
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三、结果:
阳性菌——紫色 阴性菌——红色
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固定
初染 媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP”
（Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“G¯”或“GN”
（Gram’s Negative）表示。
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细菌染色技术
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细菌染色方法
燃料与细胞 结合而染色
细菌染色
活菌染色
死菌染色
正染色
负Leabharlann Baidu色
细胞不染色 而背景染色
普通染色
特殊染色
简单染色法 复杂染色法 芽孢染色法 荚膜染色法 细胞壁染色法
抗酸染色 革兰氏染色
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常用的染色方法
革兰染色：最经典常用；革兰阳性、阴性菌；初步
酸性染料:显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。
通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染料有伊红、 刚果红等。
复合染料（中性染料）：是碱性染料和酸性染料的复
合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝）、姬姆萨染料(伊红天青)等；
荧光染料：如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。
用于某些特殊的染色技术。
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二、步骤
标本处理
涂片固定
结晶紫初染
碘液媒染
乙醇脱色
复红复染
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用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystal violet)。 媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和力或附着力， 即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落。 不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不 能，脱色剂常用95％的酒精(ethanol)。 复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的 目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色 的细胞仍然保持初染的颜色，常用的复染液是番红。
涂于载物玻片右2/3 处，均匀涂抹成卵圆形痰膜（约2cm 长),每张玻片只涂一份标本。
➢ 脓液： 同痰涂片法。
➢ 病灶组织或干酪块等：先用组织研磨器磨碎后再行涂片。
大小、厚度同痰涂片。
➢ 体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉渣涂片。
大小、厚度同痰涂片。
➢ 脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。
➢ 大便：取粘液便或者血便少量均匀涂布玻片，不可过厚。
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标本处理注意事项
➢ 标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避免标本涂布不 均影响结果判读，或使染色不均造成阴阳不定。
➢ 标本涂布不能过厚，影响染色效果。 ➢ 体液标本应浓缩集菌后取沉渣涂片。
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脂溶性染料 如Sudan black。
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染色方法的分类
1.单染法:采用一种染料染色 如用美兰或稀释石炭酸复红等，使各种细菌均染成同
一种单一的颜色。故此法只能显示细菌的形态及大小，对 细菌的鉴别价值不大。
2.复染法（鉴别染色）:
采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使 不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的 颜色，以便鉴别细菌。
四、影响因素
1.操作：
➢ 涂片的厚薄，不宜过厚 ➢ 染色时间的把握，尤其是脱色时间，脱色不宜过度 ➢ 固定过程不可用酒精灯直接加热，避免过热使菌体变性而影
响染色效果。
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2.染液
染液用完后应及时盖上盖子，以免挥发影响染色效果
3.细菌因素
➢ 被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会 影响染色结果，如培养时间过长革兰阳性菌可能染成阴性， 所以被检菌的菌龄一般最好在18~24h之内。
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革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄 色葡萄球菌 x 1000)
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革兰氏阳性链球菌例子
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革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌
x 1000)
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革兰氏阴性弧菌例子
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革兰氏阳性产芽孢杆菌例子
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普通染色法
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革兰染色法（Gram Stain）
是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是由丹麦细 菌学家 Christian Gram氏于1882～1884年发明的，至今 已逾百年，仍在广泛使用，是细菌学中最为经典的染色方 法。
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一、原理
细菌经结晶紫初染染成蓝色。G+菌细胞壁肽聚糖层数多， 且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密， 染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而G-菌细胞壁脂类含 量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解， 使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色 为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
识别特殊形态
抗酸染色：抗酸性、非抗酸性细菌；用于结核病、
麻风病等
荧光染色：敏感性强、效率高、易观察；用于结核
分枝杆菌等
其它：鞭毛染色鞭毛有无、位置、数量； 异染颗粒染色白喉棒状杆菌； 荚膜染色
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常用燃料
碱性染料 带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。常用的染
料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。
➢ 某些细菌存在染色困难、不易脱色等情况，可能会出现 染色不均，阴阳不定的现象。
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五、临床意义
➢ 鉴别细菌：
用革兰氏染色法可将所有细菌分为阳性与阴性两类，可初步识别细菌， 以利进一步鉴定。
➢ 选择药物：
可根据革兰氏染色性的不同，供临床初步选择用药方向。
➢ 与致病性相关：
大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致 病物质为内毒素。由此，可采取有针对性的治疗方案。
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革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特 菌 x 1000)
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革兰氏阴性弯曲菌例子
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革兰氏阳性棒状杆菌例子
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