血红蛋白电泳实验报告

实验汇报

实验名称：血红蛋白电泳

项目名称：两种碱性血红蛋白样品处理方法的电泳结果实验时间：2018年9月17日

实验室：龙泉驿区妇幼保健院检验科

实验人员：杨松

报告单位：成都温伦科技有限公司

一、实验目的：

1、掌握生理盐水处理血红蛋白样品的方法

2、掌握四氯化碳处理血红蛋白样品的方法

3、掌握电泳仪实验的操作

4、分析两种碱性血红蛋白样品处理方法电泳结果的不同

二、实验原理：

血红蛋白电泳就是利用在电场的作用下, 由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小, 形状等性质的差异, 使带电分子产生不同的迁移速度, 从而对样品进行分离, 鉴定或提纯的技术，在临床检验中, 主要用于分离各类蛋白分子。

三、实验方法：

琼脂糖电泳法

四、实验器械：

样品：10个EDTA抗凝管抽取的病人全血样品

试剂：0.9%生理盐水500ml，四氯化碳500ml，界面液250ml，美国Helena Spife3000血红蛋白电泳检测试剂盒

器材：移液枪，一次性移液枪头若干，EDTA抗凝管10个，玻璃试管10个设备：美国Helena Spife3000 全自动电泳仪

五、实验步骤：

1、取得医院检验科EDTA抗凝管抽取的病人全血样品10个，编号为1，2,3......10。

2、将1-10号十个个样品分别用移液枪取200ul到玻璃试管中，编号为

1-1,2-1,3-1,.....10-1。

3、将1-10号10个样品进行生理盐水前处理，处理方法如下：

-用0.9%生理盐水混匀，3500 rpm离心10分钟.

-吸走弃去清液。

-以上步骤连续进行三次。

-完全吸走弃去上清液。

-20ul制作后的样本+80ul溶血素，混匀。

-取溶血后的样本17ul加入样品孔。

4、将1-1到10-1号10个样品进行四氯化碳前处理，处理方法如下：

-用0.9%生理盐水溶液5000μL与样品混合。

-3000rpm离心5分钟。

-弃去上清液，只留下红细胞。

-加入200ul 蒸馏水溶解红细胞。

-加入300ul 的四氯化碳，混合均匀，3000rpm离心5分钟。

-取上面萃取后的血红蛋白液17ul 加入样品孔。

5、记录下这20个样品的样品孔编号，将样品孔放入样品板，摆放进电泳槽中，放上加样刀锋，添加界面液，放上琼脂板，掀开琼脂板保护膜，吸取多余界

面液，放上碳棒，关上电泳槽的盖子，启动设备开始电泳。

6、大约30分钟后，电泳完成，取出碳棒放好，铲掉琼脂板上的盐桥，取出琼脂板，放入染色槽中进行染色脱色干燥。

7、大约30分钟后，染色脱色干燥完成，取出琼脂板，放入扫描仪中进行扫描，用PT软件进行分析数据，记录数据。

六、实验数据：

七、实验结果：

采用前处理方法二（四氯化碳）处理的血红蛋白，相对于前处理方法一（生理盐水）处理的血红蛋白，电泳结果HbA2偏高，HbA1偏低，电泳条带更加聚集。

八、参考文献：

电泳技术以及其临床应用 ISBN 7-5381-4777-2

实验室质量管理 CNAS-CL27

琼脂糖电泳的发展和研究 ISBN：978703058338