实验4-血清甘油三酯含量测定
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实验26 实验26
血清甘油三酯含量测定
Assay of Triglyceride content
生物化学与分子生物学系 陈园园
实验目的
掌握血清甘油三酯化学法测定的 基本原理及主要技术方法 了解血清甘油三酯含量测定的 正常值与临床意义
实验原理
皂化
甘油三酯
+ KOH
60-70℃ ℃ 3 20min 钾皂
注意事项
抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液； 吸取上层液时不能吸入下层液； 选用小试管时试管口径不能太细； 选用小试管时试管口径不能太细； 试管使用时必须要干燥； 试管使用时必须要干燥； 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 枪头必须清洗干净， 枪头必须清洗干净，甩干
氧化显色 比色
加入氧化试剂，充分混匀后， 加入氧化试剂，充分混匀后， 加入乙酰丙酮和氨的混合液，摇匀， ℃水浴15min 加入乙酰丙酮和氨的混合液，摇匀，65℃水浴
取出试管，流水 室温冷却 室温冷却， 取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度 的吸光度
分光光度计的使用
样品池 波长 读数 拉杆， 档 拉杆，0-4档 1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min 2. 1档（空白管），T模式调 模式调100%，显示“Blank”、 档 空白管） 模式调 ，显示“ ” “100” ” 3. 拉杆拉至 档，T模式调 ，显示“0.00” 拉杆拉至1.5档 模式调0%，显示“ 模式调 ” 4. 换到 模式，拉至 、3、4档，读取各个样品的吸光度 换到A模式 拉至2、 、 档 模式， 毛面 光面
皂化
吸取上层液体0.5ml，加入对应的3 （或4）只大试管中， ，加入对应的 吸取上层液体 ） 加入异丙醇、皂化试剂，充分混匀，65℃水浴 加入异丙醇、皂化试剂，充分混匀， ℃水浴5min 注意：吸上层液时，务必当心， 注意：吸上层液时，务必当心，绝对不可吸入下层液体 分光光度计预热） （分光光度计预热）
+
甘油
氧化
甘油
HIO4
2
甲醛
显色
+
甲醛 乙酰丙酮 NH4+ 3,5-二乙酰 二乙酰-1,4二氢 二氢-2,6 二甲基吡啶 二乙酰 二氢 黄色带荧光） （黄色带荧光）
实验步骤
抽提
依次加入蒸馏水 标准液、样品， 加入蒸馏水、 取3（或4）只小试管，依次加入蒸馏水、标准液、样品， （ ） 抽提剂及硫酸，边加边摇，用力振摇10min，静置10min分层 抽提剂及硫酸，边加边摇，用力振摇 ，静置 分层 注意： 注意：试管必须干燥
比色杯的使用
1、分清光面、毛面。手应接触毛面，光从光面通过 、分清光面、毛面。手应接触毛面， 2、用溶液润洗 次，装至 至4/5体积 、用溶液润洗2-3次 装至2/3至 体积 3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面 、粗纸吸水、
实验结果
Lambert-Beer 定律 A1 c1 m1 终体积相同时） 标准管法 —— = —— = —— （终体积相同时） A2 c2 m2 A样品 ——— × m标准品 A标准品 样品TG浓度 样品 浓度 = ———————— V样品 mg/ml A样品 ——— × 1mg/ml ×0.2ml A标准品 = ———————————— 0.2ml mg/ml ————————— ×1000 mmol/L 摩尔质量g/mol (885) 摩尔质量 国际单位 正常参考值为0.30~1.7mmol/L 正常参考值为
临床应用
血脂：血甘油三酯、 血脂：血甘油三酯、血胆固醇
餐后甘油三酯会增高， 餐后甘油三酯会增高，检查时一定要空腹抽血 饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高， 饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高， 抽血前几天禁止饮酒 正常人血清甘油三酯水平有随年龄增高的趋势 血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征、 血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征、 急性胰腺炎、 急性胰腺炎、原发性高甘油三酯血症及 动脉粥样硬பைடு நூலகம்等
血清甘油三酯含量测定
Assay of Triglyceride content
生物化学与分子生物学系 陈园园
实验目的
掌握血清甘油三酯化学法测定的 基本原理及主要技术方法 了解血清甘油三酯含量测定的 正常值与临床意义
实验原理
皂化
甘油三酯
+ KOH
60-70℃ ℃ 3 20min 钾皂
注意事项
抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液； 吸取上层液时不能吸入下层液； 选用小试管时试管口径不能太细； 选用小试管时试管口径不能太细； 试管使用时必须要干燥； 试管使用时必须要干燥； 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 枪头必须清洗干净， 枪头必须清洗干净，甩干
氧化显色 比色
加入氧化试剂，充分混匀后， 加入氧化试剂，充分混匀后， 加入乙酰丙酮和氨的混合液，摇匀， ℃水浴15min 加入乙酰丙酮和氨的混合液，摇匀，65℃水浴
取出试管，流水 室温冷却 室温冷却， 取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度 的吸光度
分光光度计的使用
样品池 波长 读数 拉杆， 档 拉杆，0-4档 1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min 2. 1档（空白管），T模式调 模式调100%，显示“Blank”、 档 空白管） 模式调 ，显示“ ” “100” ” 3. 拉杆拉至 档，T模式调 ，显示“0.00” 拉杆拉至1.5档 模式调0%，显示“ 模式调 ” 4. 换到 模式，拉至 、3、4档，读取各个样品的吸光度 换到A模式 拉至2、 、 档 模式， 毛面 光面
皂化
吸取上层液体0.5ml，加入对应的3 （或4）只大试管中， ，加入对应的 吸取上层液体 ） 加入异丙醇、皂化试剂，充分混匀，65℃水浴 加入异丙醇、皂化试剂，充分混匀， ℃水浴5min 注意：吸上层液时，务必当心， 注意：吸上层液时，务必当心，绝对不可吸入下层液体 分光光度计预热） （分光光度计预热）
+
甘油
氧化
甘油
HIO4
2
甲醛
显色
+
甲醛 乙酰丙酮 NH4+ 3,5-二乙酰 二乙酰-1,4二氢 二氢-2,6 二甲基吡啶 二乙酰 二氢 黄色带荧光） （黄色带荧光）
实验步骤
抽提
依次加入蒸馏水 标准液、样品， 加入蒸馏水、 取3（或4）只小试管，依次加入蒸馏水、标准液、样品， （ ） 抽提剂及硫酸，边加边摇，用力振摇10min，静置10min分层 抽提剂及硫酸，边加边摇，用力振摇 ，静置 分层 注意： 注意：试管必须干燥
比色杯的使用
1、分清光面、毛面。手应接触毛面，光从光面通过 、分清光面、毛面。手应接触毛面， 2、用溶液润洗 次，装至 至4/5体积 、用溶液润洗2-3次 装至2/3至 体积 3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面 、粗纸吸水、
实验结果
Lambert-Beer 定律 A1 c1 m1 终体积相同时） 标准管法 —— = —— = —— （终体积相同时） A2 c2 m2 A样品 ——— × m标准品 A标准品 样品TG浓度 样品 浓度 = ———————— V样品 mg/ml A样品 ——— × 1mg/ml ×0.2ml A标准品 = ———————————— 0.2ml mg/ml ————————— ×1000 mmol/L 摩尔质量g/mol (885) 摩尔质量 国际单位 正常参考值为0.30~1.7mmol/L 正常参考值为
临床应用
血脂：血甘油三酯、 血脂：血甘油三酯、血胆固醇
餐后甘油三酯会增高， 餐后甘油三酯会增高，检查时一定要空腹抽血 饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高， 饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高， 抽血前几天禁止饮酒 正常人血清甘油三酯水平有随年龄增高的趋势 血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征、 血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征、 急性胰腺炎、 急性胰腺炎、原发性高甘油三酯血症及 动脉粥样硬பைடு நூலகம்等