微生物培养基的配制和灭菌资料
微生物培养基配制及灭菌时间控制
微生物培养基配制及灭菌时间控制微生物培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，微生物培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
微生物培养基配制过程1.配制溶液向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分，对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化.并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。
2.调节pH值用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。
3.过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤.用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
4.分装已过滤的培养基应进行分装.如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中.如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。
分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定.一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3～4毫升(1/4～1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。
每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。
5.加棉塞分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。
堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染.棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告一、实验目的1、掌握培养基的配制方法和原理。
2、学习并掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法和操作要点。
3、了解灭菌在微生物实验中的重要性。
二、实验原理（一）培养基的配制培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
不同的微生物对营养物质的需求不同，因此需要根据培养的微生物种类和实验目的来选择合适的培养基配方。
培养基通常包含碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等成分。
在配制培养基时，需要按照一定的比例准确称量各种成分，并将其溶解在水中，调节 pH 值至合适范围，最后定容至所需体积。
（二）灭菌灭菌是指杀灭或去除物体上所有微生物（包括芽孢和孢子）的方法。
在微生物实验中，为了防止杂菌污染，必须对培养基、实验器具等进行灭菌处理。
高压蒸汽灭菌是一种常用的灭菌方法，其原理是利用高温高压使微生物的蛋白质和核酸变性失活，从而达到灭菌的目的。
一般在 121℃、1034 kPa 的条件下灭菌 15 20 分钟，可以杀灭包括芽孢在内的所有微生物。
三、实验材料和仪器1、材料牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、NaOH 溶液、HCl 溶液、蒸馏水等。
2、仪器电子天平、药匙、玻璃棒、烧杯、量筒、pH 试纸、三角瓶、移液管、高压蒸汽灭菌锅、培养皿等。
四、实验步骤（一）培养基的配制1、计算根据培养基配方，计算所需各种成分的用量。
例如，配制 1000 mL 牛肉膏蛋白胨培养基，需要牛肉膏 3 g、蛋白胨 10 g、氯化钠 5 g、琼脂 15 20 g。
2、称量用电子天平准确称量各种成分。
先称取琼脂，放入三角瓶中，然后分别称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入另一个烧杯中。
3、溶解在烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使各种成分溶解。
将溶解后的溶液倒入三角瓶中，用少量蒸馏水冲洗烧杯，冲洗液也倒入三角瓶中。
4、调节 pH 值用 pH 试纸测定培养基的初始 pH 值，然后用 1 mol/L 的 NaOH 溶液或 1 mol/L 的 HCl 溶液调节 pH 值至 72 74。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：细菌培养是微生物学实验中常见的一项技术，而培养基的配制和灭菌则是细菌培养的基础。
本实验旨在探究培养基的配制方法和灭菌技术对细菌培养的影响，为后续的微生物实验打下坚实的基础。
一、培养基的配制培养基是细菌生长和繁殖所需的营养物质，其配制需要考虑细菌的营养需求和生长环境。
本实验选取了常用的液体培养基和固体培养基进行配制。
1. 液体培养基的配制液体培养基的配制相对简单，主要包括基础成分和营养物质的添加。
首先，按照配方中的要求称取所需的基础成分，如蛋白胨、肉汤等。
然后，将基础成分溶解在适量的蒸馏水中，加热至沸腾，搅拌均匀。
待溶液冷却至室温后，再添加适量的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等。
最后，用蒸馏水将溶液稀释至所需的体积，调节pH值至适宜范围。
2. 固体培养基的配制固体培养基的配制相对复杂，需要考虑到培养基的凝固和固化。
首先，按照液体培养基的配制方法，将基础成分和营养物质溶解在蒸馏水中。
然后，将溶液加热至沸腾，搅拌均匀。
接着，将溶液倒入试管或培养皿中，待溶液冷却至40-50℃时，添加适量的琼脂或琼脂糖，充分搅拌均匀。
最后，将试管或培养皿密封，放置于室温下，待培养基凝固后，进行灭菌处理。
二、灭菌实验灭菌是为了避免培养基受到外界细菌污染，保证实验的准确性和可靠性。
常用的灭菌方法包括高温灭菌、滤过灭菌和化学灭菌。
1. 高温灭菌高温灭菌是最常见的灭菌方法之一，通过加热培养基使其中的细菌被杀灭。
将配制好的培养基装入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高压锅或高温灭菌器中。
加热至121℃，保持15-20分钟，使培养基充分灭菌。
待培养基冷却后，即可进行细菌接种。
2. 滤过灭菌滤过灭菌是一种物理灭菌方法，通过滤器将培养基中的细菌过滤掉。
将配制好的培养基装入滤器中，选择合适的孔径和材质的滤膜。
然后，将滤器连接到真空泵或压力泵上，启动泵进行过滤。
待培养基完全通过滤器后，即可得到无菌的培养基。
实验一 微生物培养基的制备与灭菌知识讲解
实验一微生物培养基的制备与灭菌（8课时）一、目的要求1、学习配制微生物培养基的一般方法和步骤。
2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。
二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。
由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异，但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。
三、实验材料1、药品：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、1mol/L的NaOH和1mol/L HCl溶液。
2、仪器及玻璃器皿：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿和玻璃棒等。
3、其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳和注射器等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净，然后用自来水冲净，置于烘箱中烘干后备用。
（二）牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、培养基配制（1）称量：按培养基配方计算出各成分的用量，然后用电子天平进行准确称量后倒入一烧杯中。
注意：称量药品时，一定要用称量纸而不能用滤纸。
称药品用的药匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。
（2）溶解：用量筒称量所需体积的水（根据实验需要可用自来水或蒸馏水），倒入烧杯中，用玻璃棒搅动溶解即可。
（3）调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH，可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl 溶液进行调节。
调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。
边加边搅拌，并不时用PH试纸测试，直至达到所需pH为止。
注意：pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
2、制备液体培养基（1）用量筒准确量取20ml培养基，倒入100ml三角瓶中，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、引言在微生物学研究中，培养基的制备与灭菌是非常重要的步骤。
培养基是供养微生物生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了消除其中的有害微生物，保证培养基的纯净度。
本实验旨在探讨培养基的制备与灭菌的方法与步骤，以及其对微生物培养的影响。
二、培养基的制备2.1 选择培养基成分培养基的成分根据所需培养的微生物种类和目的而定，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基之前，需要明确所需微生物的营养需求，选择合适的成分。
2.2 配制培养基根据所选的成分和配方，按照一定比例将各种成分溶解在适当的溶剂中，常见的溶剂包括蒸馏水和生理盐水。
注意溶解顺序和温度，保证各种成分充分溶解。
2.3 调节pH值微生物对pH值的要求各不相同，因此在制备培养基时需要调节pH值。
使用酸碱溶液逐滴加入培养基中，同时使用pH试纸或pH计检测pH值，直到达到所需的范围。
2.4 灭菌前的处理在灭菌之前，需要对培养基进行一些处理，包括过滤、加热和冷却等。
过滤可以去除其中的固体杂质和大颗粒微生物。
加热可以杀灭其中的有害微生物，常用的方法包括高温灭菌和压力灭菌。
冷却后的培养基可以用于微生物的培养。
三、灭菌实验3.1 高温灭菌高温灭菌是常用的灭菌方法之一，其原理是利用高温杀灭微生物。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高温灭菌器中。
设置合适的温度和时间，一般为121℃，15-20分钟。
高温灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.2 压力灭菌压力灭菌是一种利用高温和高压杀灭微生物的方法。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入压力灭菌器中。
设置合适的温度和压力，一般为121℃，15-20分钟。
压力灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.3 灭菌效果验证灭菌后的培养基需要进行灭菌效果验证，以确保其中没有活菌存在。
常用的方法包括接种试验和平板计数法。
接种试验是将灭菌后的培养基接种到无菌平板上，观察是否有菌落生长。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告培养基的制备与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基是不可或缺的工具。
培养基的制备和灭菌是保证实验结果准确性和可重复性的重要步骤。
本实验旨在探究培养基的制备方法和灭菌技术的应用。
一、培养基的制备1.1 选择合适的培养基成分培养基的成分根据微生物的需求而定。
常见的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基时，需根据所研究的微生物特性选择合适的成分。
1.2 制备培养基的步骤制备培养基的步骤主要包括称量、溶解、调pH、加热消毒和装瓶。
首先，按照配方称取所需成分，并逐一溶解于适量的蒸馏水中。
随后，根据微生物的需求，调节溶液的pH值。
最后，将溶液装入试管或培养皿中，并加热消毒。
二、灭菌技术的应用2.1 灭菌的目的灭菌是指将培养基、培养器具和实验室环境中的微生物杀灭或去除的过程。
灭菌的目的是为了避免外来微生物的污染，确保实验结果的准确性。
2.2 常用的灭菌方法常用的灭菌方法包括高温灭菌、化学灭菌和紫外线灭菌。
高温灭菌是指将培养基或器具在高温条件下进行加热消毒，常用的方法有烘箱灭菌和压力灭菌。
化学灭菌则是通过使用化学物质如酒精、乙醛等来杀灭微生物。
紫外线灭菌则是利用紫外线的辐射杀灭微生物。
2.3 实验中的灭菌操作在实验中，常用的灭菌操作包括培养基灭菌、器具灭菌和工作台灭菌。
培养基灭菌是将制备好的培养基加热消毒，以杀灭其中的微生物。
器具灭菌则是通过高温、化学物质或紫外线对实验器具进行消毒。
工作台灭菌则是通过紫外线辐射对实验台面进行灭菌处理。
结论：培养基的制备和灭菌是微生物学研究中的重要环节。
正确的培养基制备和灭菌操作可以确保实验结果的准确性和可重复性。
通过本实验，我们学习了培养基的制备方法和常用的灭菌技术，为今后的微生物实验打下了基础。
参考文献：[1] 陈晓玲, 赵莉, 邱晓红, 等. 基础微生物学实验教程[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 2017.[2] 郭燕妮, 张晓红. 微生物学实验指导[M]. 北京: 高等教育出版社, 2019.。
微生物培养基的配制与灭菌
思考题
（1）在固态培养基配制中，琼脂和蛋白胨的主要作 用是什么？ （2）按照原理划分，灭菌有几种方法？
实验步骤
④用双层纱布滤掉渣子，所得滤液为LB培养基。 ⑤将LB培养基分装到10mL试管中，每个试管中放入 3mL培养基，用棉塞封口。 ⑥用牛皮纸包好进行灭菌，待冷却后取出。
实验步骤
（2）LB培养基灭菌的操作方法 ①打开灭菌锅盖，向锅内加入适量的水。 ②将待灭菌物品放入锅内，然后加盖旋紧螺栓、密 闭蒸汽锅，切勿漏气。 ③打开放气阀，加热至水沸腾，冷空气排尽后，再 关紧放气阀。
实验原理
机械灭菌法
高温
灭菌的方法
物理灭菌法 紫外线
超声波…
化学灭菌法 其中高压蒸汽灭菌法是一种用途最广、效率最 高的灭菌方法，适用于培养基、玻璃器具及医疗工 具等的灭菌。
实验步骤
（1）LB培养基的制备方法 ①按LB培养基配方，分别称取各成分放于烧杯中。 ②加一定量水于烧杯中搅拌，待完全溶解后，补足 所需水。 ③用滴管逐滴加入10% NaOH至烧杯中，pH调到7.0。
实验原理
可采用查氏培养基，培养霉菌或酵母菌常采用 米曲汁或麦芽汁培养基。 （2）注意各种营养物的浓度与配比；其中以C：N比 和C：N：P比最重要。 （3）根据微生物的需求，加适量的缓冲剂，使培养 基的pH控制在一定的范围内。
实验原理
（4）尽量利用价廉且易于获得的原料作为培养基 成分。
在接种微生物之前，必须事先杀死培养基和一 切用具中的微生物，然后以无菌操作将所需要的菌 种接入，才能获得纯培养。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告实验名称：培养基的配制与灭菌实验
实验目的：了解培养基的配制方法和灭菌技术，掌握实验操作
技能，培养实验室操作能力。
实验原理：
1. 培养基配制
培养基的配制是在一定比例下将各种营养成分混合组成的，包
括碳水化合物、胺基酸、氮源、矿物质等，以提供生长和繁殖细
菌所需的条件。
2. 灭菌
细菌培养需要具备无菌环境，因此必须对培养基进行灭菌处理。
实验中常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌。
实验器材和试剂：
1. 水浴锅
2. 培养瓶和试管
3. 称量硬度高的玻璃容器
4. 试剂：琼脂、提取物、蔗糖、酵母提取物、胆汁、NaCl，
实验步骤：
1. 培养基配制
按照比例将各种营养成分混合，加入含有一定含量的蔗糖和酵母提取物的琼脂，再加入一定量的胆汁和NaCl，配制成固体培养基。
将琼脂和提取物等放入庞大的试管中；配合无水熔点管等研磨出来的溶液进行试管的分离悬胶操作，所得的琼脂可以冷藏保存。
2. 灭菌
将培养基装入培养瓶中，放入水浴锅中加热，使水温达到100℃左右，进行高压蒸汽灭菌。
灭菌后将培养基放置在无菌环境中，
待其温度降至40℃左右，即可使用。
实验结果和分析：
实验结果表明，配制的培养基已可以暂存和使用，经过高温蒸
汽灭菌可以达到无菌效果。
实验结论：
本实验灭菌技术和培养基配制方法是现代微生物学实验检测的
基础，熟练掌握这些操作技能可以提高实验室操作能力，为实验
的顺利开展提供有力保障。
微生物试剂配制和灭菌标准
微生物试剂的配制和灭菌是在微生物实验室中非常重要的步骤，以确保实验的准确性和可重复性。
以下是一般的微生物试剂配制和灭菌标准：微生物试剂的配制：1. 培养基配制：-使用高质量的培养基成分，例如肉汤、酵母提取物、葡萄糖等。
-通过称量和混合来准确配制培养基，确保成分的准确性和一致性。
-使用蒸馏水或去离子水作为配制培养基的溶剂。
2. 试剂和缓冲液的配制：-使用高纯度的试剂，确保配制过程的精确性。
-采用标准的实验室操作程序，使用适当的实验室设备，如搅拌器、pH计等。
3. 灭菌步骤：-在配制之前，确保工作区域、仪器和培养器具已经经过适当的清洁和消毒。
-配制过程中，使用无菌技术，避免微生物污染。
微生物试剂的灭菌：1. 高压蒸气灭菌（常用于培养基、培养器具等）：-使用高压蒸气灭菌器（例如，高压蒸汽灭菌器或自动压力蒸气灭菌器）。
-遵循制造商的使用指南和操作规程。
-通常，121摄氏度、15分钟是一个常见的高压蒸气灭菌条件。
2. 紫外线灭菌（常用于表面消毒）：-将试剂瓶、培养皿等物品暴露在紫外线灯下，以进行表面消毒。
-通常需要较长时间的照射，同时确保灭菌面暴露在紫外线下。
3. 过滤灭菌（用于灭菌液体培养基等）：-使用合适的微孔过滤器，选择合适的孔径，将液体通过过滤器。
-这种方法适用于温度敏感的试剂。
4. 酒精喷雾或浸泡（常用于实验台面等表面的消毒）：-使用酒精（通常是70%的乙醇）进行喷雾或浸泡，以对实验台面等表面进行消毒。
在进行微生物试验时，遵循实验室安全操作规程和制定的消毒程序非常重要。
此外，对于每种试剂和培养基，应该查阅制造商提供的具体使用说明书，以确保正确的配制和灭菌。
微生物实验一、培养基的配制与灭菌
培养基的配制与灭菌一、实验目的1. 了解一般培养基配制原理，掌握培养基常规配制程序。
2. 了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项，掌握实验室各种灭菌技术及玻璃器皿的包装方法。
二、基本原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料，主要含有微生物生长繁殖所必需的碳源、氮源、无机盐、生长因子及水分，并要求具有适宜的pH值、合适的渗透压等。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料各有差异，但一般配制程序却大致相同。
三、实验材料1. 器皿及材料天平、称量纸、钥匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、橡胶塞、试管架、三角瓶、移液管、洗耳球、培养皿、玻璃棒、烧杯、剪刀、酒精灯、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、电炉、灭菌锅等。
2. 药品试剂蛋白胨、牛肉膏、NaCl、琼脂、水、1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液。
四、实验流程称药品→溶解→调pH值→加琼脂融化（补水，固体培养基用）→过滤（可省略）→分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板→无菌检查。
五、操作步骤1. 称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
2. 溶解用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。
待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。
（如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。
）3. 调节pH用1mol/L NaOH或1mol/L HC1溶液调至所需pH。
注意pH值不要调过头，以免回调，否则会影响培养基内各离子浓度。
4. 溶化琼脂琼脂加入后，置电炉上一边搅拌一边加热，直至琼脂完全溶化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。
注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
5. 过滤分装有时需用滤纸或纱布趁热过滤，以利于观察结果。
微生物学实验三 培养基的配制及灭菌
实验三培养基的配制及灭菌培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质。
主要用于微生物的分离、培养、鉴定以及菌种保藏等方面。
培养基一般应含有微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。
此外，为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基的pH。
一般细菌、放线菌适于生长在中性或微碱性的环境中，而酵母菌和霉菌则适于生长在偏酸性的环境中。
因此，在配制培养基时，须将培养基调节在一定pH的范围内。
迄今为止，培养基的种类极其繁多。
按培养基的成分，可将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
天然培养基是指利用动物、植物、微生物或其它天然有机成分配制而成的培养基。
其优点是营养丰富、价格便易；缺点是成分不能准确确定且不稳定。
实验室常用的牛肉汁或麦芽汁培养基即为天然培养基。
合成培养基是指完全利用已知种类和成分的化学试剂配制而成的培养基。
优点是各成分均为已知且含量稳定，缺点是价格较贵。
实验室常用的高氏一号培养基即为合成培养基。
半合成培养基是指由天然有机成分和已知化学试剂混合组成的培养基。
实验室常用的马铃薯葡萄糖培养基即为半合成培养基。
按培养基的物理状态，可将培养基分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。
固体培养基是指在液体培养基中加入一定量的凝固剂（常加1.5％～2％的琼脂）经融化冷凝而成；半固体培养基是指在液体培养基中加入0.2％～1％左右的琼脂，经融化冷凝而成；液体培养基是指培养基中不加凝固剂琼脂，培养基呈液体状态。
按培养基的用途，可将培养基分为加富培养基、选择培养基和鉴别培养基。
加富培养基是指在培养基中加入某些特殊营养物质，促使某种持殊性能的微生物迅速生长，有利从混合菌群中分离出所需种类微生物。
例如为了分离能够利用石蜡的微生物，常在培养基中加入石蜡作为碳源。
选择培养基是指在培养基中加入某些微生物生长抑制剂，抑制那些不需要的微生物的生长，以达到从混杂微生物菌群的环境中分离到所需的微生物。
实验一微生物培养基的配制灭菌及纯培养
今天接种的菌种：
枯草杆菌
芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3
微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。
菌落外表粗糙不透明，污白色或微黄色，在液
体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。广泛分布
在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故
名。
大肠杆菌 需氧及兼性厌氧。G－短杆菌，周鞭毛，
有动力，周身有菌毛。
变形杆菌
为革兰氏染色阴性、无芽胞、无荚膜、周身鞭
毛、运动活泼、两端钝圆的小杆菌。兼性厌氧。有些
种在普通固体培养基上菌落呈迁徙生长。
在自然界中存在极广，水、泥土、阴沟及各种
腐败的动、植物中最多，也存在于安康人和动物的肠
道中。它们是条件致病菌，在特殊情况下对人致病，
如食物中毒、尿路感染、夏季腹泻或其他混合感染。
培养基的介绍
培养基
是指由人工配制的、适合微生物生长 繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
营养物质的浓度要适宜 营养物质之间的配比要适宜
培养基的pH值、渗透压、 水活度和氧化复原电势等 物理化学条件要适宜。
通常培养条件：
细菌： pH 7.0~8.0 放线菌：pH 7.5~8.5 酵母菌： pH 3.8~6.0 霉菌：pH 4.0~5.8 藻类： pH 6.0~7.0 原生动物： pH 6.0~8.0
培养基的灭菌
高压蒸气灭菌 一般培养基: 121.3℃, 15-30 min 含糖培养基: 112.6 ℃, 15-30 min
器皿的灭菌： 干热空气： 160℃， 2 小时
无菌室的消毒： 紫外光 化学药物熏蒸〔苯酚；高锰酸
钾+甲醛〕
二、 微生物的纯培养 〔微生物的培养特征〕
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基的配制和灭菌是非常重要的实验步骤。
培养基是供养菌落生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了杀灭培养基中可能存在的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
本实验旨在探究不同培养基的配制方法以及灭菌的效果，并提供一种简单可行的实验方案。
一、培养基的配制1. 培养基的种类在微生物学实验中，常用的培养基有固体培养基和液体培养基两种。
固体培养基主要用于菌落计数、分离纯种菌落以及观察微生物生长形态等实验，而液体培养基则适用于大规模培养、生物化学分析等实验。
2. 培养基的配方培养基的配方根据不同微生物的需求而定，常见的培养基配方包括营养物、水和琼脂。
营养物可以是有机物如蛋白胨、肉汤，也可以是无机盐如硝酸钠、磷酸氢二钾等。
水的选择要注意纯净度，最好使用经过蒸馏或纯化的水。
琼脂是一种提供凝胶状基质的物质，常用于制备固体培养基。
3. 培养基的制备步骤（1）称取所需的营养物和琼脂，按照一定比例加入适量的水中。
（2）将容器密封，并在高压蒸汽灭菌器中进行高温高压灭菌，以杀灭培养基中的有害微生物。
（3）取出灭菌后的培养基，待其冷却至适宜生长温度后，即可使用。
二、灭菌实验1. 灭菌的重要性灭菌是为了消除培养基中的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
如果培养基未经灭菌处理，其中可能存在的细菌、真菌等微生物会与待测微生物相互干扰，导致实验结果的偏差。
2. 灭菌方法（1）高温高压灭菌：将培养基密封于容器中，放入高压蒸汽灭菌器中进行高温高压处理。
高温高压可以有效杀灭细菌、真菌等微生物。
（2）化学灭菌：使用化学消毒剂如酒精、过氧化氢等进行灭菌处理。
这种方法适用于一些耐热菌种，但需要注意化学消毒剂的浓度和作用时间，以避免对待测微生物产生不良影响。
3. 灭菌效果的验证为了验证灭菌效果，可以将灭菌后的培养基分别接种于无菌平板上，并进行培养观察。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的。
本实验旨在掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续微生物培养提供基础支持。
二、实验原理。
1.培养基的制备。
培养基是微生物生长繁殖的基础，其主要成分包括碳源、氮源、矿物盐和生长因子。
按照微生物的需求，可以选择适当的培养基配方进行制备。
2.灭菌技术。
灭菌是指将培养基、培养器皿和其他实验用具中的微生物全部杀灭，以保证实验过程的纯净和结果的可靠性。
常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌、紫外线灭菌和化学灭菌等。
三、实验材料。
1.所需培养基原料，葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂等；2.灭菌设备，高压蒸汽灭菌器、紫外线灭菌仪等；3.实验用具，培养皿、试管、移液器等。
四、实验步骤。
1.培养基的制备。
（1）称取适量葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物等原料，按照配方比例加入蒸馏水中；（2）搅拌均匀，加热至溶解；（3）加入适量琼脂，再次搅拌均匀；（4）分装至培养皿或试管中，待凝固后即可使用。
2.灭菌实验。
（1）将制备好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中，进行高压蒸汽灭菌；（2）将培养器皿等实验用具放入紫外线灭菌仪中，进行紫外线灭菌；（3）取出灭菌后的培养基和实验用具，进行后续的微生物培养实验。
五、实验结果与分析。
经过培养基的制备和灭菌实验后，观察到培养基无明显异物和霉菌生长，实验用具无细菌污染。
说明培养基制备和灭菌实验取得了成功。
六、实验总结。
通过本次实验，我们掌握了培养基的制备方法和灭菌技术，为后续微生物培养实验奠定了基础。
同时，也提醒大家在实验过程中要注意操作规范，保证实验结果的可靠性。
七、实验注意事项。
1.培养基制备过程中要注意原料的准确称取和比例的精确控制；2.灭菌实验中要严格按照灭菌方法和时间进行操作，确保实验用具的无菌状态；3.实验结束后要及时清理实验台面和设备，保持实验环境的整洁。
八、参考文献。
1. 《微生物实验技术手册》。
2. 《生物实验技术指南》。
以上就是本次培养基的制备与灭菌实验报告的全部内容，希望对大家有所帮助。
微生物培养基的配置与灭菌实验报告
微生物培养基的配置与灭菌实验报告好嘞，今天咱们来聊聊微生物培养基的配置和灭菌实验。
这可是个既有趣又重要的话题，咱们的日常生活中其实离不开这些小家伙，微生物在我们身边随时随地都在忙碌着呢。
你知道吗？微生物就像是自然界的“小工人”，它们能帮助分解有机物，促进土壤肥沃，甚至在我们的消化系统里默默奉献，真是少不了的好帮手。
咱们得搞清楚什么是培养基。
哎呀，简单来说，培养基就是给微生物提供食物和环境的“餐桌”。
就像我们吃饭需要饭菜一样，微生物在实验室里也需要专门的培养基来成长。
想象一下，咱们在厨房里准备晚餐，得有米、有菜、还有调料才能做出美味的菜肴。
微生物也一样，它们需要各种营养成分，比如糖、氨基酸和矿物质。
培养基的配方千变万化，各种各样，简直就像厨师的秘制菜谱，谁的手艺好，微生物就长得快。
说到培养基的配置，首先得准备好所有的原料，像是买菜一样，得有计划。
我们常用的有营养琼脂、LB培养基等等。
把它们混合在一起，就像调配饮料，得按比例来。
把干粉加到水里，搅拌均匀，直到它们彻底溶解。
这个过程其实蛮有趣的，看到那些粉末在水里渐渐消失，心里总会有种成就感。
然后，把这个混合物倒进试管或者培养皿里，接着就要加热了，嘿，这时候的关键环节来啦。
就要进行灭菌了。
为什么要灭菌呢？因为咱们可不想在实验里“招来”一些不速之客，别让那些坏微生物跟我们争食。
一般来说，咱们用高温灭菌，最常见的就是高压蒸汽灭菌，听起来就很专业对吧？简单来说，就是把培养基放进一个像锅一样的设备里，给它加热、加压，这样细菌和其他微生物就会被消灭得干干净净。
想想看，微生物们在高温高压的环境下，一定是心里发慌，忙着逃命。
经过灭菌的培养基就可以冷却，等温度适中后，可以用无菌操作将其倒入预先准备好的培养皿中。
这个过程可不能马虎哦，手一定要保持干净，避免二次污染。
别小看这一步，有时候一不小心就会把外面的细菌带进去，这样一来，实验的结果可就全毁了。
就像是做饭的时候不小心把沙子洒进去，谁还敢吃啊。
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微生物培养基的配制和灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
目的要求
了解培养基的配制原理和方法，掌握其 配制过程。
了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和 加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
熟悉分离、培养微生物前的有关准备工 作及操作方法。
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖； 可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、
实 验 程 序5
（培养基的配制方法和步骤）
实验程序6
（培养基的配制方法和步骤）
实 验 程 序7
（三种培养基的配方及配制）
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（用于分离和培养细
菌，是一种天然培养基）配方如下：
牛肉膏
3g
蛋白胨
5g
氯化钠
3g
琼脂
20g
自来水
1000mL
pH
7.2~7.4
灭菌
1.05kg/cm2，25~30min
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒 精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液， 它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂，详见表6—4。
实验程序18
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
思考题
固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问 题？ 培养基中加琼脂的作用是什么？ 干热灭菌、高压蒸汽灭菌和间歇灭菌的场合有 何不同？ 如何检查培养基灭菌是否彻底？
实验程序
培养基的配制 分离培养微生物常用器皿的准备 培养基和玻璃器材的灭菌方法
实 验 程 序1
（培养基的配制）
培养基的种类 培养基的配制方法和步骤 三种培养基的配方及配制 无菌水的制备
实 验 程 序2
（培养基的种类）
据组成成分可分为:
1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制 而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
实验程序16
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
实验程序17
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h， 就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂， 可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使 一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气 及表面杀菌。
实 验 程 序13
实 验 程 序14
实验程序15
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每 次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将 物品（指培养基）放在370C恒温条件下培养过夜，这 样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体， 以便下次蒸煮时杀灭。 过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般 可用细菌过滤器进行除菌。（教师示范）
FeSO4•7H2O等。
高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线 杀菌灯。
其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试 纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠 的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、 吸管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
实 验 程 序4
（培养基的配制方法和步骤）
称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 分装：注意不要污染棉塞。 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无 菌生长，方可使用。
30min
实验程序10
（三种培养基的配方及配制）
无菌水的制备 无菌水为下一次微生物分离
实验中所需要的材料。 100mL三角烧瓶（装有玻璃珠），装自来水 45.0mL，试管中装9.0mL自来水，塞上棉塞， 包扎、灭菌备用。三角烧瓶和试管须预先塞好 棉塞，并经干热灭菌。
实验程序11
（分离培养微生物常用器皿的准备）
实 验 程 序9
（三种培养基的配方及配制）
淀粉琼脂培养基（高氏一号Gause´1），用于分离 和培养放线菌，是一种合成培养基。配方如下：
可溶性淀粉
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl FeSO4• 7H2O 琼脂 自来水
灭菌： 1.05kg/cm2
20.0g 1.0g 0.5g 0.5g 0.5g 0.01g 20g 1000mL
从培养基的物理状可分为
1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状 态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成 的半固体状培养基。
实 验 程 序3
（培养基的种类）
常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
清洗一些玻璃仪器：如三角烧瓶、试管、培养皿、吸管等。
棉塞的制作
包装培养皿和吸管等。
实验程序12
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器
加压蒸汽灭菌法 其步骤如下： 1.灭菌器内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。 2.接通电源，进行加热。 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关 闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开 排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 4.当压力达15bl/in2（即1.05kg/cm2）时，此时灭菌器内的温 度为1210C，维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、 氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。 5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀， 然后打开灭菌器盖，取出物品。
实 验 程 序8
（三种培养基的配方及配制）
马铃薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）琼脂培养基
（用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基），
其配方如下：
去皮马铃薯（或鲜豆芽） 200g
蔗糖（或葡萄糖）
20g
自来水
1000mL
琼脂
20g
pH
自然
灭菌：（含蔗糖）1.05kg/cm2 20min
（含葡萄糖）0.1kg/cm2 30min