盐酸头孢吡肟中高分子聚合物含量测定方法学研究

盐酸头孢吡肟中高分子聚合物含量测定方法学研究陈宁;蔡逸筠【摘要】目的采用高效液相色谱法测定盐酸头孢吡肟中高分子聚合物,并进行方法学研究.方法采用分子排阻色谱法,色谱柱:Sephadex G-10柱(13.0 mm ×400 mm,TIANHE)；流动相:流动相A为pH7.0的0.01mol/L磷酸盐缓冲液[0.01 mol/L Na2HPO4溶液-0.01 mol/L NaH2PO4溶液(体积比61:39)],流动相B为水；流速:1.0 mL/min；检测波长:254nm；进样量:100 μL；以头孢噻肟作为对照品加校正因子外标法定量[Mr(头孢吡肟)/Mr(头孢噻肟)=1.055].结果头孢吡肟在0.88～51.70 mg/mL范围内与盐酸头孢吡肟高分子聚合物峰面积呈良好的线性关系(r=0.9997)；头孢噻肟在58.55～136.611μg/mL范围内与头孢噻肟缔合物的峰面积呈良好的线性关系(r =0.9998).检测限为2.7×10-3 μg,定量限为5.4×10-3 μg.结论该方法能较好地分离盐酸头孢吡肟及其高分子聚合物,可用于盐酸头孢吡肟中高分子聚合物的检查.%Objective To develop and validate the method of determining high molecular polymers in cefepime hydrochloride. Methods Molecular exclusion chromatography was performed with Sephadex G-10( 13.0 mm x 400 mm.TIANHE) gel column. The mobile phase A was 0. 01 mol/L phosphate buffer (pH7. 0) and the mobile phase B was water with a flow rate of 1. 0 mL/min. The detection wavelength was 254 nm and the injection volume was 100 μL. The polymers was assayed by external standard method with a correct factor (the molecular weight of cefepime/the molecular weight of cefotaxime is 1. 055 ). Results The calibration curve of high molecular polymers in cefepime hydrochloride was linear within the range of 0. 88 - 51. 70 mg/mL( r = 0. 999 7). And thecalibration curve of associations in cefotaxime was linear within the range of 58.55 -136.61 μg /mL ( r = 0.999 8). The limit of detection was 2.7×10-3 μg and the limit of quantitation was 5.4 x 10-3 μg. Conclusion This method can be used to separate the polymers from cefepime hydrochloride and control the quality of cefepime hydrochloride and its preparations.【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2011(027)006【总页数】4页(P613-616)【关键词】盐酸头孢吡肟;高分子聚合物;分子排阻色谱法;高效液相色谱法【作者】陈宁;蔡逸筠【作者单位】深圳九新药业有限公司,广东深圳 518049;深圳九新药业有限公司,广东深圳 518049【正文语种】中文【中图分类】R927.2头孢吡肟为β-内酰胺类广谱抗菌药物，对革兰阳性和阴性菌均有作用，其作用机制是抑制细菌细胞壁的合成。

它是临床上常用，同时也是较易发生不良反应的药物之一。

在临床上最常见的不良反应是速发型过敏反应，经研究证实引发β-内酰胺抗生素速发型过敏反应的过敏原并不是β-内酰胺抗生素本身，而是其中的高分子聚合物[1-2]，故控制产品中高分子聚合物杂质的含量，对减少此类抗生素的临床过敏反应有重要意义。

2010年版《中华人民共和国药典》二部“盐酸头孢吡肟”项下无高分子聚合物检查项，故本文参考2010年版《中国药典》所载的分子排阻色谱法[3]附录38 ，建立了符合药品检验要求的盐酸头孢吡肟中高分子聚合物的测定方法，并采用该方法对3批盐酸头孢吡肟进行了检验，为盐酸头孢吡肟质量控制提供了参考。

1 仪器与试药1.1 仪器LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)；AB265-S电子分析天平(梅特勒-托利多)；S20K pH计(梅特勒-托利多)。

1.2 试药盐酸头孢吡肟原料(自制，批号：SY091201，质量分数：85.39%，水分：3.9%；批号：SY091202，质量分数：85.44%，水分：3.8%；批号：SY091203，质量分数：85.56%，水分：4.0%)。

头孢噻肟对照品(中国药品生物制品检定所，批号：130483-200904，质量分数：90.6%)；注射用盐酸头孢吡肟(商品名马斯平，中美上海施贵宝制药有限公司，批号：1010782，规格：1.0 g/支)；蓝色葡聚糖2000(中国药品生物制品检定所，批号：296120，分析纯) ；色谱用水为注射用水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 系统适用性试验溶液①取蓝色葡聚糖2000 40 mg，精密称定，加水溶解并定量稀释制成0.4 mg/mL的蓝色葡聚糖2000溶液。

②取盐酸头孢吡肟约0.2 g，置10 mL量瓶中，加0.4 mg/mL蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻度，即得。

2.1.2 对照品溶液取头孢噻肟对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释，制成每1 mL含0.1 mg的溶液。

2.1.3 供试品溶液取本品约0.2 g，精密称定，置10 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 色谱条件色谱柱：Sephadex G-10柱(13.0 mm×400 mm，TIANHE)；流动相A为pH7.0的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液，流动相B为水；流速：1.0 mL/min；检测波长：254 nm；进样量：100 μL。

2.3 系统适用性试验精密吸取“2.1.1”项下系统适用性试验溶液①100 μL，分别以流动相A、B为流动相，注入液相色谱仪；精密吸取“2.1.1”项下系统适用性试验溶液②100 μL，以流动相A为流动相，立即注入液相色谱仪；精密吸取“2.1.2”项下对照品溶液100 μL，以流动相B为流动相，立即注入色谱仪。

在2种流动相系统中，理论塔板数按蓝色葡聚糖2000峰计算均不低于500，拖尾因子均小于2.0，蓝色葡聚糖2000峰的保留时间比值在0.93～1.07之间；对照品溶液主峰与系统适用性试验溶液②中高分子聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均在0.93～1.07之间。

系统适用性试验溶液②中高分子聚合物的峰高与单体和高分子聚合物之间的谷高比大于1.5。

均符合规定。

系统适用性色谱图见图1。

1.蓝色葡聚糖2000；2.高分子聚合物；3.头孢噻肟；4.蓝色葡聚糖2000与高分子聚合物。

A.系统适用性试验溶液①(在流动相A中)； B.系统适用性试验溶液①(在流动相B中)； C.供试品溶液(在流动相A中)； D.对照品溶液(在流动相B中)；E.系统适用性试验溶液②(在流动相A 中)。

图1 盐酸头孢吡肟HPLC色谱图Figure 1 HPLC chromatograms2.4 缔合物的线性试验分别精密称取头孢噻肟对照品适量，分别加水制备成头孢噻肟质量浓度分别为58.55、78.06、97.58、117.09、136.61 μg /mL的溶液，以流动相B为流动相，各取100 μL注入液相色谱仪，以头孢噻肟的质量浓度(ρ)为横坐标，头孢噻肟缔合物的峰面积(A)为纵坐标，求得回归方程为：A=2.0721×105ρ-3.5182×105(r=0.999 8)。

以流动相B为流动相时，头孢噻肟在58.55～136.61μg/mL范围内与头孢噻肟缔合物的峰面积呈良好的线性关系。

2.5 缔合物的精密度试验取“2.1.2”项下溶液，以流动相B为流动相，进样100 μL，连续进样5次。

结果缔合物峰面积的RSD为0.12%,说明精密度良好。

2.6 F值的重复性试验取“2.1.2”项下对照品溶液，以流动相B为流动相，进样量为100 μL，依法测定，平行操作6份。

对照品质量浓度(mg/mL)与其峰面积比值的RSD为0.99%，说明重复性良好。

2.7 检测限及定量限测定精密称取头孢噻肟对照品适量，加水溶解并逐级稀释，进样量为100 μL，记录头孢噻肟峰并计算其信噪比。

当对照品质量浓度为2.7×10-2 μg/mL时，头孢噻肟的信噪比约等于3；当对照品质量浓度为5.4×10-3 μg/mL时，头孢噻肟的信噪比约等于10。

故头孢噻肟的检测限为2.7×10-3 μg，定量下限为5.4×10-3 μg。

2.8 高分子聚合物的线性试验精密称取盐酸头孢吡肟原料(批号：SY091201，质量分数：85.39%)适量，分别加水制备成头孢吡肟质量浓度分别为0.88、8.60、17.38、34.87、51.70 mg/mL的溶液，以流动相A为流动相，各取100 μL注入液相色谱仪，以头孢吡肟原料的质量浓度(ρ)为横坐标，头孢吡肟高分子聚合物的峰面积(A)为纵坐标，求得回归方程为：A=3.9×105ρ-2.0×106(r=0.999 7)。

以流动相A为流动相时，头孢吡肟在0.88～51.70 mg/mL范围内与盐酸头孢吡肟高分子聚合物峰面积呈良好的线性关系。

2.9 高分子聚合物的稳定性试验取盐酸头孢吡肟原料(批号：SY091201)约0.2 g，精密称定，置10 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

在室温下放置0、1.5、3 h，分别精密吸取100μL注入液相色谱仪，按“2.2”项下条件进行测定。