探究：酵母菌种群数量的变化实验

作出假设
根据前面所学的知识，针对这一问题作出假设：
培养液中酵母菌种群数量开始一段时间是“J”型增长， 由于营养物质的消耗，有害代谢产物的积累，PH值的改变， 种群数量呈“S”型增长。 讨论探究思路 探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试 管、血球计数板（2mm×2mm方格）、滴管、显微镜等，都由老 师提供。 在制订计划前，你需要思考以下问题，并与同学讨论。
(100小格内酵母细胞个数/100)×400× 2.5×103×稀释倍数
即：一小方格内酵母菌个数×106×稀释倍数
（2）25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=
(80小格内酵母细胞个数/80)×400× 2.5×103 ×稀释倍数
即：一小方格内酵母菌个数×106×稀释倍数
二、从试管中吸出培养液进行计数之前，建 议你将试管轻轻振荡几次。这是为什么？ 使酵母菌混合均匀。
3、影响酵母菌的种群数量增长的因素可 能是什么？
除了本实验中温度、营养以外还包括 酵母菌菌种本身性质、接种时间、pＨ值、 接种量、溶氧量等影响因素。
课本中大方格的长和宽各为2mm，深度为0.1mm， 其体积为0.4mm3。换算为1mL：1000/0.4 = 2.5×103 ， 即1mL是 2.5×103个 0.4mm3。 则：每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式 （2mm× 2mm ） ： （1）16格×25格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml=
分析结果，得出结论
将所得数值用曲线图表示出来，分析实验结果是否支持你 所做的假设。
探究的结论： 酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下是呈 “S”型增长，但之后会下降。温度、营养成分会 影响酵母菌种群数量的变化。
一、怎样进行酵母菌的计数？
提示：对一支试管中的培养液(可定为10ml) 中的酵母菌逐个计数是非常困难的，可以采用 抽样检测的方法：先将盖玻片放在计数室上， 用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养 液自行渗入，多余培养液用滤纸吸去，稍待片 刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部，将 计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内 的酵母菌数 量，再以此为根据，估算试管中 的酵母菌总数。
介绍:血球计数板的构造
1、血球计数板：是显微镜上的外挂物件，可用来测 量细胞，细菌等一些微小物体的长度，还有就是测量 数量，如单位体积细胞的数量。血球计数板是由一块 比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下 凹的槽，构成三个平台，中间的平台较宽，其中间又 被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。
探究： 培养液中酵母菌 种群数量的变化
探究：培养液中酵母菌种群数量的变化
目的要求 1、学习利用血球计数板进行微生物计数的方法 2、实验探究培养液中酵母菌种群数量的变化 3、注意样方法的应用 4、体会影响种群数量变化的因素
酿酒和做面包都需要酵母菌。这些酵母 菌可以用液体培养基（培养液）来培养。培 养液中酵母菌种群的增长情况，与发酵食品 的制作有密切关系。
3、使用方法:
将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上 加盖专用的盖玻片，将稀释后的酵母菌悬液，用吸管 吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余 的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降 到血球计数室内，加盖盖玻片。
5、单位换算: 以1mm×1mm 4、计数室的规格： 为例，大方格的长和宽各为 计数室长×宽有： 1mm，深度为0.1mm，其体 1mm×1mm, 积为0.1mm3。换算为1mL： 2mm×2mm, 1000/0.1= 104即1mL是104 3mm×3mm等 个0.1mm3 。 深度均为0.1mm。
规格为25格×16格的计数室，五点取样法
7、盖玻片下的培养液厚度为0.1mm，请推算出将 一个小方格范围内的酵母菌数，换算成10ml培养液 中酵母菌总数的公式。 每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式 （以1mm×1mm为例）： （1）16格×25格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml= (100小格内酵母细胞个数/100)×400 ×104 ×稀释倍数 即：一小方格内酵母菌个数× 4× 106×稀释倍数 （2）25格x16格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml= (80小格内酵母细胞个数/80)×400 ×104 ×稀释倍数 即：一小方格内酵母菌个数× 4× 106×稀释倍数
实验设计 将9支试管分成ABC三组，每组3支。A组为实验 组，装培养液10 mL，酵母菌母液0.1mL,环境温度 28℃。B组装培养液10 mL，酵母菌母液0.1mL,环 境温度5℃，与A组形成温度条件对照。C组不装培 养液，只装无菌水10mL,酵母菌母液0.1mL,环境温 度28℃，与A组形成营养条件对照。
三、本探究需要设置对照吗？如果需要, 请讨论对照组应怎样设计和操作，如果 不需要，请说明理由。 不需要，因不同时间取样已形成对照。 四、需要做重复实验吗？
需要。尽量减少误差。对每个样品计 数三次,取其平均值。
五、怎样记录结果？记录表怎样设计？
酵母菌细胞数量（× 106个/mL）
时间 （d） 1 2 3 4 5 6 7 A组 B组 C组 A1 A2 A3 平 B1 B2 B3 平 C1 C2 C3 平 均 均 均
六、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当 采取怎样的措施？
稀释培养液。稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每 小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。
七、对于压在小方格界线上 的酵母菌，应当怎样计数？ 只计数相邻两边及其顶角的 酵母细胞数 八、血球计数板的清洁
血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗 后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙 . 酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留 菌体或其他沉淀物，若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
实验操作： (1)、配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液； (2)、预先设计分装。先每次用10mL刻度吸管吸取10mL培养 液到A组和B组试管，用另一支10mL刻度吸管吸取10mL无菌 水到C组试管。待分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后， 然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。 (3)、用高压蒸汽灭菌锅灭菌； (4)、接种菌种：用灭菌干净的1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵 母菌母液，往每支试管中加入。（注意滴加量不要太多，避免 初始菌数过多。） (5)、培养：将 A、C试管置于 28℃的恒温箱中培养。将 B试管 置于5℃的恒温箱中培养。（5℃的恒温箱可由某些型号冰箱保 温室设定5℃时代替。） (6)、计数和记录：每天取样时间大体一致，每次每组按序号取 一支试管。计数过程中一定要遵守无菌操作规范，取样的吸管 要干净且分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。显微镜下进 行细胞计数后，立即将数据填到记录表格中。
6、如何计数呢？
如果使用规格为16格×25格的计数室，要 按对角方位，取左上、右上、左下、右下4个中 格(即100个小格)的酵母菌数。 如果使用规格为25格×16格的计数室，除 了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中 格(即80个小方格)的酵母菌数（五点取样法）。
出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即 可作为两个菌体计算。
表达和交流
1、向全班汇报本小组7天的数据，算 出每一天全班各组数据的平均值，根据平 均值重新画酵母菌种群数量的增长曲线。 将这个增长曲线与本小组的曲线进行比较， 分析其相似程度，并做出合理的解释。 2、根据各组平均数据画出的增长曲线 有没有什么总趋势？如果有，作出说明。 如果设计了无菌水的对照，也画出增长曲 线。
2、方格网的构成：
25×16
A D G
百度文库B E H
C F I
16×25
化
放大后的方格网计数室 方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格 为计数室，计数室通常有两种规格：一种是大方格内分 为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格 内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计 数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一 大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
回顾思考:
1、酵母菌的繁殖方式主要是: 出芽生殖 2、酵母菌的呼吸方式是: 兼性厌氧(可进行有氧呼吸和无氧呼吸) 3、酵母菌的培养条件要注意那些问题? 比如要用适宜的温度培养,调节好PH值, 溶氧量的控制等。
探究：培养液中酵母菌种群数量的变化
问题：培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？ 温度会影响酵母菌的生长吗？营养成分会影响酵母菌的生 长吗？