外周血染色体核型分析讲义

明显体态异常，智力低下，发育障 碍，多发畸形或皮纹明显异常，性情 异常
第二性征异常或外生殖器两性畸形。
女性原发性闭经、继发性闭经或男 子无精
长期接触X线、电离辐射、有毒物 质的人员
恶性血液病患者
简介 (Cont.)
染色体核型技术检测 （产前婚前孕 前诊断）：
Eg. 猫叫综合症 （5P综合症), 特 纳综合症， 先天性睾丸发育不良综 合症，超雄综合症 (XYY综合症)， 超雌综合症(XXY综合症)。
项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析 (Cont.)
实验操作： Test Procedure
1.接种：先在每瓶含有PHA的5ml培养基的 培养瓶中接种0.5ml的外周血，接种2瓶。
2.培养：37℃全封闭式培养68-72h。在细胞 收获前加入0.1ml浓度为20ug/ml秋水仙素培 养1-1.5h。
多发性流产，死胎和不孕不孕的夫 妇
35岁以上高龄孕妇
已生育过染色体异常患儿的夫妇， 或双方或一方具有遗传病家族史
夫妇双方或一方为可疑或已知的染 色体数目或结构异常的患者
婚前孕前检查希望进行优生优育检 查的人群
临床应用： Application
检测方法： Method 样本量： Sample
8）用吸管吸取细胞悬液在适当的高度滴于预 冷的清洁玻片上，玻片的头体尾各一滴即可。
9）每滴完一张片后，用纸轻轻将底面擦干， 放至滴片柜中，10分钟后拿出贴上细胞遗传小 标签。
4.烤片：置于75摄氏度烤箱烤3小时。
5.染片：在胰酶中消化20-25s，在生理盐水中 漂洗，在吉姆萨溶液中染色1-2分钟即可。
外周血染色体核型分析可直接在染色体上显 示带型，不仅可以检测染色体数目上的变化， 而且可以观察到缺失、重复、倒位、异位等 结构上的异常，因而其检测可用在遗传病以 及产前婚前孕前的诊断上。
简介 (Cont.)
染色体核型技术检测 （遗传病诊 断）：
Eg. 唐氏综合症 (21-3体)，Patau 综合症(18-3体)， Edwards综合症 (13-3体)。
一定条件刺激下 （Eg. 药物、射线、 病毒或母亲年龄），染色体会发生数 目或结构畸变。
背景知识 (Cont.)
染色体畸变 – 数目改变： Quantity changes
染色体畸变 – 结构异常： Unusual structure
多倍性：体细胞染色体数目成倍增 加。 原因： 双雄受精，双雌受精， 核内复制。 非整倍性： 体细胞染色体数目增加 或少一条或数条。原因： 减数分裂 染色体不分离或丢失。
G显带评判标准： Evaluation Score
目的： 对不同级别条带 水平进行评判， 便于染色体的操 作分析
0： 无条带 1： 鉴定同一条染色体的形态和主要标志 2： 低 (小于300条) 3： 300条带 4： 适中 (400条带) 5： 500条带 6： 好 (600条带) 7： 700条带 8： 优良 (850条带) 9： 900条带 10： 条带决定高于9级的额外带能在
缺失：染色体臂中段或末端丢失。 倒位：某一染色体中间片段发生两 个断裂，断片倒转180°后重接。 易位： 转位，平衡易位，罗伯逊易 位
简介 (Introduction)
概念： Concept
目的： Purpose
染色体核型分析是分析生物体细胞内染色体 的长度、着丝点位置、臂比、随体大小等特 征，其分析以体细胞分裂中期染色体为研究 对象。
900bphs水平看到，一致视为双方同源。
谢谢 Thanks
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实验操作： Test Procedure
5）用离心机以2200转/分钟离心7分钟，吸弃 上清，加入10ml 固定液轻轻混匀（两管合一） ，2200转/分钟离心7分钟。
6）弃上清，加入适量的固定液轻轻混匀使成 细胞悬液。
7）取出在4℃冰水中预冷的清洁玻片，对玻片 进行标识，每标记完一块滴片板上的玻片,就回 顾一下是否编号准确。
外周血
淋巴 细胞
PHA 细胞增殖
秋水仙素
离心 5mins
弃上清液
弃上清液
3x甲醇 1x冰乙酸
吸管吸取
滴入载玻片
烘烤
离心 7mins
染色
固定
75摄氏度，3hours
胰酶消化25s 生理盐水漂洗
KCL氯化钾 溶液 0.075 离心 7mins
吉姆萨溶液 染色1-2mins
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实验原理： Test Principal
外周血中淋巴细胞在含有植物血 凝素(PHA)的培养基中培养68-72 小时，进入生长旺盛的有丝分裂 期；
之后加入秋水仙素抑制纺锤体形 成，使其停留在细胞分裂中期；
再经过氯化钾溶液低渗、固定、 滴片制片、胰酶消化、姬姆萨染 色，在油镜下可观察到每个分裂 期的染色体形态及数量。
外周血染色 体核型分析
背景知识（Background information)
染色体与遗传病： Genetic Disease
染色体的多变性： Variability
染色体的畸变： Aberration
多达300多种因染Biblioteka Baidu体异常而导致的 遗传疾病
46条染色体在不同的人体内存在恒定 的微小变异 （无表型效应or病理学意 义）
3.细胞的收获：
1）用离心机以2200转/分钟离心5分钟后弃 上清液。
2）加入0.075M的KCl溶液10ml，充分混匀 ，低渗时间为15-18分钟 。
3）预固定：低渗后加入固定液1ml充分混 匀（固定液是甲醇与冰乙酸按3：1混匀）， 以2200转/分钟离心7分钟。
4） 吸弃上清液，加入10ml的固定液，混 匀。
项目介绍 (Project) - 外周血染色体核型分析
染色体异常是导致自然流产、胚胎停止 发育，不良孕产史和不孕不育及发育异常 的重要原因，对优生优育门诊就诊的患者 进行染色体分析，在临床诊断和优生优育 方面有重要意义。
培养法G显带
肝素抗凝全血2.0ml
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