第六章微生物发酵

合集下载
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

发酵液中泡沫的大量形成会使菌体与泡沫形
成稳定的乳浊液,影响到氧传递系数。
2013-7-14
若发酵液中溶氧保持不变,即供氧=需氧,则
K L a(c * cL ) QO2 X
使供需失去平衡的因子也会改变溶氧浓度。
2013-7-14
三、发酵过程溶解氧的变化
图 谷氨酸发酵时正常和异常的溶氧曲线
———正常发酵溶氧曲线; 异常发 酵溶氧曲线; 异常发酵光密度曲线
2013-7-14
• 发酵液pH变化是菌体代谢的综合结果,从代谢 曲线的pH值变化可以推测发酵罐中各种生化反
应的进展和pH变化异常的可能原因。
2013-7-14
例: 配制不同初始pH的培养基,摇瓶考察发酵情况
pH对产海藻酸裂解酶的影响
2013-7-14
异亮氨酸发酵
不同pH控制方式对目的突变株ISw330异亮氨酸摇瓶发酵 的影响,结果如图所示。 “1”表示只加CaC03控制pH值, “2”表示只加尿素控制,“3”表示CaC03和尿素联合控制pH 2013-7-14 值。
注意: ●实际上,呼吸临界氧值不一定与产物合成临界氧值相同。 ●生物合成临界氧浓度并不等于其最适氧浓度。 ●在培养过程中是不是维持溶氧越高越好?
2013-7-14
• 初级代谢的氨基酸发酵,需氧量的大小与氨基酸 的合成途径相关。据需氧要求可分为三类: • 第一类有谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(G1n)、精氨酸
2013-7-14
第二节 pH对发酵的影响和控制
一、pH值对菌体生长和代谢产物合成的影响
• 菌种不同,对pH要求不同
• 菌种相同,pH不同,形成的产物不同
• 菌种生成和发酵的最适pH不同,形成的产物不同
2013-7-14
第二节 pH对发酵的影响和控制 pH对微生物生长和产物合成影响的原因:
1.影响细胞膜所带电荷的状态,改变细胞膜的通透性, 影响营养物质吸收和代谢产物分泌; 2.影响酶的活性,阻碍菌体的新陈代谢; 3.影响培养基中某些组分的解离,从而影响吸收;
(Arg)和脯氨酸(Fro)等谷氨酸系氨基酸,它们在菌
体呼吸充足的条件下,产量才最大,如果供氧不
足,氨基酸合成就会受到强烈的抑制,大量积累
乳酸和琥珀酸;
2013-7-14
• 第二类,包括异亮氨酸(ILe)、赖氨酸(Iys)、苏氨 酸(Thr)和天冬氨酸(Asp),即天冬氨酸系氨基酸, 供氧充足可得最高产量,但供氧受限,产量受影
一、溶氧控制的意义 微生物只能利用溶解于液体中的氧。溶氧(DO) 是需氧微生物生长所必需。在发酵过程中有多方面 的限制因素,而溶氧往往是最易成为控制因素。 氧是一种难溶于水的气体。在25℃,1×105 Pa条件下,空气中的氧在纯水中溶解度 0.25mmol/L。在28℃氧在在发酵液中的溶解度只 有0.22 mmol/L。
方法:提高罐压或在通气中掺入纯氧,提高 氧分压。
一般微生物在5个大气压以下的压力下不会受 到损害,适当提高空气压力可提高通风效果。但 是,过分增加使设备投资也大大增加。
2013-7-14
5.发酵罐内液柱高度
在空气流量和单位发酵液体积消耗功率不变 时,通风效率随H/D的增大而增加。国外倾向于 采用较高的H/D。
H/D太大,溶氧系数反而增加不大。一般在23之间为宜。
2013-7-14
6. 发酵罐体积
发酵罐体积大的氧利用率高,体积小的氧利
用率低。几何形状相同的条件下,发酵罐体积大
的氧利用率可达7-10%,而体积小的发酵罐利用
率只有3-5%。
2013-7-14
7、培养液的物理性质
发酵液的表面张力、粘度、离子浓度等都会 影响气体的溶解度,还影响液体的湍动以及界面 和液膜的阻力,因而影响传递效率。
长慢,维持较高温度时间可长些。培养条件适宜, 如营养丰富,通气能满足,那么前期温度可髙些, 以利于菌的生长。 • 总的来说,温度的选择根据菌种生长阶段及培 养条件综合考虑。要通过反复实践来定出最适温 度。
2013-7-14
2. 温度的控制
• 设施:在发酵罐上安装夹套和蛇管,通过循环冷
却水控制。 • 冷却介质:深井水或冷冻水 • 控制方式:手动控制或自动控制
2013-7-14
供氧对于好氧微生物来说是非常重要的。谷氨酸 发酵时,发酵液中氧的饱和浓度约为0.313mmol/L, 仅能维持菌正常呼吸20-30s。发酵液中的大量微生 物耗氧迅速(耗氧速率大于25~100 mmol/L.h) 在好氧深层培养中,氧气的供应往往是发酵能 否成功的重要限制因素之一。
2013-7-14
两者的关系:
r QO2 X
式中,r ——耗氧速率,mmol O2/(L· h);
QO2——呼吸强度,mmol O2/(g· h); X ——菌浓,g/L。
2013-7-14
在发酵过程中,影响耗氧的因素有以下几方面: 1.培养基成分和补料 培养基的成分和浓度显著影响耗氧;培养液营养 丰富,菌体生长快,耗氧量大;发酵浓度高,耗氧 量大;发酵过程补料或补糖,微生物对氧的摄取量 随着增大。
2013-7-14
pH的控制
• 在培养液的缓冲能力不强的情况下,pH可反映菌的
生理状况,如pH上升超过最适值,意味菌处在饥饿 状态,可加糖调节,但加糖过量又会使pH下降。用 氨水中和有机酸时,过量的NH3会使微生物中毒。用 NaOH或Ca(OH)2调节pH,需注意培养基的离子强度和
产物的可溶性。
2013-7-14
利福霉素发酵 时,pH选择试 验结果。
2013-7-14
pH的控制
• 通过中间补料控制合适的pH,采用补料的方法,可
以同时实现补充营养、延长发酵周期、调节pH和培 养液特性。
• 青霉素发酵中,通过调节补糖速率控制pH,比用恒
速加糖,pH由酸碱控制提高青霉素产量25%。
2013-7-14
2013-7-14
一般好氧微生物临界溶解氧浓度很低,约为 0.003-0.05mmol/L,需氧量一般为25-100mmol/
(L· h)。其临界溶解氧浓度大约是饱和浓度的1%-25%。
2013-7-14
• 为避免发酵处于限氧条件下,需要考查每一种
发酵产物的临界氧浓度和最适溶氧浓度,并使
发酵过程保持在最适溶氧浓度。
2013-7-14
⑵ 根据培养条件选择
• 温度选择还要根据培养条件综合考虑,灵活选择。 • 通气条件差时可适当降低温度,使菌呼吸速率降 低些,溶氧浓度也可髙些。 • 培养基稀薄时,温度也该低些。因为温度高营养 利用快,会使菌过早自溶。
2013-7-14
⑶ 根据菌生长情况 • 菌生长快,维持在较高温度时间要短些;菌生
2013-7-14
2.菌龄影响耗氧: 呼吸旺盛,耗氧力强,发酵后期菌体处于衰老状 态,耗氧能力自然减弱。
3.发酵条件影响耗氧:
在最适条件下发酵,耗氧量大。
发酵过程中,排除有毒代谢产物如二氧化碳、挥发性
的有机酸和过量的氨,也有利于提高菌体的摄氧量。
2013-7-14
供氧方面 在单位体积培养液中氧的传递速率OTR可表示为:
2013-7-14
溶氧作为发酵异常的指标
• 生长过程从培养液中溶氧浓度的变化可以反映菌 的生长生理状况。 • 发酵溶氧变化异常,可及时预告生产可能出现的 问题。
• 溶氧异常下降,原因?⑴ 、⑵、⑶ • 溶氧迅速(一般2~5h)跌到零,并长时间不回升。 这比无菌试验发现染菌要提前几个小时。溶氧升
2013-7-14
影响溶氧系数KL a 的因素
1、搅拌: (1)增加气液接触面积(打碎气泡),增加氧传 递面积;(2)使液体形成涡流,从而延长气泡在 液体中的停留时间;(3)增加液体的湍流程度, 降低气泡周围的液膜阻力,从而增加KL a值;(4) 减少菌丝结团,降低细胞壁表面的液膜阻力。
2013-7-14
2、空气的线速度
溶氧系数K Lα是随空气量的增加而增大的,当 增加通风量时,空气的线速度也就相应地增大,从 而增加了溶氧,氧传递系数K Lα相应地也增大。 但空气速度过大,则可使叶轮发生过载,即叶 轮不能分散空气,气体不经分散而沿搅拌器缓慢运 动的中心迅速上升而逸出。
2013-7-14
3、 空气分布管
2013-7-14
三、发酵过程中pH选择与控制
• 选择原则:既有利于菌体的生长繁殖,又最 大限度地合成代谢产物。
μ QP μ
QP
μ QP
a μ QP
b
c pH
d
2013-7-14 pH与菌体比生长速率(μ)和产物比生产速率(Qp)之间的关系
pH 选择
• 调节发酵培养基初始pH,在发酵过程中定时测定和 调节pH,以菌体生长达到最高值的pH为菌体生长的 合适pH,以产物合成达到最高值为产物合成合适的 pH。 • 利福霉素发酵,当pH7.0时,平均得率系数最大, 从经济角度考虑各种参数,平均得率系数最重要, 故pH7.0是生产利福霉素B的最佳条件。
4.影响代谢过程,使代谢产物的质量和比例发生改变。
5.影响菌体形态。
2013-7-14
部分微生物生长与产物合成的pH范围
代谢产物 丙酮丁醇 青霉素 菌种生长最适 pH范围 5.5-7.0 6.5-7.2 产物合成最适 pH范围 4.3-5.3 6.2-6.8
链霉素
灰黄霉素
6.3-6.9
6.4-7.0
pH6.9时,菌体生长旺盛,pH7.15时,对菌体的产酸 有利。因此,在发酵的产酸期产酸较高。采用阶段pH控 制模式进行发酵,在发酵中前期控制pH6.9,到48h后pH 值为7.15,到80h后pH值为7.25。产率22.27g·/L,产酸 率提高12.23%。
2013-Baidu Nhomakorabea-14
第三节 溶氧对发酵的影响及控制
空气分布管的型式、喷口直径及管口与罐底 距离的相对位置对氧溶解速率有较大的影响。 当通风量较小时,喷口的直径越小,气泡的 直径也就越小,相应地溶氧系数就越大。而当通 风量超过一定值后,气泡的直径与通风量有关, 与喷口的直径无关。
2013-7-14
4. 增加氧的分压
增加空气中的氧分压可使氧的溶解度增大。
2013-7-14
在微生物的培养过程中,应保持供氧与耗氧的 平衡,满足微生物对氧的利用。
2013-7-14
二、微生物的临界氧浓度
临界氧浓度:满足微生物呼吸的最低溶氧浓度,如 对产物而言,是不影响产物合成所允许的最低浓度。 用C临界表示。 如果溶解氧浓度低于临界值,细胞的比耗氧速 率就会大大下降,细胞处于半厌氧状态,代谢活动 受到阻碍。
第一节 温度控制
2013-7-14
四、温度的选择与控制
1.最适温度的选择
⑴ 根据菌种及生长阶段来选择
• 如黑曲霉生长温度为37℃;谷氨酸产生菌棒状杆 菌的生长温度为30~32 ℃ ;青霉菌生长温度为 30 ℃ 。 • 在生长阶段,应选择最适生长温度; 在产物分泌 阶段,应选择最适生产温度。如谷氨酸发酵时, 最适生长温度30-34 ℃ ,产生谷氨酸的温度为3637℃
OTR K L a (C* CL )
式中, KLa——以浓度差为推动力的体积溶氧系数, m/h; c* ——氧在水中的饱和浓度,mmol/L; cL ——发酵液中的溶氧浓度, mmol/L。
凡是使KLa和c*增加的因素都能使发酵供氧改善。
• Kla反映了设备的供氧能力,发酵常用的设备为摇 瓶与发酵罐。
响不明显;
• 第三类,有亮氨酸、濒氨酸(Val)和苯丙氨酸(Phe),
仅在供氧受限、细胞呼吸受抑制时,才能获得最
大量的氨基酸,如果供氧充足,产物生成反而受 到抑制。
2013-7-14
三、供氧与微生物呼吸及代谢产物的关系
需氧方面 微生物的“需氧” 可用耗氧速率或呼吸强度来表示: 呼吸强度(respiratory strength):单位质量的细 胞干重在单位时间的耗氧量。单位为 mmol O2/(g · 干细胞 · ,用Qo2表示 h) 耗氧速率(oxygen uptake rate):指单位体积的培 养液在单位时间的耗氧量。单位为 mmol O2/(L· h), 用r表示
6.7-7.3
6.2-6.5
四环素 碱性脂肪酶
6.1-6.6 6.5-7.0
5.9-6.3 6.8-7.4
2013-7-14
二、发酵过程中影响发酵液pH变化的因素
引起发酵液pH下降的因素有: 1、培养基碳、氮比例不合适,碳源过多,特别是葡 萄糖过量或者中间补糖过多,溶解氧不足,使有机酸 大量积累而pH下降。 2、消泡剂(油)加量过多。 3、生理酸性物质的存在,氨被利用。 引起发酵液pH下降的因素有: 1、培养基碳、氮比不当,氮源过多,氨基氮释放; 2、生理碱性物质存在; 3、中间补料中氨水或尿素等碱性物质量过多。
相关文档
最新文档