实验二-经口急性毒性试验
经口急性毒性试验
经口急性毒性试验※<(一)目的>化学毒物经口急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。
奉实习的目的是学习急性毒性试验的实验设计原则，学会经口灌胃技术、随机分组方法，掌握主要的LD50计算方法和急性毒性分级标准。
※<(二)原理>选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。
一次或24h内多次给予受试物后，了解动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。
※<(三)内容>1．健康小鼠或大鼠的选择，性别的辨认。
2．称重、编号和随机分组方法。
3．受试化学物溶液的配制。
4．小鼠和大鼠经口灌胃操作技术．5．毒性体征的观察、LD50计算和毒性分级※<(四)材料和试剂>1.实验动物健康成年小鼠或大鼠若干只。
2.器材灌胃针(大鼠、小鼠适用)、注射器(0.25，1.2，5m1)、吸管(0. 1，0.2，0.5，1，2，10ml)、容量瓶(10，25，50ml)、烧杯(10，25，50ml)、滴管、电子天平(感应量1／10000g)、动物体重秤、外科剪刀、镊子。
3.试剂受试物(由指导教师自定)，苦味醒酒精饱和液，o．5％品红溶液或其他染色剂．※<(五)操作步骤>1．健康动物的选择。
2．性别辨认。
3.动物称重、编号和分组；(1)称重；称量大、小鼠体重的秤，其感应量需在0.1g以下，并经过校正。
称量时注意轻抓轻放动物，避免激惹，等动物安静后记录体重读数，以g表示。
(2)编号：以染色法编号。
用苦味醒酒精饱和液为染料。
以黄色为个位数号码，红色为十位数号码。
一股以头部为1号，按顺时针依次右前肢为2号，右腰为2号，右后肢为4号，尾根部为5号，右后肢为s号，左腰为7号，左前肢为8号，后背为9号，10号为在头部染红色标记，11号在右前肢染红色和黄色标记各一，依次类推。
急性经口毒性试验
二、急性经口毒性试验Acute Oral Toxicity Test1 范围本规范规定了动物急性经口毒性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料安全性毒理学检测。
2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals ( No. 401, Feb. 1987 )USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines （Series 870.1100, Aug. 1998 )3 试验目的急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。
试验结果可作为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其它毒理学试验剂量的依据。
4 定义4.1 急性经口毒性(Acute oral toxicity)：一次或在24h内多次经口给予实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。
4.2 经口LD50（半数致死量，Medium lethal dose）：经口一次给予受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重接受受试物的重量(mg/kg或g/kg)来表示。
5 试验的基本原则以管饲法经口给予各试验组动物不同剂量的受试物，每组用一个剂量，染毒剂量的选择可通过预试验确定。
染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。
试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行尸检。
本方法主要适用于啮齿类动物的研究，但也可用于非啮齿类动物的研究。
6 试验方法6.1 受试物受试物应溶解或悬浮于适宜的介质中，建议首选水，其次是植物油(如玉米油)，或考虑使用其它介质（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）。
对非水溶性介质，应了解其毒理特性，否则应在试验前先确定其毒性。
每次经口染毒液体的最大容量取决于实验动物的大小，对啮齿类动物所给液体容量一般为1mL/100g，水溶液可至2mL/100g。
通过调整受试物溶液浓度使各剂量组经口染毒的容量一致。
《食品毒理学》经口急性毒性试验
《食品毒理学》经口急性毒性试验一、实验目的和要求掌握给药方法；了解一次或24小时内多次给予受试化学物后，动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试动物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死量。
二、主要仪器设备实验动物：成年昆明系实验小鼠（SPF级别）。
器材：注射器（0.25，1，2，5ml）、吸管（0.1，0.2，0.5，1，2，10ml）、容量瓶（10，25，50ml）、烧杯（10，25，50ml）、滴管、灌胃针12号、动物体重秤、解剖剪刀、镊子、手术手套，口罩。
试剂：受试化合物（氯化钡溶液，20mg/mL）。
三、实验原理氯化钡是强电解质，可完全电离出钡离子，导致钡离子在小鼠血液内部引发急性低钾血症，故小鼠会出现肌无力和发作性软瘫，心肌应激性减低，各种心律失常和传导阻滞，由于肌无力，严重中毒的小鼠还会出现呼吸困难乃至死亡等症状。
四、实验内容1．健康动物的选择和性别鉴定。
2．实验动物称重、编号和随机分组。
3．受试化学物溶液的配制。
4．小鼠灌胃操作技术。
（1）预实验，取小白鼠、称重、随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液，摸索小鼠接近100%和0%死亡的剂量范围。
（2）小鼠随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液。
小鼠灌胃法：将钝头的12号注射针（适用于小鼠），安装在适当容积的注射器上，吸取所需的受试物溶液，左手抓住动物双耳后至背部的皮肤（小鼠仅抓住耳后、颈部的皮肤，用无名指、小手指和大鱼际肌将其尾根部压紧），将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者。
注意使动物的上消化道固定成一直线。
右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避开牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。
若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即可深入至胃部。
如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免操作穿破食管，甚至误人气管，导致动物立即死亡。
经口急性毒性试验.
大小鼠标记方法（单色法n>10）
双 色 法
大小鼠标记方法（双色法n<10）
红色表示十位数： 头部染红色为10
左前肢为20
左腰部为30 黄色表示个位数。 大小鼠标记方法（双色法n>10）
其它标记方法
烙印编号法：
体内埋号编号法：
耳孔编号法：
挂牌编号法：
实验动物的随机分组
表1 动物随机分组表 动物号 随机数字 除6余数 分组 动物号 随机数字 除6余数 分组 1 97 1 A 16 27 3 C 2 74 2 B 17 7 1 A 3 24 0 F 18 36 0 F 4 67 1 A 19 7 1 A 5 62 2 B 20 51 3 C 6 42 0 F 21 24 0 F 7 81 3 C 22 51 3 C 8 14 2 B 23 79 1 A 9 57 3 C 24 89 5 E 10 26 2 B 25 73 1 A 11 42 0 F 26 16 4 D 12 53 5 E 27 76 4 D 13 32 2 B 28 62 2 B 14 37 1 A 29 27 3 C 15 32 2 B 30 66 0 F
组 别 A B C D 1 2 7 26 4 5 9 27 14 8 16 鼠 号 17 10 20 19 13 22 23 15 29 25 28
E
F
12
3
24
6 11 18 21 30
具体方法如下：继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F组的现有动物数，即： 56/7(7为A组现动物数)整除，余数为0，将A组第7只动物(25号)调配给D组；下一 个：50/6(6为A组现有动物数)余2，将A组第2只动物(4号)调配给D组；接下来 26/6(6为C组现有动物数)余2，将C组第2只动物(9号)给D组。余类推，最后调整
实验二 经口急性毒性LD50测定
实验二经口急性毒性LD50测定实验二经口急性毒性LD50测定一、试验目的1. 熟悉急性毒性LD50测定的剂量设计2. 掌握小鼠灌胃技术3. 掌握改进寇氏法计算LD50的方法二、试验原理选择健康的实验动物，依据LD50计算的设计原则，将实验动物随机分成数个染毒组和一个阴性对照组。
一次或24小时内多次给予实验组受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因。
根据受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。
三、材料和试剂1. 实验动物:健康成年小鼠60只，雌雄各半2. 器材:灌胃针(小鼠适用)、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、分析天平、台秤、外科手术剪、镊子3. 受试物:(敌百虫或克佰威)4. 染色剂:苦味酸酒精饱和溶液、0.5%品红溶液四、实验内容1. 实验动物称重、编号和随机分组2. 染毒剂量设计及试剂配制3. 小鼠灌胃染毒技术4. 毒性反应的观察及LD50计算五、试验方法(一)预实验1. 探索剂量范围先找出100%与0%的致死量(或阳性反应的剂量)为实验的上、下限剂量(Dmax和Dmin)。
据经验或文献定出一个估计量，取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax;如降低一档剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax。
以次类推，找出Dmin。
2. 剂量分组一般染毒组数(G)以5-8组为宜，组间剂量比值为r。
在确定组数后，按下列公式计算r。
1/(G-1)r = (Dmax/Dmin) 3. 受试物溶液的配制配制等比浓度的敌百虫溶液，并使每只动物在给药容量上相等(如0.5ml/20g)。
剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6,0.9，设5个剂量组。
毒理学急性经口实验
一、试验原理、目的1、急性经口毒性试验是评估化学物毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。
试验结果可作为化学毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其它毒理学试验剂量的依据。
2、此实验为设计性实验，通过此试验应学会化学物急性毒性评价试验的基本程序，并且掌握进行试验设计时应考虑的各种因素与试验条件。
3、熟悉实验动物的饲喂技术及基本要求，掌握实验动物灌胃的技能，学会LD50及其可信限的计算方法。
4、通过本试验获得受试化学物的半数致死剂量，并描述试验过程中实验动物的各种反应及可能的靶器官。
二、试验所需的试剂与器材、小白鼠、灌胃针、动物饲料、天平、饲养室、苦味酸、酸性品红、手术剪、托盘、镊子等。
三、受试物名称、理化性状、配制方法及浓度、受试剂量；1.受试物：亚硝酸钠2.理化性状：白色至淡黄色粒状结晶或粉末，无味，易潮解，有毒，微溶于醇及乙醚，水溶液呈碱性，PH值约为9.相对密度（水=1g/cm3）：2.17g/cm3；熔点：271℃；沸点320℃（分解）属强氧化剂又有还原性，在空气中会逐渐氧化，表面则变为硝酸钠，也能被氧化剂所氧化；遇弱酸分解放出棕色二氧化氮气体；与有机物、还原剂接触能引起爆炸或燃烧，并放出有毒的刺激性的氧化氮气体；遇强氧化剂也能被氧化，特别是铵盐，如与硝酸铵、过硫酸铵等在常温下，即能互相作用产生高热，引起可燃物燃烧。
3.配置方法及浓度称取一定量亚硝酸钠粉末（由预实验结果决定浓度从而决定剂量），将其溶解于水中制成不同浓度梯度的一组试剂。
4.受试计量由预实验决定。
四、实验步骤/实验动物的分组1.实验动物的分组将预实验得出的最高、最低剂量换算为常用对数，然后将最高、最低剂量的对数差，分为5个对数等距的剂量组，每组10只小白鼠，雌雄各半。
2.饲喂条件实验动物喂养室温度应该孔子和在22℃±3℃，相对湿度30%~70%,无对流风。
早6点至晚6点进行12h光照，其余时间黑暗。
经口急性毒性试验
实验动物编号标记方法
① ○ ⑧ ②
⑦ ⑨ ③
● ⑥ ⑤ ④
标记部位和对应 的号码
48号鼠标记方法 48号鼠标记方法 ●表示十位 ○表示个位
实 验 步 骤
实验动物 预实验
确定大致的 LD0和LD100
秤体重
编号
分组
组数和剂量 （随机数字表法） 随机数字表法）
灌胃操作
中毒症状观察和死亡纪录
计算LD 计算LD50
体重记录(g)
组 染毒剂量 动物编 性 体重 染毒 别 (mg/kg) 号 别 (g) 时间
……
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
计算LD 计算LD50
（寇氏法） 寇氏法）
lgLD50=1/2Σ(Xi + Xi+1)(Pi+1 - Pi) Σ(X i+1 i+1
式中: 式中:（Xi + Xi+1）为相邻两个试验组剂量之和 为相邻两组死亡率之差。 (Pi+1 - Pi)为相邻两组死亡率之差。
确定组距的方法 确定组距的方法
lgLD100 – lgLD0 d = n-1 式中： 式中： d：为组距 n：为设计时确定的剂量组数
急性毒性实验记录
受试物 名称： 提供单位： 动物种属品系： 动物来源： 相对湿度： 染毒剂量： mg/kg 合格证号：
症状 死亡 及出现时间 时间
染毒途径： 室温：
实验目的
1.掌握化学物毒性评价试验方法 1.掌握化学物毒性评价试验方法 2.掌握经口灌胃技术 2.掌握经口灌胃技术 3.学习中毒症状观察方法。 3.学习中毒症状观察方法。 学习中毒症状观察方法
材料和试剂
•实验动物：健康小鼠 实验动物： 实验动物 •器 器 材： 小鼠灌胃针、 小鼠灌胃针、电子天平 动物体重计、 动物体重计、外科剪刀和镊子 •试 试 剂：受试物
经口急性毒性试验
经口急性毒性试验经口急性毒性试验是一种广泛使用的实验室动物毒性试验，它通常用于评价新化合物、生物制品等物质的毒性，以及评估安全使用剂量的潜在结果。
这篇文章将介绍经口急性毒性试验的背景、方法、注意事项和限制。
背景方法经口急性毒性试验通常使用小鼠、大鼠、兔子或其他哺乳动物，动物必须年龄相似、体重相当且健康状态良好。
实验中使用不同剂量的测试物质来确定它们在动物体内的毒性。
通常，实验中使用的剂量量较低，但有时也会使用较高的剂量以便观察更加严重的毒性反应。
其实验流程如下：1.选取合适且健康的实验动物，检查其体内和体外健康状况；2.确定实验剂量，并将物质以食物、水、灌胃管等方式交予动物口服；3.观察动物的外观、行为和症状，记录观察结果；4.在一定时间后继续观察动物，在必要时应用适当的护理；5.按照实验协议的规则处理动物，以确保其安全。
注意事项在进行经口急性毒性试验时，需要注意以下几点：1.确定剂量：需要选择适当的实验剂量，以确保所测试的物质不会对动物造成过度毒性反应，且可以解释毒性的分级。
2.采取恰当的动物保护措施：对于实验过程可能造成疼痛或不适的情况，应采取适当的保护措施，例如提供充足的饮水、合适的饲料和温度环境。
3.保证实验数据质量：为了确保实验数据质量，需要在实验过程中跟踪记录、分析数据，并确定实验的有效性以及物质毒性分级的准确性。
限制虽然经口急性毒性试验是一种有效的毒性评估方法，但它有一定的局限性。
经口急性毒性试验只能评估物质对动物的急性毒性反应，而对于慢性毒性、免疫毒性或生殖毒性等长期影响，它并不能提供完整的信息。
此外，每种动物特征不同，对物质的敏感程度也会不同，因此难以将实验结果适用于不同品种的动物和不同的物质评估。
因此，除经口急性毒性试验外，还需要完善其他的毒性评估方法以更准确地评估药物、化学物质和其他物质的毒性。
实验二 经口急性毒性实验
实验二经口急性毒性实验一、实验目的1、通过本次实验掌握经口灌胃技术，半数致死剂量的意义。
2、通过本次实验学习半数致死剂量的计算及毒性判定。
二、实验原理：化学物经口染毒的方法是毒理学中重要的基本技术之一，经口急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。
通过该实验学习化学物毒性试验的实验设计原则和掌握经口灌胃技术。
三、仪器、试剂与材料1、器材帆布手套、橡胶手套、电子天平、剪刀、大头针、小鼠鼠笼、泡沫塑料板、棉签、纱布、脱脂棉、小鼠灌胃针、1ml注射器、电子天平、动物体重秤等2、试剂敌百虫、苦味酸饱和溶液。
3、实验动物成年、健康的雌、雄小鼠50只。
四、实验内容与步骤1、实验动物的性别鉴定、编号、称重和分组参考实验一中动物性别鉴定、编号和分组方法，50只小鼠，雌雄各半，随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、五组，各小鼠用电子天平称重，以g为单位，小数点后保留一位数字。
2、确定染毒剂量：经预试验获得敌百虫0％～100％的致死剂量范围，由公式计算各组剂量公比值r：1/-r，根据公比值确定各组正式剂=n ab量。
a：最低组剂量，mg/kgb：最高组剂量，mg/kg3、配制毒物溶液准确称取敌百虫2024mg，溶解并稀释至10 mL，取5 mL置于容器中，供第五组染毒；加入5 mL溶剂，稀释后取出5 mL供第四组动物染毒；再加入5 mL溶剂，稀释后取出5 mL供第三组动物染毒用，依此类推，可配制成按1:0.5递减的各剂量组不同浓度的溶液。
4、计算每只动物实际灌胃体积每只小鼠实际灌胃量＝0.02 mL/g ×该小鼠体重g5、染毒（1）动物的禁食和复食：试验前，实验动物禁食过夜，不限制饮水，灌胃后2-3h后复食（2）灌胃操作技术：同实验一小鼠灌胃染毒法。
6、中毒体征和死亡情况观察染毒后观察和记录中毒体征及出现的时间、死亡数量和时间及死亡前的特征。
高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观察。
根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。
乙醇小鼠急性经口毒性评价
实验二、乙醇小鼠急性经口毒性评价
体重 (若动物无死亡，应称重)
反映动物中毒后综合性整体变化，比较客观简便的 量化指标 应定期多次称量动物的体重变化，一般为每周1次 对体重指标的变化要仔细观察和分析
用5个剂量时，
LDk的可信限= log-1(logLDk + 1.96 S ) (P=0.95) X ----为对数剂量； i-----为相邻两组剂量比值（以高剂量组为分子）的对数； y-----为死亡率相应的机率单位（查附表）； 1、2、3、4、5…为小剂量组到大剂量组的顺序。 yK----为LDk所相当的反应率的机率单位 W----为权重系数（查表）
+ + i=0.1
+ + + + +
-
0 2 2 1 5
2 3 2 0 7
2 5 4 1 12
根据上表数据计算：n=12,n2=144 ∑xf=12.59*2+10.0*5+7.94*4+6.31*1=113.25 (∑xf)2=12825.56 ∑x2f =12.592*2+10.02*5+7.942*4+6.312*1=1109 n ∑x2f =13308 因此，该化学物小鼠经口LD50 LD50=1/12*113.25=9.44(mg/kg) 及其95%可信区间范围为 S=0.55(mg/kg) 9.44mg/kg (8.37~10.51mg/kg).
0%和100%反应率的权重表
【推荐】第二次--经口急性毒性实验
二 、实验原理
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD50计算的设计原则将动物分成数 个染毒组。给予受试物后，了解动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征 以及可能的死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量（LD50），并 根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。本次实验采用改进寇氏法。 改进寇氏法: 利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计的方法。要求如下: 每个染毒剂量组动物数相同， 各剂量组组距呈等比级数， 死亡率呈正态分布， 最低剂量组死亡率<20％， 最高剂量组死亡率>80%。
治疗提供参考。
实习报告要求
• 一、目的意义 • 二、实验原理 • 三、实验材料（实验动物, 受试物）及仪器 • 四、实验步骤(随机分组, 试剂配制） • 五、实验结果（包括两个表、计算结果） • 六、结果评价
• 1、说明受试物的基本情况（名称、纯度、状态等）和配 制方法；
• 2、实验动物的种属、级别。实验前动物禁食情况和健康 状况；
雄A= V * K / (K-1)
•
＝5*1.28/ ( 1.28－1)
=5*1.26/(1.26-1)
•
＝22.9ml
=24.2ml
• 4.下一组溶液的配置： 等比稀释法 A*（1/K）
• 雌性=A×（1/k）=22.9 ×(1/1.28)=17.9ml
• 雄性=A×（1/k）=24.2 ×(1/1.26)=19.2ml
受试物名称: 敌敌畏 验室
受试物性状: 乳油 受试物来源: 毒理实
动物种属品系: 小鼠，昆明种 物中心
急性经口毒性试验
急性经口毒性试验2.3.1.1 目的（1)检测消毒剂对实验动物的急性毒性作用和强度。
（2)为亚急（慢）性毒性等试验提供剂量选择的依据。
2.3.1.2 实验动物小鼠或大鼠任选一种，雌雄各半。
小鼠体重18g～22g，大鼠体重180g～220g，根据不同的计算LD50方法，选用适当的动物数量。
2.3.1.3 试验分组如应用概率单位-对数图解法计算LD50，随机分为5个～6个剂量组。
通常最高剂量组的动物死亡率应≥90%，最低剂量组动物死亡率应≤10%。
可先以较大的组距较少量动物进行预试，找出其粗略致死剂量范围，然后再设计正式试验的剂量分组。
2.3.1.4 操作程序（1）动物的准备：试验前，一般禁食过夜，不限制饮水。
（2）受试物的配制：常以水或食用植物油为溶剂配制成溶液，或采用0.5%羧甲基纤维素配制成混悬液。
灌胃给予受试物的最大容量，小鼠不超过0.2ml/10g体重，大鼠不超过1.0ml/100g体重。
（3）染毒方法：用灌胃方式将受试物一次给予动物。
若受试物毒性很低，一次灌胃容量太大，可在24h内分成2次～3次给予，其总剂量作为一日剂量计算。
（4）染毒后观察动物的中毒表现和死亡数及死亡时间，并对死亡动物和观察期满处死动物进行尸体解剖，肉眼观察，发现有异常的组织或脏器，尚需进一步作组织病理学检查。
观察时间14d。
2.3.1.5 LD50的计算方法根据给受试物后14d内的各剂量组动物死亡率计算LD50(半数致死剂量)。
2.3.1.5.1概率单位-对数图解法：（1）根据各剂量组动物死亡率，从表2-9 中查各组的概率单位。
因死亡率为 0% 和 100%的概率单位，与所试动物数有关，故需另在表2-10中查找。
例如：对死亡率为45%的概率单位，可查表2-9。
先在表的左侧纵标目上找到 40，而后在表的上行横标目处找到5，两者交叉点处的4.87，即为45% 的概率单位。
又如:某组用 10 只实验动物，如果全部存活(死亡率为0%)，查表2-10，其概率单位为 3.04。
经口急性毒性实验课件PPT
11
实验步骤
实验动物
预实验
确定大致的 LD0和LD100
组数和剂量
秤体重 编号 分组 （随机数字表法）
灌胃操作
中毒症状观察和死亡纪录 计算LD50
12
确定组距的方法
lgLD100 – lgLD0 d = n-1
式中：d---为组距 n---为设计时确定的剂量组数
13
急性毒性实验记录
受试物 名称： 提供单位： 动物种属品系： 动物来源： 相对湿度： 染毒剂量： mg/kg 合格证号：
各组剂量为等比级数时简化为
lgLD50=Xm - d/2Σ(pi+1 + pi)
式中Xm为最高剂量对数；d为相邻两组剂量对数之和。
16
LD50标准差和95%可信限计算方法
SlgLD50=d Σ
Pi(1 - Pi) n- 1
式中: Pi ---- 死亡率， n ---- 每组动物数
LD5095%可信区间=Lg-1(lgLD50±1.96S lgLD50
6
实验动物编号的标记方法
单 色 法
大小鼠标记方法（单色法n<10）
7
实验动物编号的标记方法
单色法标记原则：单 色法编大于10的号码
时，我们规定顺时针
旋转，后一位必需大 于前一位数，例如：
可以编，12，13，
14……19，但不能编 10，11，20，21，22，
30，31，32，33，等，
以此类推。100以内最 大能编89号。
3
实验内容 • 试验动物的选择和性别鉴定。
• 试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 • 急性毒性试验常用染毒途径和方法。 • 急性毒性反应的观察和LD50计算。
实验二 经口急性毒性试验 Acute Oral Toxicity
一般是采用少量动物(2~3只为一组)，拉大组距，逐渐
缩小，找出受试物0%和100%死亡剂量。
正式试验
经预试验求出受试化学物的致死剂量范围(即死亡率10%90%的剂量范围)，再以下式求出正式试验的剂量组距(i) 值。
logLD90 - logLD10 i n -1
i—表示相邻的两个剂量组，剂量对数之差或相邻两组剂 量比值的对数值；
实验二 经口急性毒性试验 Acute Oral Toxicity Test
Dept. of Toxicology School of Public Health Xinjiang Medical University
目的要求
掌握实验动物的常用染毒途径和方法。 掌握半数致死浓度的测定方法和结果评定。
实习内容
试验动物的选择和性别鉴定。
试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 急性毒性试验常用染毒途径和方法。
急性毒性反应的观察和LD50计算。
实验材料
(一) 实验动物：健康成年小鼠或大鼠若干只。
(二) 器材 注射器(O.25，1，2，5ml)、吸管(0.1，0.2，0.5，1，2，
黑色：煤焦油的酒精溶液
单 色 法
大小鼠标记方法（单色法n<10）
单色法标记原则：单色 法编大于10的号码时，
我们规定顺时针旋转，
后一位必需大于前一位 数，例如：可以编，12，
13，14……19，但不能
编10，11，20，21，22， 30，31，32，33，等， 以此类推。100以内最 大能编89号。
10m1)、容量瓶(10，25，50ml、烧杯(10，25，50ml)、滴管、
灌胃针(大鼠、小鼠适用)、电子天平(感应量1/10000g)、动物 体重秤、外科剪刀、镊子。
急性经口毒性实验
死亡率及LD50计算
死亡率
根据实验动物接触毒物后的死亡数量，计算死亡率。死亡率=死亡动物数/总动物 数×100%。
LD50计算
采用概率单位法或图解法计算LD50（半数致死量），即引起50%实验动物死亡 的毒物剂量。通过比较不同毒物的LD50值，可评价其急性毒性大小。
数据统计与分析
数据整理
将实验数据进行整理，包括动物 种类、性别、体重、接触毒物剂 量、中毒症状、死亡时间等。
药物剂量范围确定
通过分析实验动物在急性经口毒性实验中的反应，可以确定药物的安全剂量范 围，为临床试验和药物治疗提供参考。
在环境科学中的应用
环境污染物风险评估
急性经口毒性实验可用于评估环境污染物对生物体的毒性作 用，为环境风险评估和污染物治理提供依据。
生态毒理学研究
通过分析实验动物在急性经口毒性实验中的反应，可以了解 环境污染物对生态系统的潜在影响，为生态毒理学研究提供 基础数据。
统计分析
采用适当的统计方法对数据进行 分析，如描述性统计、方差分析 、回归分析等，以揭示毒物剂量 与中毒症状及死亡率之间的关系 。
结果解释
根据统计分析结果，对实验数据 进行解释和讨论。比较不同毒物 或不同剂量下的中毒表现和死亡 率，分析可能的影响因素和机制 。
05
实验注意事项与讨论
实验操作规范
动物选择
急性经口毒性实验通过给予实验动物不同剂量的化学物质，观察其产生的毒性效应，从而 建立剂量-反应关系，确定化学物质的毒性阈值和致死剂量。
生物体对化学物质的吸收、分布和代谢
化学物质进入生物体后，会经过吸收、分布和代谢等过程，这些过程会影响化学物质在生 物体内的浓度和停留时间，从而影响其毒性效应。
实验动物的选择
毒理学 实验二、急性经口毒性试验
LD50测定方法 霍恩（Horn)法（剂量递增法） ——查表 改进寇氏法(karber’s method) 几率单位法
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改进寇氏法(karber’s method) 基本要求：
每个染毒剂量组的实验动物数量相同； 各剂量组组距呈等比级数； 死亡率呈正态分布； 最低剂量组死亡率<20%，最高剂量组死亡率>80%。
实验二、经口急性毒性试验
1
急性毒性的概念
急性毒性（acute toxicity）是指实验动物一次或 24h内多次接触一定剂量外源化学物后在短期内所产生的健 康损害作用及致死效应。
观察指标包括一般行为和外观改变、大体形态变化 以及死亡效应。
2
（二）急性毒性试验的目的
1.求出致死剂量及其他急性毒性参数，并根据 LD50对急性毒性进行分级。 2.观察中毒表现、毒作用强度和死亡情况，初步 评价毒物的毒效应特征。 3.为后续的毒性试验提供接触剂量和观察指标选 择的依据。 4.为毒理学机制研究提供线索。
i——相邻两剂量组之对数剂量差值； Xk——最大剂量的对数值； p——死亡率； q——存活率（q = 1－p）； ∑p——各剂量组死亡率总和； m —— lgLD50； n——每组动物数。
最后求反对 数得LD50及 可信区间
22
表6-3 我国农药的急性毒性分级
级别
经口LD50
经皮LD50
吸入LC50
18
19
表1. 急性毒性实验原始记录
受试物名称： 动物物种品系： 染毒途径：
受试物性状： 动物来源： 室温：
受试物来源：
组别 剂量 动物 性 体重 染毒量 染毒 体征及 死亡 体重 (mg/kg) 编号 别 (g) (ml) 时间 出现时间 时间 记录(g)
经口毒性急性试验实验报告
经口毒性急性试验实验报告一、实验目的本次经口毒性急性试验的主要目的是评估测试物质通过口腔摄入后在短时间内对实验动物可能产生的毒性反应，包括但不限于观察中毒症状、确定致死剂量范围以及了解毒性作用的特点和机制，为后续的毒性评估和安全性研究提供基础数据。
二、实验材料1、测试物质本次实验所选用的测试物质为_____，其纯度为_____，物理状态为_____。
2、实验动物选用健康的_____种属动物，体重范围在_____至_____克，雌雄各半，共_____只。
实验动物均来自具有资质的供应商，并在实验前经过适应性饲养，确认健康状况良好。
3、饲料和饮水实验动物在实验期间给予标准的饲料和清洁的饮用水，自由摄取。
4、实验器材包括灌胃针、电子天平、计时器、观察笼等。
三、实验方法1、剂量设计根据预实验结果和相关文献资料，设置了_____个剂量组，分别为_____、＿____、＿____等，同时设立了阴性对照组（给予等量的生理盐水）。
2、动物分组将实验动物随机分为不同的剂量组和对照组，每组动物数量为_____只，确保分组的随机性和均衡性。
3、染毒途径采用一次性经口灌胃的方式进行染毒，灌胃体积根据动物体重进行计算，控制在_____毫升/千克体重。
4、观察指标及时间在染毒后的_____小时内，对实验动物进行密切观察，观察指标包括一般行为表现（如活动、进食、饮水、毛发状态等）、神经系统症状（如抽搐、震颤、昏迷等）、呼吸系统症状（如呼吸急促、呼吸困难等）、消化系统症状（如呕吐、腹泻等）以及死亡情况。
观察时间点分别为染毒后_____分钟、＿____小时、＿____小时等。
四、实验结果1、中毒症状在不同剂量组中，实验动物表现出了不同程度的中毒症状。
低剂量组动物可能仅出现轻微的活动减少、食欲不振等症状；中剂量组动物可能出现呕吐、腹泻、呼吸急促等症状；高剂量组动物则可能出现抽搐、昏迷甚至死亡。
2、死亡情况随着剂量的增加，实验动物的死亡率逐渐升高。
实验二 经口急性毒性试验
毒理学实验二经口急性毒性试验一、实验目的1、掌握实验动物分组方法2、测定LD50的试验设计原则3、小鼠的经口灌胃技术二、试剂和材料1、实验动物：（1）动物品种：健康成年ICR小鼠，体重18g～22g（2）样品来源：首都医科大学实验动物部2、器材：注射器（1ml）、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。
3、试剂：敌敌畏（1400mg/ml）、苦味酸染液（标记用）。
三、实验内容1、健康实验动物的选择和性别鉴定选择健康的雄性小鼠（健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。
动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。
）肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性2、实验动物称重、编号和随机分组选择体重在18-22 g的小鼠，采用随机分组的方法（动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物），每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。
3、受试化学物溶液的配制（1）确定灌胃量：0.1ml/10g（2）确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积（3）药品称量及稀释4、小鼠灌胃技术左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。
5、毒性体征的观察和LD50计算（1）毒性体征的观察：染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时间，观察期为30 min组数：各组死亡率：数相邻两组对数剂量之差：最大剂量的对数 P d :X )P P (d 21X lg 150i i k i i k LD ∑++-=)lg 96.1(lg lg 95%:1)P 1(P d lg 50501-50LD S LD ni ni LD S i i ±--=∑可信区间：实验动物数。
标准误公式：（2）LD50的计算：a 、实验各组剂量的确定：设5组，每组雌雄动物各10只。
剂量组距 d 为：d 为相邻两个剂量组剂量对数之差利用lgLD0依次加d ，取反对数，即可得出各组剂量。
经口急性毒性试验
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试剂和ห้องสมุดไป่ตู้料
1.受试动物 健康小鼠50只 2.器材 玻璃匀浆器、注射器、容量瓶、烧杯、灌胃器、电子天平（感量 0.1g） 3.试剂 氯硝柳胺悬浮液
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方法
（一）健康动物的选择和性别鉴定（见实验一） 急性毒性试验选择动物的体重要求：小鼠18-22g，大鼠180-200g。 （二）动物称重、编号与随机分组（见实验一） （三）剂量分组 经预试求出受试化学物的大致致死范围（0-100%），按等比级数设计5-7个 剂量组。
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六．LD50计算方法 １、平均致死量法（又名寇氏法） 此法计算LD50较为简便，但实验要符合下列要求： （１）每个实验组动物数要相同； （２）各组剂量要按等比级数分组； （３）最大剂量的死亡率最好为100%或与之接近，最小剂量的死亡率最好为0%或与 之接近，计算公式如下： LD50=Log-1[Xm-i(Σp-0.5)]式中: xm——最大剂量的对数值 i——组距，即相邻两组剂量对数剂量之差 p——各剂量组死亡率（死亡率均用小数表示）
2 0 1 5
动物毒理学实验
实验二 经口急性毒性试验
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目的和原理
急性毒性试验的目的是推测新药对人的急性毒性的强弱。同时，它可以为长期 毒性试验、生殖毒性试验、致突变试验等试验设计提供剂量选择依据和有关毒 性信息，还可以推测受试药物毒性发生的速度和持续时间，与半数有效量(ED50) 比较判断新药的安全系数。因此，急性毒性试验对了解新药的毒性是非常必要 的。 急性毒性试验的原理是动物一次或24h内多次接触外源化学物后，观察急性毒性 反应及其程度，中毒死亡的原因及特征，了解受试动物毒性反应的剂量-反应关 系，求出LD50。
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毒理学实验二经口急性毒性试验
一、实验目的
1、掌握实验动物分组方法
2、测定LD50的试验设计原则
3、小鼠的经口灌胃技术
二、试剂和材料
1、实验动物：
（1）动物品种：健康成年ICR小鼠，体重18g～22g
（2）样品来源：首都医科大学实验动物部
2、器材：注射器（1ml）、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。
3、试剂：敌敌畏（1400mg/ml）、苦味酸染液（标记用）。
三、实验内容
1、健康实验动物的选择和性别鉴定
选择健康的雄性小鼠（健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。
动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。
）
肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性
2、实验动物称重、编号和随机分组
选择体重在18-22 g的小鼠，采用随机分组的方法（动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物），每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。
3、受试化学物溶液的配制
（1）确定灌胃量：0.1ml/10g
（2）确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积
（3）药品称量及稀释
4、小鼠灌胃技术
左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。
5、毒性体征的观察和LD50计算
（1）毒性体征的观察：
染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间
按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时间，观察期为30 min
组数
：各组死亡率：数相邻两组对数剂量之差：最大剂量的对数 P d :X )P P (d 21X lg 150i i k i i k LD ∑++-=)lg 96.1(lg lg 95%:1)P 1(P d lg 50501-50LD S LD ni ni LD S i i ±--=∑可信区间：实验动物数。
标准误公式：
（2）LD50的计算：
a 、实验各组剂量的确定：设5组，每组雌雄动物各10只。
剂量组距 d 为：
d 为相邻两个剂量组剂量对数之差
利用lgLD0依次加d ，取反对数，即可得出各组剂量。
b 、LD50的计算（见附件）：
C 、求半数致死量的95%可信区间
四、实验过程
1、人员分工：本次实习同学分两个大组(A 组和B 组)，分别在不同实验室。
每大组分5个小组，分别处理雌雄动物，每小组10只动物。
集体活动：1、 2、 3、 4、5 组各1人，进行受试物配制。
1
lg lg d 0100--=组数LD LD
各小组活动：
每小组1人（共4人），进行动物标记。
（1-10号）
每小组1人（共4人），进行体重记录。
（1-10号）
每小组1人（共4人），进行灌胃。
（1-10号）
每小组1人（共4人），根据体重吸取受试物（0.1ml/10g ）
五、剂量设计及受试物配制表
见附件
六、实验结果
1、急性经口毒性试验原始记录（见附件）
2 、LD50计算表（见附件）
3、结果计算（按照ppt 中所给的剂量设计及受试物配制表计算）
=(lg500-lg100)÷4=（0.6990-2）÷4=0.1747
=0.1747× =0.0316
=2.1747-1/2×（（0+0.35）+（0.35+0.2）+
（0.2+0.65）+（0.65+1））
=1.8777
)lg 96.1(lg lg 95%5050-1LD S LD ±可信区间：
)0316.0 ×96.18777.1(lg 95%-1±可信区间：
即：65.4335~87.0162mg/Kg
七、实验结论与分析
1、毒性物质敌敌畏为中等毒性，体重在18~22g 之间的雄性健康成年ICR 小鼠（来源于首都医科大学实验动物部）经口急性染毒的50LD 为65.4335~87.0162mg/Kg 。
2、毒性特征：小鼠在经口染毒后短时间内出现抽搐，躁动不安，麻痹，肌张力松弛，反应减弱，同时伴有呼吸加快，口吐白沫，鼻孔溢液，尿失禁，腹泻等症状，然后在10分钟左右死亡。
1lg lg d 0100--=组数LD LD ∑--=1)P 1(P d lg 50ni LD S i i 1
-2062.0∑++-=)P P (d 21X lg 150i i k LD
3、本组小鼠为径口染毒的最低剂量，没有出现死亡小鼠，观察过程中，6号小鼠出现亢奋，8号小鼠出现腹泻症状。
4、经过上述症状，可以看出敌敌畏急性毒性包括中枢神经系统与躯体感觉和运动系统毒性，呼吸系统毒性，消化系统毒性，泌尿毒性。
1lg lg d 0
100--=组数LD LD。