试验染色体组型分析

FISH的基本原理

很简单, 就是标记了荧光的单链DNA(探 针)和与其互补的DNA(玻片上的标本)退 火杂交, 通过观察荧光信号在染色体上的 位置来反映相应基因的情况.
荧光原位杂交（FISH）

FISH技术是常规染色体分析的辅助手段。 它是用荧光素标记特异探针，与染色体 做杂交后，根据特异的荧光信号来判断 结果。 它可用于标记染色体的识别、特异融合 基因的检测、新基因定位，用全染色体 涂抹探针识别复杂的染色体结构异常。
实验步骤
1. 2. 3. 4.
计数，沿边缘剪下染色体，编号 初步目测配对，分组 测量长度，计算相对长度、着丝粒指数、 臂比，相同的染色体间配对 将配对好的染色体排列并粘贴在纸上，每一 组下面画一横线，在两端注明起止号，并在 横线下的中部写明A-G组号，染色体从大到 小编为1-22号，性染色体单独列为一组

染色体数目确定 染色体形态特征：
长度：绝对、相对 相对长度=每条染色体的长度/全套染色体长度 臂比=长臂/短臂
着丝点指数=短臂/（长+短臂）
随体的有无
分组排队原则

着丝粒类型相同，相对长度相近的分一组 同一组的按染色体长短顺序配对排列 各指数相同的染色体配为一对 可根据随体的有无进行配对 将染色体按长 短排队，短臂向上

dinitrophenyl(DNP)，aminoacetyl
fluorene(AAF)均可用于探针标记。
直接标记和间接标记
用生物素或地高辛标记称为间接标记, 杂交后 需要通过免疫荧光抗体检测方能看到荧光信号, 因而 步骤较多, 操作麻烦, 其优点是在信号较 弱或较小时可经抗原抗体反应扩大 直接用荧光素标记DNA的方法称为直接标记. 由于直接标记的探针杂交后可马上观察到荧光 信号, 省去了烦琐的免疫荧光反应, 不再需要购 买荧光抗 体, 也由于近年来荧光素的亮度和抗 淬灭性的不断改进和提高, 直接标记的荧光探 针越来越成为首选, 并采用多种不同颜色的荧 光, 方便在同一标本上同时检测多种异常. 其荧 光强度 和信号大小都易于在普通荧光显微镜下 观察, 使FISH过程变得简便而易于操作.
染 色 体 超 螺 旋
染 色 体 的 大 小
灯刷染色体（光镜观察）
染色体观察及核型分析
应用意义

染色体组型分析——染色体水平上的表型 可确定物种的特征，确定种属亲缘关系


分析生物物种的变异和进化过程
识别单条染色体、基因定位
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
临床应用（染色体疾病、产前诊断）
人类23对染色体
组型分析实验方法
FISH具有其不可比拟的优点：
1.操作简便，探针标记后稳定，一次标记 后可使用二年。 2.方法敏感，能迅速得到结果。 3.在同一标本上，可同时几种不同探针。 4.不仅可用于分裂细胞染色体数量或结构 变化的研究，而且还可用于静止期细胞 的染色体数量及基因改变的研究。
FISH的技术特点：

FISH选用的标本可以是分裂期细胞染色 体也可以是间期细胞。间期细胞可以是 冰冻切片，也可以是细胞滴片或印片。 生物素（Biotin）地高辛（digoxigenin ）,
思考题

请描述核型：
– 45，XY, der (14;21) (q21;q14)
–
47，XY, +21
遗传及分子生物学实验新技术新方法系列讲座 生命科学中的“钓鱼” （FISH）技
术
发展历史

荧光原位杂交技术(fluorescence in situ Hybridization,FISH)问世于70年代后期, 其曾多用于染色 体异常的研究,近年来随 着FISH所应用的探针种类的不断增多,特 别是全COSMID探针及染色体原位抑制 杂交技 术的出现,使FISH技术不仅在细 胞遗传学方面,而且还广泛应用于肿瘤学 研究,如诊断、基因定位等
核型描述

首先列出染色体总数，然后是性染色体组成， 接着列出异常的染色体数目或形态。下列统一 的命名符号：
– – – – – – – – – A-G 染色体组的名称 1-22 染色体编号 X,Y 性染色体 del 缺失 der 结构重排的染色体 dup 重复 inv 倒位 t 易位 +/在染色体符号前表示染色体增加或减少，在 染色体符号后表示染色体多出或缺少一部分
放射性同位素原位杂交技术

原有的放射性同位素原位杂交技术存在 着较多缺点，诸如每次检验需重新标记 、 已标记的探针表现出明显的不稳定性 、 需要较长时间的曝光时间和对环境的污 染等。在观察结果时，需要较多的分裂 相进行统计学分析。此外，由于放射性 银粒和染色体聚集的不同平面，可能引 起计数上的误差等。
各类常用实验生物和人细胞DNA含量与染 色体数目
物 种
MS2 λ噬菌体 T4 枯草杆菌 大肠杆菌 啤酒酵母 果蝇 海胆 蛙 小鸡 小鼠 玉米 人
染色体数目
1 1 1 1 1 34 8 52 26 78 40 20 46
DNA含量（bp）
3×103 5×104 5×105 2×106 4.2×106 1.4×107 1.4×108 1.6×109 4.5×109 2.1×109 4.7×109 3×109 3.2×109
实验用品
毫米尺、剪刀、胶水、计算器、白纸 人染色体放大照片

染色体编号(人X染色体)
记述一特定带时，需 要写明4个内容：染 色体号，长短臂，区 的号序和带的号序。 这些内容按顺序写， 不用间隔或加标点。 如果某一带被再细分， 在原带号数后加一小 数点，编号原则仍按 从着丝粒往臂端序贯 编号。如1p31.2代表 一号染色体短臂3区1 带第2亚带

发展历史
1920年提出 三项技术促进：低渗处理 秋水仙素应用 植物凝激素应用 染色体分带技术：Q带、G带、C带、R 带、T带、N带等 FISH技术

染色体的特征

数目 （2n=？）
长度 （绝对长度、 相对长度）


着丝粒位置 （M\SM\ST\T）
随体与次溢痕的数目、 大小和位置 带型分析
遗传学实验之—— 染色体组型分析
厦门大学生命科学学院
实验目的：

掌握染色体组型分析的各种数据指标 学习染色体组型分析的基本方法
实验原理
定义：染色体组型又称核型，是指将动 物、植物、真菌等的某一个体或某一分 类群（亚种、种、属等）的体细胞内的 整套染色体，按它们相对恒定的特征排 列起来的图像。 核型模式图是指将一个染色体组的全部 染色体逐个按其特征绘制下来，再按长 短、形态等特征排列起来的图像。