动物肝脏DNA提取和鉴定-实验技术
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告,DOC
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言后期，查加夫（E.Chargaff）发现不同物种DNA的碱基组成不同，但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数（A=T），鸟嘌呤数等于胞嘧啶数（G=C），因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用几个层次描绘DNA的结构。
浓盐法从动物组织中提取DNA面和胆小管面三种。
肝细胞里面含有许许多多复杂的细微结构:如肝细胞核、肝细胞质、线粒体、内质网、溶酶体、高尔基氏体、微粒体及饮液泡等组成。
二、实验目的1.掌握浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术三、实验原理核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在0.14M的盐溶液中溶解度很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。
⑦恒温水浴锅实验材料：①猪肝实验试剂：①0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠溶液（pH6.8）②95%乙醇（A.R.）③NaCl固体（A.R.）④5%SDS溶液（5gSDS定容至100ml）⑤V(氯仿)：V（异戊醇）20：1的混合液五、实验操作5min，取上清水相；⑥在上述水相溶液中分别加等体积冷95%乙醇，边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA粗品；⑦用8ml蒸馏水溶解DNA粗品于10ml离心管中。
3.标准曲线的绘制按下表加入各种试剂，混匀，于60℃恒温水浴锅45min，冷却后，在595nm波长下于分光光度计比色测定，以吸光度对DNA浓度作图，制作标准曲线。
w=m1/m2×100%w：DNA的质量分数（%）m1：样液中测得的DNA的质量（ug）m2：样液中所含样品的质量（ug）六、实验数据处理1.标准曲线根据公式w=m1/m2×100% 得：w=0.1053％则100g猪肝中DNA含量为：w×100=0.1053g 七、思考题1.实验中的乙醇、SDS、氯仿-异戊醇、NaCl、柠檬酸钠分别有什么作用？答：①柠檬酸的钠盐在实验中既充当DNA酶的抑制剂，也是pH缓冲溶液；②SDS是表面活性剂，可以让蛋白质与DNA分开；用的材料，本实验用新鲜肝脏作为实验材料。
动物肝脏中DNA的提取和检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸〔DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写,又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。
有时也被称为"遗传微粒",原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线〔260nm有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应；当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸〔dAMP 脱氧腺苷、胸腺嘧啶脱氧核苷酸〔dTMP 脱氧胸苷、胞嘧啶脱氧核苷酸〔dCMP 脱氧胞苷、鸟嘌呤脱氧核苷酸〔dGMP 脱氧鸟苷。
而脱氧核糖〔五碳糖与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。
生化实验课件-动物肝脏中DNA的提取和测定
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
一. 实ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ目的 掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法 二. 实验器材 坐标纸 试管 吸管 722型分光光度计 恒温水浴锅
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
三.实验耗材 1. DNA标准溶液（取DNA钠盐用5mmol/L的NaOH 配成200ug/L的溶液） 2. 二苯胺溶剂（纯二苯胺1g溶于100ml冰醋酸 （A.R.）再加入10ml过氯酸（A.R.浓度>60%） 混匀待用。临用前加入1ml 1.6%乙醇溶液） 3. DNA样液（将实验1提取的DNA粗品用蒸馏水 溶解，定容至25ml，控制其DNA含量在100ug/ml 左右）
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
四. 实验操作 1.标准曲线的绘制 按表1加入各种试剂，混匀，于60°C恒温水浴45min，冷却后， 在595nm波长下于分光光度计比色测定，以吸光度对DNA浓度作 图，制作标准曲线。 2.样品的测定 取DNA样液1.0ml，加入蒸馏水1.0ml，混匀。然后准确加入二苯 胺试剂4.0ml，混匀，于60°C恒温水浴45min，冷却后，595nm 波长下于分光光度计比色测定，根据所测的吸光度对照标准曲线 求得DNA的质量（ug）。
实验1 动物肝脏中DNA的提取
2. 在沉淀中加入20ml柠檬酸钠缓冲液、10.5ml氯仿-异 戊醇混合液、2ml SDS使其最终浓度为0.41%，振荡 30min，然后缓慢加入固体NaCl（约1.8g），使其最 终浓度为1mol/L。将其在3500r/min离心20min，取 上清水相。 3. 在上述水相溶液中加入等体积冷乙醇，边加边用 玻棒慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶 状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA 粗品。用蒸馏水溶解并定容至25ml。
动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告
动物肝脏dna的提取和鉴定实验报告动物肝脏DNA的提取和鉴定实验报告研究背景•DNA提取是基因研究和遗传分析的基础步骤之一，对于动物肝脏DNA的提取和鉴定具有重要意义。
•本实验旨在探究动物肝脏DNA的提取方法，并通过PCR技术对其进行鉴定和分析。
实验设计和方法1.实验所用材料和仪器：–动物肝脏样本–DNA提取试剂盒–离心管、显微管–PCR反应体系组分–PCR仪2.DNA提取步骤：–取动物肝脏样本，加入提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质消化。
–通过离心将细胞碎片分离，再加入酒精将DNA沉淀。
–对DNA进行洗涤、干燥和溶解，得到纯净的DNA提取物。
3.DNA鉴定和PCR步骤：–制备PCR反应体系，包括DNA模板、引物、酶和缓冲液等。
–进行PCR反应，使用特定的温度和时间条件进行扩增。
–通过凝胶电泳分析PCR产物，检测特定的DNA序列是否存在。
实验结果和分析•经过DNA提取和PCR扩增，成功从动物肝脏中提取到DNA，并进行了鉴定和分析。
•凝胶电泳结果显示，PCR反应产物呈现出预期的大小和条带清晰，表明目标DNA序列存在于动物肝脏中。
结论•本实验成功地提取和鉴定了动物肝脏中的DNA。
•通过PCR技术，可以快速、准确地检测和分析动物肝脏的遗传信息。
•这一研究结果对于进一步深入了解动物遗传特征具有重要意义。
参考文献[1] Smith A, Jones B. A review of DNA extraction techniques for biofilm analysis in wastewater treatment systems. Water Research, 2018, 132: 87-96.[2] Brown C G, McKinstry J L, et al. Comparison of seven methods for extraction of bacterial DNA from fecal and cecal samples of mice. Journal of Microbiological Methods, 2019, 164: 105682.讨论与展望•本实验采用DNA提取试剂盒的方法，相比传统的有机溶剂法，具有操作简便、提取效率高、污染少等优点。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA勺提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA为英文Deoxyribo nucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA勺一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA寸紫外线（260nm有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开一也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA勺结构：DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
生化实验4动物肝脏DNA的提取和鉴定
▪ 1、核酸的理化性质
▪ RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结 晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。 除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核 苷酸大都呈酸味。
▪ DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物， 一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机 溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水， RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸 性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或 弱碱性溶液中较稳定。
（4) 离心机 (5) 普通光学显微镜 (6) 冰箱 (7) 具塞离心管 (8) 弯头滴管
(9)小 烧杯
(10) 紫外分光光度计
(11)分析天平 (12)恒温水浴 (13)硬质玻璃试管 (14)新鲜猪肝脏 (15)冰块
2. 试剂 （1）匀浆液（ 0.1 mol/L NaCl ＋0.05 mol/L柠檬
实验五
动物肝脏DNA的提取和鉴定
(教材110页)
一．原理
DNA 、 RNA在细胞内多以核蛋白体形 式存在---DNP 、 RNP．
分离提取核酸时首先要破碎细胞去除蛋 白质和其他物资, 用0.14mol/L Nacl(含柠 檬酸钠)匀浆液溶解细胞中的RNA及其他物资, 离心，去上清,然后加入提取液（十二烷基硫 酸钠，SDS）溶液溶解DNA，然后加入氯仿 -辛醇，以去除其余核蛋白和杂蛋白．再离心 除去沉淀(杂蛋白)部分,收集上清部分(DNA).
▪ 鉴定:
▪
▪ 脱氧核糖的鉴定
▪
1.O ml DNA溶解液+二苯胺
化合物.
加热10分钟
生成蓝色
▪ 嘌呤碱的鉴定
▪
1.0ml DNA溶解液 + 生褐色的嘌呤银化合物。
动物肝脏中DNA得提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA得提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid得缩写),又称去氧核糖核酸,就是脱氧核糖核酸染色体得主要化学成分,同时也就是组成基因得材料。
有时也被称为“遗传微粒”,原因就是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA得一部分复制传递到子代中,从而完成性状得传播。
DNA就是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高得粘度,可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来得水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间得氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 得解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言,正常得体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中得拟核内。
染色体上得染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其她蛋白质进行交互作用,进而调节基因得转录。
脱氧核糖核酸得结构DNA得结构: DNA得结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构与四级结构四个水平。
DNA就是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。
而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸〔DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写〕，又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒〞，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一局部复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线〔260nm〕有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进展含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋构造解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体那么统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，那么主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进展组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进展交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的构造DNA的构造：DNA的构造一般可划分为一级构造、二级构造、三级构造和四级构造四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸〔dAMP 脱氧腺苷〕、胸腺嘧啶脱氧核苷酸〔dTMP 脱氧胸苷〕、胞嘧啶脱氧核苷酸〔dCMP 脱氧胞苷〕、鸟嘌呤脱氧核苷酸〔dGMP 脱氧鸟苷〕。
而脱氧核糖〔五碳糖〕与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
动物肝脏中DNA的提取与检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
动物肝脏DNA提取和鉴定
整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，减少核酸变性、降解、机械切割的机会。
核酸提取过程中的注意事项：
01
加入RNA酶降解剩余的RNA，获得纯的DNA。
02
保存：将DNA于滤纸上干燥，溶于1mlTE中低温保存。
03
纯的DNA样品的获得
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理：
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖凝胶作为支持介质的一种电泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法，已成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。 琼脂糖英文名agarose，是从琼脂中提取出来的，由半乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多糖。琼脂糖和琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶，电泳中具有分子筛效应。但琼脂糖含硫酸根比琼脂少，电渗作用降低，因而分离效果明显提高。
溴化乙啶检测DNA的灵敏度很高，可检出10ng甚至更少的DNA。
01
02
03
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的影响因素
（1）核酸大小与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 凝胶中，DNA片段迁移率与DNA分子大小(碱基对的对数)成反比(≤ 20kb) ，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。 （2）核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 不同构型DNA的移动速度次序为：闭环DNA>直线DNA>开环的双链环状DNA. （3）不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。 琼脂糖浓度/% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 线状DNA大小/kb 60-5 20-1 10-0.8 7-0.5 6-0.4 3-0.2 2-0.1 注：DNA片段在5-500bp之间时，一般用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进行电泳分离。
动物肝脏DNA提取和鉴定-实验技术
实验结束后将变性的蛋白质（肝糜）小心取出置于专 用的废物袋中，氯仿倒入回收瓶内。
THANK YOU
以吸光度A595nm对DNA含量（ug）作图， 绘制标准曲线。
从标准曲线上查出样品的DNA含量。 计算100g猪肝中DNA的含量：
待测样品中DNA的质量×25(稀释倍数)
=
称取猪肝的质量
注意事项
匀浆（破碎细胞）要充分，需剪成小块。
固体NaCl应磨碎，加入应分批缓慢加入，边加边摇， 避免局部浓度过大或者未及溶解而沉入氯仿层。
核酸在真核细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在， 用DNP和RNP表示。
DNA-Pro（DNP）溶于高盐溶液（1mol/L）,
细胞核
微溶于低盐溶液（0.14mol/L）
RNA-Pro(RNP) 溶于低盐溶液（0.14mol/L）
核仁及细胞质
微溶于高盐溶液（1mol/L）
核酸含量的测定方法：紫外吸收法、定磷法和分别针 对DNA和RNA的颜色反应方法。
DNA标准液200ug/ml:DNA钠 盐用5mmol/L的NaOH配制。
95%冷 乙醇、 NaCl固 体
0.14mol／L NaCl－0.05mol／L 柠檬酸钠缓冲液(PH=6.8)
二苯胺： 称取纯 二苯胺 1g溶于 100ml冰
组织捣碎ห้องสมุดไป่ตู้浆机
猪肝8g 16ml的0.14mol／L NaCl－
脱氧核糖核酸中的脱氧核糖在酸性环境中变成ω-羟基γ-酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在 595nm处有最大的吸收 。
DNA20~400微克范围内，光密度与DNA的浓度成正比， 在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。
动物肝脏中dna的提取实验报告
动物肝脏中dna的提取实验报告动物肝脏中 DNA 的提取实验报告一、实验目的1、学习从动物肝脏组织中提取 DNA 的原理和方法。
2、熟悉和掌握离心机、移液器等实验仪器的操作。
3、理解 DNA 提取过程中各种试剂的作用。
二、实验原理DNA 在生物体内通常与蛋白质结合形成复合物。
在提取 DNA 时，需要通过一系列的物理和化学方法，破坏蛋白质与 DNA 的结合，使DNA 得以释放和分离。
本实验采用的是盐析法和有机溶剂抽提法相结合的方式。
首先，使用细胞裂解液破碎细胞，释放出DNA 以及其他细胞成分。
然后，加入高浓度的盐溶液，使蛋白质变性沉淀，而 DNA 仍溶解在溶液中。
接着，用有机溶剂（如酚、氯仿）去除蛋白质和其他杂质。
最后，通过乙醇沉淀得到纯净的 DNA 。
三、实验材料和试剂1、实验材料新鲜的动物肝脏（如猪肝）2、实验试剂（1）细胞裂解液：含 SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶 K，用于裂解细胞和消化蛋白质。
（2）NaCl 溶液（5mol/L）：提供高盐环境，促进蛋白质沉淀。
（3）酚氯仿异戊醇混合液（25:24:1）：用于去除蛋白质等杂质。
（4）无水乙醇：用于沉淀 DNA 。
（5）70%乙醇：用于洗涤 DNA 沉淀，去除残留的盐和杂质。
（6）TE 缓冲液（10mmol/L TrisHCl，1mmol/L EDTA，pH 80）：溶解和保存 DNA 。
3、实验仪器（1）离心机（2）移液器（3）恒温水浴锅（4）冰箱（5）玻璃棒（6）离心管（7）微量移液器吸头四、实验步骤1、材料处理（1）称取约 5g 新鲜的动物肝脏，用生理盐水洗净，去除结缔组织和脂肪。
（2）将肝脏剪成小块，放入研钵中，加入适量的液氮，迅速研磨成粉末状。
2、细胞裂解（1）将研磨好的肝脏粉末转移至离心管中，加入10ml 细胞裂解液，充分混匀。
（2）置于 55℃恒温水浴锅中保温 1-2 小时，期间每隔 15-20 分钟轻轻颠倒离心管混匀一次，以促进细胞裂解和蛋白质消化。
动物肝脏中dna的提取和鉴定
动物肝脏中DNA的提取和鉴定一、实验目的1.学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。
2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。
3.学习核酸染色的方法。
二、实验原理为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。
由于DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。
动植物中小牛胸腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。
微生物中，谷氨酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。
从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。
对于低等生物，如从病毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。
从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。
细菌DNA相对分子质量较大，一般达2×109Da。
因此易被机械张力剪短。
细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA等。
1.DNA的基本功能生物遗传信息复制的模板和基因转入的模板，是生命遗传繁殖的物质基础，也是个体生命活动的基础；作为DNA分子中的某一区段，有复制、转录和翻译等主要功能称为基因。
2.核酸的结构与功能核酸（nucleic acid)是以核苷酸为基本组成的生物大分子。
天然存在的核酸有两类，一类为脱氧核苷酸（deoxyribonucleic acid,DNA)，另一类为核糖核酸（ribonucleic acid,RNA)。
DNA存在于细胞核和线粒体中，携带遗传信息。
RNA存在于细胞质和细胞核内，参与细胞内DNA遗传信息的表达。
3.DNA的存在形式天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白（DNP）形式存在于细胞核中。
要从细胞核中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖、RNA及无机离子等，从中分离DNA。
DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。
DNP在低浓度盐溶液中几乎不溶解，如在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中溶解度很大，比纯水高2倍。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸〔DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写〕，又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒〞，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一局部复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线〔260nm〕有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体那么统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，那么主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构：DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸〔dAMP 脱氧腺苷〕、胸腺嘧啶脱氧核苷酸〔dTMP 脱氧胸苷〕、胞嘧啶脱氧核苷酸〔dCMP 脱氧胞苷〕、鸟嘌呤脱氧核苷酸〔dGMP 脱氧鸟苷〕。
而脱氧核糖〔五碳糖〕与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。
动物肝脏DNA提取和鉴定-实验技术
实验过程包括肝脏组织的研磨、细胞裂解、DNA沉淀、洗 涤和溶解等步骤，每一步都有严格的操作要求和注意事项。
实验结果
通过电泳检测，观察到清晰的DNA条带，表明提取的 DNA质量较高，可用于后续的分子生物学实验。
实验中遇到的问题及解决方案
问题1
肝脏研磨不充分。
解决方案
在研磨过程中，应确保充分研磨动物肝脏组织，使其充 分破碎。
基因功能研究
通过比较不同物种或个体间的基因序列，可以研究基因功能和进化关系，进一步 揭示生物多样性和物种起源。
分子生物学实验
分子标记
DNA提取是进行分子标记的关键步骤，如SSR、SNP等标记 技术，可用于遗传图谱构建、亲子鉴定和品种鉴别等。
基因克隆与表达
提取高质量的DNA是进行基因克隆和表达的前提，有助于研 究基因结构和功能，以及开发新的生物技术。
DNA浓度测定
紫外分光光度法
利用DNA在260nm处的紫外吸收峰 ，通过测量吸光度值计算DNA浓度 。
荧光染料染色
利用荧光染料如PicoGreen等染色 DNA样品，通过测量荧光信号的强度 计算DNA浓度。
04 DNA应用与拓展
基因组学研究
基因组测序
通过DNA提取，可以对动物基因组进行测序，了解其基因组成和变异情况，为遗 传学研究和疾病诊断提供基础数据。
01
实验前确保实验室环境 清洁、无菌，避免交叉 污染。
02
使用高质量的实验器具 和试剂，确保实验结果 的准确性和可靠性。
03
在操作过程中，要遵循 正确的实验步骤和操作 规程，避免误差和意外 事故的发生。
04
实验结束后，要及时清 理实验场地和废弃物， 保持实验室的整洁和卫 生。
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防止DNA酶的降解，提取时可 加入适量EDTA（乙二胺四乙 酸）、柠檬酸，以降低DNA酶 的活性
SDS（十二烷基硫酸钠）等去 污剂使蛋白质变性，可以直接 从生物材料中提取DNA
DNA的定量测定
DNA粗品用5mmol/LNaOH溶解并定容至50ml，作为待测品。
混匀，60℃水浴保温45min，冷却后，595nm处，比色。
21ml氯仿/异戊醇 4ml 5% SDS 振荡 30 min（保鲜膜封口） 加入3.6gNaCl 固体， 终浓度为1mol/L 离心，3500r/min ,20min 吸取上清（量取体积） 95%冷乙醇（缓慢加入）边 加边朝一个方向缓慢搅动 DNA粗制品
上清（弃掉）
沉淀
除去蛋白质的方法
氯仿一异成醇使蛋白 质变性，离心除去变 性蛋白质
组织捣碎匀浆机
猪肝8g 16ml的0.14mol／L NaCl－
0.05mol／L 柠檬酸钠缓冲液
沉淀
40ml的0.14mol／L NaCl－
0.05mol／L 柠檬酸钠缓冲液
匀 浆 离心， 4000r/min ,10min 上清（弃掉） 沉淀 25ml缓冲液洗涤 离心， 4000r/min ,20min
核酸制备中常用的去垢剂
核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质。用于核 酸提取的去垢剂，一般都是阴离子去垢剂。 去垢剂的作用： 1．溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； 2．溶解核糖体上面的蛋白质，使其解聚，将核酸释放出 来； 3．对RNase、DNase有一定的抑制作用。 如：SDS、脱氧胆酸钠、4-氨基水杨酸钠、萘-1.5-二磺 酸钠、三异丙基萘磺酸钠
离子去污剂法：利用SDS、CTAB（十六烷基三甲基溴
化铵）等去污剂使蛋白质变性，直接从生物材料中提取 DNA。
苯酚抽提法：苯酚既是蛋白变性剂，又能抑制DNase 的降解。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA连接键 已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相 溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
核酸提取的主要步骤
破碎细胞：研磨、组织匀浆、 超声、冻融；异硫氰酸胍、 碱裂解；酶解（溶菌酶）
除去其它不需要
的核酸分子
除去与核酸结合的蛋白质以及多糖、 脂类等生物大分子：酚/氯仿抽提、 蛋白变性剂（SDS、异硫氰酸胍 等）、蛋白酶处理、高盐洗涤
沉淀核酸，去除盐类， 有机溶剂等杂质
注意事项
脱氧核糖核酸中的脱氧核糖在酸性环境中变成ω-羟基γ-酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在 595nm处有最大的吸收 。
DNA20~400微克范围内，光密度与DNA的浓度成正比，
在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。
三、实验试剂
5% SDS
氯仿/异戊醇=20：1 （V/V）
核酸的理化性质
在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在
微溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机溶剂 在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。 DNA溶液粘度很大，RNA的粘度较小 在强大离心力的作用下，可以从溶液中沉降下来
基因组DNA的提取方法
浓盐法：利用RNA和DNA在不同盐浓度溶液中的溶解 度不同将二者分离。
避免过酸、 过碱及高温
蛋白变性剂反应
不宜过于剧烈
加入DNA酶抑制剂：柠 檬酸、氰化物、砷酸盐、 EDTA、SDS、苯酚等
加入RNA降解 酶除RNA
一、实验目的：
• 1、学习并掌握用浓盐法从动物组织中的提取DNA方法及 其原理。
• 2、学习和掌握二苯胺法测定DNA的原理和方法。
二、实验原理
核酸制备中常用的蛋白质变性剂
作用：
1.使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中分离除去，以防造
成蛋白污染。
2.某些蛋白质变性剂也有抑制 RNase活性和破裂细胞的作用。
如：苯酚、氯仿、盐酸胍、DEPC
核酸制备中常用的酶
DNase:降解DNA
RNase：降解RNA
蛋白酶K：降解蛋白质
溶菌酶：破碎细胞
变性蛋白质层易散，吸取上清液时应仔细，不要将蛋
白质及下层的氯仿吸入。
实验结束后将变性的蛋白质（肝糜）小心取出置于专
用的废物袋中，氯仿倒入回收瓶内。
THANK YOU
核酸在真核细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在， 用DNP和RNP表示。
DNA-Pro（DNP）溶于高盐溶液（1mol/L）, 微溶于低盐溶液（0.14mol/L） 细胞核 RNA-Pro(RNP) 核仁及细胞质
溶于低盐溶液（0.14mol/L）
微溶于高盐溶液（1mol/L）
核酸含量的测定方法：紫外吸收法、定磷法和分别针 对DNA和RNA的颜色反应方法。
以吸光度A595nm对DNA含量（ug）作图，
绘制标准曲线。
从标准曲线上查出样品的DNA含量。 计算100g猪肝中DNA的含量：
待测样品中DNA的质量×25(稀释倍数)
=
称取猪肝的质量
注意事项
匀浆（破碎细胞）要充分，需剪成小块。 固体NaCl应磨碎，加入应分批缓慢加入，边加边摇，
避免局部浓度过大或者未及溶解而沉入氯仿层。
Байду номын сангаас
DNA标准液200ug/ml:DNA钠 盐用5mmol/L的NaOH配制。
95%冷乙醇、 NaCl固体
0.14mol／L NaCl－0.05mol／L 柠檬酸钠缓冲液(PH=6.8)
二苯胺：称取纯二苯胺1g溶于 100ml冰醋酸中，加入10ml过 氯酸，混匀。临用时加 1ml1.6%乙醛溶液，所配置试 剂应为无色。
动物肝脏DNA的制备 和鉴定
甘肃中医药大学
核酸的分类
DNA (脱氧核糖核酸) 主要存在于细胞核的染色体中。 核外也有少量DNA，如线粒体DNA（mtDNA），叶绿 体DNA（cpDNA），质粒DNA。 RNA（核糖核酸） 存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。 除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬 菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。