细菌染色技术 ppt课件
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微生物学实验细菌的简单染色和革兰氏染色(共7张PPT)
微生物学实验细菌的简单染色和革兰氏染色
二、实验原理
1、细菌的简染色原理
①细菌菌体微小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须通过染色来增加菌体的显示力， 从而更清楚地观察到其形态和结构。 ②在碱性、中性或弱酸性溶液中，细菌菌体通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染 色局部带正电荷〔酸性染料的染色局部带负电荷〕，因此，碱性染料很容易与菌体结合而是菌 体着色。
2、细菌革兰氏染色的原理
G+菌和G-菌的细胞壁结构和组成有较大的区别。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小， 通透性降低，结晶紫-碘复合物被滞留在细胞内，因此细菌仍保存初染时的颜色，经番红复染后呈蓝紫 色。 G-菌细胞壁的外膜层富含类脂，而且其肽聚糖层次薄、交联度低；乙醇脱色时，细胞壁因类脂被 溶解而出现较大缝隙，使得菌体内的结晶紫-碘复合物较易渗出，而使菌体变成无色，再经番红 复染就成为红色。
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二、实验原理
1、细菌的简染色原理
①细菌菌体微小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须通过染色来增加菌体的显示力， 从而更清楚地观察到其形态和结构。 ②在碱性、中性或弱酸性溶液中，细菌菌体通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染 色局部带正电荷〔酸性染料的染色局部带负电荷〕，因此，碱性染料很容易与菌体结合而是菌 体着色。
2、细菌革兰氏染色的原理
G+菌和G-菌的细胞壁结构和组成有较大的区别。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小， 通透性降低，结晶紫-碘复合物被滞留在细胞内，因此细菌仍保存初染时的颜色，经番红复染后呈蓝紫 色。 G-菌细胞壁的外膜层富含类脂，而且其肽聚糖层次薄、交联度低；乙醇脱色时，细胞壁因类脂被 溶解而出现较大缝隙，使得菌体内的结晶紫-碘复合物较易渗出，而使菌体变成无色，再经番红 复染就成为红色。
〔 〔涂使混乙。乙。3直倾结右右G在 倾直5菌〔染倾G在②荷先结〔将①②荷右直将先将乙。2〔 m 〔 〔 水 〔〔、、++菌匀醇醇至去晶区区细去至体1色去细在〕用晶三玻细在〕区至染用玻醇三2、菌菌片〕固 水2415洗3i体 并 脱 脱 流 染 紫 — — 胞染 流 尚 时 染 胞 碱 ， 低 紫 区 片 菌 碱 ， — 流 好 低 片 脱细细〕n区定 洗涂〕染〕〕〕不固涂色色下液、——内 液下未间液内性因倍、：置菌性因—下的倍置色〕胞胞。；： ：片：枯定成时时的，碘大大， ，的成1，，、此镜碘左于体、此大的涂镜于时媒色复壁壁易初枯用 倒—-脱2于薄，，水用液肠肠因 用水熟用因中，找液区玻微中，肠水片找玻，倾左中中染m燥夹 去—染过载膜细细为洗、杆杆此 洗为或洗此性碱到、片小性碱杆为放到片细—染燥i肽肽色n子 染“去区。三玻〔胞胞无瓶菌菌细 瓶无菌瓶细或性视架而或性菌无空视架胞99—。及。聚聚厚夹 液55。及区片注壁壁色自区区菌 自色体自菌弱染野上透弱染区色气野上壁苏。%%—加染糖糖住 ，固滴〞，上：因因为载〕〕仍 载为过载仍酸料后，明酸料〕为中后，因云酒酒将 镜层层—载用卢将液涂。涂类类止玻。。保玻止老玻保性很，加，性很。止晾，加类金精精定加厚厚否玻 洗玻 检片苏片脂脂。片存 片。，片存溶容再适在溶容。干再适脂芽、、戈玻且且，片 瓶蕃。法那不被被的初 的可的初液易换量普液易或换量被孢沙沙交交云片 。氏一 自。易溶溶一染 一能一染中与油〔通中与者油〔溶杆黄黄片用红联联步么端 载金碘置 将过解解端时 端使端时，菌镜以光，菌用镜以解菌或或度度， 玻洗倾复造厚而而轻的 轻染轻的细体观覆学细体吸观覆而区骤蕃蕃芽液高高于 染迅 片〕出出轻颜 轻色轻颜菌结察盖显菌结水察盖出；红红瓶染斜，，成速 的同孢一。现现冲色 冲结冲色菌合菌微菌合纸菌现玻 好，，类类通 一自2局较较洗， 洗果洗，体而膜镜体而吸膜较，杆简滴并并脂脂过 端片 的m大大，经 ，呈，经通是为下通是干为大判判载质质部菌火 轻，连单缝缝直番 直现直番常菌度不常菌。度缝断 断架 涂含含i焰 轻区菌玻n染隙隙至红 至相至红带体〕易带体〕隙菌菌染续量量冲2上片，，流复 流反流复负着结识负着结，后～；体体少少色体片洗色使使下染 下的下染电色晶别电色晶使滴3的的，，，放，〔次中1脱得得的后 的结的后荷。紫，荷。紫得的革革经经法切加，菌菌水呈 水果水呈，染必，染菌立加空央兰兰脱脱m 色勿一体体为蓝 为。为蓝而液须而液体。氏氏色色9即区将适气i不内内无紫 无无紫碱染通碱染内端染染n剂剂5菌—的的色色 色色色性色过性色的水量中色色，处处完膜% 轻结结。。 。。。染染染结11反反理理—洗冲～～水〔晾全晶晶料色料晶响响后后轻掉22两乙紫紫在来在紫至洗性性反反以干mm，〕冲电增电---种ii。。碘碘碘而而nn醇流，。而覆或离加离；；复复复使使洗菌时菌时出脱合合合肽肽使盖者，体，的，物物物聚聚液色G其的其菌用较较较糖糖混直分显分无-易易易层层2膜吸菌合子示子至渗渗渗的的色0的力的呈为水区出出出孔孔～流染，染。，，，径径；现度纸色从色而 而 而缩缩下2局 而 局右革使使使小小〕吸5部更部的菌菌菌，，区兰s带清带结干体体体通通水至—正楚正氏变变变透透晶。电地电为成成成性性—流阳荷观荷紫先无无无降降大无〔察〔出性色色色低低染用酸到酸肠，，，，，色结液性其性再再再液低结结杆。染形染果经经经晶晶无染倍料态料菌番番番紫紫。的和的色红红红--区色镜碘碘染结染复复复复复〕，色构色找1染染染合合局。局～。就就就立到物物部部成成成被被2带带即视为为为滞滞负负红红红留留电电色色色 野脱后色时，间再对换革油兰镜氏观染察色结，果并的判影断响菌：体脱的色时革间兰过氏短染，色G反-菌响转性呈。革兰氏阳性结果；如果脱色时间过
细菌芽胞染色技术ppt
从菌落的大小、颜色、高度等方面观察并记 录细菌菌落特征，找出有芽胞的细菌细胞形 态和菌落形态间的相关性。
10
版权所有 未经作者同意 请勿使用
实验六 细菌芽胞染色技术
五、实验结果：
1.图示枯草芽孢杆菌芽胞染色的结果，注明 芽胞的形态和着生部位。
2.记录、说明枯草芽孢杆菌的菌落形态及与 细胞形态的相关性。
实验六 细菌芽胞染色技术
二、基本原理：
芽胞的透性很差。用一般的染色方法很难使 芽胞着色，而当芽胞着色后，使其脱色也很 难。
利用芽胞的这一特性，使用一弱碱性染料， 如孔雀绿，在较长时间、加热的条件下染色 处理有芽胞的细菌，使细菌细胞和芽胞同时 着色，呈现孔雀绿的蓝绿色。
2
版权所有 未经作者同意 请勿使用
3
实验六 细菌芽胞染色技术
三、实验材料：
1.实验菌种及培养基：枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)， 37℃，24小时营养琼脂 斜面及平板培养物；
2.实验试剂：染色液：5%孔雀绿水溶液； 0.5%番红水溶液；
4
版权所有 未经作者同意 请勿使用
实验六 细菌芽胞染色技术
3.实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥 箱；高压蒸汽灭菌锅；显微镜；酒精灯；接 种环；滴瓶；试剂瓶；双层瓶；镊子；载玻 片；φ90mm培养皿；500ml标本缸；15×150 试管；火柴（或打火机）；吸水纸；镜头纸； 棉花；
实验六 细菌芽胞染色技术
在适宜的条件下，芽胞可萌发成营养细胞， 继续生长繁殖。芽胞的形态及其在菌体中的 着生部位等，可作为有芽胞细菌分类鉴定中 的形态学指标之一。
芽胞常作为检验灭菌措施的灭菌效果的指标。 1.学习、掌握芽胞染色技术； 2.了解有芽胞细菌的细胞形态和菌落形态间
10
版权所有 未经作者同意 请勿使用
实验六 细菌芽胞染色技术
五、实验结果：
1.图示枯草芽孢杆菌芽胞染色的结果，注明 芽胞的形态和着生部位。
2.记录、说明枯草芽孢杆菌的菌落形态及与 细胞形态的相关性。
实验六 细菌芽胞染色技术
二、基本原理：
芽胞的透性很差。用一般的染色方法很难使 芽胞着色，而当芽胞着色后，使其脱色也很 难。
利用芽胞的这一特性，使用一弱碱性染料， 如孔雀绿，在较长时间、加热的条件下染色 处理有芽胞的细菌，使细菌细胞和芽胞同时 着色，呈现孔雀绿的蓝绿色。
2
版权所有 未经作者同意 请勿使用
3
实验六 细菌芽胞染色技术
三、实验材料：
1.实验菌种及培养基：枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)， 37℃，24小时营养琼脂 斜面及平板培养物；
2.实验试剂：染色液：5%孔雀绿水溶液； 0.5%番红水溶液；
4
版权所有 未经作者同意 请勿使用
实验六 细菌芽胞染色技术
3.实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥 箱；高压蒸汽灭菌锅；显微镜；酒精灯；接 种环；滴瓶；试剂瓶；双层瓶；镊子；载玻 片；φ90mm培养皿；500ml标本缸；15×150 试管；火柴（或打火机）；吸水纸；镜头纸； 棉花；
实验六 细菌芽胞染色技术
在适宜的条件下，芽胞可萌发成营养细胞， 继续生长繁殖。芽胞的形态及其在菌体中的 着生部位等，可作为有芽胞细菌分类鉴定中 的形态学指标之一。
芽胞常作为检验灭菌措施的灭菌效果的指标。 1.学习、掌握芽胞染色技术； 2.了解有芽胞细菌的细胞形态和菌落形态间
《革兰氏染色法》课件
将脱色后的涂片用番红染液复染，时间约为1-2分钟。番红是 一种酸性染料，可以和蛋白质结合，使菌体或细胞呈现红色 。
番红复染的作用是使菌体或细胞呈现红色，使其更加明显， 有助于观察和鉴别。同时，番红还可以与结晶紫形成鲜明的 对比，使观察更加准确。
冲洗与干燥
• 将染色完成的涂片用清水冲洗干净，然后晾干或用吸水纸吸干 水分。冲洗的目的是去除染色过程中残留的染料和媒染剂等物 质，以免对观察造成干扰。干燥的目的是使涂片固定，以便于 保存和观察。
背景
革兰氏染色法的发明对于细菌学的发展起到了重要的推动作 用，为后续的细菌分类、疾病诊断和治疗提供了有力支持。
染色原理
原理
革兰氏染色法的染色原理主要是通过 一系列的脱色处理和复染，使细菌着 色，从而根据颜色差异将细菌分为革 兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
操作流程
革兰氏染色法通常包括涂片、脱色、 媒染、染色和复染等步骤，通过这些 步骤的组合和调整，可以实现对不同 类型细菌的准确鉴别。
革兰氏染色法的结
03
果与意义
革兰氏阳性菌与阴性菌的染色特性
革兰氏阳性菌
被染成紫色或蓝紫色，不易被酒 精脱色，有厚重的革兰氏染色反 应。
革兰氏阴性菌
被染成红色或淡红色，易被酒精 脱色，有较弱的革兰氏染色反应 。
染色结果的分析与解读
根据染色结果判断细菌的种类和特性，有助于临床诊断和 治疗。
通过观察染色后细菌的形态和排列，可以初步判断细菌的 致病性。
重要性
革兰氏染色法对于临床医学、生物技术和食品工业等领域具有重要意义，能够 帮助科学家和医生快速准确地鉴别不同类型的细菌，从而采取相应的治疗和预 防措施。
发展历程与背景
发展历程
革兰氏染色法由丹麦细菌学家汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884 年发明，至今已有百余年历史。随着科学技术的不断进步， 该方法在操作流程和染料选择等方面不断得到优化和改进。
微生物常用染色法-PPT
微生物常用染色法
1
细菌染色的一般程序
涂片(干燥)---固定---染色---脱色---复染
2
涂片制备
血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液体培养物,直接 在载玻上作薄涂片. 固体培养基上的菌落或菌 苔的制片,用接种环取1 环9g/L氯化钠溶液置载 玻片中央.再用无菌接种环取少量的培养物在 氯化钠溶液中磨匀,涂成人1CM*1CM大小的涂 面.置室温下自然干燥或火慢慢烘干.
18
涂片见G+球菌，呈葡萄状排列
19
涂片见G+球菌，呈链状排列
20
染色原理:
最广泛接受观点认为与细菌细胞壁结构及化学 组成有关. G+菌细菌壁结构致密,肽聚糖层厚, 脂质含量少,形成结晶紫_碘复合物.脱 色过程 中,虽然溶解细菌壁脂质成分形成小孔.脱水作 用使细胞壁收缩又 构成屏障,阻止结晶紫—碘 复合物被乙醇溶出,细菌保持紫色.G-菌细菌壁 疏松,肽聚糖层较薄,脂质含量高,乙醇溶解脂质, 经复染细菌呈红色.
– 复染色法 用两种或以上的不同颜色的染料进行 染色，可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成 不同颜色
9
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
10
革兰染色
– 细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液1min,清水冲去染液. – 加碘液媒染1min,水洗,甩干. – 用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30S,至无紫色洗落为止,水洗,
24
染色原理
抗酸性染色细菌与细胞壁成分有关.分枝杆菌 细胞壁含脂质较多,其中主要成分是分枝菌酸. 决定抗酸性染色反应,用乙醚脱去分 分枝菌酸,则呈非抗酸染色性.
25
剂.也可用加热法促进着色.
6
脱色
使已着色的被染物脱去颜色.常用乙醇,丙酮等 作为脱色剂.脱色剂可以查出细菌与染料结合 的稳定程度,作为鉴别染色用.
1
细菌染色的一般程序
涂片(干燥)---固定---染色---脱色---复染
2
涂片制备
血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液体培养物,直接 在载玻上作薄涂片. 固体培养基上的菌落或菌 苔的制片,用接种环取1 环9g/L氯化钠溶液置载 玻片中央.再用无菌接种环取少量的培养物在 氯化钠溶液中磨匀,涂成人1CM*1CM大小的涂 面.置室温下自然干燥或火慢慢烘干.
18
涂片见G+球菌，呈葡萄状排列
19
涂片见G+球菌，呈链状排列
20
染色原理:
最广泛接受观点认为与细菌细胞壁结构及化学 组成有关. G+菌细菌壁结构致密,肽聚糖层厚, 脂质含量少,形成结晶紫_碘复合物.脱 色过程 中,虽然溶解细菌壁脂质成分形成小孔.脱水作 用使细胞壁收缩又 构成屏障,阻止结晶紫—碘 复合物被乙醇溶出,细菌保持紫色.G-菌细菌壁 疏松,肽聚糖层较薄,脂质含量高,乙醇溶解脂质, 经复染细菌呈红色.
– 复染色法 用两种或以上的不同颜色的染料进行 染色，可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成 不同颜色
9
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
10
革兰染色
– 细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液1min,清水冲去染液. – 加碘液媒染1min,水洗,甩干. – 用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30S,至无紫色洗落为止,水洗,
24
染色原理
抗酸性染色细菌与细胞壁成分有关.分枝杆菌 细胞壁含脂质较多,其中主要成分是分枝菌酸. 决定抗酸性染色反应,用乙醚脱去分 分枝菌酸,则呈非抗酸染色性.
25
剂.也可用加热法促进着色.
6
脱色
使已着色的被染物脱去颜色.常用乙醇,丙酮等 作为脱色剂.脱色剂可以查出细菌与染料结合 的稳定程度,作为鉴别染色用.
《细菌的革兰染色法》课件
《细菌的革兰染色法》 PPT课件
通过本课件，我们将深入探索细菌的革兰染色法，包括该方法的概述、原理、 步骤和结果解读，以及其在医学和生物学领域的重要性和贡献。
革兰染色法的定义
革兰染色法是一种常用的细菌染色技术，用于将细菌分为革兰阳性菌和革兰 阴性菌两类，从而帮助确定细菌的形态特征和性质。
革兰染色法的历史和意义
革兰染色法的局限性和改进
适用性
革兰染色法对不同种类细菌的 适用性有限，对一些特殊菌株 无法发挥作用。
革兰阳性菌的染色
某些革兰阳性菌可能会出现未 染色或染色不明显的情况，增 加了结果解读的难度。
其他染色法和检测方 法
为了克服革兰染色法的局限性， 科学家们开发了其他染色法和 检测方法。
结语
重要性
革兰染色法作为一种常用技术， 对细菌学和医学领域做出了重要 贡献。
发展趋势和前景
对医学和生物学的贡献
随着科技的进步，革兰染色法将 继续发展并与其他检测方法结合， 提高细菌诊断的准确性和效率。
革兰染色法的研究和应用对细菌 病原体的诊断和治疗起到了至关 重要的作用。
3 环境监测
革兰染色法可用于监测水 和土壤中的细菌污染。
革兰染色的原理
革兰染色根据细菌细胞壁的结构差异进行分类，通过染色步骤的执行可区分出革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰染色法的步骤
1
1. 用菌技术准备样品
收集细菌样品并进行培养和纯化。
2
2. 固定样品在载玻片上
将培养物涂抹在载玻片上，形成薄的细菌涂片。
历史
革兰染色法由丹麦细菌学家克里斯蒂安·格拉姆于1884年发现并提出。
意义
革兰染色法的应用广泛，对细菌分类和临床诊断起着重要作用。
贡献
通过本课件，我们将深入探索细菌的革兰染色法，包括该方法的概述、原理、 步骤和结果解读，以及其在医学和生物学领域的重要性和贡献。
革兰染色法的定义
革兰染色法是一种常用的细菌染色技术，用于将细菌分为革兰阳性菌和革兰 阴性菌两类，从而帮助确定细菌的形态特征和性质。
革兰染色法的历史和意义
革兰染色法的局限性和改进
适用性
革兰染色法对不同种类细菌的 适用性有限，对一些特殊菌株 无法发挥作用。
革兰阳性菌的染色
某些革兰阳性菌可能会出现未 染色或染色不明显的情况，增 加了结果解读的难度。
其他染色法和检测方 法
为了克服革兰染色法的局限性， 科学家们开发了其他染色法和 检测方法。
结语
重要性
革兰染色法作为一种常用技术， 对细菌学和医学领域做出了重要 贡献。
发展趋势和前景
对医学和生物学的贡献
随着科技的进步，革兰染色法将 继续发展并与其他检测方法结合， 提高细菌诊断的准确性和效率。
革兰染色法的研究和应用对细菌 病原体的诊断和治疗起到了至关 重要的作用。
3 环境监测
革兰染色法可用于监测水 和土壤中的细菌污染。
革兰染色的原理
革兰染色根据细菌细胞壁的结构差异进行分类，通过染色步骤的执行可区分出革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰染色法的步骤
1
1. 用菌技术准备样品
收集细菌样品并进行培养和纯化。
2
2. 固定样品在载玻片上
将培养物涂抹在载玻片上，形成薄的细菌涂片。
历史
革兰染色法由丹麦细菌学家克里斯蒂安·格拉姆于1884年发现并提出。
意义
革兰染色法的应用广泛，对细菌分类和临床诊断起着重要作用。
贡献
微生物实验二细菌的简单染色和革兰氏染色_图文_图文
染色结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果
染色结果
大肠杆菌革兰氏染色结果
染色结果
金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果
四、实验结果
显微镜放大倍数＝物镜放大倍数×目镜放大倍数
绘图记录观察结果
思考题
1、在制作涂片中，为什么要进行固定这 一步？
2、革兰氏染色中哪一步关键，为什么？
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳 性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁 的结构和组成不同决定的。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂 结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用 乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红 )复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂 蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞 中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染 剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌 。
2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。 3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。 4、染色：待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上，覆盖涂
面染色1-2分钟。 5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的
水变无色为止（注：勿冲去菌体）。 6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。 7、镜检：油镜观察并绘图。
二、实验原理---简单染色
染色前必须固定细菌。其目的有二：一是 杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增 加其对染料的亲和力。常用的有加热和化 学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原 有的形。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+） 和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染 色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
实验 细菌的染色.ppt
复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有：
革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 荚膜染色法等。
2019-9-15
感谢你的欣赏
13
革兰氏染色（Gram stain） 1984年，丹麦医生Gram采用革兰氏染色法细 菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+） 和革兰氏阳性（G-）
2) 油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净， 否则可能损害镜头
3）擦油镜镜头方法：分三步 A）先用擦镜纸揩去 镜头上的香柏油 B）从双层瓶的下层沾少许二 甲苯滴在另一片擦镜纸上 ，擦拭镜头； C）再用 一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。
2019-9-15
感谢你的欣赏
12
2、革兰氏染色
单染色法：只能观察微生物的大小、形状、 和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。
23
思考题
简单染色:
(1) 你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环节? (2) 如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、
时间太长，又会怎样呢？
革兰氏染色: (1) 你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节
是什么? (2) 现有一株细菌宽度明显大于大肠杆茵的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰
8
2、干燥 室温自然干燥
操作步骤（continued）
3、固定
固定的目的： 1）使细胞质凝固，以固定细胞形态； 2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。
固定方法： 热固定：涂面朝上，通过火焰数次 注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜， 否则会改变甚至破坏细胞形态
2019-9-15
感谢你的欣赏
《细菌的革兰染色法》课件
脱色
用95%酒精脱去结晶紫和碘液的颜色。
复染
用沙黄复染，增加对比度。
实验操作步骤
冲洗
用清水轻轻冲洗涂片，去除染色液残 留。
观察
将涂片放在显微镜下观察，记录染色 结果。
实验结果观察与记录
观察要点
观察细菌的细胞壁着色情况，判断细菌的革兰氏染色反应。
记录内容
记录染色结果，包括阳性或阴性，以及染色反应的强度。
04
革兰染色法的结果分析
阳性菌与阴性菌的鉴别
总结词
通过革兰染色法，可以将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类，其染色结果 不同，具有明显的鉴别特征。
详细描述
革兰阳性菌被染成紫色或红色，而革兰阴性菌被染成红色或淡红色。革兰阳性 菌的细胞壁较厚，结构致密，而革兰阴性菌的细胞壁较薄，结构疏松。
菌种的鉴定与分类
详细描述
一些细菌在接触抗生素后，其细胞壁 结构会发生变化，导致革兰染色法的 结果发生变化。通过观察这些变化， 可以初步判断细菌对某些抗生素的敏 感性和耐药性。
05
革兰染色法的改进与发展
染色方法的优化与改进
染色时间
优化染色时间，提高染色效率， 减少染色误差。
染色剂配方
改进染色剂配方，提高染色效果 ，使结果更易于观察。
革兰染色法由丹麦医生汉斯·克里 斯蒂安·革兰于1884年发明，是细 菌学中最重要的染色方法之一。
革兰染色法的历史与发展
01
02
03
04
1854年，德国病理学家鲁德 维格·阿道夫·罗伯特首次使用
苯胺染料进行细菌染色。
1872年，法国微生物学家查 尔斯·诺曼德改进了罗伯特的 方法，并引入了结晶紫和番红
在科研领域，革兰染色法用于细菌分 类、毒力因子研究、疫苗开发等方面 ，为科学家提供重要的实验数据和结 果。
用95%酒精脱去结晶紫和碘液的颜色。
复染
用沙黄复染，增加对比度。
实验操作步骤
冲洗
用清水轻轻冲洗涂片，去除染色液残 留。
观察
将涂片放在显微镜下观察，记录染色 结果。
实验结果观察与记录
观察要点
观察细菌的细胞壁着色情况，判断细菌的革兰氏染色反应。
记录内容
记录染色结果，包括阳性或阴性，以及染色反应的强度。
04
革兰染色法的结果分析
阳性菌与阴性菌的鉴别
总结词
通过革兰染色法，可以将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类，其染色结果 不同，具有明显的鉴别特征。
详细描述
革兰阳性菌被染成紫色或红色，而革兰阴性菌被染成红色或淡红色。革兰阳性 菌的细胞壁较厚，结构致密，而革兰阴性菌的细胞壁较薄，结构疏松。
菌种的鉴定与分类
详细描述
一些细菌在接触抗生素后，其细胞壁 结构会发生变化，导致革兰染色法的 结果发生变化。通过观察这些变化， 可以初步判断细菌对某些抗生素的敏 感性和耐药性。
05
革兰染色法的改进与发展
染色方法的优化与改进
染色时间
优化染色时间，提高染色效率， 减少染色误差。
染色剂配方
改进染色剂配方，提高染色效果 ，使结果更易于观察。
革兰染色法由丹麦医生汉斯·克里 斯蒂安·革兰于1884年发明，是细 菌学中最重要的染色方法之一。
革兰染色法的历史与发展
01
02
03
04
1854年，德国病理学家鲁德 维格·阿道夫·罗伯特首次使用
苯胺染料进行细菌染色。
1872年，法国微生物学家查 尔斯·诺曼德改进了罗伯特的 方法，并引入了结晶紫和番红
在科研领域，革兰染色法用于细菌分 类、毒力因子研究、疫苗开发等方面 ，为科学家提供重要的实验数据和结 果。
革兰氏染色课件PPT
复染
复染：将脱色后的涂片用复染液进行复染处理，以便更好地观察菌体或组织的形态和结构。
复染时应注意控制复染时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
冲洗和干燥
冲洗
将染色和脱色处理后的涂片用清 水冲洗干净，以便观察菌体或组 织的染色效果。
干燥
将冲洗干净的涂片放在干净的纸 巾上自然干燥，以便后续观察。
Part
固定时应注意控制火焰温度，避免过高或过低，以免影响 染色效果。
染色
染色：将涂片浸入革兰氏染色液中， 染色一定时间后取出晾干。
染色时应注意控制染色时间，避免过 长或过短，以免影响染色效果。
脱色
脱色：将染色后的涂片用脱色液进行脱色处理，以去除菌体或组织表面的色素。
脱色时应注意控制脱色时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
复染与初次染色要匹配
复染的颜色要与初次染色相匹配，以 便更好地观察染色效果。
其他注意事项
染色液要新鲜
染色液使用前要确保新鲜，过期 或变质的染色液会影响染色效果
。
避免交叉污染
在染色过程中要避免不同染色液之 间的交叉污染，以免影响染色结果 。
注意安全
染色过程中要注意安全，避免染色 液溅到皮肤或眼睛上，如不慎溅到 应立即用大量清水冲洗并及时就医 。
革兰氏染色还可以用于研究细菌的生 物学特性和分类学研究，有助于深入 了解细菌的生态学和进化关系。
Part
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片：将待染色的菌体或组织薄而均匀地涂在洁净的玻片上，然后晾干或烘干， 以便后续染色。
涂片时应注意避免涂层过厚，以免影响染色效果。
固定
固定：将涂片在火焰上快速通过两次，使菌体或组织固定 在玻片上，以便后续染色。
实验二细菌革兰氏染色ppt课件
兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 （3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 （4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。
五、思考题
1、讲述革兰氏染色的原理并指出E.C和B.S分别属于革兰 氏阳性或阴性？
2、观察细菌为什么要染色？为什么细菌染色多采用碱性 染料？
3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色 成败的关键一步是什么？
crystal violet stain
wash with water
Counterstain wi在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱 色
时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足， 革
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等
Heat fixing
Staining
实验二 细菌革兰氏染色
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
二、实验原理
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
4、当对未知菌进行革兰氏染色时，怎样能证明你的染色 技术和结果的正确性？
五、思考题
1、讲述革兰氏染色的原理并指出E.C和B.S分别属于革兰 氏阳性或阴性？
2、观察细菌为什么要染色？为什么细菌染色多采用碱性 染料？
3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色 成败的关键一步是什么？
crystal violet stain
wash with water
Counterstain wi在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱 色
时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足， 革
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等
Heat fixing
Staining
实验二 细菌革兰氏染色
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
二、实验原理
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
4、当对未知菌进行革兰氏染色时，怎样能证明你的染色 技术和结果的正确性？
《细菌的单染色》课件
单染色技术的步骤
固定
使用固定剂将细胞或组织固定 在载玻片上，以防止染色过程 中细胞或组织脱落。
冲洗
使用适当的冲洗液将未结合的 染料冲洗掉，以获得清晰的染 色效果。
样品制备
将待染色的细胞或组织制备成 适合染色的涂片或切片。
染色
将染料与待染色的细胞或组织 混合，使其充分染色。
干燥
将染色后的样品干燥，以便在 显微镜下观察。
缺点
染色效果不稳定，有时会出现染色不均或染色过深过浅的情 况，影响观察效果。
单染色技术的发展趋势
自动化染色技术
随着自动化技术的发展，未来有 望实现自动化单染色，提高染色
效率和准确性。
多重染色技术
目前单染色技术只能显示一种颜 色，未来有望开发出多重染色技 术，实现多种颜色同时显示，提
高观察效果。
新型染色剂的开发
实验过程
观察步骤 1. 将染色后的载玻片放在显微镜下，调整焦距，观察细菌的染色情况。
2. 注意观察细菌的形态、大小、排列和染色深浅，记录实验结果。
实验结果分析
染色结果
美蓝或台酚兰染色后，细菌呈现深蓝色或浅蓝色，而背景呈现无色或淡黄色。
结果分析
通过观察染色后的细菌，可以初步判断细菌的种类和形态。例如，革兰氏阳性菌通常呈现紫色或深蓝色，而革兰 氏阴性菌则呈现淡蓝色或无色。此外，还可以观察到细菌的排列、形态和大小等特点，有助于进一步了解细菌的 生物学特性。
总结词
细菌的形态多样，结构简单，主要由细胞壁、细胞膜、细胞质和核区等部分组 成。
详细描述
细菌的形态主要有球状、杆状和螺旋状等，其结构主要由细胞壁、细胞膜、细 胞质和核区等组成，其中细胞壁是细菌特有的结构，对细菌具有保护和支持作 用。
细菌革兰氏染色PPT课件
细菌革兰氏染色ppt课件
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用，帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一，通过对细菌的染色， 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合，实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术，用于快速识别细菌种类，对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域，革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色，分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行，避免 染色过度或不足，同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理，以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量，避 免脱色过度或不足，影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异，通过结 晶紫初染和碘液媒染后，由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同，酒精脱色时，细胞壁对染料的吸 附能力不同，从而导致被脱色的程度 不同，最终影响了复染后细菌的着色。
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用，帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一，通过对细菌的染色， 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合，实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术，用于快速识别细菌种类，对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域，革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色，分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行，避免 染色过度或不足，同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理，以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量，避 免脱色过度或不足，影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异，通过结 晶紫初染和碘液媒染后，由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同，酒精脱色时，细胞壁对染料的吸 附能力不同，从而导致被脱色的程度 不同，最终影响了复染后细菌的着色。
《细菌的形态、染色》课件
杆菌
肠道杆菌
白喉杆菌
呈杆状，有鞭毛，无芽孢，革兰氏染 色阴性。
呈棒状，有鞭毛，无芽孢，革兰氏染 色阳性。
结核杆菌
呈杆状，有鞭毛，无芽孢，革兰氏染 色阳性。
螺形菌
钩端螺旋体
呈螺旋状卷曲，有鞭毛，无芽孢 ，革兰氏染色阴性。
梅毒螺旋体
呈螺旋状卷曲，无鞭毛，无芽孢 ，革兰氏染色阳性。
弧菌
• 霍乱弧菌：呈弧形或逗点状，有鞭毛，无芽孢，革兰氏染 色阴性。
察。
染色结果
发出荧光，便于观察细菌形态和 分布情况。
03 细菌染色技术的应用
在医学诊断中的应用
诊断感染性疾病
通过细菌染色技术，医生可以快速准确地诊断感染性疾病，如肺 炎、尿路感染等，为患者提供及时有效的治疗。
鉴别病原体种类
染色技术可以帮助医生鉴别病原体的种类，如细菌、病毒、真菌等 ，从而选择合适的药物进行治疗。
监测耐药性
染色技术还可以用于监测细菌的耐药性，帮助医生了解病菌对不同 抗生素的敏感性，制定合理的治疗方案。
在环境监测中的应用
1 2 3
检测水质污染
通过细菌染色技术，环境监测人员可以检测水体 中的细菌数量和种类，评估水质污染程度，为环 境保护提供科学依据。
监测空气污染
通过采集空气中的细菌样本，染色技术可以检测 空气中的细菌数量和种类，评估空气污染程度， 预防和控制空气污染。
自动化染色技术能够节省人力成本，提高工作效率，为实验室带来更高的效益。
新型染色技术的发展
随着科学技术的发展，新型染 色技术不断涌现，如荧光染色 、免疫染色和原位杂交染色等 。
新型染色技术具有更高的特异 性和灵敏度，能够更好地满足 临床和科研的需求。
新型染色技术能够提供更多的 信息，有助于深入了解细菌的 生物学特性和致病机制。
《细菌染色技术》课件
常用的脱色液有乙醇、丙酮等，脱色时间需要根据染色液和染色方法而定。
复染的目的是使染色后的细菌更加清晰可见，常用的复染液有稀释复红、稀释结晶 紫等。
干燥与镜检
干燥与镜检是细菌染色技术的最 后步骤，需要将染色完成的载玻 片干燥后进行显微镜检查，以便
观察染色效果和细菌形态。
干燥过程中需要注意避免过度加 热或干燥，以免影响染色效果。
01
02
03
04
简单染色法
利用单一染料对细菌进行染色 。
复染色法
利用两种或多种染料对细菌进 行染色，以便区分不同的细胞
结构。
荧光染色法
利用荧光染料对细菌进行染色 ，通过荧光显微镜观察。
特殊染色法
针对某些特殊性质或结构的细 菌，采用特殊的染色方法。
染色过程中的物理和化学变化
物理变化
染色过程中染料分子与细菌细胞 之间的相互作用，如吸附、渗透 等。
勤洗手
操作后应立即用肥皂和水彻底 清洗双手，确保个人卫生。
废弃物处理
使用过的培养物、染料和其他 废弃物应按照实验室规定进行
安全处理。
染色技术的优缺点和未来发展方向
优点
细菌染色技术是一种简单、快速、有效的细菌检测方法，能够直观地观察细菌的形态和结 构，有助于初步鉴定细菌种类。
缺点
染色技术需要人工操作，容易受到操作者主观因素的影响，且无法对细菌进行深入的分子 生物学鉴定。
《细菌染色技术》 ppt课件
REPORTING
目录
• 引言 • 细菌染色技术的基本原理 • 细菌染色技术的操作步骤 • 细菌染色技术的结果分析 • 细菌染色技术的注意事项和问题解决
PART 01
引言
REPORTING
复染的目的是使染色后的细菌更加清晰可见，常用的复染液有稀释复红、稀释结晶 紫等。
干燥与镜检
干燥与镜检是细菌染色技术的最 后步骤，需要将染色完成的载玻 片干燥后进行显微镜检查，以便
观察染色效果和细菌形态。
干燥过程中需要注意避免过度加 热或干燥，以免影响染色效果。
01
02
03
04
简单染色法
利用单一染料对细菌进行染色 。
复染色法
利用两种或多种染料对细菌进 行染色，以便区分不同的细胞
结构。
荧光染色法
利用荧光染料对细菌进行染色 ，通过荧光显微镜观察。
特殊染色法
针对某些特殊性质或结构的细 菌，采用特殊的染色方法。
染色过程中的物理和化学变化
物理变化
染色过程中染料分子与细菌细胞 之间的相互作用，如吸附、渗透 等。
勤洗手
操作后应立即用肥皂和水彻底 清洗双手，确保个人卫生。
废弃物处理
使用过的培养物、染料和其他 废弃物应按照实验室规定进行
安全处理。
染色技术的优缺点和未来发展方向
优点
细菌染色技术是一种简单、快速、有效的细菌检测方法，能够直观地观察细菌的形态和结 构，有助于初步鉴定细菌种类。
缺点
染色技术需要人工操作，容易受到操作者主观因素的影响，且无法对细菌进行深入的分子 生物学鉴定。
《细菌染色技术》 ppt课件
REPORTING
目录
• 引言 • 细菌染色技术的基本原理 • 细菌染色技术的操作步骤 • 细菌染色技术的结果分析 • 细菌染色技术的注意事项和问题解决
PART 01
引言
REPORTING
相关主题
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四、影响因素
1.操作：
➢ 涂片的厚薄，不宜过厚 ➢ 染色时间的把握，尤其是脱色时间，脱色不宜过度 ➢ 固定过程不可用酒精灯直接加热，避免过热使菌体变性而影
响染色效果。
2020/11/29
18
2.染液
染液用完后应及时盖上盖子，以免挥发影响染色效果
3.细菌因素
➢ 被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会 影响染色结果，如培养时间过长革兰阳性菌可能染成阴性， 所以被检菌的菌龄一般最好在18~24h之内。
2020/11/29
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染色过程
涂片
干燥
固定
水洗、吸干
镜检
2020/11/29
染色
6
细菌基本形态结构
➢ 基本形态
球菌 杆菌 弧菌
➢ 特殊结构
芽孢：枯草杆菌、破伤风梭菌 荚膜：肺炎链球菌 鞭毛：变形杆菌
2020/11/29
7
标本处理
➢ 痰液：用无菌棉签挑取干酪样或脓性痰部分0.05-0.1ml，
➢ 大便：取粘液便或者血便少量均匀涂布玻片，不可过厚。
2020/11/29
8
标本处理注意事项
➢ 标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避免标本涂布不 均影响结果判读，或使染色不均造成阴阳不定。
➢ 标本涂布不能过厚，影响染色效果。 ➢ 体液标本应浓缩集菌后取沉渣涂片。
2020/11/29
9
2020/11/29
酸性染料:显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。
通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染料有伊红、 刚果红等。
复合染料（中性染料）：是碱性染料和酸性染料的复
合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝）、姬姆萨染料(伊红天青)等；
荧光染料：如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。
用于某些特殊的染色技术。
脂溶性染料 如Sudan black。
2020/11/29
4
染色方法的分类
1.单染法:采用一种染料染色 如用美兰或稀释石炭酸复红等，使各种细菌均染成同
一种单一的颜色。故此法只能显示细菌的形态及大小，对 细菌的鉴别价值不大。
2.复染法（鉴别染色）:
采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使 不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的 颜色，以便鉴别细菌。
2020/11/29
15
三、结果:
阳性菌——紫色 阴性菌——红色
2020/11/29
16
固定
初染 媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP”
（Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“G¯”或“GN”
（Gram’s Negative）表示。
2020/11/29
17
涂于载物玻片右2/3 处，均匀涂抹成卵圆形痰膜（约2cm 长),每张玻片只涂一份标本。
➢ 脓液： 同痰涂片法。
➢ 病灶组织或干酪块等：先用组织研磨器磨碎后再行涂片。
大小、厚度同痰涂片。
➢ 体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉渣涂片。
大小、厚度同痰涂片。
➢ 脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。
2020/11/29
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革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄 色葡萄球菌 x 1000)
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22
革兰氏阳性链球菌例子
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23
革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌
x 1000)
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24
革兰氏阴性弧菌例子
2020/11/2识别特殊形态
抗酸染色：抗酸性、非抗酸性细菌；用于结核病、
麻风病等
荧光染色：敏感性强、效率高、易观察；用于结核
分枝杆菌等
其它：鞭毛染色鞭毛有无、位置、数量； 异染颗粒染色白喉棒状杆菌； 荚膜染色
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常用燃料
碱性染料 带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。常用的染
料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。
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革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特 菌 x 1000)
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革兰氏阴性弯曲菌例子
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革兰氏阳性棒状杆菌例子
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普通染色法
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革兰染色法（Gram Stain）
是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是由丹麦细 菌学家 Christian Gram氏于1882～1884年发明的，至今 已逾百年，仍在广泛使用，是细菌学中最为经典的染色方 法。
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一、原理
细菌经结晶紫初染染成蓝色。G+菌细胞壁肽聚糖层数多， 且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密， 染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而G-菌细胞壁脂类含 量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解， 使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色 为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
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二、步骤
标本处理
涂片固定
结晶紫初染
碘液媒染
乙醇脱色
复红复染
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用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystal violet)。 媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和力或附着力， 即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落。 不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不 能，脱色剂常用95％的酒精(ethanol)。 复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的 目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色 的细胞仍然保持初染的颜色，常用的复染液是番红。
细菌染色技术
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细菌染色方法
燃料与细胞 结合而染色
细菌染色
活菌染色
死菌染色
正染色
负染色
细胞不染色 而背景染色
普通染色
特殊染色
简单染色法 复杂染色法 芽孢染色法 荚膜染色法 细胞壁染色法
抗酸染色 革兰氏染色
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常用的染色方法
革兰染色：最经典常用；革兰阳性、阴性菌；初步
➢ 某些细菌存在染色困难、不易脱色等情况，可能会出现 染色不均，阴阳不定的现象。
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五、临床意义
➢ 鉴别细菌：
用革兰氏染色法可将所有细菌分为阳性与阴性两类，可初步识别细菌， 以利进一步鉴定。
➢ 选择药物：
可根据革兰氏染色性的不同，供临床初步选择用药方向。
➢ 与致病性相关：
大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致 病物质为内毒素。由此，可采取有针对性的治疗方案。