花青素的分离提纯测定实验具体方案.
花青素提取
桑椹酒渣中花青素提取1材料与方法1.1材料桑椹果酒酒渣。
1.2试剂药品试验所用95%乙醇、浓盐酸、30%过氧化氢、Na2SO3等试剂均为分析纯。
1.3主要仪器电子分析天平、分光光度计、旋转蒸发仪、酸度计、高速冷冻离心机、电热恒温水浴锅等。
1.4方法（稀HCl+95%乙醇提取）样品称量，用提取剂提取，过滤（减压过滤/板框过滤），所得的提取液按一定比例稀释（pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀）释后在分光光度计上测出OD值，以OD值代表桑椹红色素的含量。
1.4.1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较分别以75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）作为提取剂，以物料与提取剂之比1：10提取桑椹色素，提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。
1.4.2不同物料与提取剂之比对花青素提取的影响（此时用提取效果最好的提取剂）。
1.4.3温度对提取效果的影响以最佳结果作为桑椹提取剂，分别于60、50、40、30、20℃下提取1h。
1.4.4提取时间对提取效果的影响每隔20分钟取样测得OD值。
1.4.5正交实验1.4.6得率试验称取一定量样品，经提取后。
提取液经旋转蒸发仪蒸发，真空干燥，求得率。
方法一稀HCl+95%乙醇提取1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较固定浸提温度、提取时间、液料比，分别85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）、0.15%稀HCl +95%乙醇（1：1）为提取剂进行浸提试验，色素提取液分别采用pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀释一定倍数(吸光值在0.2~0.8之间)，将稀释液静置15min，分别测定两种样品稀释液ODλmax和700nm处的吸光值A。
按公式计算桑椹花色苷含量，分析提取溶剂对花色苷提取量的影响。
注：ODλmax的确定分别以85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）、0.15%稀HCl +95%乙醇（1：1）作为提取剂，以物料与提取剂之比1：10提取桑椹色素，提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。
花青素提取实验报告
花青素提取实验报告花青素提取实验报告植物中的花青素是一类具有丰富颜色的天然色素，广泛存在于花朵、果实、叶子等植物组织中。
花青素不仅为植物赋予了吸引力的色彩，还具有很多生物活性，如抗氧化、抗炎、抗癌等。
因此，对花青素的提取和研究具有重要意义。
本实验旨在探究不同溶剂对花青素提取效果的影响，并比较不同植物材料中花青素的含量差异。
实验选取了红花、紫苏和紫甘蓝三种常见的植物材料作为研究对象。
实验步骤如下：1. 材料准备：准备红花、紫苏和紫甘蓝三种植物材料，并将其分别洗净、切碎备用。
2. 提取溶剂选择：选取乙醇、醋酸乙酯和水三种常用溶剂作为提取试剂，分别标注为A、B和C。
3. 提取过程：将每种植物材料分别加入三个烧杯中，每个烧杯中加入适量的提取溶剂，浸泡一段时间后，用搅拌棒搅拌均匀。
4. 过滤：将提取液用滤纸过滤，去除固体颗粒。
5. 浓缩：将过滤后的提取液分别倒入烧杯中，放在加热板上进行浓缩，直至溶剂蒸发完全。
6. 称量：将浓缩后的花青素溶液称量并记录。
7. 分光光度计测定：将每个烧杯中的花青素溶液分别转移到试管中，使用分光光度计测定吸光度。
8. 计算花青素含量：根据吸光度值，利用标准曲线计算出花青素的含量。
实验结果如下：在本实验中，我们选取了红花、紫苏和紫甘蓝三种植物材料进行花青素提取实验。
通过比较不同溶剂对花青素提取效果的影响，我们发现乙醇溶剂（A）对三种植物材料中花青素的提取效果最好。
在红花提取实验中，乙醇溶剂（A）的吸光度值最高，表明乙醇溶剂对红花中花青素的提取效果最佳。
紫苏和紫甘蓝的提取实验结果也是如此。
这可能是因为乙醇具有较好的溶解性，能够更好地溶解植物组织中的花青素。
此外，我们还发现不同植物材料中花青素的含量存在差异。
红花中花青素含量最高，紫苏次之，紫甘蓝最低。
这可能与不同植物材料的生长环境、基因差异等因素有关。
通过本实验，我们深入了解了花青素的提取过程以及不同溶剂对提取效果的影响。
同时，我们也发现了不同植物材料中花青素含量的差异。
红米原花青素的测定方法
红米原花青素的测定方法红米原花青素的提取及测定方法1、标准曲线的配置标准溶液的配制，用甲醇配制原花青素母液2mg/mL标准液配制：母液：2ml 3ml 4ml 5ml 6ml 7ml 8ml甲醇：8ml 7ml 6ml 5ml 4ml 3ml 2ml2、试剂试剂a：10g/L香草醛甲醇溶液，10g香草醛溶于1L甲醇溶液试剂b：245ml浓硫酸（18.4mol/L）溶于500ml甲醇溶液，并用甲醇定容直1L。
3、提取方法将红米磨粉后称0.5g，放入15ml试管中，加入8ml的80%甲醇溶液，至于黑暗的地方，每隔2h左右振荡一次，一直浸泡提取8小时。
4、测定方法吸取1ml提取液或标准液，加入10ml离心管中，然后依次加入2.5ml试剂a和2.5ml试剂b，混匀后35℃下水浴20min，水浴结束后8000rm离心10min，用移液器取上清液测定其在500nm下的吸光值。
5、参考文献：1、Sun B, Ricardo-da-Silva JM, Spranger I Critical Factors of Vanillin Assay for Catechins and Proanthocyanidins. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1998, 46: 4267-42742、Gunaratne A, Wu K, Li D, et al. Antioxidant activity and nutritional quality of traditional red-grained rice varieties containing proanthocyanidins. Food Chemistry, 2013, 138: 1153-1161。
紫甘蓝提取实验报告
一、实验目的1. 探究紫甘蓝中花青素的提取方法。
2. 了解花青素的性质及其应用。
3. 学习实验室提取、分离、鉴定等基本操作。
二、实验原理紫甘蓝中含有丰富的花青素，花青素是一种天然色素，具有较强的抗氧化性、抗变异、抗肿瘤、抗过敏等生理功能。
本实验采用溶剂提取法，利用有机溶剂（如乙醇、甲醇等）提取紫甘蓝中的花青素，然后通过纸层析法分离纯化花青素，最后利用紫外-可见分光光度法测定花青素的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：紫甘蓝、乙醇、甲醇、蒸馏水、NaCl、NaOH、盐酸、pH试纸、滤纸、层析板、紫外-可见分光光度计、电子天平、研钵、烧杯、漏斗、玻璃棒、移液管等。
2. 实验试剂：无水乙醇、甲醇、NaCl、NaOH、盐酸、醋酸、硫酸铵、氯化钠等。
四、实验步骤1. 提取（1）将紫甘蓝洗净，晾干，切成小块。
（2）将紫甘蓝放入研钵中，加入适量无水乙醇，研磨充分。
（3）将研磨好的混合物倒入烧杯中，加入适量蒸馏水，搅拌均匀。
（4）将烧杯放入水浴锅中，加热至沸腾，保持沸腾状态10分钟。
（5）取出烧杯，冷却至室温，用滤纸过滤，收集滤液。
2. 分离纯化（1）将滤液倒入漏斗中，用蒸馏水洗涤滤渣，收集洗涤液。
（2）将滤液与洗涤液合并，加入适量醋酸，调节pH至2.5。
（3）静置30分钟，使花青素沉淀。
（4）取上层清液，用滤纸过滤，收集滤液。
（5）将滤液倒入烧杯中，加入适量硫酸铵，搅拌，使蛋白质沉淀。
（6）静置30分钟，取上层清液，用滤纸过滤，收集滤液。
3. 测定花青素含量（1）取适量滤液，用紫外-可见分光光度计测定其在520nm处的吸光度。
（2）根据标准曲线计算花青素含量。
五、实验结果与分析1. 提取结果：紫甘蓝提取液呈紫色，说明花青素已被成功提取。
2. 分离纯化结果：滤液经过分离纯化后，颜色较浅，说明花青素得到了一定的纯化。
3. 花青素含量测定结果：根据标准曲线计算，紫甘蓝提取液中花青素含量为0.5mg/g。
六、实验结论1. 紫甘蓝中花青素可以通过溶剂提取法提取。
紫甘薯中花青素的提取及含量的测定
紫甘薯中花青素的提取及含量的测定山东农业大学化学学院09级材化2班赵林静152********山东农业大学化学学院09级材化2班李新152********摘要用乙醇酸溶液从紫甘薯中提取花青素。
用PH示差法对提取液中花青素含量进行测定。
关键字：紫甘薯花青素PH示差法1前言：花青素又称花色素，是一种广泛存在于植物中的水溶性天然色素。
属黄酮类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。
花色苷是一种以黄酮核为基础的一类糖苷，天然花色苷配糖体的基本结构为3、5、7-三羟基-2-苯基并呋喃。
最早且最丰富的花青素的花青素是从后葡萄渣中提取的葡萄皮红，花青素作为一种天然食用色素，安全，无毒，资源丰富，而且具有一定的营养和药用价值，在视屏、化妆、医药等方面有着巨大的应用潜力。
有实验证明，花青素是迄今为止所发展的最强效的自由基清除剂。
目前对花青素的定量没有较好的方法，常用的方法是以色价或吸光度表示其相对含量，也有用花青素纯品配置不同浓度梯度制作标准曲线测定色素的含量但由于花青素的标准品很不稳定，限制了这种方法的使用。
本实验用PH示差法对紫甘薯中花青素的提取液中花青素的含量进行测定。
2 实验目的2.1掌握花青素的提取方法及其PH示差法测量花青素含量的原理2.2熟练掌握分离提纯操作方法步骤。
3 实验原理紫甘薯中含有花青素，用乙醇的酸溶液作为提取液在离心机的作用下即可得到粗的花青素提取液。
PH示差法的原理为花青素的色调和色度随PH值的不同而发生改变。
PH为1.0时，花青素以红色的2-苯基并呋喃的形式存在。
结合朗伯比尔定律可得出在两个不同PH值下，花青素溶液的吸光度差值与花青素含量成正比。
4实验仪器及试剂仪器：电子天平；钥匙；精密PH试纸；PH计；表面皿、玻璃棒；烧杯；干燥的带塞子的锥形瓶250ml(4支)；100ml容量瓶（4支）；胶头滴管；500ml试剂瓶（3支）；高速离心机、离心管（6支）；分光光度计；10ml小量筒（3支）；摇床；烧杯3支试剂：粉末状紫甘薯30g(自备)；分析纯的乙醇试剂500 ml 氯化钾20g 醋酸钠30g 去离子水1000ml 分析纯的盐酸50ml5 实验步骤5.1乙醇的酸溶液按85：15的比例将分析纯的乙醇溶液与去离子水混合，再用浓盐酸调节PH至1.0左右。
蓝莓果皮中花青素的提取及分离纯化研究
蓝莓果皮中花青素的提取及分离纯化研究摘要：研究蓝莓果皮中花青素的提取、纯化方法，通过控制浸渍法体积分数、pH值等关键实验参数，以花青素提取率为考察指标观察浸膏得率的变化，确定1：30的浴比中加入1%柠檬酸与70%乙醇组成溶液，以温度30℃、pH为3超声浸渍20min为蓝莓果皮中花青素最佳提取方法。
通过65%乙醇的大孔树脂洗脱液洗脱，色价达到61.37，产率为81.32%，大大的提高的花青素的纯度。
关键词：蓝莓果皮花青素提取纯化蓝莓（Vaccinium spp.）是杜鹃花科越桔属植物，果实呈蓝色近圆形。
其中果肉和果皮都含有丰富的花色素。
花色素又名花青素，属于酚类化合物中的类黄酮类。
其结构的基本母核是2-苯基苯并吡喃。
通常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖等通过糖苷键形成花色苷，目前已知的花色苷有250多种。
已知花青素的功效有：一是抗氧化和清除自由基的功能，减轻疲劳，抗衰老，同时有美容美颜的作用。
二作为天然的食物添加剂，可作为食品的防腐剂，三是作为天然染料，不同pH值下可不同呈色。
一、仪器与材料1.原料：蓝莓果皮粉末（从安徽安庆市购入，买入四批产地分别位于山东省、辽宁省、内蒙古省、吉林省）。
2.试剂：乙醇、甲醇、甲酸、氢氧化钠、盐酸、乙腈、矢车菊3-O-葡萄糖苷标准品、柠檬酸、纤维素酶。
3.仪器：台式烘箱、SHZ-IIII型循环水式真空泵（上海贤德实验仪器有限公司）、EYELA N-1100旋转蒸发仪、OSB-2100水浴锅（上海爱朗仪器有限公司）、电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）、水浴锅（南京科尔仪器设备有限公司）、SB-3200D超声波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)，Agilent 1100 高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计（Thermo）、层析柱、AB-8大孔树脂、各个型号圆底烧瓶等玻璃仪器。
二、蓝莓果皮中花色素的提取1.提取方法：花色素分子含有酸性与碱性基团，溶于水和乙醇等醇类化合物。
花青素检测内容和方法 -回复
花青素检测内容和方法-回复花青素检测是一种常用的方法，用于确定食物、植物和其他生物中是否存在花青素化合物。
花青素是一类具有特殊结构和颜色的天然色素，广泛存在于植物中，特别是花朵、水果和蔬菜中。
在这篇文章中，我将详细介绍花青素检测的内容和方法。
第一部分：花青素的概述首先，我们来了解一下花青素的基本概念。
花青素是一类化学物质，属于类黄酮类化合物。
它们是水溶性的，可以通过分光光度法检测其浓度。
花青素具有丰富的生物活性，包括抗氧化、抗炎症和抗癌等特性。
因此，花青素在医药和食品领域具有重要的应用价值。
第二部分：花青素检测的常见方法花青素的检测方法有很多种，其中常见的几种方法包括分光光度法、高效液相色谱法和质谱法。
1. 分光光度法分光光度法是花青素检测中最常用的方法之一。
它利用花青素在特定波长下吸收光线的特性进行测定。
首先，要选择合适的波长进行检测，常用的波长为紫外光谱的510-540纳米范围。
然后，将待测样品制备成溶液，并使用分光光度计测量样品的吸光度。
根据吸光度和标准曲线的关系，可以确定样品中花青素的浓度。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种精确测定花青素浓度的分析方法。
它利用花青素在特定条件下与色谱柱相互作用的特性进行分离和测定。
在HPLC方法中，样品经过前处理后注入色谱柱，通过流动相不同的组成进行分离。
然后，使用紫外检测器检测样品中花青素的峰值，并根据峰面积和标准曲线的关系确定含量。
3. 质谱法质谱法是一种高灵敏度和高分辨率的分析技术，可用于花青素的定性和定量分析。
质谱法可以直接测定花青素分子的质量和结构。
通过质谱仪的扫描，可以得到花青素的质谱图，并通过比对已知标准品的质谱图进行分析。
第三部分：花青素检测的样品准备在进行花青素检测之前，需要对样品进行适当的预处理。
首先，要将样品磨碎或切碎，以提高样品暴露表面积。
然后，将样品加入适量的溶剂中，浸泡一段时间，以提取花青素。
提取液中的杂质可以通过滤纸或离心去除。
葡萄籽中分离提取原花青素的研究
葡萄籽中分离提取原花青素的研究花青素是一类多酚类化合物，其具有高效的清除自由基的功能，是一种新型、高效、低毒的天然抗氧化剂。
本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
研究结果表明：本项目产品投资费用少，操作费用低，产品附加值高；原料为废物利用，变废为宝符合国家相关产业政策；几乎没有“三废”排放，使用的溶剂全部回收利用，废渣可以作为造纸或者饲料综合利用。
标签：花青素；葡萄籽；提取；正交实验1 概述原花青素是广泛存在于植物中的一类天然多酚类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。
属于缩合鞣质或黄烷醇类。
最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红。
它于1879年在意大利上市。
由于原花青素的多种功效，由葡萄籽提取的原花青素已被我国卫生部批准为保健原料。
目前对原花青素的提取研究及保健作用研究已非常成熟。
已经将其应用到工业化产业，开发出多种原花青素的保健产品和化妆产品。
原花青素的产品已被广大消费者普遍接受。
2 葡萄籽中花青素的提取本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
并通过设计正交实验，得出原花青素提取最佳工艺条件。
2.1 实验方法2.1.1 葡萄籽中原花青素的提取本实验采用甘肃紫轩酒业葡萄酒厂生产葡萄酒产生的葡萄籽下脚料作为本实验的原材料。
在生产葡萄酒压榨葡萄汁的糟粕和葡萄酒生产前和发酵后压榨的榨粕，所得的这些榨渣中，以换成干品计，约有50%的葡萄皮，45%的葡萄籽和少量的梗等，将该榨渣经粗选分离出葡萄籽，作为提取的原料。
所得的葡萄籽用粉碎机粉碎后，过20目筛，于磨口三角瓶中，经石油醚脱脂脱水份，得脱脂葡萄籽粉，用一浸提液在50℃的恒温水浴中回流浸提，离心后取上清液，反复提取若干次，最后洗涤残渣，将上清液和洗涤液合并，加入固体无水硫酸钠脱水，倾出上层溶液，在真空度为0.095MPa，温度为40℃的条件下真空浓缩，浓缩液冷却至室温，得到原花青素粗提液，干燥，制得粗提物。
原花青素的分离纯化实验方案(修改)
原花青素的分离纯化一、实验目的对上一步提取的原花青素进行分离纯化，熟悉实验相关仪器设备及过程二、仪器、材料及试剂原花青素提取液、原花青素标准品、大孔树脂、75%乙醇、60%乙醇（作解吸剂）、50%乙醇（作洗脱剂）、盐酸（磷酸或乙酸）、分析天平、带筛板的玻璃柱（可无筛板，但是要脱脂棉或者用酸式滴定管改装（尝试性），同样需要脱脂棉）、紫外分光光度计（286nm）（可用可见光分光光度计（536nm）代替）、真空干燥箱（用真空泵+密封的抽滤瓶（尝试）代替）、PH计、铁架台、漏斗（小号）、小试管若干（不少于5支）、试管架、烧杯若干（不少于3个）、玻璃棒、滴管、锥形瓶三、实验步骤大孔树脂的预处理：新购树脂含有未聚合单体、致孔剂、分散剂等残留的杂质成分，使用前必须加以处理。
将新购大孔树脂用乙醇浸泡24h，充分溶胀，取一定量湿法装柱，先用适当浓度的乙醇清洗至洗出液加等量蒸馏水无白色浑浊为止，再用蒸馏水洗至无醇味且水液澄清，备用。
通过乙醇(或甲醇)与水交替反复洗脱，可除去树脂中的残留物，一般洗脱溶剂用量为树脂体积的2～3倍，交替洗脱2～3次，最终以水洗脱后即可使用。
大孔树脂动态饱和吸附曲线图的绘制：1、将试验中需要用到的50%乙醇、60%乙醇的PH用盐酸调至5，在波长为286nm（如果采用可见光分光光度计则为536nm）测定原花青素提取液的吸光值（以75%的乙醇溶液为对照）2、取一定量的大孔树脂于烧杯中缓慢倒入50%的乙醇溶液（同时搅拌），搅拌至可流动的糊状，取一支干净的带筛板的玻璃柱，将糊状大孔树脂加入玻璃柱，用手指轻轻敲打玻璃柱，使大孔树脂均匀铺在玻璃柱底部（用烧杯接住此时流出的液体），用50%的乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出液，直至与水混合不呈白色浑浊为止（乙醇：水一1：5）。
然后以大量蒸馏水洗去乙醇（必须洗净乙醇，否则将影响吸附效果），待用。
将样品液直接或拌入树脂中加到已处理好的大孔吸附树脂柱柱顶，拌样时样液和树脂的比例为1：（2～3）。
花青素提取工艺试验
花青素提取工艺试验实验仪器材料：仪器：打浆机、干燥箱、粉碎机、超声波震荡器、培养箱、低温超速离心机、旋转蒸发仪、真空干燥箱、水浴锅、pH试纸试剂：80%乙醇、山芋粉、蔗糖、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、滤纸、石油醚、0.1%稀盐酸材料：枸杞、黑曲霉1.1称取枸杞加入去PH=2离子水中（按比例为1：120g/L），在60℃水浴中浸泡4h，分离样液和样品，（重复2次），样液待用1.2【脱脂处理】将1.1中的样品和样液与石油醚（30-60℃）按1:10g/L混合，浸泡1h后，于旋转蒸发仪中50℃加热回流2h，所得样品溶液，放在打浆机打碎1.3加入微生物培养液中【固液1:5】(培养液配比: 山芋粉3. 7 5%、蔗糖1 5% 、硝酸铵0. 2%、磷酸二氢钾0. 1%和硫酸镁0. 025% ) , 120 ℃条件下灭菌20min,在超净工作台内接种。
黑曲霉与培养液比例为1∶1 000。
接种后放入培养箱中培养。
温度30℃，pH4.5，培养时间72h1.4培养后，在培养液中加入40倍pH3.0的80%乙醇，在超声波水浴中50℃提取3h（过滤后重复1-2次）1.5粗过滤后，低温离心40℃，4000r/min，10min，去沉淀，取离心液1.6 50℃旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩0.076Mpa1.7 放入真空干燥箱干燥，得粗品1.8上述浓缩液再次离心，加入0.1mol/LHcl溶液调pH=4-4.5，离心分离，再次浓缩烘干精提12.1上述粗品，加入温水中溶解2.2常温下，在微滤机下0.12MPa，进行微滤收集液体2.3所得滤液再次放入超滤机中过滤，0.1MPa，膜流速1500L/h 2.4取0.5g活化湿AB- 8 树脂和20ml液体常温吸附24h，离心2.5滤液加入60%乙醇洗脱，1-3h左右，后60℃，减压真空88kpa 下蒸馏回收乙醇2.6所得液体加入一定量石油醚精致萃取，35℃减压浓缩回收，2.7真空干燥称重方案二1.1称取样品和样液与石油醚（30-60℃）按1:10ml混合，浸泡1h后，于旋转蒸发仪中50℃加热回流2h，所得样品溶液，干燥滤渣用于色素提取1.2以料液比为1：40的PH=3的80%乙醇在50℃下浸泡3后，在超声波为40kHZ下，100W,20min，过滤去沉淀，重复1-2次1.3粗过滤后，低温离心40℃，4000r/min，10min，去沉淀，取离心液1.4 50℃旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩0.076Mpa1.5 放入真空干燥箱干燥，得粗品1.6上述浓缩液再次离心，加入0.1mol/LHcl溶液调pH=4-4.5，离心分离，再次浓缩烘干精品提取1、称取粗品50g左右加入170ml的pH3.5-4.0的浓盐酸化的95%乙醇，在40-50℃中搅拌提取4h，抽滤2、滤渣用100ml酸性乙醇在同样条件下进行第二次提取3h，抽滤（也可进行重复多次）3、合并滤液，边搅拌边加入浓氨水，并调溶液ph为7.2-7.5，室温静置0.5h，使之完全沉淀，抽滤，在沉淀未干燥前，用适量冰醋酸使之分解成稀糊状，可微微加热，静置1h，抽滤理化因素：A：最大波长的确定：取处理过的枸杞粉末溶于乙醇中浸泡一段时间后利用紫外分光光度计进行光谱扫描，测定最大吸收波长。
花色素的提取分离
一、实验目的1.了解原花色素及其分离提纯的常用方法。
2.学会用乙醇抽提法提取分离花色素和比色法测定其含量。
二、实验目的原花色素，也称原花青素（proanthocyanidins）,是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。
也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。
原花色素属于生物类黄酮（flavonoids）,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。
依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。
从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。
其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（oligomeric proanthocyanidins,简称OPC）。
三．实验仪器1.试剂：花色素标准样品；甲醇；0.1%HCL-95%乙醇（V:V=70:30）；无水乙醇；石油醚；乙酸乙酯；HCL-正丁醇（浓HCL5.0ml加入正丁醇95.0ml，混合即可）；2%硫酸铁氨（硫酸铁氨2.0g溶于2.0mol/L HCL 100.0ml即可）2.器材：冷冻干燥机；旋转蒸发仪；分光光度计；水浴锅；电炉；电子分析天平3.材料：新鲜勒杜鹃花四、实验操作(一)勒杜鹃原花色素的提取1.材料处理：称取新鲜勒杜鹃10.0g，剪碎，置于锥形瓶中，加入3倍体积的石油醚，室温浸泡，脱去脂质物质和叶绿素，过滤，将勒杜鹃样品晾干，备用。
a)花色素的提取：提取剂0.1%HCL-95%乙醇（V：V=70:30）料液比（m：V=1:150），提取时间30分钟，控制提取温度60℃，提取次数2次，即提取液分2次加入。
2.花色素的纯化：由于样品中还是会含有其他杂质，如：蛋白质，维生素（水溶性维生素易溶于水而不易溶于非极性有机溶剂；脂溶性维生素易溶于非极性有机溶剂，而不易溶于水。
花青素测定——精选推荐
花青素测定花青素的测定⽬的花青素是类黄酮类⾊素中最重要的⼀种，⼴泛存在于植物花、果实、茎叶中，对这些器官的观赏价值和商品形状有重要价值。
本实验学习花青素的提取及测定⽅法。
⼀、实验原理花青素在酸性溶液中呈红⾊，其颜⾊的深浅与花青素的浓度成正⽐。
花青素酸性溶液的吸收⾼峰波长是530nm，摩尔消光系数为4.62×104，故可⽤分光光度法测定其含量。
但是⼀些提取液中常有叶绿素存在，⼲扰测定。
因此，需同时测定提取液在620nm（可溶性糖）和650nm（叶绿素的吸收值）波长下的光密度值，并⽤Greey公式准确计算出花青素的光密度值，才能计算花青素的含量。
⼆、材料、设备及试剂1.材料茶叶2.2. 设备分光光度计、电⼦天平、⽔果⼑、50ml具塞三⾓瓶、25ml容量瓶。
3. 试剂0.1 mol·L-1的盐酸⼄醇溶液（8.3ml浓盐酸⽤95%⼄醇稀释成1L）。
三、操作⽅法1. 花青素的提取取0.100g⼀串红和0.116g红花继⽊分别放在编号为1、2的三⾓瓶中，加10ml盐酸⼄醇溶液，在60℃⽔浴中加10ml提取液浸提30min，把溶液倒⼊25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒⼊25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒⼊25ml容量瓶中，共浸提1h，最后定溶到25ml。
2. 测定以0.1mol·L-1的盐酸⼄醇溶液做参⽐液，在分光光度计测定提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。
四、实验结果实验结果如下表依据公式1．计算花青素的光密度值ODλ=(OD530-OD620)-0.1(OD650-OD620)2.计算花青素含量=ODλε×V×1000000m花青素含量（nmol/g）ODλ:花青素在530nm波长下的光密度ε：花青素摩尔消光系数4.62×106v:提取液总体积（ml）m:取样质量（g）1000000: 计算结果换算成nmol的倍数由⼀串红测得结果则有：ODλ=(1.360-0.024)-0.1(0.043-0.024)=1.3341所以，花青素含量（nmol/g）=1.3341/4.62/104×25/0.100×106=7219.156 由红花继⽊测得结果则有：ODλ=(0.370-0.062)-0.1(0.183-0.062)=0.2959 所以，花青素含量（nmol/g）=0.2959/4.62/104×25/0.116×106=1380.337五、结果分析与讨论从实验实验可以看出，⼀串红的花青素含量⽐红花继⽊的花青素含量⾼很多。
花青素的测定
花青素的测定方法1:原花色素的测定方法（分光光度法）本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂（如葡萄子与松树皮提取物）中原花色素含量的测定。
1. 方法提要原花色素（也称缩合单宁）是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体，属多酚类化合物。
与其他酚类化合物不同，黄烷醇（缩合单宁，单体，双体等）在酸性介质中可与香草醛反应，生成在500nm处有最大吸收的有色物质，可通过比色测其含量。
2. 仪器分光光度计。
3. 试剂所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。
（2）提纯的原花色素或儿茶素。
（3）4%香草醛甲醇液。
（4）标准使用液：将提纯的原花色素溶于蒸馏水，制成1mg/mL 储备液，将储备液稀至浓度为1×10-2mg/mL至1mg/mL的标准使用液。
标准使用液应于测定当天配制。
如无提纯的原花色素，可用儿茶素代替，配制方法同上。
4. 测定步骤（1）样品中原花色素的制备：植物材料经4倍体积丙酮+水（7+3，体积比）或者经60%甲醇提取，40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂，水相再经乙醚洗涤后定容。
冰冻干燥的固体原花色素制剂，直接溶于水中（先加少量甲醇助溶）制成原花色素液。
原花色素液于5℃下暗环境中保存备用。
（2）样品测定：用锡箔将试管（14mm×20mm）包裹严，仅留管口用于加样。
向管内加入试样0.5mL，再加3.0mL 4%香草醛甲醇液混合，然后加入1.5mL浓盐酸，彻底混匀，室温下显色15min。
也可在暗环境下进行以上操作。
最后在500nm处比色。
可按以上操作步骤制得标准曲线（即0.1mg原花色素在500nm 处的吸收值为0.55）。
5. 结果计算计算原花色素量的公式，原花色素（1×10-3mg）=A500nm÷0.55×100×V式中V——试样稀释体积（倍数）。
6. 注释（1）本方法的检测范围为（5~500）×10-3mg/0.5mL样液。
花青素提取
2.7290 2.7134 2.6787 0.9097 0.9045 0.8929 0.0168
0.9023（X）
方差分析表
变异来源 乙醇浓度 （A） SS 0.0251 df 2 MS 0.01255 F 83.667* Fa
料液比（B） 0.0023
提取时间 （C） 0.0106
2
2
0.00115
乙醇浓度(%) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 1 2 2 2 3 3 3 料液比（V/V） 1 2 3 1 2 3 1 2 3 提取时间(s) 1 2 3 2 3 1 3 1 2 空列 1 2 3 3 1 2 2 3 1 A525 0.9109 0.9764 1.0048 0.8716 0.9753 0.8770 0.8600 0.8023 0.8428 8.1211（T）
料液比的确定
1
0.9 0.8
0.7 0.6
吸光值A
0.5
0.4 0.3
0.2 0.1
0
1:10
1:15
1:20 料液比(v/v)
1:25
1:30
盐酸浓度的确定
1 0.9 0.8 0.7
吸光值A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0
0.03
0.05
0.1 盐酸浓度(%)
0.5
1
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
正交试验结果
提取时间的确定
1 0.9 0.8 0.7
吸光值A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 10 20 30 提取时间(s) 40 50
微波功率对提取效果的影响
0.88 0.86 0.84 0.82
吸光值A
花青素含量的测定
花青素是一类具有重要生物活性的天然色素，广泛存在于植物中，并对人体健康有益。
测定花青素含量的方法有多种，以下是其中一种常用的方法：
试剂和仪器：甲醇、乙酸、五氯酚酞溶液、高压液相色谱仪（HPLC）等。
步骤：
1.将待检测的样品（如花瓣、果实等）取适量，冷藏保存。
2.取少量样品，用甲醇将其加以浸泡，使其充分均匀地溶解，形成混合液。
该混合液可放于水浴中加热加速搅拌。
3.通过滤纸将混合液过滤，使其中的杂质分离并去除。
4.将滤过的液体放入离心管并进行离心分离，将上清液取出。
5.将上述上清液加入乙酸及五氯酚酞溶液中，混匀后置于常温下反应15-20
分钟，即可形成浅红色溶液。
6.将步骤5中得到的溶液进行过滤，然后放入样品瓶中，即为待测样品溶
液。
7.通过高压液相色谱仪（HPLC）对待测样品溶液中的花青素成分进行分析
和检测，得到花青素的含量。
注意事项：
1.在操作前应严格遵守操作规程，保持实验环境清洁卫生。
2.在每个步骤中加入足量的试剂以确保精准的测定结果。
3.操作时应小心谨慎，防止操作过程中出现意外。
4.为了得到较为准确的测试结果，最好采用与国家标准接近的检测方法，并
在实验条件允许的情况下重复测试。
花青素的分离提纯测定实验具体方案
花青素的提取、测定仪器材料试剂：仪器：旋转蒸发仪，真空泵，分光光度计，真空干燥箱，水浴锅，天平材料：新鲜的紫葡萄和青葡萄试剂：无水乙醇，盐酸，铁氰化钾，三氯乙酸，硫酸亚铁实验步骤一、花青素的提取：1、挑选新鲜的紫葡萄薄洗净晾干，分离出果肉、果皮、籽粒2、将分离晾干的紫色葡萄果皮，80℃下干燥1h。
3、称取2g磨成粉末4、用含有1%盐酸的乙醇溶液浸提2次，合并提取液5、讲合并提取液进行抽滤6、60℃减压浓缩7、真空干燥8、得粗提取液二、提取条件的优化：--完整版学习资料分享----确定最佳提取方案然后对果皮、果肉、籽粒进行提取，测定最佳提取部位。
三、纯化纸层析法提纯1.取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。
2．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。
3．在大试管中加入常用的展开剂有V(丁醇)∶V(乙酸)∶V(水)=4∶1∶5,V(正丁醇)∶V(2mol/LHCl)=1∶1,V(乙酸)∶V(浓HCl)∶V(水)=15∶3∶82,1%盐酸,V(浓HCl)∶V(水)=3∶97等（即层析液）。
然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。
4.展开后剪下色斑,以酸化甲(乙)醇洗涤、浓缩,即可得到样品。
四、花青素的测定1.采用普鲁士蓝法测定花青素的还原能力。
取一定浓度的样品溶液1 mL，加入磷酸盐缓冲液和1%K3Fe（CN）6各2.5 mL，混合均匀，混合液50 ℃保温20 min，快速冷却，加入10 %的三氯乙酸溶液2.5 mL，离心10 min。
取上清液2.5 mL，加入等量蒸馏水和0.1%的FeCl3 1mL，摇匀，10min后700nm下测定吸光值A700，以抗坏血酸为对照。
(原花青素提取分离)
定量分析
标准曲线
配制0.05—0.5mg/mL的原花青素对照品水溶液，于试 管中依次加入0.5mL丌同浓度对照水溶液，加入 2.5mL30g/L香草醛的甲醇溶液及2.5mL30%硫酸的甲 醇溶液，混匀后于30℃水浴保温20min后在波长为 500mn下测定绘制标准曲线。 2 线性方程为：Y=2.0669X-0.0196， R =0.9994
工艺流程
粉碎葡萄籽
称量
浸提
浓缩
合并上清液
过滤并离心
上柱洗脱
浓缩含量较高的洗脱液
喷雾干燥
实验步骤
提取
取粉碎后的葡萄籽20g 按料液比1:7加入 70%乙醇，在50℃下回流提取30min，浸 提3次，分别过滤，冷却后在4 000 r/min 转速离心10min，合并上清液，蒸发浓缩 回收乙醇。
实验步骤 分离
原花青素的用途 由于原花青素属于黄酮类化合物，具有多种生理功能 及药理作用。 随着研究人员对原花青素的研究一步一步深入，发现 原花青素的功效甚好，用途及其广泛。 原花青素的主要作用: 抗氧化剂 由于opc分子结构中有多个酚羟基B环上具有相邻 二酚羟基，且分子中有几个不氧原子相邻的二羟酚基， 有利于分子不金属离子及蛋白结合，阻止了催化自由 基反应金的属离子的活性。所以是一种很强的抗氧化 剂。
大孔树脂柱层析:将浓缩液上样已经处理好的大孔 树脂层析柱上,分别用水和20%、40%、60%、 80%的2BV的乙醇洗脱，分别收集洗脱液，检测 含量，合并含量较高的洗脱液，蒸发浓缩。
干燥
将浓缩好的样液进行喷雾干燥。
定性分析
盐酸镁粉反应 将样品 溶于1ml 乙醇 加入少 许镁粉 振摇 滴加几 滴浓盐 酸
实验试剂和仪器
紫甘蓝中花青素提取实验报告
紫甘蓝中花青素的提取（安徽农业大学 12青年农场主班）花青素具有很强的抗氧化作用，具有清除体内自由基、过敏、保护胃粘膜等多种功能，引起了国内外学者广泛关注。
目前抗变异、抗肿瘤、抗，对花青素的研究主要集中于花青素的提取、分离纯化、热稳定性、抗氧化性及其生理功能等方面。
1、实验原理紫甘蓝花青素或花色素属于黄酮类化合物，极性较高，可溶于水或甲醇乙醇等有机溶剂中。
根据相似相溶的原则，本实验选用乙醇作为紫甘蓝花色素的浸提剂，采用大孔吸附树脂法分离提纯。
大孔吸附树脂具有吸附性能和分子筛的作用，使相对分子质量和吸附能力不同的混合物的不同成分得到分离。
紫甘蓝叶片与60%乙醇混合在组织捣碎机中破坏紫甘蓝细胞，使花色素尽可能多的溶解。
为了防止花色素的降解以提高其溶出率，可在其中加入1%盐酸。
八层纱布过滤后，留一小烧杯备用，剩余的用大孔树脂除杂，加入200ml 15%的乙醇溶液除去其他可溶性杂质，让树脂吸附花色素，再用60%乙醇洗脱，解析得到乙醇和花色素的混合液。
将过柱的溶液以HCl：混合液=1:4的比例混合至烧杯中，在90。
C的水浴锅中水解一小时，以破坏花色素的糖苷键，使花色素均以花青素的形式存在。
此时，用20ml纯水除杂，用无水乙醇洗脱，得到较为单一的花青素与乙醇混合液。
在旋转蒸发仪上蒸干。
2、材料、药品与仪器新鲜紫甘蓝15%乙醇、60%乙醇+1%HCl混合液、弄HCl、无水乙醇、AB-8打孔吸附树脂电子天平、组织捣碎机、交换柱、玻璃棒、50ml量筒漏斗、烧杯、圆底烧瓶、纱布、比色皿、分光光度计、旋转蒸发仪3、实验步骤●配制60%+1%HCl混合液与15%乙醇溶液备用●称取100.0g新鲜紫甘蓝叶片，量取60%+1%HCl混合液300ml（浸提剂），同时放入组织捣碎机中捣碎，浸提●所得固液混合物用8层纱布过滤，取一点滤液备用，剩余滤液1：5加水稀释得色素原液●将备用滤液再用滤纸过滤，用浸提剂做空白，测定其对520nm光的吸光度，并作标准曲线。
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花青素的提取、测定
仪器材料试剂：
仪器：旋转蒸发仪，真空泵，分光光度计，真空干燥箱，水浴锅，天平材料：新鲜的紫葡萄和青葡萄
试剂：无水乙醇，盐酸，铁氰化钾，三氯乙酸，硫酸亚铁
实验步骤
一、花青素的提取：
1、挑选新鲜的紫葡萄薄洗净晾干，分离出果肉、果皮、籽粒
2、将分离晾干的紫色葡萄果皮，80℃下干燥1h。
3、称取2g磨成粉末
4、用含有1%盐酸的乙醇溶液浸提2次，合并提取液
5、讲合并提取液进行抽滤
6、60℃减压浓缩
7、真空干燥
8、得粗提取液
2、提取条件的优化：
p 水平A提取
温度 /℃
B乙醇
浓度/%
C提取时
间/min
D料液比/
（g/ml）
p 1 50 50 60 1:10 p 2 60 60 90 1:20 p 3 70 70 120 1:30
A B C D 结果
实验序
号
1 1 1 1 1
2 1 2 2 2
3 1 3 3 3
4 2 1 2 3
5 2 2 3 1
6 2 3 1 2
7 3 1 3 2
8 3 2 1 3
9 3 3 2 1
K1
K2
K3
Q
确定最佳提取方案然后对果皮、果肉、籽粒进行提取，测定最佳提取部位。
3、纯化
纸层析法提纯
1.取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。
2．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。
3．在大试管中加入常用的展开剂有V(丁醇∶V(乙酸∶V(水=4∶1∶5,V(正丁
醇∶V(2mol/LHCl=1∶1,V(乙酸∶V(浓HCl∶V(水=15∶3∶82,1%盐酸,V(浓
HCl∶V(水=3∶97等（即层析液）。
然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。
4.展开后剪下色斑,以酸化甲(乙醇洗涤、浓缩,即可得到样品。
四、花青素的测定
1.采用普鲁士蓝法测定花青素的还原能力。
取一定浓度的样品溶液1 mL，加入磷酸盐缓冲液和1%K3Fe（CN）6各2.5 mL，混合均匀，混合液50 ℃保温20 min，快速冷却，加入10 %的三氯乙酸溶液2.5 mL，离心10 min。
取上清液2.5 mL，加入等量蒸馏水和0.1%的FeCl3 1mL，摇匀，10min后700nm下测定吸光值A700，以抗坏血酸为对照。
2青素清除体外自由基能力测定。
利用Fenton 反应产生羟自由基[6]。
取2 mL PBS（磷酸盐缓冲液pH=7.4），依次加入20mmol/L EDTA和12mmol/L FeSO4混合溶液0.1mL，一定浓度的花青素溶液1 mL、100mmol/L H2O2 0.1mL，用磷酸盐缓冲液定容至5 mL，迅速混匀，置于37 ℃水浴15 min。
测定510nm 下光吸收值，计算清除率。
清除率=（对照吸光度-样品吸光度）/对照吸光度×100%。