5-菌种的管理和保藏
5菌种保藏的原理和方法
适用菌种：产孢子的真菌 该法麸皮、大米、小米或麦粒等天然农产品为 产孢子培养基，使菌体产生大量的休眠体（孢 子）后加以保存。 注意：控制适当的水分。 保存期：1-3年
（四）沙土管干燥保藏法
原理：低温、寡营养 保藏期：4-5
℃冰箱 保存期1-2年。 适用菌种：产孢子的丝状真菌和放线菌以及产 芽孢的细菌。 过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质， 可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载 体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
（二）穿刺保藏法
原理：低温、缺氧 保藏期：
4-5℃冰箱 保存期6-12个月 适用菌种：各种好气性细菌 液体石蜡作用：防止培养基失水并隔绝氧气 液体石蜡保藏法 （在斜面菌种上加入灭菌后 的液体石蜡） 适用于不能以石蜡为碳源的菌种，如：固 氮菌、分枝杆菌、沙门氏菌、毛霉、根霉等。
（三）固体曲保藏法
三、菌种保藏的注意事项
1 菌种在保藏前所处状态 休ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ体如孢子或芽胞 培养时间（过短，容易死亡；过长，生产性能 衰退） 培养温度 一般采用生长最适温度培养至孢子成熟的菌种 进行保藏效果好
三、菌种保藏的注意事项
2 菌种保藏所用基质 斜面保藏所用的培养基，碳源比例应少些，营 养成分贫乏些较好； 沙土管保藏需将沙和土充分洗净，以防其中过 多的有机物，影响菌的代谢或经灭菌后产生一 些有毒物质； 冷冻干燥所用的保护剂，有不少经加热分解或 变性的物质，如还原糖和脱脂乳，过度加热易 形成有毒物质。
（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整， 然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。 步骤： ①安瓿瓶的处理：灭菌 ②保护剂:其作用是保持菌种细胞的生命状态，尽量减少冷 冻干燥对微生物引起的冻结损伤。 常采用脱脂牛奶或血清。 ③菌悬液制备：与保护剂混合，放在安瓿瓶内； ④冷冻干燥（用低温酒精或干冰（-15 ℃以下）使之速冻， 在低温下用真空泵抽干） 保藏期：将安瓿瓶熔封，低温4-5 ℃，保藏5-10年。
菌种保藏管理制度
菌种保藏管理制度第一章总则第一条为规范和加强菌种保藏管理，提高菌种资源的利用率和保藏质量，制定本制度。
第二条本制度适用于菌种保藏单位的管理和操作。
第三条菌种保藏管理应遵循法律法规、国家标准和相关管理制度，保障菌种资源的合法、安全、有效性。
第四条菌种保藏管理应遵循科学性、规范性和合理性原则。
第二章菌种保藏管理制度要求第五条菌种保藏单位应有合格的菌种保藏人员，具有相关专业知识和操作技能。
第六条菌种保藏单位应具备完善的菌种保藏设施和设备，满足菌种的质量保护和管理需求。
第七条菌种保藏单位应制定菌种保藏管理规章制度，明确菌种资源的申请、保藏、使用和监管流程。
第八条菌种保藏单位应建立菌种信息数据库，对菌种资源进行准确、完整地记录和管理。
第九条菌种保藏单位应定期组织对菌种资源进行检测和鉴定，确保菌种的纯度和活力。
第十条菌种保藏单位应加强安全管理，确保菌种资源的安全使用和保护。
第十一条菌种保藏单位应建立菌种资源的追溯机制，对菌种资源的来源和去向进行记录和跟踪。
第三章菌种保藏管理流程第十二条菌种保藏单位应依法收集菌种资源，并进行鉴定和分类。
第十三条菌种保藏单位应按照规定对菌种资源进行保存和保藏，确保其质量和活力。
第十四条菌种保藏单位应制定菌种资源的使用管理规定，明确使用范围和条件。
第十五条菌种保藏单位应建立菌种资源的定期更新机制，确保菌种资源的新鲜和多样性。
第十六条菌种保藏单位应建立菌种资源的信息共享平台，促进菌种资源的交流和共享。
第四章菌种保藏管理监督第十七条有关行政部门应加强对菌种保藏单位的监督和检查，确保菌种资源管理的合法性和合规性。
第十八条菌种保藏单位应定期对菌种资源进行抽查和自检，发现问题及时整改。
第十九条菌种保藏单位应接受社会监督，加强与公众的沟通和交流。
第二十条对违反菌种保藏管理制度的单位和个人，依法给予相应的处罚和通报。
第五章附则第二十一条本制度自颁布之日起正式执行。
第二十二条本制度的解释权归菌种保藏管理部门所有。
菌种的管理和保藏
整理课件
液体冷冻保藏法
制备方法 1%蛋白胨 、甘油 ,灭菌,接种、培养18-24小时.
保存条件 -80℃可保存数年.
整理课件
菌种的传代和使用
工作菌种传代次数不得超过5代。 1代 是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任何亚培养的形式均被认为是转种或传 代一次。
整理课件
基本操作技术
细菌的接种、分离和培养 接种：将微生物的培养物接种到培养基上的一种操作技术。
信息。
整理课件
2015版-指导原则
菌种的鉴定
纯菌的分离 微生物的表型 表型微生物鉴定 通过长时间培养对微生物细胞的恢复、增殖是有限的，如有些环境中的微生 物在普通微生物增殖培养基不能恢复。此外，分离出的受损的培养物可能不 能完整表达其表型属性。 基因型微生物鉴定
整理课件
菌种的鉴定
微生物分类中使用的表型特征
整理课件
菌种的保藏
低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可以抑制微生物的代谢和生长繁殖， 因此低温、干燥和真空是菌种保藏的重要手段。
整理课件
菌种的保藏
标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株。 冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得重新冷冻或再 次使用。
工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用 作
培养时间( h ) 18～24
2～3天
5～7天，或直到获得 丰富的孢子
整理课件
菌液制备用稀释液—2015修定内容
修订前 0.9％氯化钠溶液
修订后 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。 0.9%无菌氯化钠溶液。
整理课件
菌液贮存—2015修定内容
修订前
修订后
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使 用。
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程完整
菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。
3、定义标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4、职责4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。
4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5、规程5.1菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。
5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。
5.3菌种的保存5.3.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：每个月转种一次；酵母菌及芽胞：3~6个月转种一次；丝状真菌每年转种一次。
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程传代用菌种采用甘油冷冻管保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合甘油并分装至冷冻管中，冷冻管标注菌种名称、代数、保存日期等信息，然后放置于-80℃冰箱中保存。
每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。
5.3.2.2液体石蜡保存法对于一些难以保存的菌种，采用液体石蜡保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合液体石蜡并分装至玻璃瓶中，瓶口用铝箔密封，标注菌种名称、代数、保存日期等信息，保存温度为-70℃。
每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。
5.4菌种的传代传代用菌种每年进行一次复苏和传代。
复苏后，将菌种接种至适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，按照规定的传代代数制备传代用菌种，并及时更新菌种库存记录。
5.5菌种的使用使用菌种前，应先确认菌种的品质和纯度，并按照规定的传代代数制备工作用菌种。
使用后，应及时更新菌种库存记录，并进行相应的消毒处理。
5.6菌种的销毁菌种在使用过程中，如出现变异或污染等情况，应及时进行应灭活处理，并填写《菌种销毁记录表》，经主管部门审核同意后，进行销毁处理。
菌种库存中长期未使用的菌种，应定期进行清理和销毁处理。
菌复苏、复壮；Sabouraud葡萄糖琼脂培养基：用于白色念珠菌复苏、复壮；青霉素-链霉素琼脂培养基：用于铜绿假单胞菌复苏、复壮。
5.4.1.1.3复苏步骤：1.取出保存好的菌种管，用接种针在酒精灯上消毒；2.将接种针在75%酒精中消毒，再用酒精棉球擦拭消毒；3.用接种针在相应的培养基上进行接种；4.置于适宜温度下孵育，待菌落出现后进行传代或进行实验。
5.4.1.2标准菌株的确认通过形态学、生理生化特性、分子生物学等方法进行鉴定，确认菌株的纯度和种属。
5.4.1.3标准菌株的传代将菌株从原始保存方式中转移到新的保存方式中，确保菌株的保存和传承。
传代次数不宜过多，一般不超过10代。
5菌种的管理和保藏
2024/7/3
7
低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可 以抑制微生物的代谢和生长繁殖，因此低温、 干燥和真空是菌种保藏的重要手段。 标准储备菌株经纯度和特性确认后保存时，可 将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中，并分 装于小瓶中,建议采用低温冷冻干燥，液氮储存， 超低温冷冻(低于-70℃)等方法保存。
2024/7/3
19
⑵创造适宜的培养条件 ⑶用不同类型的细胞进行传代 ⑷采用有效的保藏方法
2024/7/3
20
定期检查
主要检查项目 菌落形态、革兰染色、显微镜下菌体形
态、生化特性及血清学检查。
2024/7/3
21
菌种的复壮 使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性的 过 程验室主要采用分离纯化的方法。
2024/7/3
11
⑴ 挑选特征典型的纯菌菌落。 ⑵确定保藏的合适菌体。 ⑶选择最适宜的方法保藏。 ⑷定期对保藏的菌种进行检查。
2024/7/3
12
二、菌种的传代和使用
工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代， （从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0代）防止 过度的传代造成菌种变异。
1代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任 何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。必要 时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。
2024/7/3
2
菌种的来源
药品微生物检验用的试验菌应来自认 可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株， 或使用与标准菌株所有相关特性等效的商 业派生菌株。
2024/7/3
3
菌种保藏的中心任务
⒈广泛收集各种有用的微生物菌种。 ⒉选择最适宜的保藏方法。 ⒊研究、检验、交换和使用。
2024/7/3
4
菌种管理规范
菌种管理规范引言概述：菌种管理是生物技术领域中非常重要的一项工作，它涉及到菌种的保存、鉴定、培养和分发等方面。
规范的菌种管理能够保证菌种的纯度和可靠性，为科学研究和工程应用提供可靠的基础。
本文将从菌种的保存、鉴定、培养、分发和记录等五个大点，分别阐述菌种管理的相关内容。
正文内容：1. 菌种的保存1.1 保存条件：菌种保存需要提供适宜的环境条件，包括温度、湿度和光照等。
不同菌种对保存条件的要求不同，因此需要根据菌种的特性进行调整。
1.2 保存方式：常见的菌种保存方式包括冷冻保存、冷冻干燥保存和液氮保存等。
不同保存方式有其优缺点，需要根据菌种的特性和使用需求选择合适的保存方式。
2. 菌种的鉴定2.1 鉴定方法：菌种的鉴定是确定其物种和亚种的过程，常用的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化特性鉴定和分子生物学鉴定等。
鉴定方法的选择应根据菌种的特性和鉴定目的进行。
2.2 鉴定标准：菌种的鉴定需要依据一定的标准和参考物种进行比对。
国际上常用的鉴定标准包括国际菌种保存中心（CBS）和美国类型菌种文化集（ATCC）等。
3. 菌种的培养3.1 培养基选择：菌种的培养需要提供适宜的培养基，包括基础培养基和特定培养基。
基础培养基可根据菌种的需求选择，特定培养基则针对特定菌种的培养需求进行设计。
3.2 培养条件控制：菌种的培养需要控制适宜的温度、pH值和培养时间等条件。
不同菌种对培养条件的要求有所不同，因此需要根据菌种的特性进行调整。
4. 菌种的分发4.1 分发要求：菌种的分发需要满足科学研究和工程应用的需求，同时要保证菌种的纯度和可靠性。
分发过程中需要采取一系列措施，如制备分生孢子、制备冻干粉和制备液体培养物等。
4.2 分发方式：常见的菌种分发方式包括直接分发和间接分发。
直接分发是将菌种直接提供给用户，间接分发是通过菌种库或合作单位进行分发。
分发方式的选择应根据实际情况进行。
5. 菌种的记录5.1 记录内容：菌种的记录需要包括菌种的基本信息、保存和鉴定的结果、培养条件和分发情况等。
菌种保藏管理
菌种保藏管理菌种保藏管理是指对微生物菌种进行保存、管理、鉴定和利用的一系列工作。
菌种保藏管理的目的是保护微生物资源，促进微生物资源的研究和利用，防止微生物污染和传播，维护科学研究的诚信和公正。
一、菌种保存菌种保存是指将微生物菌株保存在适宜的条件下，以保证其生命活力和遗传稳定性。
常见的菌种保存方式有以下几种：1. 冷冻保存：将菌株在-70℃以下的低温条件下保存，可保存数年至数十年。
2. 干燥保存：将菌株在低湿度条件下干燥保存，可保存数年至数十年。
3. 液氮保存：将菌株在液氮中保存，可保存数十年至数百年。
4. 长期培养：将菌株在适宜的培养基上连续传代培养，可保存数年至数十年。
二、菌种管理菌种管理是指对保存的菌株进行鉴定、分类、记录和更新等工作。
常见的菌种管理工作有以下几个方面：1. 鉴定和分类：对保存的菌株进行鉴定和分类，确定其种属和亚种。
2. 记录和更新：对保存的菌株进行详细的记录和更新，包括菌株来源、保存时间、保存方式、鉴定结果等信息。
3. 质量控制：对保存的菌株进行质量控制，包括检测菌株的纯度、活力和遗传稳定性等指标。
4. 分发和交换：将保存的菌株分发给需要的研究人员或机构，或与其他机构进行菌株交换。
三、菌种利用菌种利用是指利用保存的菌株进行科学研究和应用开发。
常见的菌种利用方式有以下几种：1. 研究应用：利用保存的菌株进行科学研究和应用开发，如发酵生产、药物研发、环境修复等。
2. 教学实验：利用保存的菌株进行教学实验，培养学生的实验技能和科学素养。
3. 保护利用：利用保存的菌株进行保护利用，促进微生物资源的可持续利用和保护。
总之，菌种保藏管理是保护微生物资源、促进科学研究和应用开发的重要工作，需要科学规范的管理和操作。
菌种保藏的方法
菌种保藏的方法菌种保藏是一种重要的微生物资源保护方式，对于研究、应用和开发微生物具有重要意义。
以下是几种常见的菌种保藏方法及其操作步骤。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻是一种常用的微生物保藏方法，适用于大多数真菌、细菌和酵母菌。
其主要原理是将菌株保存在低温下，使其生理活动缓慢，以延长菌种的保藏时间。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，常用的保存液有甘油、甘露醇等。
4. 菌种保存：将菌株用保鲜膜包裹，放入保存管中，加入保存液，密封保存管。
5. 冷冻保存：将保存管放入低温冰箱或液氮罐中进行冷冻保存。
二、干燥保藏法干燥保藏法是一种简便、经济的保藏方法，适用于真菌、细菌、放线菌等微生物。
其基本原理是将菌种与干燥剂混合，使其水分含量降低，从而实现微生物的休眠状态。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备干燥剂：根据不同菌株的需要，选择合适的干燥剂，如硅胶、氧化钙等。
4. 菌种混合：将菌株与干燥剂按照一定比例混合均匀。
5. 干燥保存：将混合物均匀地散布在无菌培养基上，置于通风干燥的环境中进行保存。
三、冷冻冻干保存法冷冻冻干保存法是一种较为复杂的菌株保藏方法，适用于难保存的微生物，如厌氧菌、放线菌等。
其主要原理是将菌株在低温下冻结干燥，从而保护微生物的活力。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，如甘油、甘露醇等。
4. 冷冻过程：将菌株加入保存液中，放入冷冻机冷冻至低温（通常为-80℃）。
5. 冻干过程：将冷冻的菌株经过真空排气、结冰降温等步骤进行冻干处理。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。
恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。
本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。
其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。
该方法具有诸多显著优点。
低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。
低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。
操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。
在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。
常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。
制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。
将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。
在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。
低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。
然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。
二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。
常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。
沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。
该方法具有操作简便、成本低廉的特点。
在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。
菌种的保藏管理制度
菌种的保藏管理制度一、前言随着微生物研究领域的不断发展，菌种的保藏和管理变得日益重要。
菌种在科学研究、工业生产、医药卫生等领域起着重要作用。
菌种的保藏管理制度不仅是对菌种进行有效保护和管理的重要手段，也是对科研机构和生产企业负责任的表现。
本文将从菌种的保藏目的、原则、保藏管理程序、管理机构和管理人员的职责等方面进行详细阐述，以便各单位建立完善的菌种保藏管理制度。
二、菌种的保藏目的1. 保证菌种的纯度、活力和保存性能；2. 保证菌种在长时间内可以被有效使用；3. 促进菌种资源的共享和交流；4. 保证菌种在科研、生产和应用中的安全性和可追溯性。
三、菌种的保藏原则1. 选择适宜的保藏方法，确保菌种的长期保存和传代；2. 严格按照操作规程操作，保证菌种的纯度和活力；3. 建立完善的菌种信息档案，保证菌种的可追溯性；4. 定期检测保藏菌株的纯度和活力，确保菌种的质量；5. 加强对菌种的安全管理，防止菌种的交叉污染和泄露。
四、菌种的保藏管理程序1. 菌种的采集、分离和鉴定（1）菌种的采集应按照规范程序进行，同时将采集信息记录在案，包括采集地点、采集时间、样品编号等；（2）菌种的分离和鉴定应由具有相关资质和经验的专业人员进行，并建立菌种信息档案。
2. 菌种的保存和传代（1）选择适宜的保存方法，如低温、冷冻、干燥等；（2）菌种的传代应按照规范程序进行，记录传代信息并定期对保存菌株进行检测。
3. 菌种的信息管理（1）建立菌种信息档案，包括菌种的采集信息、分离和鉴定信息、保存和传代信息等；（2）对菌种信息进行分类归档，方便查阅和管理。
4. 菌种的质量控制（1）定期对保存菌株进行纯度和活力检测；（2）对检测结果进行记录和分析，并定期进行质量评估。
5. 菌种的安全管理（1）加强菌种管理的安全防护措施，防止菌种的交叉污染和泄露；（2）对涉及菌株管理的人员进行相关培训和教育，提高他们的安全意识。
六、菌种的管理机构和管理人员的职责1. 菌种管理机构（1）设立专门的菌种管理机构，负责菌种的保藏和管理工作；（2）建立菌种管理制度，制定相关管理规定和操作程序。
5菌种保藏的原理和方法
16
.
17
.
方法。
9
.
（六）液氮保藏法
原理：低温 悬浮介质： 10%甘油或5%的二甲亚砜 机理：甘油或二甲亚砜可进入细胞，并通过降低强烈的
脱水作用而保护细胞。 甘油—般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。 适用菌种：适用于所有微生物、动植物细胞保藏。 保藏期：置液氮内（-196 ℃ ），保存5-10年。 特点：保藏期最长，但保藏费用高，仅用于保存经济价
4 菌种保藏的原理和方法
菌种保藏原理及条件 菌种保藏的方法 菌种保藏的注意事项 菌种保藏机构
1
.
一、菌种保藏原理
原理：
根据菌种的生理生化特性，人为创造条件使菌 体的代谢活动处于休眠的状态。
条件：
挑取优良纯种，最好是休眠体（孢子、芽孢等）
创造一个最有利于休眠的环境条件，如：降低培 养基营养成分、低温、干燥、隔氧及添加保护剂 等方法。
2
.
二、菌种保藏的方法
斜面保藏法 穿刺保藏法 固体曲保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法
3
.
（一）斜面保藏法
原理：低温 方法： 将培养好的斜面菌种，置于4-5℃冰箱保存，定期
移植到新的斜面培养基上继续保藏。 一般保存期3-6个月。 注意事项: 冰箱的温度； 培养基水分蒸发情况（用橡皮塞代替棉塞）。 优点：简便，适合于实验室中菌种的短期保藏。 缺点：短期内多次传代，易引起菌种变异、退化，染菌
过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质，
可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载 体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
7
.
（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整， 然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。
菌种的管理和保藏
生物安全：加 强生物安全管 理防止菌种泄
漏和污染
应用拓展：扩 大菌种保藏的 应用领域如食 品、医药、环
保等
感谢观看
汇报人：
菌种保藏设施与设备
低Байду номын сангаас冰箱： 用于保存菌 种温度控制 在-20℃以下
超低温冰箱： 用于长期保 存菌种温度 控制在-80℃
以下
干燥器：用 于干燥菌种 防止菌种受
潮
培养基：用 于培养菌种 提供营养物
质
灭菌锅：用 于灭菌防止
菌种污染
生物安全柜： 用于操作菌 种防止菌种 污染和传播
01
菌种保藏的应用
农业领域
生物能源：用于 生产生物燃料如 乙醇、生物柴油 等
医学领域
疫苗生产：用于生产疫苗提高疫苗的质量和产量 抗生素生产：用于生产抗生素提高抗生素的产量和质量 生物制药：用于生物制药提高药物的疗效和安全性 基因工程：用于基因工程提高基因工程的效率和准确性
环境领域
土壤修复：利用 微生物降解污染 物改善土壤质量
菌种保藏技术
低温保藏：将菌种置于低温环境中如冰 箱、冷库等
真空保藏：将菌种置于真空环境中如 真空包装、真空罐等
干燥保藏：将菌种干燥后置于干燥环 境中如干燥器、干燥箱等
化学保藏：将菌种置于化学环境中如 化学试剂、化学溶液等
液氮保藏：将菌种置于液氮环境中如液 氮罐、液氮冷冻机等
辐射保藏：将菌种置于辐射环境中如 紫外线、伽马射线等
命名规则：采用拉丁文或英文进 行命名
命名示例：Escherichi coli K12
菌种鉴定与保藏
菌种鉴定：通过形态学、生理生化和分子生物学等方法进行鉴定 菌种保藏：包括低温保藏、干燥保藏、液氮保藏等方法 菌种管理：包括菌种登记、菌种库管理、菌种使用等环节 菌种保藏的重要性：确保菌种的纯度和活性防止菌种退化和污染
医学微生物菌种保藏管理方法
医学微生物菌种保藏管理方法一、菌种保藏的基本原则1.保鲜原则：菌种在采集和分离过程中应尽量保持其原汁原味，避免外源菌的混入和污染。
2.单株原则：保藏时应保证每支菌株是单株，以保证其纯度和稳定性。
3.多种原则：对同一种微生物的不同菌株应采取多中多位保藏，以增加菌种的多样性。
4.全程可控原则：采取全程可追溯和可控制的管理方法，确保菌种的安全保藏和利用。
5.国际标准原则：按照相关国际标准和规范进行菌种保藏和管理，以提高交流和合作的效率。
二、菌种保藏的方法1.冷冻保存法：将纯菌株悬浮液或细胞片通过添加保护剂如甘油或DMSO等，将菌株冷冻保存在低温下，通常是-70°C或液氮中。
此方法简单易行，适用于细菌和真菌的保存。
2.干燥保存法：将菌落或菌株通过无菌技术处理后，放在无菌培养基上晾干后保存。
此法适用于真菌和酵母菌等耐干燥的菌种，保存条件较为简单。
3.血清冻干保存法：将微生物菌株通过添加保护剂的方法制备成冻干粉末，然后放置在低温干燥器中冻干保存。
此法适用于需长时间保存且具有较高生物学活性的病毒和细菌。
4.深层培养保存法：将纯菌株制备成深层培养基中的斜面培养或沉淀法保存。
此法适用于常规保存，保存条件较为简单。
5.液体亚培养保存法：将菌种接种到液体培养基中，通过调整培养基成分，采取亚培养保存的方式，保持菌种的生存状态。
此法适用于对菌株的要求较高的特殊菌株。
2.制度规范：建立菌种保藏和管理的工作制度和操作规范，明确工作流程和责任分工，保证工作的科学性和规范性。
3.定期检测：对保存的菌种进行定期检测，保证其纯度、活性和遗传稳定性，及时发现和处理菌种变异和污染等问题。
4.定期更新：对长时间保存的菌种进行定期更新，保持菌种的活力和可持续利用能力，与其他菌种资源中心进行流通和交换。
5.安全保障：建立菌种保藏和管理的安全保障制度，包括物理安全、信息安全和生物安全等方面的管理措施，保证菌种和研究人员的安全。
综上所述，医学微生物菌种保藏管理是一项综合性较强的工作，需要遵循基本原则，采用适合的保存方法，并且进行科学的管理和规范的操作，以确保菌种的质量和可持续利用能力。
菌种保藏室管理规定
菌种保藏室管理制度
1、菌种保藏必须由专人负责,保持菌种保藏室内恒定的温度和湿度.
2、进行操作前,实验员必须将相关物品进行高温灭菌,同时,实验员进入超净工作台前,要有酒精进行消毒.
3、完成操作后,必须对超净工作台进行清洁,超净工作台中不能存放任何垃圾或者与实验不相关的其他试剂、仪器.
4、使用完超净工作台后,需关闭其电源开关,停止一切与其相关仪器的运转.
5、定期要对菌种保藏室进行卫生清洁.注意外来杂菌的污染.
6、进入实验室的一切人员,必须遵守实验室的各项规章制度,保持室内安静,严禁吸烟、吃东西、乱抛纸屑杂物、随地吐痰、严禁大声喧哗、打闹.
7、对实验室的所有仪器、工具必须爱护,如发现仪器设备损坏,要及时报告,查明原因.凡属违反操作规程导致设备损坏的,要照章赔偿.
8、对贵重仪器设备的正常维护保养,是保持仪器使用价值的重要途径,仪器设备在维修时要作好维修登记,简要记录仪器设备的维修情况
和维修时间.。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。
这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。
冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。
在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。
二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。
这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。
常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。
干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。
三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。
在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。
这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。
四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。
这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。
液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。
五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。
这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。
总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。
不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。
在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。
菌种的保藏与管理
原理
1.根据微生物的生理、生化特性在人工创造的条件下尽量降低微生物细 胞的代谢强度，使细胞处于基本休眠状态，生长繁殖受到抑制但又至于 不死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺乏营养等环境条件都有 抑制微生物代谢的作用。 2.低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段。 3.在选择方法时，首先要考虑方法能否长期有效的保持菌种原有的特性， 同时也应兼顾到方法的经济和简便。
菌种的保藏与管理
2012.12.13
菌种保藏的意义
• 菌种保存是为了减慢或停止菌种的生长繁殖﹔不被杂菌污染﹐在较长时 期内保持著生活能力。以便为日常工作需求提供可靠的优质菌株。 • 微生物具有生命活力，在传代过程中容易发生变异甚至死亡，因此菌种 保存是一项重要的基础工作，是微生物基础学工作的一项重要内容，也 是药品 微生物工作中的一项常用技术。 • 更有效的利用微生物资源。Fra bibliotek谢谢观赏
菌种保藏机构
常用的菌种保藏方法
方法 主要原理 低温（4℃） 低温、缺氧 干燥、无营养 干燥、低温、缺 氧 超低温 适用的微生物 广泛 广泛 产孢微生物 广泛 广泛 保藏时间 1--6个月 1年以上 1--10年 5--10年以上 数十年 特点 简便 简便 简便但有效 复杂但有效 复杂但有效
斜面琼脂低温保 存
液氮超低温保藏发
原理
当温度达到-70℃时，菌体的原生质会形成稳定的“玻璃态”，能长时间 保藏菌种，故菌株在液氮（-196℃），干冰或超低温的冰箱中保藏，此 时菌株的新陈代谢已经停止，但不会死亡。（国外已经普遍采用）
菌种的管理
• 使用菌种的单位，需有一定从事微生物工作的条件和设备，菌种应有专 人负责保管和发放，并建立相关制度。 • 定期转种和（生化、纯度）鉴定，防止菌种衰退、变异、死亡。 • 菌种的采购、接受、鉴定、发放、使用、转种、销毁均应有详细记录。
菌种保藏的要点
菌种保藏的要点
菌种保藏的要点包括以下几点：
1. 菌种的分离与培养：选择合适的方法将所需菌种从样品中分离出来，并进行适当的培养，确保纯净度和菌株的健康状态。
2. 菌种的保存介质：选择适合菌种保存的介质，常见的包括琼脂、液体培养基、冰冻保存液等。
保存介质要符合菌株生长的需求，并具备较长的保存时间。
3. 冷冻保存：将菌种培养物经过适当处理后保存在低温环境中，常见的冷冻方式包括冷冻干燥、液氮冷冻等。
冷冻保存可以有效地延长菌株的保存时间。
4. 恒温保存：将菌种培养物保存在稳定恒温环境中，如恒温培养箱或恒温冰箱。
保存温度要根据菌株的生长特性进行调整，通常为4-8摄氏度。
5. 定期传代：定期传代菌株，避免菌株在长期保存过程中发生遗传变异或失活。
6. 保存记录：建立并及时更新菌株的详细保存记录，包括菌株的来源、保存时间、保存方式、特性描述等信息，以便于菌株的溯源和使用。
7. 双重保存：对于重要的菌种，可以考虑进行双重保存，即同时进行冷冻保存和恒温保存，以增加保存的安全性。
8. 定期检测：定期检测保存的菌株，包括菌株的纯度、生长状况和遗传特性等，确保保存的菌株依然具有所需的特性和活力。
以上是常见的菌种保藏要点，可以根据具体的实验需求和菌种特点进行调整和优化。
同时，注意进行合理的菌种管理和使用，以减少菌株的失活和遗传变异，保证科研的可靠性和稳定性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
杜平华
2020/2/9
1
前言
试验过程中，生物样本可能是最敏感的，因 为它们的活性和特性依赖于合适的试验操作和 贮藏条件。实验室菌种的处理和保藏的程序应 标准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性的 改变。
按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结 果一致性的重要保证。
2020/2/9
2
菌种保藏的重要性
2020/2/9
19
三、菌种的检查与复壮
菌种的衰退 菌种经过长期人工传代培养或保藏，由自发突变 的作用而引起某些优良特性变弱或消失的现象。 控制菌种的衰退方法 ⑴控制传代次数 尽量避免不必要的接种和传代， 降低突变几率。采用良好的传代保藏方法。《中 国药典》2010年版规定，传代次数不得超过5代。
菌种保藏是微生物学检验工作中的 一项常规技术，菌种的科学保藏和管 理直接关系到检验结果的正确性。
2020/2/93Fra bibliotek菌种的来源
药品微生物检验用的试验菌应来自认 可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株， 或使用与标准菌株所有相关特性等效的商 业派生菌株。
2020/2/9
4
菌种保藏的中心任务
⒈广泛收集各种有用的微生物菌种。 ⒉选择最适宜的保藏方法。 ⒊研究、检验、交换和使用。
2020/2/9
23
四、菌种的管理
1、使用菌种的单位，应具备从事微生物工作的 条件和设备。 菌种应由专人负责管理，管理人 员应具有微生物专业知识和技术水平，并应具有 较强的责任心。
2020/2/9
24
2、实验室必须建立菌种保存和使用文件化的程序管理
制度；
包括：每支菌种标注名称、标准号、接种日期、传代 次数、进出、收集、贮藏、保存、确认试验以及销毁 的记录、标准菌种的申购记录、从标准菌株到工作菌 株操作记录，如菌种定期转种传代，鉴定（纯度、特 性）、培养基和培养条件、菌种保存的位置和条件及 其它需要的程序。
2020/2/9
14
细菌的接种、分离和培养 常用培养基种类 斜面培养基 半固体培养基。 液体培养基 平板培养基
2020/2/9
15
接种方法 涂布法 划线法 穿刺法 直接加入法等
2020/2/9
16
分离：为了获得纯菌种（株），采用的 将细菌分离成单个细胞，使其独立分裂繁 殖形成单个菌落的操作技术。
2020/2/9
20
⑵创造适宜的培养条件 ⑶用不同类型的细胞进行传代 ⑷采用有效的保藏方法
2020/2/9
21
定期检查
主要检查项目 菌落形态、革兰染色、显微镜下菌体形
态、生化特性及血清学检查。
2020/2/9
22
菌种的复壮 使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性的 过 程验室主要采用分离纯化的方法。
2020/2/9
25
3 、菌种应冷藏或冷冻保存，保存菌种的冰箱不得 放置食品和易挥发性药品，放置菌种应有专用的冰 箱，应上锁管理。 4、由专人按操作规程和有关要求定期进行传代，并 定期对保存的菌种进行检查，一般每年1～2次， （或定期更换冻干菌种）。发现菌种的异常情况应 及时检查。一旦发现菌种污染和变异现象，应立即 报告、研究处理。尤其长期保存时。
2020/2/9
28
菌悬液的制备与保存
菌悬液的制备与保存 参照《中国药典》2010版培养基适用性 试验。
2020/2/9
29
2020/2/9
30
2020/2/9
9
低于-70℃或低温冷冻干燥可以延长菌种的保 存时间.标准储备菌株可用于制备每月或每周一 次转种的工作菌株。
冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得 重新冷冻或再次使用。
2020/2/9
10
工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业 衍生物仅可用作工作菌株。
2020/2/9
11
不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适 宜的保藏方法，菌种的保藏方法一般分四个阶 段：
分离一般采用平板培养基。
分离方法主要有分段划线法、连续划线法、 涂布分离法、倾注分离法等。
2020/2/9
17
培养 ：接种后的培养基，根据不同微生物
生长条件的要求，将培养基放在适宜微生物 生长的环境中（温度、湿度、氧气等），使 其生长繁殖的过程。 需气菌培养法 厌氧培养法
2020/2/9
18
培养后微生物的生长判断 固体培养基 液体培养基
2020/2/9
5
国外的菌种保藏机构
2020/2/9
6
常用菌种保藏方法
菌种保藏的原则
根据微生物菌种的生理、生化特性，在人工 创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强 度，使细胞基本上处于休眠状态，生长繁殖 受到抑制但不至于死亡，以减低菌种的变异 率。
2020/2/9
7
常用菌种保藏方法
标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商 提供的说明或按验证的方法进行。 标准储备菌株-从国内、外菌种收藏机构获得 的标准菌株经复活并在适宜的培养基中生长后, 既为标准储备菌株。
2020/2/9
12
⑴ 挑选特征典型的纯菌菌落。 ⑵确定保藏的合适菌体。 ⑶选择最适宜的方法保藏。 ⑷定期对保藏的菌种进行检查。
2020/2/9
13
二、菌种的传代和使用
工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代， （从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0代）防止 过度的传代造成菌种变异。
1代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任 何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。必要 时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。
2020/2/9
8
低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可 以抑制微生物的代谢和生长繁殖，因此低温、 干燥和真空是菌种保藏的重要手段。 标准储备菌株经纯度和特性确认后保存时，可 将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中，并分 装于小瓶中,建议采用低温冷冻干燥，液氮储存， 超低温冷冻(低于-70℃)等方法保存。
2020/2/9
26
详细记录
菌种的来源、接收、传代、分离、复壮、使用 和鉴定等均应做好详细记录。包括菌保存位置、 环境(温度)、种传代或使用时间、名称、菌号、 代数、传代或保存形式、分离、复壮方式、使 用内容、鉴定情况等都应进行详细的记录。
2020/2/9
27
菌种不得随意带出实验室，外单位索取、购买 应有证明和登记，并包装严密。 菌种处理应严格按操作规程进行，灭菌处理应 有详细记录。