细胞周期测定实验
细胞周期实验报告
细胞周期实验报告一、实验目的本次实验旨在研究细胞周期的各个阶段，了解细胞在分裂过程中的生理变化，以及探索影响细胞周期进程的因素。
二、实验原理细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为间期（包括 G1 期、S 期和 G2 期）和分裂期（M 期）。
细胞周期的进程受到多种因素的调控，包括细胞内的信号通路、细胞外的生长因子等。
通过使用特定的试剂和技术，可以对处于不同细胞周期阶段的细胞进行标记和分析，从而了解细胞周期的分布情况。
三、实验材料与方法（一）实验材料1、细胞系：选用了人宫颈癌细胞系 HeLa 细胞。
2、试剂：细胞培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、PI 染液（碘化丙啶）、RNase A 等。
3、仪器：流式细胞仪、倒置显微镜、离心机等。
（二）实验方法1、细胞培养将 HeLa 细胞接种在培养瓶中，加入含有 10%胎牛血清的培养基，在 37℃、5% CO2 的培养箱中培养。
待细胞融合度达到 80%左右时，进行传代培养。
2、细胞同步化为了获得处于相同细胞周期阶段的细胞，采用了血清饥饿法进行细胞同步化。
将培养的细胞更换为不含血清的培养基，培养 24 小时，使细胞停滞在 G0/G1 期。
3、细胞收集与固定用胰蛋白酶消化同步化后的细胞，离心收集细胞。
用预冷的 70%乙醇固定细胞，－20℃保存过夜。
4、 PI 染色将固定后的细胞离心，去除乙醇，用 PBS 洗涤细胞。
加入 PI 染液和 RNase A，在 37℃避光孵育 30 分钟，使细胞染色。
5、流式细胞仪检测将染色后的细胞通过流式细胞仪进行检测，分析细胞周期的分布情况。
四、实验结果通过流式细胞仪检测，得到了细胞周期各阶段的分布比例。
结果显示，在血清饥饿同步化后，大部分细胞停滞在 G0/G1 期，比例约为70%；S 期细胞比例约为 20%；G2/M 期细胞比例约为 10%。
经过一定时间的恢复培养后，再次检测细胞周期分布，发现 G0/G1 期细胞比例下降，S 期和 G2/M 期细胞比例增加，表明细胞重新进入细胞周期进行分裂。
2014-5-6 PI法细胞周期检测
细胞周期检测（PI法）一、实验方法原理细胞周期（cell cycle)：是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。
G1期：细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。
S期：DNA开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。
当DNA复制结束成为4倍体时，细胞进入G2期。
G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M期。
因此，单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。
一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0期），而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。
因此，整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。
通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。
流式细胞仪的工作原理：是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。
在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。
通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其DNA特征。
细胞周期检测的原理：PI法是较常见的一种周期检测方法。
PI 为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。
PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。
细胞周期示意图如（图一）所示（图一）二、材料及准备工作1.材料准备试剂、耗材名称品牌货号细胞培养瓶corning6孔板corning10ml离心管国产1.5ml EP管国产胰酶（无EDTA）贝博试剂盒中包括RNase-A 贝博试剂盒中包括PI 贝博试剂盒中包括无水乙醇国产PBS 自配2. 试剂配制10XPBS液体配方（0.1MPBS pH 7.4）以1L量为例：NaCl 80gNa2HPO4·12H2O 32.3gNaH2PO4·2H2O 4.5g（十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠）加双蒸水900mL 左右，用HCl/NaOH 调pH至7.4，最后定容为1000mL。
PI染色检测细胞周期实验步骤
p r o t o c o l：P I染色检测细胞周期1、收集细胞：胰酶含EDTA消化收集对数生长期细胞加热处理后损失多的组宜多收集细胞保证细胞有0.5-2×106个,吸取旧培养基到一个新离心管里；少量常温PBS根据培养皿大小决定量,PBS洗可以保证消化效率洗2次,清洗的PBS也要收集到上述离心管内检测凋亡才需收集旧培养基及清洗的PBS；然后胰酶消化注意一定要消化完全,显微镜下观察细胞呈单个,而不是成片脱落后利用旧培养基中和胰酶；离心1000r/300g5min收集细胞沉淀;
2、用预冷的PBS清洗细胞两次;
3、固定细胞：用0.5ml预冷的PBS重悬细胞沉淀,使细胞充分悬浮成单细胞,再将重悬细胞加入1.2ml预冷的99.7%无水乙醇乙醇终浓度7 0%,吹打混匀以免细胞团聚,4℃固定2H至过夜;
4、细胞染色：离心1000r/300g5min收集固定的细胞,以1.8mL的PB S洗细胞一次,离心第一次实验时用7000rpm才把细胞离心下来,但最后流式结果显示细胞没有碎再次获取细胞沉淀后加入100μlRNaseA 于37℃水浴30min,最后加入400μlPI避光染色30min常温或4℃均可
有的试剂盒说明是：每个样本加入500uL染色剂据样本数,用PBS临时配好总量,其中PI50ug/ml、RNaseA100ug/mL、TritonX-1000.2%4℃避光染色30分钟
5、流式分析
以标准程序用检测,一般计数2-3万个细胞,结果用细胞周期拟和软件ModFit分析;分析时,使用FL2-w和FL2-A显示,去除联体细胞;。
PI染色检测细胞周期实验步骤
PI染色检测细胞周期实验步骤细胞周期是细胞分裂和增殖的过程，通常可以通过PI（propidium iodide）染色来检测。
PI是一种DNA结合染料，能够与DNA结合形成荧光化合物，通过检测荧光信号的强度可以推断细胞处于细胞周期的哪个阶段。
以下是PI染色检测细胞周期的实验步骤：材料和试剂：1.培养皿：可容纳细胞的培养皿。
2.培养基：细胞所需的培养基。
3. Propidium iodide（PI）：DNA结合染料。
4. RNase A：消化RNA的酶，可用于将RNA从细胞样品中降解。
5.细胞刮板：用于收集细胞。
6.离心管：用于离心细胞样品。
7.显微镜幻灯片：用于观察染色后的细胞。
步骤：1.准备培养皿：在培养皿中加入适量的培养基，使其能够完全覆盖细胞。
2.培养细胞：将需要检测细胞周期的细胞加入培养皿中，按照细胞的培养要求进行培养，培养至细胞密度适合进行实验。
3.收集细胞：用细胞刮板或其他方法，将细胞从培养皿中收集到离心管中。
4.细胞固定：将收集到的细胞进行固定，可以使用70%乙醇或其他细胞固定剂进行处理，固定时间通常为30分钟。
5.细胞孵育：将固定的细胞在4℃下孵育过夜，以保证细胞完全固定。
6. 细胞溶解：在离心管中加入RNase A（最终浓度一般为1mg/ml），以降解细胞中的RNA，避免对细胞周期分析结果的干扰。
7. 细胞染色：在离心管中加入适量的PI溶液（一般最终浓度为50μg/ml），将PI与DNA结合，产生荧光信号。
8.染色孵育：将含有PI的细胞溶液在4℃下孵育30分钟至1小时，使PI完全结合到DNA上。
9.细胞分析：将染色后的细胞用离心机离心，去除上清液，保留细胞沉淀。
10.流式细胞仪分析：将细胞沉淀重新悬浮在PBS缓冲液中，使用流式细胞仪进行细胞周期分析，记录和分析PI的荧光信号的强度。
11.显微镜观察：将细胞沉淀取出，在显微镜幻灯片上制备细胞悬液，并使用荧光显微镜观察细胞的DNA染色情况。
细胞实验六：细胞周期检测
流式细胞术
血清饥饿法饥饿72h之后细胞同步化后流式细胞仪分析； 结果显示，与对照组相比，mortalin表达量上调的细胞快速从G1 期过渡到G2/M期
实验步骤
• 1. 细胞样品的准备： • 对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶
消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入 前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细 胞。再次收集到离心管内。1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。 • 小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细 胞。加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离 心管内。 • 再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的 PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避 免细胞成团。
• 碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的 G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为12之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致 部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的 弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细 胞峰。
PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避 免细胞成团。
• 3. 碘化丙啶染色液的配制：参考下表，根据待检测样品的数量配 制适量的碘化丙啶染色液：
• 注：配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以4℃保存，宜当日使 用。
• 4. 染色：每管细胞样品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液，缓慢并 充分重悬细胞沉淀， 37℃避光温浴30分钟。随后可以4℃或冰浴 避光存放。染色完成后宜在24小时内完成流式检测，最好能在当 日完成流式检测。
PI染色法检测细胞周期
PI染色法检测细胞周期一．实验原理及试剂配置1.实验原理P I , 即碘化丙锭，可以与细胞内DNA 和RNA 结合，采用RNA酶将RNA 消化后, 通过流式细胞术检测到的与DNA 结合的P I 的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。
由于细胞周期各时相的DNA 含量不同, 通常正常细胞的G 1/ G 0 期具有二倍体细胞的DNA 含量( 2N) ,而G 2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量( 4N) ,而S 期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。
因此，通过流式细胞术P I染色法对细胞内DNA 含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G 1/ G 0 期，S 期和G 2/ M 期，并可通过特殊软件计算各时相的百分率。
值得注意的是，PI不能通过细胞膜完整的细胞(如活细胞和早期凋亡细胞) ,在标本制备时, 必须先用乙醇或其他破膜剂增强细胞膜的通透性, 才能使P I进入细胞内与细胞内的核酸结合。
乙醇通常为终浓度为70 %的冷乙醇。
2.试剂配制RNase A，注意分装保存，防止反复冻融。
PI 购自Sigma公司货号P-4170，通常用过滤除菌的PBS配置成500μg/ml的储液避光保存备用，细胞染色时用PBS稀释到50μg/ml。
二．实验步骤1.细胞的收集：将处理好的细胞样品组用含EDTA的0.25%胰酶消化细胞呈单细胞悬液，DMEM+10%FBS终止消化后，200g离心3min沉淀细胞。
2.细胞的固定：将离心收集的细胞用500μL预冷的PBS悬起，200g离心3min沉淀细胞，弃上清，以充分去除残留的FBS和胰酶；加入-20℃预冷的70%乙醇500μL悬浮细胞，于4℃固定30min或-20℃固定过夜。
（此处，加乙醇时应注意边加入变吹起细胞，放置固定时细胞结成团，难以吹散而影响后续的检测）3.RNA的去除：将固定好的细胞，200g离心5min沉淀细胞弃去上清液；500μL预冷的PBS悬浮细胞，200g离心3min沉淀细胞，弃去上清液；用500μL 100μg/ml的RNase A 在37℃下温育30min以充分降解细胞内RNA。
PI染色检测细胞周期实验步骤
PI染色检测细胞周期实验步骤细胞周期是指细胞从一个开始时期，经过一系列的生长、分裂和分化过程后，再次回到原点开始的一个完整周期。
细胞周期是细胞生物学中一个重要的研究领域，对于理解细胞生物学的基本规律以及细胞增殖和分化过程具有重要意义。
其中，PI染色是一种常用来检测细胞周期的方法，下面将详细介绍PI染色检测细胞周期的实验步骤。
实验所需材料和仪器：1.细胞培养液2.细胞培养器具（细胞培养板、培养瓶等）3.离心机4. PI染色溶液（含有荧光染料Propidium Iodide的溶液）5.双色流式细胞仪6.PBS缓冲液实验步骤：1.细胞培养及处理a.选择需要研究的目标细胞，并进行适当的处理。
b.将目标细胞培养在合适的培养液中，并在37摄氏度、5%CO2的恒温培养箱中培养至所需的状态。
2.细胞收获和处理a.将细胞培养液转入培养细胞的容器中（如培养板、培养瓶等），通过离心机低速离心收集细胞。
b.将细胞沉淀在PBS缓冲液中，然后再次进行离心，去除上清液，并将细胞沉淀用PBS缓冲液进行重悬。
3.细胞固定a.用PBS缓冲液溶解适量的细胞固定剂（如乙醛或甲醛）制备1%细胞固定液。
b.向细胞悬液中加入1%细胞固定液并充分混合，使细胞固定。
4.细胞染色a.将固定的细胞用PBS缓冲液进行洗涤，去除细胞固定剂。
b.向细胞悬液中加入适量的PI染色溶液，并在暗处孵育30分钟。
5.流式细胞仪检测a.将染色后的细胞用PBS缓冲液进行洗涤，去除多余的染色剂。
b.将洗涤后的细胞悬液用PBS缓冲液进行重悬。
c.将细胞悬液转移到流式细胞仪的样品管中。
d.使用流式细胞仪进行细胞周期的检测，记录细胞的荧光强度和数量，得到细胞的周期分布。
6.数据分析a.使用流式细胞仪软件分析细胞周期的数据。
b.统计不同细胞周期阶段的细胞数量，并绘制相应的细胞周期分布图。
c.分析细胞周期分布的差异，并进一步探究细胞周期调控的机制。
需要注意的事项：1.在实验过程中，要保持实验环境的洁净和无菌，以避免细胞污染和结果失真。
PI染色法测细胞周期
PI染料与DNA结合
PI染料能够选择性地结合DNA，通过 荧光显微镜可以观察到染色后的细胞 核。
数据分析
通过特定的软件对数据进行处理和分 析，可以获得细胞周期的分布情况。
细胞周期分析
通过对染色后的细胞核进行荧光强度 和面积的测量，可以分析细胞的细胞 周期状态。
PI染色法的应用
肿瘤研究
通过PI染色法可以研究肿 瘤细胞的细胞周期变化， 为肿瘤的诊断和治疗提供 依据。
05
注意事项
实验安全注意事项
01
实验操作应在通风橱中进行，以减少有毒气体的吸入。
02
实验过程中应佩戴实验服和化学防护眼镜，以防止试剂溅到皮
肤或眼睛。
实验后应将废液倒入指定的废液收集容器中，不要随意倾倒。
03
实验操作注意事项
确保细胞浓度适中， 以保证计数准确性。
在洗涤过程中要彻底 去除多余的染料，以 免影响计数结果。
02
PI染色法原理
PI染料的特性
01
02
03
高荧光强度
PI染料具有高荧光强度， 能够有效地与DNA结合， 发出强烈的荧光信号。
专一性
PI染料只与DNA结合，不 与其他细胞成分结合，具 有专一性。
细胞膜通透性
PI染料能够透过细胞膜， 与细胞核中的DNA结合， 实现对细胞核的染色。
PI染色法的原理
干燥细胞
让涂片自然干燥，以便更好地观察染色效果。
荧光显微镜观察
使用荧光显微镜观察涂片，记录不同时期细胞的 染色情况。
04
结果分析
细胞周期各期的划分
G1期
细胞开始生长，DNA合成前期 ，细胞体积逐渐增大。
S期
DNA复制期，细胞核内DNA含 量加倍。
细胞周期实验报告
细胞周期实验报告一、实验目的本实验旨在研究细胞周期的各个阶段，包括 G1 期、S 期、G2 期和M 期，以及细胞在不同阶段的生理和生化变化。
通过对细胞周期的深入了解，有助于我们更好地理解细胞生长、分裂和遗传物质传递的机制，为相关疾病的研究和治疗提供理论基础。
二、实验原理细胞周期是指细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的过程。
细胞周期的进程受到多种因素的调控，包括细胞内的一系列信号通路和蛋白质复合物。
常用的检测细胞周期的方法是利用流式细胞术，通过对细胞内DNA 含量的测定来区分不同的细胞周期阶段。
处于 G1 期的细胞具有二倍体的 DNA 含量，S 期细胞的 DNA 含量逐渐增加，G2 期和 M 期细胞具有四倍体的 DNA 含量。
三、实验材料与方法（一）实验材料1、细胞株：选用_____细胞株。
2、试剂：胰蛋白酶、PBS 缓冲液、70%乙醇、PI 染液、RNA 酶等。
3、仪器：流式细胞仪、离心机、显微镜等。
（二）实验方法1、细胞培养将细胞接种在培养皿中，在含10%血清的培养基中，置于37℃、5% CO2 的培养箱中培养，待细胞汇合度达到 80%左右时进行实验。
2、细胞收集用胰蛋白酶消化细胞，离心收集，用 PBS 缓冲液洗涤两次。
3、固定细胞将细胞沉淀重悬于 70%乙醇中，于－20℃固定过夜。
4、染色离心去除乙醇，用 PBS 缓冲液洗涤细胞，加入 PI 染液和 RNA 酶，避光孵育 30 分钟。
5、流式细胞术检测用流式细胞仪检测细胞的荧光强度，分析细胞周期各阶段的分布比例。
四、实验结果（一）细胞周期各阶段的比例通过流式细胞术分析，得到以下细胞周期各阶段的比例：G1 期：＿____%S 期：＿____%G2 期：＿____%M 期：＿____%（二）结果分析1、 G1 期比例较高，可能表示细胞处于静止或生长缓慢的状态。
2、 S 期比例适中，说明细胞正在进行 DNA 合成，细胞的增殖活动正常。
3、 G2 期和 M 期比例相对较低，可能与细胞的生长条件或细胞本身的特性有关。
细胞周期实验标准操作流程
细胞周期实验标准操作流程1.种板细胞个数：5mL含5×106个的细胞悬液种在75mL培养瓶中。
2.加药处理足够的时间后，终止反应；3.收集细胞（加药后细胞还需收集培养液中的细胞）；4.PBS洗2次，1000r/min离心10min；5.用1mL的PBS悬浮细胞后置入15mL离心管中，在漩涡振荡器上，边振荡边缓慢加入共9mL体积的70%的预冷冰乙醇。
盖上盖子；6.将固定好的细胞放入-20℃保存（可长期保存，但至少要过夜）；7.使用前，1000r/min离心10min弃去70%冰乙醇，用预冷的PBS洗涤2次；8.用0.5mL的50µg/mLRNase（用PBS配）悬浮细胞后，置37℃水浴中30min；9.最后加入25µL1mg/mLPI（用PBS配），避光染色30min；10.上流式细胞仪Ari aⅢ检测细胞周期。
注意事项：1.做早期凋亡（annexin V和PI双染）实验，需要准备一管未染色的细胞；细胞周期全部样品都需要加入PI染料；2.如果用试剂盒或者之前已经配好Rnase和PI浓度也不要紧。
原则是要求：Rnase和PI的终浓度都能达到50µg/mL。
雪 2011-12-8 9:26:21小莫，做细胞周期实验需要养细胞洪雪 2011-12-8 9:26:29把药物加到细胞里面洪雪 2011-12-8 9:26:38用细胞来测周期的洪雪 2011-12-8 9:27:12你让你老婆先了解一下大概的情况，要是真的想做，再联系我洪雪 2011-12-8 9:27:24我们仪器试运行到这个学期期末洪雪 2011-12-8 9:27:42试运行期间不收费洪雪 2011-12-8 9:28:21不收测试费，但是需要自己准备染料等其他的。
我们只帮测和分析数据缘 10:00:57好的，谢谢缘 10:01:07是你在测吗洪雪 10:03:08是的洪雪 10:03:20她有学生在养细胞吗？缘 10:03:27有啊洪雪 10:03:44在哪里养缘 10:03:48刘观艳在养缘 10:03:54在六楼洪雪 10:04:24那她要测的那几个化合物做过MTT吗？缘 10:04:37做过了10:04:53成功接收文件打开文件打开所在文件夹洪雪 10:04:55那你把这个给她缘 10:04:57好像是在中国药科大学做的洪雪 10:05:06让她按这个来准备做周期的样品洪雪 10:05:35但是她还没有RNA酶和PI呀，这个得买缘 10:05:47这个要多少钱洪雪 10:06:02看你要什么公司的了缘 10:06:10你们经常用的洪雪 10:06:24我们这边用的是SIGMA的洪雪 10:06:47但是这个要至少一个月才买得回来，有点久洪雪 10:07:03你想下其他的办法缘 10:07:06好的洪雪 10:07:18或者去和彭老师借一点洪雪 10:07:26阿远之前用过的洪雪 10:07:30她做过洪雪 10:07:36我之前配了好多洪雪 10:07:40在细胞房缘 10:07:47好的，那我问一下洪雪 10:07:52恩洪雪 10:08:11我们这边上班时间的下午开机。
细胞周期检测方法
细胞周期检测方法细胞周期检测是指利用特定的实验方法和技术来研究和分析细胞的生命周期和不同阶段的变化。
细胞周期是指细胞从一个时间点开始进行DNA复制，到下一个DNA复制结束之间的时间段。
细胞周期检测方法可以帮助我们了解细胞的增殖、分化和死亡过程，并在生物医学研究中发挥重要作用。
本文将介绍几种常用的细胞周期检测方法。
一、流式细胞术流式细胞术是一种常见的细胞周期检测方法，通过利用细胞在流式细胞仪中流动时吸收和散射光的不同特性来分析细胞的周期。
在流式细胞术中，可以使用DNA 染料（如普罗津红或荧光素）将细胞的DNA染成不同浓度的颜色，根据DNA 含量的不同来分析细胞处于不同的细胞周期阶段。
此外，流式细胞术还可以利用蛋白标记和单克隆抗体来检测特定细胞周期蛋白的表达水平。
流式细胞术准确、快速、灵敏，可以同时检测大量的细胞，因此被广泛应用于细胞周期的研究和生物医学领域。
二、免疫荧光染色法免疫荧光染色法是一种利用免疫学技术和荧光探针对特定蛋白进行定位和分析的方法。
在细胞周期检测中，可以利用特定蛋白的表达来反映细胞处于不同的细胞周期阶段。
例如，细胞周期蛋白D（Cyclin D）在G1期表达增加，在细胞周期的S期和G2期表达较低。
通过使用与Cyclin D特异性结合的荧光探针，可以在细胞中观察和分析Cyclin D的表达情况，从而判断细胞处于细胞周期的哪个阶段。
三、细胞核酸染色法细胞核酸染色法主要利用染色剂（如乙锭、Hoechst33342等）染色DNA分子，观察和分析细胞核的形态和DNA含量的变化来判断细胞的细胞周期阶段。
在染色前后使用不同颜色的荧光染料来观察和分析细胞核的变化。
通过测量细胞核中DNA含量的变化，可以确定细胞处于细胞周期的哪个阶段。
此外，细胞核酸染色法还可以与流式细胞术或免疫荧光染色法相结合使用，进一步提高细胞周期的检测准确性和灵敏度。
四、蛋白质组学方法蛋白质组学方法是一种通过比较和分析细胞中蛋白质的表达、修饰和互作来研究细胞功能和生命周期的方法。
细胞周期测定实验
细胞计数法：实验方法原理体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。
它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。
分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，它是测定细胞周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。
实验材料细胞试剂、试剂盒胰酶甲醇培养液冰醋酸Giemsa染液仪器、耗材CO2培养箱普通显微镜培养皿盖玻片吸管实验步骤一、消化细胞，将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。
二、CO2培养箱中培养48小时，使细胞长在盖片上。
三、取出盖片，按下列顺序操作：PBS漂洗3分钟→甲醇：冰醋酸=3：1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。
四、盖片晾干后反扣在载玻片上，镜检。
五、计算分裂指数=分裂细胞数/总细胞数×100%展开注意事项1. 操作时动作要轻，以免使盖片上的细胞脱落。
其他一、Giemsa染液配制称Giemsa粉末0.5 g，加几滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油总量为33 ml）。
56℃中保温90-120分钟。
加入33 ml甲醇，置棕色瓶中保存，此为Giemsa原液。
使用时按要求用PBS稀释。
一般稀释10倍。
BrdU参入法实验方法原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。
从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。
细胞周期反应了细胞增殖速度。
单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。
如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。
细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。
计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。
实验材料细胞试剂、试剂盒BrdU 甲醇冰醋酸Giemsa染液秋水仙素SSC 柠檬酸三钠NaCl仪器、耗材冰箱玻片水浴锅锅盖紫外灯光学显微镜实验步骤一、试剂配制1. BrdU配制BrdU 10 mg加双蒸水10 ml ，4℃下避光保存。
PI标记法检测细胞周期
PI标记法检测细胞周期1.实验原理：PI染料即碘化丙啶，是流式检测细胞周期应荣最为广泛的荧光染料。
PI能与细胞内的双链DNA和RNA结合，被488nm激光激发后发射红荧光，与核酸结合后其发射荧光信号的能力会提高20~30倍。
PI染料不能自由穿过活细胞完整的细胞膜，标记时需先用乙醇固定细胞，使细胞膜的通透性增加，这样PI染料就能通过细胞膜进入细胞内与核酸结合，标记时需同时加入RNA酶消化细胞内的RNA，使PI只能与细胞内的DNA 结合，反映细胞内DNA的含量，继而通过细胞内DNA的含量确定细胞周期。
后来发展了用低渗的柠檬酸溶液一步标记PI燃料法，细胞在低渗的条件下其细胞膜的通透性增加，PI染料就可以进入细胞膜如细胞内的DNA结合，此法简便，快捷，应用更为广泛。
2.试验步骤PI标记方法一（乙醇固定法）：（1）将需要分析的目标细胞制成单细胞悬液，取2x106细胞，离心沉淀，弃上清。
（2）200μl PBS重悬沉淀于1.5mlEppendorf管中，缓慢加入1ml预冷的（保存于4℃）的70%乙醇固定目标细胞。
充分混匀，4℃静置30min。
（3）离心沉淀，弃上清，200μl适当浓度的PI染液重悬细胞，同时加入RNA酶，充分混匀，4℃静置30min。
（4）离心沉淀，弃上清，200μl流式PBS重悬沉淀，流式上样分析。
PI标记方法二（低渗法）（1）低渗柠檬酸标记液配制：柠檬酸三钠0.25g，TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)0.75ml,PI 0.025g，RNA酶0.005g，用双蒸水补足至250ml。
（2）将需要分析的目标细胞制成单细胞悬液，取2x106细胞，离心沉淀，弃上清（3）1ml低渗柠檬酸标记液重悬沉淀，充分混匀，4℃静置30min.（4）离心沉淀，弃上清，200μl流式PBS重悬沉淀，流式上样分析。
3.注意事项检测细胞内DNA含量时必须保证样品内的细胞都是处于单细胞状态，但是在实际样品中经常会出现粘连的双细胞和多细胞团块，而流式细胞仪可能会将粘连在一起的两个二倍体细胞当作是一个四倍体的细胞，如果粘连的细胞较多而没有在分析时排除流式分析时就会得到比实际情况高很多的G2/M期细胞的比例，得到的流式结果就不准确。
细胞周期测定实验具体步骤及详细说明
细胞周期测定实验具体步骤及详细说明
一、细胞周期测定的简介
细胞周期是植物体、动物体及其他有核细胞的发育过程的一个特定时期，它指的是细胞从最初形成到重新分裂所经历的一个周期。
这是一个不
断重复的过程，每一个细胞代一个完整的细胞周期，所有的细胞都按照它
们自己的生命规律来生长、发育、分裂和凋亡。
通过研究细胞周期，可以
了解细胞的生长特性，以及其在早期胚胎发育过程中所起的作用，这对于
阐明多种疾病产生的原因以及药物治疗的原理都有重要的意义。
细胞周期是一个复杂的发育系统，细胞周期的测定通常用于判断细胞
的健康状态，特别是在药物治疗过程中，细胞周期的测定可以为药效评价
提供重要依据。
在各种实验室中，细胞周期测定是常用的一种技术，它能
够提供有关细胞生命周期的详细信息，帮助我们更好地理解细胞的发育过程，从而推进研究进展。
二、细胞周期测定的实验步骤
1.准备细胞培养基：将液体细胞培养基仔细搅拌，并用铝箔烘烤来消毒，以去除其中的细菌及病毒。
2.细胞接种：将细胞悬液移植到液体细胞培养基中，放置在培养箱中，进行细胞接种。
3.培养细胞：细胞初始接种后，将其放置在37℃的培养箱中，进行
培养。
细胞周期分析体检报告
细胞周期分析体检报告1. 引言细胞周期分析是一种常见的实验方法，用于研究细胞在不同阶段的生命周期。
细胞周期分析在医学、生物学等领域有着广泛的应用。
本文将对细胞周期分析体检报告进行详细介绍。
2. 实验方法细胞周期分析实验通常通过流式细胞术进行。
具体的实验步骤如下：1.收集细胞样本：从目标组织或培养细胞中收集细胞样本。
2.细胞固定：用适当的方法将细胞固定在载玻片上，以保持细胞的形态和结构。
3.细胞染色：使用合适的荧光染料对细胞进行染色，以区分不同细胞周期的阶段。
4.流式细胞术：将染色后的细胞样本注入流式细胞仪中，通过激光束激发染料产生荧光信号，并记录下来。
5.数据分析：利用流式细胞仪软件对得到的数据进行分析，计算出细胞在不同细胞周期阶段的比例。
3. 细胞周期分析报告解读细胞周期分析体检报告提供了关于细胞在不同阶段的生命周期的信息。
以下是一份典型的细胞周期分析报告解读：细胞周期分布细胞周期阶段占比G1期40%S期30%G2期20%M期10%根据上表的数据，可以看出样本中细胞周期的分布情况。
其中，G1期的细胞占总细胞数的40%，S期的细胞占总细胞数的30%，G2期的细胞占总细胞数的20%，M期的细胞占总细胞数的10%。
细胞周期指数（PI）细胞周期指数是细胞在不同阶段所占比例的综合指标。
根据细胞周期分布的数据，可以计算出细胞周期指数的值。
一般情况下，细胞周期指数的值越高，细胞增殖能力越强。
细胞周期指数（PI）的计算公式如下：PI = (S期细胞数 + 0.5 * M期细胞数) / (G1期细胞数 + S期细胞数 + G2期细胞数)根据实验数据，可以计算出细胞周期指数的值为：PI = (30% + 0.5 * 10%) / (40% + 30% + 20%) = 0.45细胞周期指数的值为0.45，表示样本中的细胞具有一定的增殖能力。
4. 结论细胞周期分析体检报告提供了关于细胞在不同阶段的生命周期的信息。
通过对细胞周期分布和细胞周期指数的分析，可以评估细胞的增殖能力和生命周期的稳定性。
细胞周期实验报告
细胞周期实验报告摘要：本实验旨在通过观察和分析细胞在不同阶段的行为及特征，深入了解细胞周期的变化规律。
实验采用显微镜观察和细胞染色技术对细胞进行观察和分类，通过数据统计和对比分析，得出了细胞在各个阶段的周期长度和特征。
实验方法：1. 细胞培养：选取带有明显生长特征的细胞株，进行细胞培养。
保持适宜的培养条件，包括培养基的温度、湿度、营养物质等。
2. 细胞采集：在培养基中加入适量的细胞生长因子，促使细胞迅速增殖。
当细胞数量达到一定程度时，采用适当的方法将细胞采集出来。
3. 细胞染色：将采集到的细胞进行染色处理，常用的染色方法包括吉姆萨染色和荧光染色。
染色目的是为了使细胞核和细胞器等结构更加清晰可见。
4. 显微镜观察：将染色后的细胞放置在显微镜上，调整合适的倍数和焦距，观察细胞的形态和细节结构。
用相机等设备记录下观察到的细胞图像。
5. 数据统计与分析：对观察到的细胞进行分类和计数，统计各个细胞周期阶段的细胞数量。
根据数据进行比较和分析，得出细胞周期在不同阶段的长度和特征。
实验结果：经过观察和统计分析，我们得出了以下的实验结果：1. G1期：在显微镜下观察到，G1期的细胞呈现出较小的体积，细胞核形状较圆，染色质较少。
G1期细胞周期长度为X小时。
2. S期：S期的细胞在显微镜下表现为细胞核逐渐扩大，形状变为椭圆形，并且染色质开始复制。
S期细胞周期长度为Y小时。
3. G2期：G2期的细胞核较大，形状为椭圆形，并且染色质进一步增加。
G2期细胞周期长度为Z小时。
4. M期：M期是细胞分裂的阶段。
在显微镜下观察到，细胞核逐渐缩小并分裂成两个新的细胞核。
M期细胞周期长度为W小时。
综合以上结果，我们得到了细胞周期的完整时间长度为X+Y+Z+W 小时。
实验讨论：通过本实验的观察和分析，我们深入了解了细胞在不同阶段的周期长度和特征。
这对于细胞生物学研究和医学应用有着重要的意义。
然而，实验结果仅仅是对特定细胞株的研究结果，并不能代表所有类型的细胞。
PI染色检测细胞周期实验步骤
PI染色检测细胞周期实验步骤PI（Propidium Iodide）染色是一种常用的细胞周期分析方法，可用来定量分析细胞在不同细胞周期阶段的比例。
下面是一种常见的PI染色检测细胞周期实验步骤：实验步骤：1.细胞培养：将要进行细胞周期实验的细胞株在无菌条件下培养至富有活力的生长期，并确保细胞数目足够。
2.细胞收获：将培养皿中的细胞用PBS（磷酸缓冲盐溶液）洗涤2次，以去除残留的培养基和衰老细胞。
然后用细胞解离液将细胞从培养皿上彻底剥离。
3.细胞计数：采用显微镜或血球计算板等工具计数细胞数目。
确保每个实验条件下的细胞数相似。
4. 固定细胞：用70%（体积比）的乙醇在-20℃的环境中将细胞固定。
将乙醇均匀地加入细胞悬浮液中，一般细胞浓度为1×10^6/ml。
放置细胞悬液在-20℃的冰箱中固定1小时。
5.染色：将固定的细胞在室温下洗涤2次PBS。
制备PI染色液，可以选择适当的PI浓度（如50μg/mL）然后将染色液加入洗涤后的细胞悬液中，使之均匀包涵。
在黑暗中静置15分钟以便细胞充分染色。
6.流式细胞仪检测：使用流式细胞仪对染色后的细胞进行检测。
在流式细胞仪前，将细胞过滤，以去除聚团的细胞。
7.数据分析：使用流式细胞仪的软件或其他分析软件对所得数据进行细胞周期分析。
基于DNA含量，细胞可以被分为G0/G1、S和G2/M三个周期阶段，通过计算这些细胞的百分比可以得到细胞周期分布情况。
注意事项：1.实验要在无菌条件下进行，以避免细胞污染。
2.在染色时，应在黑暗的环境中操作，以避免PI受光照的影响。
3.使用流式细胞仪时，要注意正确设置仪器参数，以获取准确的测量结果。
4.实验前后仔细清洁工作区和实验设备，以防止交叉污染。
以上就是一种常见的PI染色检测细胞周期实验步骤，根据实验的需求和细胞类型的不同，还可以对实验步骤进行适当的调整。
细胞周期实验：从protocol到数据分析（附免费软件）
细胞周期实验：从protocol到数据分析（附免费软件）细胞周期，是指细胞从⼀次分裂完成开始到下⼀次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段。
细胞间期⼜分为C0期、G1期、S期、G2期；细胞分裂期即M期。
G0/G1期：G1期，细胞体积逐渐增⼤，细胞开始RNA和蛋⽩质的合成，DNA含量保持⼆倍体状态，G0期是脱离细胞周期暂时停⽌分裂的⼀个阶段。
但在⼀定适宜刺激下，⼜可进⼊周期，从DNA含量上⽆法区分G0与G1期。
S期：在这⼀阶段完成DNA的合成以及合成与DNA组装构成染⾊质等有关的组蛋⽩。
DNA含量在此时期增加，介于G1期和G2期之间。
G2/M期：G2期是DNA复制结束和开始有丝分裂之间的间隙。
从DNA含量上同样⽆法区分G2期和M期。
细胞周期的检测-------------DNA含量的变化检测细胞周期最常⽤的⽅法就是检测细胞DNA含量，正常⽣长的细胞都会经历分裂过程，G0/G1期是两倍体时期，S期DNA开始合成，到G2/M期，细胞处于四倍体时期，之后细胞⼀分为⼆，进⼊下⼀个细胞周期。
特性染料固定破膜特点激光细胞膜不通透性PI/RNase是最常⽤蓝黄绿激光DAPI是CV值最⼩紫外激光⼀、实验操作：PI/RNase染⾊法：以悬浮细胞为例1、离⼼收集细胞，弃上清，⽤预冷的PBS洗涤2次；2、细胞固定：⽤残留的少许PBS混匀沉淀，缓慢加⼊-20°C预冷的70%⼄醇，边加边摇匀，避免细胞粘连在⼀起，置于-20°C冰箱固定4h以上；3、细胞染⾊：350g离⼼5min，弃上清，⽤2ml的PBS洗涤2次，按照10^6 cells 加⼊500µlPBS，含50µg/ml的 PI，100µg/ml的RNaseA，4°C避光孵育15min-30min（可将PI直接⽤PBS配成⼯作浓度，RNaseA现加进去）；4、上机分析：由于PI具有很强的粘附性，容易使细胞聚团，建议过滤后再上机分析，同时别忘了检查流式仪器的状态，⼀般低速收集2-3万个细胞即可。
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤流式细胞仪是一种能够对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析和分选的技术。
在细胞生物学研究中，流式细胞仪常用于检测细胞周期，这对于了解细胞的增殖、分化和凋亡等生理过程具有重要意义。
以下是流式细胞仪检测细胞周期的详细操作步骤：一、实验前准备1、细胞培养选择处于对数生长期的细胞进行实验，以保证细胞状态良好且增殖活跃。
根据细胞类型和实验要求，在合适的培养条件下培养细胞。
2、试剂和材料70%乙醇：用于固定细胞。
碘化丙啶（PI）染液：用于染色细胞核中的 DNA。
RNA 酶：用于去除 RNA 对染色的干扰。
磷酸盐缓冲液（PBS）：用于洗涤细胞。
流式细胞仪专用的上样管。
3、仪器设备流式细胞仪，并确保仪器处于正常工作状态，包括光路校准、液流系统稳定等。
离心机：用于离心细胞。
二、细胞收集1、当细胞培养达到所需的密度和状态时，小心吸出培养基。
2、用 PBS 轻轻洗涤细胞两次，以去除残留的培养基和杂质。
3、加入适量的胰蛋白酶或其他细胞解离试剂，将细胞从培养容器表面解离下来。
4、加入含有血清的培养基终止胰蛋白酶的作用，防止过度消化细胞。
5、将细胞悬液转移到离心管中，离心（一般 1000 1500 rpm，510 分钟），使细胞沉淀。
三、细胞固定1、弃去上清液，留下细胞沉淀。
2、缓慢加入预冷的 70%乙醇，边加边轻轻涡旋或吹打细胞，使细胞充分分散在乙醇中。
乙醇的最终浓度应在 70%左右。
3、将细胞在 4°C 下固定至少 1 小时，可固定过夜以确保固定效果。
四、PI 染色1、离心固定后的细胞，弃去乙醇。
2、用 PBS 洗涤细胞两次，以去除残留的乙醇。
3、加入适量的 RNA 酶溶液，在 37°C 水浴中孵育 30 分钟，以去除 RNA 对染色的干扰。
4、加入 PI 染液，使其终浓度达到合适的范围（通常为 50 100μg/mL），在室温下避光孵育 30 分钟。
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细胞周期测定实验细胞计数法：实验方法原理体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。
它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。
分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，它是测定细胞周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。
实验材料细胞试剂、试剂盒胰酶甲醇培养液冰醋酸Giemsa染液仪器、耗材CO2培养箱普通显微镜培养皿盖玻片吸管实验步骤一、消化细胞，将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。
二、CO2培养箱中培养48小时，使细胞长在盖片上。
三、取出盖片，按下列顺序操作：PBS漂洗3分钟→甲醇：冰醋酸=3：1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。
四、盖片晾干后反扣在载玻片上，镜检。
五、计算分裂指数=分裂细胞数/总细胞数×100%展开注意事项1. 操作时动作要轻，以免使盖片上的细胞脱落。
其他一、Giemsa染液配制称Giemsa粉末0.5 g，加几滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油总量为33 ml）。
56℃中保温90-120分钟。
加入33 ml甲醇，置棕色瓶中保存，此为Giemsa原液。
使用时按要求用PBS稀释。
一般稀释10倍。
BrdU参入法实验方法原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。
从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。
细胞周期反应了细胞增殖速度。
单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。
如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。
细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。
计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。
实验材料细胞试剂、试剂盒BrdU 甲醇冰醋酸Giemsa染液秋水仙素SSC 柠檬酸三钠NaCl仪器、耗材冰箱玻片水浴锅锅盖紫外灯光学显微镜实验步骤一、试剂配制1. BrdU配制BrdU 10 mg加双蒸水10 ml ，4℃下避光保存。
2. 2×SSC配制NaCl 1.75 g，柠檬酸三钠0.88 g，加水至100 ml，4℃保存。
二、细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使最终浓度为10 μg/ml。
三、44小时加秋水仙素，使每ml中含0.1 μg。
四、48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。
五、常规染色体制片。
六、染色体玻片置56℃水浴锅盖上，铺上2×SSC 液，距紫外灯管6 cm处紫外照射30分钟。
七、弃去2×SSC液，流水冲洗。
八、Giemsa液染色10分钟，流水冲洗，晾干。
九、镜检100个分裂相，计第一、二、三、四细胞期分裂指数。
十、计算细胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小时）展开其他一、细胞周期介绍细胞周期（cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，分为间期与分裂期两个阶段。
1. 间期间期又分为三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。
（1）G1期此期长短因细胞而异。
体内大部分细胞在完成上一次分裂后，分化并执行各自功能，此G1期的早期阶段特称G0期。
在G1期的晚期阶段，细胞开始为下一次分裂合成DNA所需的前体物质、能量和酶类等。
（2）S期S期是细胞周期的关键时刻，DNA经过复制而含量增加一倍，使体细胞成为4倍体，每条染色质丝都转变为由着丝点相连接的两条染色质丝。
与此同时，还合成组蛋白，进行中心粒复制。
S期一般需几个小时。
（3）G2期为分裂期做最后准备。
中心粒已复制完毕，形成两个中心体，还合成RNA和微管蛋白等。
G2期比较恒定，需用1～1.5小时。
2. 分裂期细胞的有丝分裂（mitosis）需经前、中、后，末期，是一个连续变化过程，由一个母细胞分裂成为两个子细胞。
一般需1～2小时。
（1）.前期（prophase）染色质丝高度螺旋化，逐渐形成染色体（chromosome）。
染色体短而粗，强嗜碱性。
两个中心体向相反方向移动，在细胞中形成两极；而后以中心粒随体为起始点开始合成微管，形成纺锤体。
随着核仁相随染色质的螺旋化，核仁逐渐消失。
核被膜开始瓦解为离散的囊泡状内质网。
（2）中期（metaphase）细胞变为球形，核仁与核被膜已完全消失。
染色体均移到细胞的赤道平面，从纺锤体两极发出的微管附着于每一个染色体的着丝点上。
从中期细胞可分离得到完整的染色体群，共46个,其中44个为常染色体,2个为性染色体。
男性的染色体组型为46，XY，女性为46,XX。
分离的染色体呈短粗棒状或发夹状，均由两个染色单体借狭窄的着丝点连接构成。
（3）后期（anaphase）由于纺锤体微管的活动，着丝点纵裂，每一染色体的两个染色单体分开，并向相反方向移动，接近各自的中心体，染色单体遂分为两组。
与此同时，细胞波拉长，并由于赤道部细胞膜下方环行微丝束的活动，该部缩窄，细胞遂呈哑铃形。
（4）末期（telophase）染色单体逐渐解螺旋，重新出现染色质丝与核仁；内质网囊泡组合为核被膜；组胞赤道部缩窄加深，最后完全分裂为两个2倍体的子细胞。
在体内根据细胞的分裂能力可把它们分为三类：①增殖细胞群，如造血干细胞，表皮与胃肠粘膜上皮的干细胞。
这类细胞始终保持活跃的分裂能力，连续进入细胞周期循环。
②不再增殖细胞群，如成熟的红细胞、神经细胞、心肌细胞等高度分化的细胞，它们丧失了分裂能力，又称终末细胞（end cell）。
③暂不增殖细胞群，如肝细胞、肾小管上皮细胞、甲状腺滤泡上皮细胞。
它们是分化的，并执行特定功能的细胞，在通常情况下处于G0期，故又称G0期细胞。
在某种刺激下，这些细胞重新进入细胞周期。
如肝部分切除术后，剩余的肝细胞迅速分裂。
流式细胞仪实验方法原理流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。
在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。
通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。
细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。
利用PI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。
实验材料HeLa细胞试剂、试剂盒乙醇RNase-A PI PBS仪器、耗材流式细胞仪细胞培养设备离心机水浴冰箱注射器离心管封口膜微量移液器实验步骤一、取对数生长期细胞，倒去培养液，胰酶适度消化细胞，用培养液吹打，800 rpm，离心15 min去上清。
二、PBS洗2次，加0.5 mL PBS吹匀，务必吹散。
三、用5 mL注射器将细胞吸起，用力打入5 mL 70%(预冷)乙醇中，封口膜封口。
4℃固定过夜（可长至2周）。
四、800 rpm 15 min收集固定细胞，PBS洗2次。
五、用0.4 mL PBS重悬细胞并转至Tube中轻轻吹打（防止细胞破碎）。
六、加RNase-A约3 μL至终浓度约为50 μg/mL ，37℃水浴消化30 min；七、加PI约50 μL至终浓度约为65 μg/mL ，在冰浴中避光染色30 min。
八、用300目（孔径40~50微米）尼龙网过滤，上机检测。
九、样品分析测定及打印。
其他一、常见问题1. Q：要做胃粘膜组织的DNA含量及倍体检查，但取材后要等几个星期才会做流式细胞术检查，请问：胃组织要怎样保存好呢？用低温保存，还是用乙醇固定？或者固定后再低温下保存？A：我做过乳腺细胞的DNA含量测定，取得组织以后，先处理成单细胞悬液，然后再加70%冰乙醇固定，要保证冰乙醇的最终浓度为50%，这样固定的细胞悬液可以至少保存12小时，最多可保存一个月，上机检测前再加PI综合染液。
我就是这样做的，保存了将近三个星期，结果还可以，变异系数为5%.2. 实验中想用PI分析细胞周期及凋亡率，请教几个问题：Q：（1）所用的RNAs酶用什么配制呢？用PBS配吗？A：RNaseA用PBS配制没有问题，但是注意要沸水浴去除DNase的活性。
Q：（2）测细胞周期和凋亡率时都要用RNAs酶，可以一起检测吗？A：用流式细胞仪测定时细胞周期和凋亡率是同时测定的，不用担心。
Q：（3）Triton－x－100是固定剂吧，用了70％的冷乙醇（是4℃吗？），是不是就不用Triton－x－100固定了？A：Triton X-100是起透化作用的，不是固定剂，可以用75％的乙醇于-20度固定。
Q：（4）还要设什么内参标准（5％鸡红细胞）吗？A：对照肯定是需要的，这个根据自己的需要进行设置。
Q：（5）不用试剂盒行不行啊？A：完全可以不用试剂盒。
以下提供一个自己的实验步骤供参考：（1）200×g离心10min收集细胞；（2）弃去上清，PBS漂洗一次，将细胞重悬于预冷的80%乙醇中，-20°C固定24h以上；（3）进行流式细胞仪检测前，200×g离心10min收集固定后的细胞；（4）PBS洗涤一次，200×g离心10min收集细胞；（5）将细胞重悬于含100ug/ml RNase A和50ug/ml PI的PBS中，室温孵育30min；（6）将经PI染色和RNase A消化后的细胞悬液用300目的尼龙膜过滤后即可利用流式细胞仪进行细胞周期分布和凋亡细胞定量的分析。
3. Q：流式检测细胞周期时加RNA酶所需的温度？A：其实有关RNA酶在凋亡检测制样过程中使用的必要性问题尚有人持不同意见，该观点的人认为RNA酶在环境中无所不在，常规制样过程中所接触的试剂和环境中的RNA酶已足以降解样品中的RNA，所以为了简便实验操作，也有人不加RNA酶或如你所参考的方法将其与PI染液一起使用。
不过经典的方法还是“先加RNA酶37度孵育30min，然后加PI 4度孵育30min”。
至于染色时使用4度，是因为低温可减弱分子运动，增强荧光染料结合的稳定性和减少可能的荧光损耗。
上流式前细胞用75％乙醇固定行吗？4. Q：我养肿瘤细胞，测周期。
看到帖子说70％乙醇必须用PBS和乙醇配，用水配细胞会碎裂，有帖子说PBS和乙醇配会出现絮状物。
上流式前细胞用75％乙醇固定，就用买来的现成的瓶装75％乙醇，行吗？必须那么严格吗？A：先用冷PBS悬浮细胞，大约1-2ml，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。
之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-75%乙醇。