血凝原理基础

合集下载
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

125mg/dl
OD2
62mg/dl
PT
OD2
OD x [FIB]
PT
OD1
OD1
时间
0
62
125
250
浓度
mg/dl[FIB]
Instrumentation Laboratory
FIB的检测方法

Clauss法FIB的基本原理
Intrinsic
Extrinsic
Common
浓缩凝血酶
纤维蛋白原
反应曲线

典型的曲线像一个大的
S
有一个初始的基线,一个上升阶段和一个终 点 (平台期)

Instrumentation Laboratory
反应曲线
吸光度变化 平台期; 所有的纤维蛋白原均 已转化为纤维蛋白 纤维蛋白原正在转化为 纤维蛋白 时间
初期; 凝血因子激活期
Instrumentation Laboratory
Instrumentation Laboratory
发色底物法(如:抗凝血酶试验)
标本与肝素(外源性)一同孵育。 过量的FXa 加入。 过量的FXa水解加入的底物。 pNA产生。
AT + Heparin [AT*Heparin] + FXa (excess) Chromogenic substrate
0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 20 40 60 80 100 120 140 Antithrombin %
Instrumentation Laboratory
免疫比浊法,D-二聚体检测
Instrumentation Laboratory
免疫学百度文库法
D-Dimer Curve
Instrumentation Laboratory
光学检测法
凝固反应
测量浊度的变化 它并不是一种由于颜色变化引起的吸收值的变 化(区别于发色底物法) 为了避免干扰(胆红素,血红蛋白),通常选 择高波长进行检测

Instrumentation Laboratory
胆红素,血红蛋白和乳糜在检测时吸收峰位置
乳糜 血红蛋白
胆红素
Other
Other

PT衍生纤维蛋白原(PT based FIB )

Clauss法纤维蛋白原(Clauss FIB)
Instrumentation Laboratory
FIB的检测方法

PT based FIB的基本原理
– 基于PT反应曲线光学差值与FIB浓度的线性关系
OD
250mg/dl
OD
PT
OD3 OD3
Thrombin XIIIa XIIIa
Thrombin activates FXIII
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
3.通过铰链形成稳定的纤维蛋白
XIIIa
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
3.通过铰链形成稳定的纤维蛋白
Instrumentation Laboratory
血凝检测原理
Instrumentation Laboratory
仪器检测原理
• 凝固法(凝块形成) • 发色底物法 (吸光度变化) • 免疫比浊法 (乳胶粘合)
Instrumentation Laboratory
仪器检测项目
凝固法 PT,APTT,TT,FIB(PT-Based & FIBClauss), Factors II, V, VII, X, VIII, IX, XI, XII, Protein C, Protein S, APC-R, LAC,PCX,HPX 发色底物法 Anti-thrombin,Heparin(普通&低分子), Plasminogen, Plasmin Inhibitor, 免疫比浊法 D-Dimer, vWF(活性及含量), Free Protein S,VIII含量,HS-CRP
Instrumentation Laboratory
发色底物法
Antithrombin: Neat plasma 100%, diluted at 50 % and 25%
Instrumentation Laboratory
发色底物法
AT Linearity
0.7 0.6
A 405 nm-490 nm

Instrumentation Laboratory
光学法检测
持续检测光密度变化 (透射法或散射法) 凝固时间由数学运算法则决定 (域值, 第一演 算法,第二演算法等)

Instrumentation Laboratory
仪器的运算法则决定反应时间
最经典的运算法则:
阈值,正好能产生特定效应的界限(反应浊度的
ACL
波长
Instrumentation Laboratory
凝固法检测史
Instrumentation Laboratory
手工法检测
反应在试管内发生(37° C水) 凝块形成,操作人员肉眼可见 操作人员记录时间

Instrumentation Laboratory
手工法检测
Instrumentation Laboratory
运算法则: 一阶导数法
一阶导数
应用于以下情况:

Example: Recombiplastin; 凝固曲线上升很快, 凝固曲线的形状清晰, 凝固时间较长 (与阈值法 或二阶导数法比较) 一阶导数的曲线总是正的 (or zero)

Instrumentation Laboratory
运算法则: 二阶导数法
一阶导数法
It is established that the maximum speed of the reaction represents the clot point
Time 凝固点
Instrumentation Laboratory
运算法则: 一阶导数法
一阶导数的真实表现
Instrumentation Laboratory
凝固法
660 散射比浊 405 吸光率
880 透射比浊 405 吸光率
671 透射比浊 405 吸光率
发色底物法
乳胶 凝集试验
405
405
405 or 671
Electra = 550 for clotting and 405 for chromogenic
Instrumentation Laboratory
时间:S 20 15 10 1 0 55
2 5
纤维蛋白
[FIB]∝凝固时间
浓度:mg/dL
1
Instrumentation Laboratory
FIB方法使用建议

首选Clauss方法—NCCLS推荐 如考虑测试成本,可选用PT based FIB做常规 筛查,超出200-400mg/dL范围样品及OAT病 人样品用Clauss法复查
血凝常规检测
血浆或稀释血浆 (37°C孵育) + 试剂 (预加热 37°C) -> 纤维凝块形成 -> 纤维凝块形成所需时间
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白凝块检测
所有的凝固反应均为纤维凝块形成过程的检测 如: PT, APTT, Fibrinogen Clauss, 因子检测, 等
正在研发的实验项目:· · · · · ·
Instrumentation Laboratory
From ACL 100 to ACL 10000 to ACL Elite
Photo-optic method: IL instrumentation
ACL Futura ACL Advance ACL Top
XIIIa
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
3.通过铰链形成稳定的纤维蛋白
XIIIa
FXIIIa stabilises fibrin by introducing covalent bonds
Instrumentation Laboratory
ACL系列凝血仪纤维蛋白原检测
运算法则: 阈值法
阈值法
应用于下列情况:

Example: 纤维蛋白原Clauss; delta信号弱, 当 FIB浓度高时,曲线上升快,而浓度低时曲线 上升缓慢。在某些标本中逆向检测的阈值用于 曲线的末端是非常平坦的。
Instrumentation Laboratory
运算法则: 一阶导数法
浊度或光 散射值
实际上,大部分凝固反应运算使用的是二阶 导数。 少许情况下使用一阶导数。 其它一些反应使用阈值法更合适。 不同的运算法则由不同的试验所选择。

Instrumentation Laboratory
发色底物法
发色底物试验
发色底物试验的基本反应是: 未稀释血浆或稀释后血浆(incubated at 37°C) + 试剂 (酶) ->中间复合物 + 试剂(底物) 剩余的酶能水解特殊的底物, 去除pNA 分子 ,产生颜色反应。
纤维蛋白的形成过程
2. 纤维蛋白单体自发聚合
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
2. 纤维蛋白单体自发聚合
Fibrin fibre
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
2. 纤维蛋白形成纤维蛋白网
Fibrin net
Instrumentation Laboratory
g b a
the formula is: 2(a,b,g)
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
纤维蛋白原转变为纤维蛋白通过三个步骤 1. 蛋白水解(通过凝血酶)
Thrombin Fibrinopeptide A
Fibrinopeptide B
Thrombin Thrombin
结论:

凝固曲线和反应曲线是一个良好 的工具 。 这种工具为确保可靠的结果提 供保障,既节省时间,又节省 费用。
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
Fibrinogen is composed of 3 chains 纤维蛋白原分子的每一条链由两部分组成
g b a
[AT*Heparin] [AT-FXa- Heparin] + FXa (residual) Peptide + pNA
FXa (residual)
Instrumentation Laboratory
Chromogenic Method
pNA呈黄色,随后被分光光度计测量 (at 405 nm). 测量值与定标曲线比较得出浓度值。
变化) 第一法则 (反应速度) 第二法则 (反应加速度)
Instrumentation Laboratory
运算法则: 阈值法
浊度或 光散射值
浊度阈值法用于 (曲线delta的绝 对值或百分比)允许识别凝固点
阈值法 (凝固起始点)
Time 凝固点
Instrumentation Laboratory

Instrumentation Laboratory
Clause 方法与PT 衍生法结果比较 口服抗凝药病人
标本: 411 正常人, 50 位口服抗凝药病人 方法: Clauss 和PT 衍生法 结果: Clauss PT derived 正常人 320±124 289±126 (mg/dl) 口服抗凝药病人421±154 487±194 (mg/dl) 口服抗凝药病人PT 衍生法结果比 Clause 法高24%
浊度或 光散射值 反应的最大加速度点 二阶导数
Time 凝固点
Instrumentation Laboratory
运算法则:二阶导数法
二阶导数法的真实表现
Instrumentation Laboratory
运算法则: 二阶导数法
二阶导数法
用于以下情况: 基线不总是平坦的 通常情况下反应加速度快 凝固曲线信号清晰,在基线和凝块形成期无起 伏 该运算法则主要应用于凝固反应试验(i.e. APTT type)

Instrumentation Laboratory
运算法则: 二阶导数
二阶导数
通常应用于下述情况:

Example: APTT; 凝固曲线相对清晰,反应加 速度快, 曲线外观没有大的起伏。 二阶导数曲线可正可负。

Instrumentation Laboratory
凝固曲线
一种完善的算法是否存在 ?
纤维蛋白的形成过程
3.通过铰链形成稳定的纤维蛋白
XIII
Thrombin
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
3.通过铰链形成稳定的纤维蛋白
Thrombin XIII
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
3.通过铰链形成稳定的纤维蛋白
Fibrinogen
凝血酶水解纤维蛋白肽 纤维蛋白单体
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
2. 纤维蛋白单体自发聚合
Instrumentation Laboratory
纤维蛋白的形成过程
2. 纤维蛋白单体自发聚合
Instrumentation Laboratory
相关文档
最新文档