HPLC法测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量

HPLC法测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量
李启彬1，刘涛2，曹晓庆，李青丽（1．河南省驻马店市药品检验所，驻马店463000；2．河南天方药业股份有限公司，驻马店463000）
摘要：目的利用HPLC测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量。

方法采用Zorbox SBC18
色谱柱，流动相为水-甲醇-乙酸（45:50 :5），流速1.0ml ·min-1,检测波长256nm。

结果芦丁在60 ~ 140μg · ml-1 浓度范围内，线性关系良好，r =1.00 000，槲皮素在2.4 ~ 5.6μg ·ml-1 浓度范围内, 线性关系良好，r=0.99998。

芦丁的平均回收率为99.3%，RSD为0.6%，槲皮素的平均回收率为99.6%，RSD为0.4%。

结论本法结果
准确，重复性良较好，方法简便可行。

关键词：芦丁；槲皮素；HPLC
Determinaition of Rutin and Its Quermination by HPLC
LI Qi-bin1，LIU Tao2，CAO Xiao- qing，LI Qing-li（1. Zhumadian Institute of Quality Control of Drug, Zhumadian 463000,China；2. Henan Topfond Pharmaceutical Co.,Ltd Zhumadian463000,China）
ABSTRACT: OBJECTIVE A HPLC method for the determination of rutin and its quermination was established. METHODS A zorbox SBC18 column was used，with the mobile phase of water-methanol-Vinegar(45：50：5)，at the flow rate of 1.0ml · min-1，the detection wavelength was 256nm. RESULTS The linear range of rutin (r=1.00000) was 60~140ug·ml-1，and quermination (r=0.99998) was 2.4~5.6μg ·ml-1，The average recovery of Rutin was 99.3%，RSD0.6%，and quermination was 99.6%，RSD0.4%.CONCLUSION It was accurate and rapid.
KEY WORDS：rutin；quermination；HPLC
芦丁又名芸香苷、芸香苷是从槐米中提取的一种浅黄色或微绿色针状结晶或粉末。

它具有降低毛细血管的异常通透性和脆性的作用。

主要用于防治高血压病的辅
助治疗。

同时，它又是合成曲克芦丁的主要原料。

现行卫生部药品标准采用紫外分
光光度法测芦丁含量，用纸层析法测槲皮素的含量，方法复杂，操作费事，并且槲
皮素无法定量，而用HPLC法操作简便，结果准确。

1仪器和试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪：Agilent 1100系列二级管阵列检测器，HP ChemStation化学工作站，Agilent 1100系列自动进样器，Agilent 1100系列柱温箱，Agilent 1100系列双元泵。

1.2 试药
甲醇（Tedia Company，A）为色谱纯，乙醇、乙酸均为分析纯.；芦丁（批号：040609、040908、041107），河南省平舆天聚化工厂，芦丁对照品和槲皮素对照品（均为中国药品生物制品检定所，含量均为100.0%）
2 方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbox SB C18 4.6 mm×150mm，5μ。

流动相：水-甲醇- 乙酸（45 :50 :5），柱温35℃，流速1.0ml·min-1，检测波长256nm，进样量20μl照“2.1.1”和“2.2.2”项下方法制备对照品、供试品溶液，各进样20μl记录色谱图（图1），保留时间分别为芦丁2.56 min，槲皮素5.831min，其分离度为14.8。

理论板数均不低于2000（芦丁8700，槲皮素4800）
2.2样品溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的配制取经120℃干燥至恒重的芦丁对照品200.0mg和槲皮素对照品8.0mg，置同一100ml量瓶中，用流动相超声溶解，并稀释成芦丁0.1mg·ml-1，槲皮素4μg·ml-1作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的配制精密称取样品适量（相当于芦丁200mg），置100ml容量瓶中，用流动相超声溶解，并稀释至刻度，摇匀。

精密量取上述溶液5ml置100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 线性关系考察
分别称取芦丁对照品200.0mg，槲皮素对照品8.0mg，加流动相超声溶解，分别制成含芦丁2mg·ml-1和槲皮素0.08mg·ml-1的溶液，以此两种溶液为母液分别配制成含芦丁0.06、0.08、0.10、0.12、0.14 mg·ml-1和含槲皮素2.4、3.2、4.0、4.8、5.6μg•ml-1对照品溶液。

分别进样20μl测定，以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标绘制标
准曲线，得芦丁和槲皮素的标准曲线回方程分别为：
Y = 0.6161919 + 23695.1833X，r = 1.00000
Y = 0.2390663 + 25.1588835X，r=0.99998
线性范围分别为芦丁60~140μg·ml-1，槲皮素2.4~5.6μg·ml-1。

2.4 进样精密度试验：
取“2.2.1”项下的对照品溶液，按上述条件连续进样6次，芦丁峰面积的RSD为0.1%，槲皮素峰面积的RSD为0.8% 。

2.5 重复性试验
取芦丁（040609）按2.2.2项下平行制备供试品溶液5份，按样品测定法测定，结果平均含量为99.2%(n=5)，表明本法重复性好。

2.6 供试品溶液稳定性试验：
取本品按含量测定方法及色谱条件分别放置0、2、4、6、8、10、12h测定结果，平均含量为芦丁99.3%，RSD为0.6%，槲皮素0.32%，RSD为0.4%。

说明供试品溶液在12个小时以内是稳定的。

2.7 回收率试验：
分别精密称取芦丁和槲皮素对照品适量，用流动相超声溶解并稀释成标示量浓度的80%、100%、120%各三份。

按含量测定方法测定回收率。

测得芦丁的平均回收率分别为99.3%，RSD为0.3%；槲皮素平均回收率99.6%，RSD为0.6%，
2.8 样品含量测定：
分别取“2.2”项下的对照品溶液和供试品溶液各进样20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，结果见表1。

表1芦丁和槲皮素含量测定结果(n=3)
Tab.1 Resultes of rutin and quermination determination(n=3)
Lot No. rutin/ % quercetin/ %
040609 99.3 0.32
040908 99.2 0.34
041107 99.5 0.37
3讨论
3.1检测波长的选择：分别将芦丁和槲皮素的对照品溶液进行紫外扫描，两个对照品溶液均在256nm处有最大吸收，并且在256nm处响应值较强，因此选择测定波长为256nm。

3.2本文通过实验研究，建立了芦丁中芦丁和槲皮素的HPLC测定法，本法与卫生部药品标准WS1—49（B）—89［S］法比较，本法操作简便、快速、准确、专属性强，重复性好，并且槲皮素的测定可以定量。

可用于该样品的常规质量分析。

REFRRENCES
[1]. 中华人民共和国卫生部药品标准(1989)化学药品及制剂第一册［S］1989:56-57.
[2]. Ch.P(2005)VolⅡ(中国药典2005年版.二部)[S] Appendix（附录）ⅤD.。