抗体筛选和鉴定 ppt课件
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免疫学概论第4章抗体PPT课件
免疫学概论第4章抗体ppt 课件
• 抗体的概述 • 抗体的结构 • 抗体的产生与类别 • 抗体的应用 • 总结与展望
01
抗体的概述
抗体的定义
抗体（Antibody）：指B淋巴细胞或记忆B细胞在抗原刺激下，经一系列活化、增殖、 分化后形成的浆细胞分泌出来的一类能与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。
免疫调节
抗体可调节机体免疫应答，用于治疗免疫相关疾病，如风湿性关 节炎、系统性红斑狼疮等。
被动免疫
将含有抗体的免疫血清或免疫球蛋白注入机体，使机体获得特异 性免疫力。
抗体在免疫学研究中的应用
01
02
03
抗原定位
通过抗体标记抗原，研究 抗原在细胞或组织中的定 位和分布。
免疫细胞功能研究
抗体可用来研究免疫细胞 的活化、分化、凋亡等过 程，有下产生的一种蛋白质，具有高度的特异性，能够与相 应的抗原结合，发挥免疫效应。
抗体的类型
IgG
IgM
IgA
IgE
免疫球蛋白G，是血清中含量最 高的抗体类型，也是唯一能够 通过胎盘的抗体类型。它具有 抗菌、抗病毒、抗毒素等作用， 是机体重要的防御机制。
免疫球蛋白M，是初次免疫应 答中最早产生的抗体类型，主 要存在于血液中。它具有抗菌、 抗病毒、抗毒素等作用，但效 价较低。
疾病的抗体药物，提高治疗效果和降低副作用。
03
免疫治疗和免疫调控
抗体在免疫治疗和免疫调控方面具有广阔的应用前景，未来将进一步探
索其在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病等领域的应用。
THANKS
感谢观看
合物，进而发挥免疫效应。
激活补体
抗体能够与抗原结合后激活补 体系统，通过补体的级联反应 ，发挥溶解和杀伤作用。
• 抗体的概述 • 抗体的结构 • 抗体的产生与类别 • 抗体的应用 • 总结与展望
01
抗体的概述
抗体的定义
抗体（Antibody）：指B淋巴细胞或记忆B细胞在抗原刺激下，经一系列活化、增殖、 分化后形成的浆细胞分泌出来的一类能与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。
免疫调节
抗体可调节机体免疫应答，用于治疗免疫相关疾病，如风湿性关 节炎、系统性红斑狼疮等。
被动免疫
将含有抗体的免疫血清或免疫球蛋白注入机体，使机体获得特异 性免疫力。
抗体在免疫学研究中的应用
01
02
03
抗原定位
通过抗体标记抗原，研究 抗原在细胞或组织中的定 位和分布。
免疫细胞功能研究
抗体可用来研究免疫细胞 的活化、分化、凋亡等过 程，有下产生的一种蛋白质，具有高度的特异性，能够与相 应的抗原结合，发挥免疫效应。
抗体的类型
IgG
IgM
IgA
IgE
免疫球蛋白G，是血清中含量最 高的抗体类型，也是唯一能够 通过胎盘的抗体类型。它具有 抗菌、抗病毒、抗毒素等作用， 是机体重要的防御机制。
免疫球蛋白M，是初次免疫应 答中最早产生的抗体类型，主 要存在于血液中。它具有抗菌、 抗病毒、抗毒素等作用，但效 价较低。
疾病的抗体药物，提高治疗效果和降低副作用。
03
免疫治疗和免疫调控
抗体在免疫治疗和免疫调控方面具有广阔的应用前景，未来将进一步探
索其在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病等领域的应用。
THANKS
感谢观看
合物，进而发挥免疫效应。
激活补体
抗体能够与抗原结合后激活补 体系统，通过补体的级联反应 ，发挥溶解和杀伤作用。
自身免疫病的相关抗体检测ppt课件
42
抗组织转谷氨酰胺转移酶抗体
组织型谷氨酰胺转移酶(fTG)广泛存在于多 种组织及细胞中，参与细胞增长、分化、受 体介导的胞吞作用、粘连、伸展及细胞的损 伤修复和凋亡，是乳糜泻患者主要的自身抗 原，为抗肌内膜抗体所识别。
乳糜泻与组织型谷氨酰胺转移酶IgG和 IgA抗体密切相关。
抗tTG抗体在检测乳糜泻患者中具有较 高的特异性和敏感性。
36
抗髓过氧化物酶抗体
是p—ANCA的主要靶抗原。
在特发性肾小球肾炎(坏死性新月体型肾小球肾炎)中 的阳性率为65％。
变应性肉芽肿性脉管炎阳性率60％，显微镜下多血 管炎45％，韦格纳肉芽肿性血管炎阳性率1 0％。
抗体的浓度与病情活动性相关，用于病情判断。
抗蛋白酶3抗体
蛋白酶3是c—ANCA的主要靶抗原，约占c—ANCA 的80％～90％。
4
（二）自身抗体的分类：
1 根据亚细胞定位
◆抗核抗体
◆抗胞浆抗体
◆抗胞膜抗体
◆抗细胞外可溶性分子抗体
2 根据有无器官/组织/细胞特异
◆非器官/组织/细胞特异自身抗体
◆器官/组织/细胞特异自身抗体
5
二、类风湿因子（Rheumatiod factor，RF）
类风关是临床上最常见的一种风湿性疾病，是以慢 性进行性关节病变为主的全身性自身免疫病，男女 发病率约为1：3。全世界患病率约1％，我国患病 率为0.3％～0.6％ 。 类风湿因子是变性IgG刺激机体产生的自身抗体,因 最先在类风湿性关节炎的血清中发现而命名，主要 为IgM型抗体，也有IgG、IgA、IgD、IgE型。
2
（二）自身免疫病的临床特征
l 患者以女性多见，发病率随年龄增长而增高，并 有遗传倾向；
抗组织转谷氨酰胺转移酶抗体
组织型谷氨酰胺转移酶(fTG)广泛存在于多 种组织及细胞中，参与细胞增长、分化、受 体介导的胞吞作用、粘连、伸展及细胞的损 伤修复和凋亡，是乳糜泻患者主要的自身抗 原，为抗肌内膜抗体所识别。
乳糜泻与组织型谷氨酰胺转移酶IgG和 IgA抗体密切相关。
抗tTG抗体在检测乳糜泻患者中具有较 高的特异性和敏感性。
36
抗髓过氧化物酶抗体
是p—ANCA的主要靶抗原。
在特发性肾小球肾炎(坏死性新月体型肾小球肾炎)中 的阳性率为65％。
变应性肉芽肿性脉管炎阳性率60％，显微镜下多血 管炎45％，韦格纳肉芽肿性血管炎阳性率1 0％。
抗体的浓度与病情活动性相关，用于病情判断。
抗蛋白酶3抗体
蛋白酶3是c—ANCA的主要靶抗原，约占c—ANCA 的80％～90％。
4
（二）自身抗体的分类：
1 根据亚细胞定位
◆抗核抗体
◆抗胞浆抗体
◆抗胞膜抗体
◆抗细胞外可溶性分子抗体
2 根据有无器官/组织/细胞特异
◆非器官/组织/细胞特异自身抗体
◆器官/组织/细胞特异自身抗体
5
二、类风湿因子（Rheumatiod factor，RF）
类风关是临床上最常见的一种风湿性疾病，是以慢 性进行性关节病变为主的全身性自身免疫病，男女 发病率约为1：3。全世界患病率约1％，我国患病 率为0.3％～0.6％ 。 类风湿因子是变性IgG刺激机体产生的自身抗体,因 最先在类风湿性关节炎的血清中发现而命名，主要 为IgM型抗体，也有IgG、IgA、IgD、IgE型。
2
（二）自身免疫病的临床特征
l 患者以女性多见，发病率随年龄增长而增高，并 有遗传倾向；
应用生物化学-抗体技术PPT课件
抗体技术的挑战
抗体生产成本高
01
由于抗体的大规模生产需要大量的细胞培养和纯化过程，因此
生产成本较高，限制了抗体的广泛应用。
抗体特异性问题
02
抗体的特异性是影响其应用的关键因素之一，如何提高抗体的
特异性是当前面临的重要挑战。
抗体稳定性不足
03
一些抗体在存储和运输过程中容易失去活性，影响其应用效果。
抗体技术的发展前景
生物制药
药物研发
抗体作为药物载体，可以用于药 物的定向输送，提高药物的疗效
和降低副作用。
免疫检测试剂
抗体可以用于制备免疫检测试剂， 如酶联免疫吸附试验（ELISA）、 免疫荧光等，用于检测生物体内
的物质。
单克隆抗体药物
利用杂交瘤技术制备的单克隆抗 体药物，具有高度特异性、低毒 性和长效性等特点，已广泛应用 于肿瘤、自身免疫性疾病等领域。
应用生物化学-抗体技术PPT 课件
• 引言 • 抗体的产生与种类 • 抗体技术的原理与流程 • 抗体技术的应用实例 • 抗体技术的挑战与前景 • 结论
01
引言
抗体的定义与特性
抗体
指免疫系统产生的一种蛋白质， 能够特异识别并结合抗原，发挥 免疫效应。
特性
高度特异性、结合力强、种类多 样。
抗体技术的历史与发展
历史
自19世纪末发现抗体以来，抗体技 术不断发展，经历了免疫学、单克隆 抗体技术、基因工程抗体等阶段。
发展
目前抗体技术已广泛应用于生物医药 、诊断、治疗等领域，为人类健康和 疾病治疗做出了巨大贡献。
抗体技术的应用领域
01
02
03
生物医药
用于药物研发、疾病诊断 和治疗，如肿瘤免疫治疗、 自身免疫性疾病治疗等。
《抗体制备技术》课件
解决方案
采用适当的免疫佐剂和免疫方式，如 使用特定的抗原组合、多次免疫和改 变免疫途径等，以提高免疫反应的效 果。
高亲和力抗体的制备挑战与解决方案
挑战
高亲和力抗体的制备需要经过多轮筛 选和优化，过程繁琐且效率低下。
解决方案
采用基因工程和细胞工程技术，通过 改造B淋巴细胞或使用噬菌体展示技 术等手段，快速筛选出高亲和力抗体 ，提高制备效率。
缺点是技术难度较高，需要专业的基因工程知识和技术。
噬菌体展示技术
01
噬菌体展示技术是一种 利用噬菌体展示抗体库 来筛选单克隆抗体的技
术。
02
该方法的优点是操作简 便、筛选效率高，可用 于制备治疗和诊断用的
单克隆抗体。
03
缺点是抗体库的构建需 要大量时间和精力，且 筛选到的抗体亲和力可
能较低。
蛋白质转导技术
数。
荧光共振能量转移（FRET）
03
通过荧光标记的抗体和抗原结合后荧光信号的变化，测定亲和
力。
抗体特异性鉴定
抗原竞争试验
免疫荧光染色
通过加入不同浓度的竞争性抗原，观 察抗体与抗原结合的变化，确定抗体 的特异性。
利用抗体与抗原的特异性结合，对细 胞或组织进行荧光染色，观察抗原的 表达和分布，确定抗体的特异性。
噬菌体展示技术
利用噬菌体展示技术筛选出能与目标抗原结合的抗体片段。
转基因抗体技术
通过基因工程技术将抗体的基因导入到宿主细胞中，表达并筛选 出具有所需特性的抗体。
抗体亲和力测定
酶联免疫吸附试验（ELISA）
01
通过检测抗体与抗原结合后的信号变化，计算出抗体的亲和力
常数。
表面等离子共振（SPR）
02
采用适当的免疫佐剂和免疫方式，如 使用特定的抗原组合、多次免疫和改 变免疫途径等，以提高免疫反应的效 果。
高亲和力抗体的制备挑战与解决方案
挑战
高亲和力抗体的制备需要经过多轮筛 选和优化，过程繁琐且效率低下。
解决方案
采用基因工程和细胞工程技术，通过 改造B淋巴细胞或使用噬菌体展示技 术等手段，快速筛选出高亲和力抗体 ，提高制备效率。
缺点是技术难度较高，需要专业的基因工程知识和技术。
噬菌体展示技术
01
噬菌体展示技术是一种 利用噬菌体展示抗体库 来筛选单克隆抗体的技
术。
02
该方法的优点是操作简 便、筛选效率高，可用 于制备治疗和诊断用的
单克隆抗体。
03
缺点是抗体库的构建需 要大量时间和精力，且 筛选到的抗体亲和力可
能较低。
蛋白质转导技术
数。
荧光共振能量转移（FRET）
03
通过荧光标记的抗体和抗原结合后荧光信号的变化，测定亲和
力。
抗体特异性鉴定
抗原竞争试验
免疫荧光染色
通过加入不同浓度的竞争性抗原，观 察抗体与抗原结合的变化，确定抗体 的特异性。
利用抗体与抗原的特异性结合，对细 胞或组织进行荧光染色，观察抗原的 表达和分布，确定抗体的特异性。
噬菌体展示技术
利用噬菌体展示技术筛选出能与目标抗原结合的抗体片段。
转基因抗体技术
通过基因工程技术将抗体的基因导入到宿主细胞中，表达并筛选 出具有所需特性的抗体。
抗体亲和力测定
酶联免疫吸附试验（ELISA）
01
通过检测抗体与抗原结合后的信号变化，计算出抗体的亲和力
常数。
表面等离子共振（SPR）
02
自身抗体检测及应用PPT课件
细胞核 细胞浆
均质型 核糖体型 斑点型 线粒体型 核仁型 高尔基体型 着丝点型 溶酶体型 周边型 颗粒型 核点型(dots)
细胞骨架
细胞周期
肌蛋白型
中心体型
波形纤维蛋白型 纺缍体型
细胞角蛋白型 纺缍丝型
原肌球蛋白型 中间体型
纽带蛋白型 结蛋白(桥粒)型
PCNA型
-
斑17点型（nRNP/Sm）
斑点型（SSA/SSB）
7 100 5~10 10
-
46 原发性胆汁性肝硬化(PBC)
抗原类型
线粒体2型（M2） 线粒体4型（M4） 线粒体8型（M8） 线粒体9型（M9） 核点 板层素
阳性率（%）
95 55 55 35~85 30 2
-
47
问题
怀疑SLE，怎么办？
-
48
常规检测程序
+ 免疫球蛋白、
补体等检测
ANA筛选
31
（pANCA）
主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和ห้องสมุดไป่ตู้罗恩病）
胞- 浆型抗中性粒细胞胞浆抗体
32
(cANCA)
主要见于Wegener’s肉芽肿及微小多动脉炎
-
ANCA临床应用
蛋33白酶3（PR3）与Wegener’s肉芽肿（WG）密切相关。
仅cANCA诊断WG的特异性大于90%，联合PR3
可超过95%， 活动期几乎100%阳性。
高滴度的抗U1-nRNP为MCTD 的特征。抗Sm抗体对SLE具有高度特 异性。
抗SSA最常出现于SS及新生儿红 斑狼疮 （100%）。抗SSB抗体几乎仅 见于女性，可出现于SS和SLE。
-
均质型
18
抗体筛选试验PPT课件
酶法等当中的至少一种，第一步盐水法必须要离心判断结果。 • 3、患者红细胞、供者红细胞必须至少用生理盐水洗涤一遍以上。
第37页/共66页
配血中出现问题的解决方法
• 1、调查患者的年龄、性别、种族、疾病诊断、用药史、家族史、输血史、输血 反应史、妊娠史、生育史等（非常重要，对于后续的配血给血方案有很重要的意 义）。
谱细胞 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 自身
IS
- -- - - - -- - - -
I AT
2+ - 2+ 3+S 2+ - - - - 1+S -
• 结果判断：IgG型抗-E抗体
第31页/共66页
四、交叉配血的作用
• 1、确认受血者和供血者ABO血型的相合性。 • 2、可检测出受血者血清中不规则抗体，此抗体可能在抗体筛选试验中，由于筛
抗体筛选试验 （试管法）
• 抗体筛选试验患者两滴血清+筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、三洗的自身细胞各一滴 立即离心看结果。
• 结果分析： • 阳性：IgM型抗体、冷抗体、蛋白凝集、自身抗体等情况。 • 阴性：需要进一步鉴定
第26页/共66页
盐水介质中阳性如何处理
1、IgM型抗体：患者血清+谱细胞进行特异性 检查，一般以抗-M、抗-Lea、抗-Leb、抗-P1、 早期形成的抗-D、E等抗体。
选试剂红细胞缺乏相应的抗原而漏检。
第32页/共66页
• 交叉配血试验是保障临床输血安全、及时、有效的重要手段，其方法主要有盐水 法、凝聚胺法或抗人球蛋白法等，使用安全、有效的方法进行交叉配血试验，分 析确定交叉配血不合的原因，并采取相应的处理方法对预防输血反应发生和解决 临床疑难输血有重要意义。交叉配血试验，也称为配合性试验。要使患者与献血 员血液间没有相对应的抗原、抗体存在 。
第37页/共66页
配血中出现问题的解决方法
• 1、调查患者的年龄、性别、种族、疾病诊断、用药史、家族史、输血史、输血 反应史、妊娠史、生育史等（非常重要，对于后续的配血给血方案有很重要的意 义）。
谱细胞 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 自身
IS
- -- - - - -- - - -
I AT
2+ - 2+ 3+S 2+ - - - - 1+S -
• 结果判断：IgG型抗-E抗体
第31页/共66页
四、交叉配血的作用
• 1、确认受血者和供血者ABO血型的相合性。 • 2、可检测出受血者血清中不规则抗体，此抗体可能在抗体筛选试验中，由于筛
抗体筛选试验 （试管法）
• 抗体筛选试验患者两滴血清+筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、三洗的自身细胞各一滴 立即离心看结果。
• 结果分析： • 阳性：IgM型抗体、冷抗体、蛋白凝集、自身抗体等情况。 • 阴性：需要进一步鉴定
第26页/共66页
盐水介质中阳性如何处理
1、IgM型抗体：患者血清+谱细胞进行特异性 检查，一般以抗-M、抗-Lea、抗-Leb、抗-P1、 早期形成的抗-D、E等抗体。
选试剂红细胞缺乏相应的抗原而漏检。
第32页/共66页
• 交叉配血试验是保障临床输血安全、及时、有效的重要手段，其方法主要有盐水 法、凝聚胺法或抗人球蛋白法等，使用安全、有效的方法进行交叉配血试验，分 析确定交叉配血不合的原因，并采取相应的处理方法对预防输血反应发生和解决 临床疑难输血有重要意义。交叉配血试验，也称为配合性试验。要使患者与献血 员血液间没有相对应的抗原、抗体存在 。
ELISA检测抗体ppt课件
抗体水平（ELISA后续步骤）
※重点实验※(写实验报告）
ppt课件.
2
成绩
◦ 课堂表现及出勤情况，占5分 ◦ 实验报告，占10分 ◦ 期末考试，占10分
ppt课件.
3
复习第一次课操作
SRBC冻融稀释（得到比例适当的抗原，非完整的红细胞）
↓
每孔加包被液（碳酸盐缓冲液，含抗原）100μl, 37℃ 1h （包被）
4 加完后统一放入37度温箱1h(大于1h)。
加入酶（HRP）标记二抗
ppt课件.
9
加入底物-酶促反应-反应终止
1 弃液 2 用PBS洗板7次，200μl/每孔，每次一分钟以上，
水平轻微晃动，切勿串孔、溢出。每次洗完用滤纸 拍板，拍干。
3 于8个ELISA孔中分别加入底物100μl/每孔。 4 加完后，室温避光反应10min。 5 反应10min后，于8个ELISA孔中分别加入终止
该法敏感性强，非特异着色浅，背景清晰，因此 把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大提 高ELISA的敏感度。
酶免疫测定技术
ppt课件.
20
是把放射性核素测定和抗原、抗体间的免疫化学 反应两种方法结合起来所形成的一种超微量物质 的测定方法。将抗原抗体反应的特异性与同位素 测定技术的敏感性相结合的一项新技术，具有特 异性强、目前为止灵敏度最高、准确性和精密度 好等优点。而且操作简便、易于标准化，其灵敏 度较高，可达10-9-10-12g水平,是其他分析方法所 无法比拟的。
ppt课件.
7
ELISA步骤 包被
↓ 封闭
↓ 加入待测样本
↓ 加入酶标二抗
↓ 加入底物
↓ 加入终止液，终止反应
ppt课件.
自身抗体的实验室检测及临床意义PPT课件
自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架 上。
临床意义：对系统性红斑狼疮（SLE） 特异性高。抗体滴度与疾病活动性存在 相关性，因此抗体滴度的检测可为监控 治疗提供有用的依据。
2021
18
抗RNP/Sm抗体
荧光模式：
Hep-2片：细胞 核粗颗粒， 核仁阴性。
肝组织切片： 同上。
荧光法不能区 分抗RNP和 抗体Sm。
2021
43
抗肝肾微粒体抗体（LKM）
有三种荧光模式：
LKM-1：肝细胞胞浆 明显荧光，呈细 颗粒到均质状， 肾脏近近端肾小 管有荧光。
LKM-2：门静脉周围 的肝组织荧光比 其他部位强，肾 脏近近端肾小管 有荧光。
LKM-3：肝和肾均为 阴性，灵长类睾 丸间质细胞荧光 明显。
2021
44
抗肝肾微粒体抗体（LKM）
肝组织片：分布于 细胞核的10~20 个颗粒，荧光弱， 易被忽略。
2021
33
抗着丝点抗体
自身抗原：着丝粒中的三种不同的蛋白 质：着丝点蛋白A、B、C，主要抗原为 着丝点蛋白B。
临床意义：对进行性系统性硬化症亚型 （CREST综合征）有诊断意义。阳性率 80~95%。还可见于PBC、SS等。
2021
13.5, 28, 29KD 22, 32,70KD 52KD 45, 47KD 68-70KD 55KD 15, 16.5, 38KD
2021
14
间接免疫荧光法
细胞核阳性 核仁阳性 细胞浆阳性 分裂期细胞阳性
2021
15
细胞核阳性
细胞核均质型（Homogeneous）：抗 dsDNA、组蛋白抗体、核小体抗体
2021
31
分裂期细胞阳性
临床意义：对系统性红斑狼疮（SLE） 特异性高。抗体滴度与疾病活动性存在 相关性，因此抗体滴度的检测可为监控 治疗提供有用的依据。
2021
18
抗RNP/Sm抗体
荧光模式：
Hep-2片：细胞 核粗颗粒， 核仁阴性。
肝组织切片： 同上。
荧光法不能区 分抗RNP和 抗体Sm。
2021
43
抗肝肾微粒体抗体（LKM）
有三种荧光模式：
LKM-1：肝细胞胞浆 明显荧光，呈细 颗粒到均质状， 肾脏近近端肾小 管有荧光。
LKM-2：门静脉周围 的肝组织荧光比 其他部位强，肾 脏近近端肾小管 有荧光。
LKM-3：肝和肾均为 阴性，灵长类睾 丸间质细胞荧光 明显。
2021
44
抗肝肾微粒体抗体（LKM）
肝组织片：分布于 细胞核的10~20 个颗粒，荧光弱， 易被忽略。
2021
33
抗着丝点抗体
自身抗原：着丝粒中的三种不同的蛋白 质：着丝点蛋白A、B、C，主要抗原为 着丝点蛋白B。
临床意义：对进行性系统性硬化症亚型 （CREST综合征）有诊断意义。阳性率 80~95%。还可见于PBC、SS等。
2021
13.5, 28, 29KD 22, 32,70KD 52KD 45, 47KD 68-70KD 55KD 15, 16.5, 38KD
2021
14
间接免疫荧光法
细胞核阳性 核仁阳性 细胞浆阳性 分裂期细胞阳性
2021
15
细胞核阳性
细胞核均质型（Homogeneous）：抗 dsDNA、组蛋白抗体、核小体抗体
2021
31
分裂期细胞阳性
不规则抗体筛选PPT课件
2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临 床医师重视。 （理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、 不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl), 保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或几天 后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要 考虑是否有慢性溶血反应存在。） 3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来 选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情 的延误。
YOU
SUCCESS
2019/4/8
Polybrene法
原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶 液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表面的 负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞 的非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的。当红细 胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红 细胞上相应抗原结合后，在聚凝胺的作用下发 生凝集，凝聚和凝集外表上不能区分，加入枸 橼酸钠重悬液后，枸橼酸根的负电荷中和了聚 凝胺上的正电荷，使红细胞凝聚现象消失，而 真正的凝集不消失。(见图).+源自自身在注意事项
必须进行间接抗人球蛋白试验。 必须同时作自身抗体的检查，即患者血清与自身红细胞的反 应，以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。 观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、转 速、。 观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性，引起 事故。 若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时，都必须进 一步进行抗体特异性的鉴定.(以判断抗体的临床意义并给予 配合型血液输注，以预防溶血性输血反应的发生及预测新生 儿溶血病等疾病) 建议：作抗体筛选试验的时候最好先做抗人球法
自身抗体的检测及应用ppt(共49张PPT)
系统性红斑狼疮 系统性硬化症 干燥综合征 类风湿关节炎
抗体滴度的高低可判断疾病的活动性
▪ 抗双链DNA 自身免疫性疾病的特点：
（抗环瓜氨酸肽抗体） 特异性较高 （1）类风湿因子（RF）
SLE
动性及严重性呈正相关。
RF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提
特异性指标阳性，人无相应症状
▪ 健康人 --- 一过性阳性（感染、焦虑、疲劳等），2月后
复查可能转阴或者下降。
▪ 貌似健康人--- 检测—自身抗体（微观）
影像---组织
表现---器官（最晚）
▪ 患者
--- 但不是自身免疫性疾病，如传染病，观察滴
度变化，一般会下降
▪ 自身免疫性疾病---但不是指标对应的疾病
临床表现阳性，实验室检查阴性
实验室检查阳性，临床表现阴性
自身免疫病自身抗体非常复杂
SLE患者中存在100多种自身抗体
Semin Arthritis Rheum. 2004 Oct;34(2):501-37.
自身免疫病自身抗体非常复杂
APS患者中存在30种自身抗体
J Autoimmun, 2008. 30(1-2): p. 74-83.
▪ 抗rRNP 狼疮脑病
自身抗体的意义
▪ 自身免疫性疾病的诊断； ▪ 疾病活动性的判断； ▪ 疗效的观察及预后； ▪ 指导临床用药等； ▪ 进行不同疾病的鉴别诊断。
自身抗体常用检测方法
自身抗体的检测方法：
（1）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：该法检 测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原 的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由 于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检 测就必须多种单独的抗原，因此该法在临床免 疫实验室的应用受到一定限制 。
如何看抗体检测结果及检测应用PPT课件
商品群
➢ 随机抽样检测（如5周、15周龄猪）或设立非免疫的哨兵 猪（非免疫猪）:20-30头/批作为哨兵猪（监测PRVgE和 PRVgB抗体,评估但不涉及淘汰）
以人为本 以正兴邦
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以人为本 以正兴邦
以人为本 以正兴邦
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以人为本 以正兴邦
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以人为本 以正兴邦
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应用
以人为本 以正兴邦
8
应用
以人为本 以正兴邦
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三、伪狂犬
伪狂犬病毒
gB片段
gE片段
疫苗病毒片段
以人为本 以正兴邦
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猪群PRV感染状况的普查
以人为本 以正兴邦
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伪狂犬疫苗的免疫评估—针对阴性场
商品猪群 ➢ 免疫疫苗后4-6周，随机采样20-30份 ➢ 要求：gE抗体检测全部为阴性； ➢ gB抗体检测阳性率≥95%
以人为本 以正兴邦
2
变异系数： Coefficient of Variation (CV)
变异系数计算的是平均个体的变化，以平均滴度的背离的百分数来表 示
➢ 公式如下
标准偏差（STDEV）
CV=
平均阻断率
X 100%
➢ CV≤40%,显示了群内猪只有一个均衡的、相似反应
➢ CV≥60%,显示了群内猪只滴度反应变化高于正常估计值
以人为本 以正兴邦
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伪狂犬的评级标准：
➢ 伪狂犬gE抗体全阴性，则为阴性场
➢ 伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体转阴，则为阳性稳 定场
➢ 伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体阳性率达到20%以 上，则为阳性不稳定稳定场
以人为本 以正兴邦
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应用—净化
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1．患者接受大量的血液（超过其自身的总血量） 需要供给最新鲜的血液。
2．患者本身血容量小，但又需接受大量的血液， 如新生儿换血或任何不到5岁的患者输血，都 应当给予尽量新鲜的血液。
3．超过5岁的患者为了纠正贫血要求输血，可以 给予浓缩红细胞。接受定期输血的患者，如镰 状细胞性贫血、地中海贫血等患者，需选择不 超过7天的相对新鲜的血液，这样做会使输血 间隔期延长一些。
常用的配血方法
4．患者当前检出或既往曾检出某种血型特异性 抗体，则需选择该抗体对应抗原阴性的血液配 血，例如：患者检出抗E，则需选择ABO血型 与患者同型或相容且Rh血型E抗原阴性之血液 配血。 又例如：患者既往曾检出有抗Jka抗体，尽 管随着时间的延长该抗体水平下降，当前已不 能检出该抗体，但为患者选择血液时仍需选择 ABO血型与患者同型或相容且Kidd血型Jka抗原 阴性之血液配血，只有这样才能避免因回忆反 应产生的抗Jka导致迟发性溶血性输血反应。
输血前实验室检查与质量控制
广州血液中心临床输血研究所 罗广平
输血前检查的目的
选择用于患者的血液或血液制品，使 输入的成分能在受者体内有效存活，无不 良反应。要求输入的红细胞在受者体内必 须不凝集和不溶血，输入的血浆不导致患 者自身红细胞显著破坏。
输血前的血型血清学试验包括:
ABO血型正反定型 Rh（D）定型 抗体筛检和鉴定 交叉配合试验
一、 病人的病史和标本等的检查核对及处理
2．标本的要求: 标本必须有正确的标签。如果标本标签上的内 容与血液申请单上的内容不一致或对病人身份 确认有疑问的话，必须重抽一份新的血液标本， 任何人不得对错误的标签进行修改。
所用血标本能代表患者当前的免疫学状态。输 血前检查的各项试验必须使用3天内采集的血 标本，反复输血的患者更应注意抽取新的标本 作配血试验，避免因回忆反应而产生的抗体漏 检。
（3）有无工作上的差错事故（如认错病人， 拿错血袋等）。
交叉配血的作胞有正常存活率。 （2）防止病人的免疫作用。 （3）从病人的血清中检出所有红细胞抗体。 （4）防止由于针对献血者抗原而发生的记忆性抗体
应答引起的迟延性溶血性反应。病人以前就有此
交叉配血应在37℃孵育，除作盐水介质法 配血外，还应选用酶法、抗球蛋白试验法、 Polybrene 或其改良法等能有效检出不完 全抗体的配血方法。
交叉配血的主要作用
（1）大多数情况下能证实献血者的红细胞与 病人的ABO血型是配合的。
（2）能检查出存在于病人血清中的针对献血 者红细胞的大多数抗体。
包括病人的姓名，年龄，床号、住院号及唯一 性标识码，性别，种族，临床诊断，输血史， 药物史，妊娠史。 凡资料填写不全的输血申请单要退回临床科室 补充，不得迁就，也不能通过电话修改。
一、 病人的病史和标本等的检查核对及处理
1．病史资料和信息 如果病人以前有过试验，则要注意核查病人以前
检查的血清学试验记录及以往输血反应的记录等。 把以前的ABO、Rh血型和抗体检测的解释同现在 的解释及任何异常情况的解答进行比较。 如既往曾经检出某种血型抗体，即使目前该抗体 检测阴性，也应选择无相关抗原的血液输注。
输血后所有的标本均应妥善保存于2~8℃冰箱 中，至少一周。
二、ABO和Rh(D)定型
各血型系中，以A、B抗原性最强，Rh（D） 抗原次之，当受者接受了所缺少的A、B抗 原后，几乎每个人都 会产生特异性同种 抗体。
大约有2/3的Rh(D)阴性的人，接受Rh(D) 阳性血液后可产生抗D抗体。
经 一次 妊娠Rh(+)的胎儿后，大约7%的 Rh(-)妇女在6个月内血清学可测到抗D。
输血前检查的主要程序
患者的病史和标本等的检查核对及处理 ABO和Rh(D)定型 抗体筛选和鉴定 交叉配血试验 已配合血液的标签与发出
一、 病人的病史和标本等的检查核对及处理
1．病史资料和信息 输血前检查强调输血科(血库)工作人员应仔细
阅读输血申请单 。 检查前应尽可能了解，核对病人的有关资料，
三、抗体筛选和鉴定
常使的试验方法有盐水介质试验法、低离 子强度介质法（LISS）、酶技术、抗球蛋 白试验、Polybrene及其改良法、微柱凝胶 技术等等，可按抗体的血清学行为和试验 的具体条件选择，但必须做抗球蛋白试验 确证。
四、交叉配血试验
交叉配血试验也称配合性试验，实际上是 检查不配合性，使病人，献血者血液之间 没有可测到的不相配合的抗原，抗体成份。
三、抗体筛选和鉴定
目的是发现有临床意义的不规则抗体，献血者血 清最好也作不规则抗体筛选，如发现有不规则抗 体就将它排除，不可用于输血，特别是大量输血 时，为了避免输入血液相互间的反应，对献血者 进行抗体筛选具有重大价值。
三、抗体筛选和鉴定
抗体筛选试验意义：欧美等发达国家的血库已将 抗体筛选试验列为输血前检验的常规项目，在交 叉配血试验前完成或同时进行。当抗体筛选试验 为阴性，且以往的记录未检出有临床意义的抗体 时，可用盐水法快速配血，确认ABO血型相容即 可输血。如抗体筛选试验阳性，应进一步作抗体 鉴定，根据所鉴定出的抗体特异性事先选择缺乏 对应抗原的献血者血液配血，以缩短寻找合适血 源及配血时间。
种抗体但未能查出这种免疫作用。
患者用血选择
用血申请单一定要注明输血的理由， 以便血库技术人员能选择最合适的血液进行 配合性试验，患者输注的血液必须认真地加 以选择，以适应每个不同患者的要求（原则 是ABO、Rh(D)同型或相容性输血）。按照 库存血“先入先出”的管理原则，一般来说， 首先用较陈的血，但有以下情况属于例外：
配血试验的内容包括：
（1）病人血清对供者红细胞 检测对供者红细胞起 反应的抗体，一般称为“主侧”配血。
（2）病人红细胞对供者血清 检测对受者红细胞起 反应的抗体，一般称为“次侧”配血。
（3）病人血清对病人红细胞 称为“自身对照” 试验。目的是显示或排除自身抗体，直接抗球蛋 白试验阳性及红细胞串钱状假阳性的存在。