实验三 一次给药皮肤刺激实验
《动物毒理实验》课件：实验3 皮肤刺激性试验
皮肤刺激强度分级
皮肤局部反应
无刺激性 轻度刺激性
无异常改变 充血、红斑
中等刺激性
红斑，少量小出血点，水肿， 少量丘疹以及小水疱
强刺激性
红斑，皮下出血，水肿，有很 多小水疱并有可能合并成大水 疱，糜烂，表皮剥落，有溃疡 形成等
评分 0 <2
2~6
>6
方法评价
皮肤刺激试验的结果不仅与检测技术有关， 也与试验过程中的质量控制相关。
经4~8h后，除去斑贴物，每24h观察一次各小区皮肤的局部 反应，连续观察4d，按皮肤刺激反应评分（表1），定量地 评定受试化学物对皮肤局部刺激作用的强度。红斑通过肉眼 观察，水肿通过轻轻触摸的方法来评分。
表1 皮肤刺激强度反应评分
皮肤反应强度
评分
无红斑
极轻微红斑（勉强可见）
1
A.红斑和 边界清晰的红斑（明显红斑，淡红至鲜红色） 2
本法与局部全封闭斑贴法不同之处在于： 1.每组的白色家兔数不应少于3只； 2.采用纱布作斑贴物，在无刺激作用的前提下，用半封
闭敷料固定； 3.斑贴不需要在擦伤皮肤上进行； 4.斑贴4h，然后去掉斑贴并清洗皮肤，观察0.5h、1h、
24h、48h和72h后的皮肤反应。 皮肤刺激反应评分同全封闭法。
结果分析
皮肤刺激试验又称皮肤原发性刺激试验。
试验目的
了解受试化学物对皮肤的直接刺激作 用以及刺激强度。
试验材料——实验动物
实验动物：成年白色家兔或白色豚鼠， 首选白色家兔。
在皮肤刺激试验中，动物品种的选择 很重要。目前多选用兔和豚鼠，对于 强刺激或无刺激作用的化学物选用家 兔检测效果好，但对作用缓和的刺激 性化学物，选用豚鼠所获得的试验结 果较准确。
刺激性、过敏性和溶血性试验的方案设计与实施
被动皮肤过敏实验
实验方法：
➢ 激发：被动致敏24或48小时后，各组静脉注射与致敏剂 量相同的激发抗原加等量的0.5-1%伊文思兰染料共1mL， 进行激发。
皮肤刺激性实验
表 1.皮肤刺激反应评分标准
皮肤刺激性实验
结果评价：
单次给药：计算每一观察时间点各组受试物及赋形剂皮肤反应 积分的平均分值，按表2进行刺激强度评价；
多次给药：首先计算每一观察时间点各组积分值，然后计算观 察期限内每天每只动物积分均值，按表2进行刺激强度评价；
皮肤刺激性实验
实验动物：成年白色豚鼠，雌雄各半，每组动物数至少6只。 实验方法： ➢ 实验分组：应设阴性、阳性对照组和受试物不同剂量组。阴性对
照组应给予赋形剂或溶媒，阳性对照组给予8-甲氧基补骨脂素，受 试物低剂量组给予临床用药浓度，高剂量组给予不引起皮肤刺激 反应的浓度 ➢ UV光源：波长为320-400nm的UVA，用前需用辐射计量仪在实验动 物背部照射区设6个点测定光强度（mw/cm2)，以平均值计。照射剂
溶血性实验
实验方法：
➢ 受试物的制备： 用于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的临床使用浓度作
为供试品溶液； 临床用于非血管内途径给药的注射剂，以各药品使用说明书规
定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1∶3稀释后作为供试品 溶液。
溶血性实验
实验方法：
➢ 操作步骤： 取洁净试管7只，进行编号，1-5号管为供试品管，6号管为
致敏期间：每日观察每只动物的症状。初次，末次致敏和激发 当日测定每组每只动物的体重。
中药A注射剂特殊毒性实验 药理实验
中药A注射剂特殊毒性实验【实验目的】通过对中药A注射剂的刺激性、过敏性、溶血性实验，研究该注射剂的安全性。
【实验原理】略。
【实验材料】动物：SD大鼠20只，雌雄各半，200—250g；豚鼠60只，雌雄各半，200—250g；家兔1只，1.5～2.0 kg。
试剂：中药A注射剂，75%乙醇，蛋清，蒸馏水，0.9%氯化钠溶液，苦味酸试剂。
仪器：全光谱灯，离心机，恒温箱，含玻璃珠的三角烧瓶，剃须刀，砂纸，玻璃纸，胶布，绷带，试管，玻璃棒，载玻片。
【实验方法】（一）刺激性试验方法皮肤刺激性试验1 实验动物选SD大鼠，20只，雌、雄各半。
设赋形剂（75%乙醇）对照，采用同体左右侧自身对比法。
试验前24小时对背部给药区用剃须刀进行脱毛处理。
去毛范围左、右各3 cm×3 cm。
给药前检查去毛皮肤是否因去毛而受损伤，有损伤的皮肤不进行试验。
进行破损皮肤的刺激性研究时，在用药部位用砂纸磨或划“井”字并以渗血为度。
2 给药方法取受试物0.5 ml直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，然后用二层纱布（2.5 cm×2.5 cm）和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定；另一侧涂布赋形剂75%乙醇作对照。
贴敷时间4小时。
贴敷结束后，除去受试物并用温水清洁给药部位。
3 结果观察在自然光线或全光谱灯光下观察皮肤反应。
按表1给出的评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分。
①单次给药皮肤刺激性试验，在去除药物后30-60分钟，24、48和72小时肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。
如存在持久性损伤，有必要延长观察期限以评价上述变化的恢复情况和时间。
但延长期一般不超过14天。
对出现中度及以上皮肤刺激性的动物应在观察期结束时对给药局部进行组织病理学检查。
4 结果评价计算每一观察时间点各组受试物及赋形剂皮肤反应积分的平均分值，按表2进行刺激强度评价。
表1.皮肤刺激反应评分标准判断指标：表2.皮肤刺激强度评价标准（二）过敏性试验方法全身主动过敏试验（ASA）对致敏成立的动物体内，静脉注射抗原，观察抗原与IgE抗体结合后导致肥大细胞、嗜碱性细胞脱颗粒、释放活性介质而致的全身性过敏反应。
GBZ240.6-急性皮肤刺激试验
无红 斑 轻微 红 斑 红斑 和焦痂形成 明显 红 斑
1
72h各 观察时点最高积分均值 ,按 表 2判 定皮肤刺激强度 。
1
皮肤刺激反应评分
评 分
2
中等程度到重度程度 红斑 严重红斑至焦痂形成
GBz/T240.6-2011
表 1(续 )
皮 肤 反 应 无水肿 很轻微水肿 水肿形成
1
评
分
6.4.2 染毒
取受试样 品 0.5mL(g)直 接涂布在皮肤 上 ,用 4层 纱 布 (2.5cm× 2.5cm)和 一层玻璃 纸或类似物 覆盖 ,再 用无刺激性胶布和绷带加 以固定 。对侧皮肤作 为对 照 。采用封 闭试 验 ,敷 用 时间为 4h。 试 验 结束后 ,用 温水或无刺激性溶剂清除残 留受试样 品 。 如怀疑受试样 品可能引起严重刺激或腐蚀作用 ,可 采用分段试验 ,将 三个涂布受试样 品的纱布块 同 时或先后敷贴于一 只家兔背部脱 毛区皮肤上 ,分 别 于涂敷后 3min、 60min和 4h取 下一块纱 布 ,皮 肤涂 敷部位在任 一时间点积分等于 8分 ,即 可停 止试验 。
限 内观察 和评 价 刺激 反 应 的程
作详细的记录 。
1犭
以进行 可 逆 或不 可逆效 应 的观 察 ,以
便进行完整 的评价 ,但 一般不超过
强碱物质 (pH≥ 11),由 于可预见其腐蚀特
性 ,不 必做本试验 ;若 已知受试样 品有很强 的经皮 吸收毒性 (LD5。 ≤ zOO mg/kg体 重 )的 物质不必进行本 试验 ;在 充分并公认 的体外试验结果 中确定可能产生腐蚀或刺 激 毒性 的物质不必进 行体 内试 验 。如果 从受试样 品的结构活性构效关系可 以预见 潜在 的腐蚀毒性 ,则 不必做本试验 。
药物毒理学实验
重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计
算半数致死量（LD50）。据此分析受试动物毒性反应 与剂量的关系，并根据LD50值对药物进行毒性分级。
三.实验材料
（1）器材
（2）药品
1ml注射器、电子天平、记号笔、镊子、剪刀等。
盐酸赛拉嗪注射液。
（3）动物
实验一
急性毒性试验
•
（一） 药物LD50的测定
一、实验目的
（1）理念——是药三分毒;
（2）了解一些常规药物毒理学的试验方法， 及评价指标; （3）掌握药物急性毒性试验的试验设计方 法、LD50的测定及计算方法。
二. 实验原理
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组方法，
根据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。一
死试验。
（2） 致癌实验： 短期致癌实验和长期致癌实验。
（3） 致畸胎试验：于孕鼠或孕兔胚胎的器官形成期给药，观察对子代的影响。
最大耐受剂量(MTD)
指在外来化合物急性毒性实验中,化学物质不引起
受试对象(实验动物)出现死亡的最高剂量,故可缩写为LD0。一般不用最大耐 受剂量来比较两种外来化合物的毒性。 治疗指数 为药物的安全性指标。通常将半数中毒量（TD50）/半数有
察受试区皮肤的变化，有无红斑、水肿等现象。
如为多次给受试物实验则一般每日涂抹一次，连续一周， 其余均与一次给受试物的方法和要求一致。
2、结果判断与评价
每只动物实验结果按表1进行刺激反应评分，
计算出平均分值按表2进行刺激强度评价：
表1 皮肤刺激反应评分
红斑形成
无红斑 勉强可见 明显红斑 中等-严重红斑
急性毒性试验
化学药物刺激性过敏性和溶血性研究技术指导原则
化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则一、概述化学药物刺激性、过敏性和溶血性是指化学药物制剂经眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、关节腔、皮肤、直肠、阴道、静脉、动脉、肌肉、皮下、静脉旁和鞘内等非口服途径给药，对用药局部产生的毒性（如刺激性和过敏性等）和/或对全身产生的毒性（如过敏性和溶血性等）。
它是临床前安全性评价的组成部分。
药物的活性成分及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质（如pH值、渗透压等）均有可能引起刺激性和/或过敏性和/或溶血性的发生，因此药物在临床应用前应研究其制剂在给药部位使用后引起的局部和/或全身毒性，以提示临床应用时可能出现的毒性反应、毒性靶器官、安全范围、临床研究监测指标并为临床解毒或解救措施提供参考，保障临床用药的安全、有效。
本指导原则适用于化学药物，主要内容包括化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究和评价的总体原则、一般原则和常用试验方法。
二、总则根据《药品注册管理办法》（试行）的规定，化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究必须执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）。
试验设计应遵循随机、对照、重复的原则。
化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究试验设计应结合毒性的发生机制、影响因素、临床意义和药物临床应用的适应症和给药方法等来考虑。
动物种属的选择应依据拟采用的试验模型和观察的指标。
动物的性别、年龄和生理状态应符合拟采用试验动物模型的要求。
受试物应与临床应用制剂一致。
给药方案应根据所采用的试验模型和拟定的临床应用情况来决定。
观察部位除给药部位外，同时应考虑周围组织或可能暴露于受试物的部位。
如果受试物与拟进行临床研究的制剂相同或具有可比性，其他非临床安全性（如长期毒性）研究结果可充分反映受试物的刺激性、过敏性和溶血性中的某一毒性时，则可不单独进行相应的毒性研究。
化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究时应采用与临床应用制剂一致，符合临床用质量标准规定的受试物，并注明其名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，其中辅料和杂质等的名称和量应尽可能明确，并附有研制单位的自检报告。
皮肤黏膜刺激实验报告
一、实验目的本研究旨在评估某新型化学物质对皮肤和黏膜的刺激性，为该化学物质的安全评价提供科学依据。
二、实验材料1. 受试化学物质：某新型化学物质（以下简称化学物质A）2. 实验动物：家兔（雌性，体重2.5kg左右）3. 试剂与仪器：生理盐水、脱脂棉、敷料、显微镜、病理切片机、病理显微镜等4. 实验环境：温度20-25℃，相对湿度40-70%三、实验方法1. 皮肤刺激试验（1）将家兔随机分为两组，每组6只，分别命名为A组和B组。
（2）A组为受试组，将化学物质A配制成0.5%的溶液；B组为对照组，使用等量的生理盐水。
（3）将受试溶液和生理盐水分别涂抹在受试家兔的背部皮肤上，面积约为1cm²，厚度约0.1cm。
（4）涂抹后，用敷料覆盖固定，粘贴时间为4小时。
（5）4小时后，去除敷料，观察并记录皮肤反应。
2. 黏膜刺激试验（1）将家兔随机分为两组，每组6只，分别命名为C组和D组。
（2）C组为受试组，将化学物质A配制成0.5%的溶液；D组为对照组，使用等量的生理盐水。
（3）将受试溶液和生理盐水分别滴入受试家兔的鼻腔，剂量约为0.1ml。
（4）滴入后，观察并记录鼻腔黏膜反应。
（5）1小时后，重复滴入受试溶液和生理盐水，观察并记录鼻腔黏膜反应。
四、实验结果1. 皮肤刺激试验（1）A组：受试家兔背部皮肤出现红斑、水肿，部分家兔出现瘙痒。
（2）B组：受试家兔背部皮肤无异常反应。
2. 黏膜刺激试验（1）C组：受试家兔鼻腔黏膜出现充血、水肿，部分家兔出现打喷嚏、流涕。
（2）D组：受试家兔鼻腔黏膜无异常反应。
五、实验结论1. 化学物质A对家兔皮肤具有刺激性，表现为红斑、水肿、瘙痒等症状。
2. 化学物质A对家兔鼻腔黏膜具有刺激性，表现为充血、水肿、打喷嚏、流涕等症状。
六、实验讨论1. 本实验结果表明，化学物质A对家兔皮肤和黏膜具有刺激性，提示该化学物质在实际应用中可能对人体造成潜在危害。
2. 皮肤刺激试验和黏膜刺激试验结果表明，化学物质A的刺激性与其浓度和接触时间有关。
《动物毒理实验》课件：实验3 皮肤刺激性试验
目录
试验原理 试验目的 试验材料 试验方法 结果分析 方法评价
试验原理
局部刺激试验是毒理学试验中的一项重要内 容，对可能具有局部刺激作用的化学物必须 进行此项试验，但对具有强酸（pH≤2 ）或 强碱（pH≥11.5 ）性质的化学物不需做本 试验，因为这些化学物属于腐蚀性物质。另 外，已知具有高毒性的化学物也不必进行皮 肤刺激试验。
凡是杀虫剂、杀真菌剂、杀鼠剂以及具有刺 激性的兽药等化学物均需进行局部皮肤刺激 试验，以保护接触人员的健康。
试验药物的量一般以0.5ml或0.5g为宜，评 价固体受试化学物时不一定要将其配成溶液， 具体可酌情而定。
将表1中A项和B项评分结果相加，凡总分低 于2分者可视为无刺激性或轻度刺激性； 2~6分之间者具有中等刺激性；6分以上者 具有强刺激性。
刺激性极强的物质，试用前需经适当稀释后 再进行斑贴，如稀释用的溶剂本身具有刺激 作用，则需作溶剂对照试验。
另外，也可按表2中的标准来判断试验结果。
表2 皮肤刺激强度分级标准
皮肤刺激强度分级
ห้องสมุดไป่ตู้
皮肤局部反应
无刺激性 轻度刺激性
无异常改变 充血、红斑
中等刺激性
红斑，少量小出血点，水肿， 少量丘疹以及小水疱
强刺激性
红斑，皮下出血，水肿，有很 多小水疱并有可能合并成大水 疱，糜烂，表皮剥落，有溃疡 形成等
评分 0 <2
2~6
>6
方法评价
皮肤刺激试验的结果不仅与检测技术有关， 也与试验过程中的质量控制相关。
皮肤刺激试验又称皮肤原发性刺激试验。
试验目的
了解受试化学物对皮肤的直接刺激作 用以及刺激强度。
试验材料——实验动物
(仅供参考)实验7-皮肤刺激实验
实验材料：
剃毛器、剪毛剪、记号笔、 医用胶带、称量纸、洗瓶、大烧杯、 棉签、静脉注射针头（5号或7号）、 一次性静脉注射器、麻醉剂（戊巴比 妥钠或其他）、兔子保定器等。
实验方法：
◆ 实验动物和饲养环境
多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白 色家兔（皮肤变态反应实验多选用豚鼠）；应使 用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性 均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的；实验 动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需 增加实验动物数；实验动物应单笼饲养，试验前 动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间；实 验动物及动物房应符合国家相应规定；选用常规 饲料，饮水不限制，豚鼠需注意补充适斑和焦痂形成
无红斑 轻微红斑（勉强可见） 明显红斑 中度~重度红斑 严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成
水肿形成 无水肿 轻微水肿（勉强可见） 轻度水肿（皮肤隆起轮廓清楚） 中度水肿（皮肤隆起约） 重度水肿（皮肤隆起超过，范围扩大） 最高积分
积分
0 1 2 3 4
0 1 2 3 4 8
结果评价：按下列公式计算每天每只动物平均 积分，以表2判定皮肤刺激强度。
每天每只动物平均积分＝ ∑红斑和水肿积分/受试动物数×14
试验报告
应包括如下内容： （1）受试物名称、理化性状、配制方法和用量。 必要时说明受试物的 pH值； （2）实验动物的种属、品系、性别、体重和来 源（注明合格证号和动物级别） ； （3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、 相对湿度、实验动物房合格证号； （4）每个动物在每一观察时点的皮肤刺激反应 积分； （5）具体描述除刺激性以外的其它毒性作用； （6）结论。
注意：如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐 蚀作用，可采取分段试验，将三个涂布受试 物的纱布块同时或先后敷贴在一只家兔背部 脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min 和4h 取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一 时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。
急性皮肤刺激实验报告
一、实验目的本实验旨在评估某种化学物质对哺乳动物皮肤的急性刺激性，通过进行急性皮肤刺激试验，为该化学物质的安全使用提供科学依据。
二、实验材料1. 实验动物：成年雌性昆明种小鼠，体重20-25g。
2. 受试化学物质：某化学物质，纯度≥98%。
3. 对照溶剂：蒸馏水。
4. 实验器材：皮肤刺激试验仪、皮肤刺激试验板、无菌棉球、生理盐水、剪刀、剪刀、酒精灯、显微镜等。
三、实验方法1. 实验动物分组：将实验动物随机分为两组，每组10只，分别为实验组和对照组。
2. 皮肤刺激试验：在实验组小鼠的背部皮肤上涂抹0.5ml的受试化学物质，对照组小鼠涂抹等量的对照溶剂。
涂抹后用无菌棉球轻轻擦拭，使受试化学物质均匀分布在皮肤上。
3. 观察与记录：在涂抹受试化学物质后，分别在1小时、4小时、24小时、48小时、72小时观察皮肤反应，记录皮肤红斑、水肿、脱皮等反应程度。
4. 数据分析：采用SPSS软件对实验数据进行统计分析，比较实验组和对照组皮肤反应的差异。
四、实验结果1. 实验组小鼠在涂抹受试化学物质后，皮肤出现明显的红斑、水肿，部分小鼠出现脱皮现象；对照组小鼠皮肤无明显反应。
2. 对实验数据进行统计分析，结果显示实验组小鼠的皮肤红斑、水肿程度与对照组小鼠相比，具有显著性差异（P<0.05）。
五、实验结论根据实验结果，某化学物质对哺乳动物皮肤具有明显的急性刺激性，涂抹后可引起皮肤红斑、水肿、脱皮等反应。
建议在使用该化学物质时，采取适当的安全防护措施，以降低其对皮肤的潜在危害。
六、讨论1. 实验过程中，受试化学物质的浓度和涂抹面积对实验结果有一定影响。
本实验中，受试化学物质的浓度为0.5ml，涂抹面积为小鼠背部皮肤，实验结果具有一定的参考价值。
2. 实验结果表明，某化学物质对哺乳动物皮肤具有明显的急性刺激性，可能与该化学物质的化学性质有关。
建议进一步研究该化学物质的化学结构、分子量等因素，以期为该化学物质的安全使用提供更全面的科学依据。
人皮肤的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在了解人皮肤对特定物质的刺激反应，通过皮肤刺激试验评估受试物质对皮肤的潜在刺激性，为化妆品、药品等产品的安全性评价提供依据。
二、实验原理皮肤刺激试验是一种用于评估受试物质对皮肤刺激性的实验方法。
本实验采用同体左右自身比较法，通过比较受试物质涂抹区域与溶剂对照区域的皮肤反应，判断受试物质的刺激性。
三、实验材料1. 受试物质：某化妆品原料2. 溶剂：蒸馏水3. 动物：家兔4. 皮肤刺激试验仪：包括涂布器、敷料、计时器等5. 皮肤评分标准：按照中华人民共和国卫生部《消毒技术规范》(2002年版)中的皮肤刺激试验评分标准四、实验方法1. 选取健康家兔，分为实验组和对照组，每组5只。
2. 将实验组家兔的皮肤按2.3.3.3.1(1)同样的方法准备。
3. 第二天，将受试物质浓度为2.3.3.3.1(2)0.5ml(g)涂抹在实验组家兔的一个皮肤上，另一个皮肤上涂抹溶剂作为对照。
4. 涂抹4小时后，用水或无刺激的适当溶剂清洗，去除残留物。
5. 每天连续涂抹1次，连续14天。
6. 涂布后每24小时观察一次结果，按照皮肤评分标准进行评价。
7. 对照组的处理方法与实验组相同。
五、实验结果1. 实验组家兔涂抹受试物质区域的皮肤出现红斑、水肿等刺激反应，评分标准为轻度刺激。
2. 对照组家兔涂抹溶剂区域的皮肤无任何刺激反应。
六、讨论与分析1. 本次实验结果表明，受试物质对家兔皮肤具有一定的刺激性，但刺激程度较轻。
2. 皮肤刺激试验是一种简单、有效的评估受试物质刺激性的方法，为化妆品、药品等产品的安全性评价提供依据。
3. 在实验过程中，需要注意以下几点：（1）受试物质的浓度和涂抹时间应符合实验要求。
（2）皮肤刺激试验应在无感染、无过敏反应的动物上进行。
（3）观察结果时，应按照皮肤评分标准进行评价。
七、结论本次实验通过皮肤刺激试验，证实了受试物质对家兔皮肤具有一定的刺激性，但刺激程度较轻。
为化妆品、药品等产品的安全性评价提供了实验依据。
皮肤的实验报告
皮肤的实验报告皮肤的实验报告皮肤是人体最大的器官之一，起着保护身体的作用。
它不仅是我们外貌的一部分，还承担着调节体温、感受触觉等重要功能。
为了更好地了解皮肤的结构和功能，我进行了一系列的实验。
实验一：皮肤的层次结构为了研究皮肤的层次结构，我使用了显微镜。
首先，我从手指上取下一小块皮肤样本，并将其放置在显微镜下观察。
通过放大镜头，我清晰地看到了皮肤的三个层次：表皮层、真皮层和皮下组织。
表皮层是皮肤的最外层，由多层角质细胞组成。
这些角质细胞密集排列，形成了一个坚固的屏障，阻止外界有害物质的侵入。
接下来是真皮层，它包含了血管、神经末梢和汗腺等重要结构。
最内层是皮下组织，主要由脂肪细胞组成，起到保护和绝缘的作用。
实验二：皮肤的保湿能力为了研究皮肤的保湿能力，我进行了一项实验。
我在两个不同的容器中放置了相同数量的水，一个容器中加入了少量的油。
然后，我将两只手分别浸泡在两个容器中，每次浸泡10分钟。
结果显示，浸泡在含有油的容器中的手感觉更加湿润和滑腻。
这是因为油能够在皮肤表面形成一层保护膜，防止水分的蒸发。
相比之下，浸泡在不含油的容器中的手感觉干燥。
这个实验说明了皮肤的保湿能力与油脂的存在有关。
实验三：皮肤对外界刺激的反应为了研究皮肤对外界刺激的反应，我进行了一项触觉实验。
我在手掌上用一根细尖的针轻轻刺激皮肤，并记录了刺激的强度和感受。
结果显示，当刺激较轻时，我只感觉到一点点痛感。
但是，当刺激加大时，我感觉到更强烈的疼痛。
这是因为皮肤中有大量的神经末梢，它们能够感受到外界的刺激并传递给大脑。
这个实验揭示了皮肤对外界刺激的敏感性。
实验四：皮肤的恢复能力为了研究皮肤的恢复能力，我进行了一项伤口愈合实验。
我在手臂上划了一个小口子，并记录了伤口的愈合过程。
在伤口刚划开时，我能够看到血液流出并形成了一个小血块。
然后，伤口开始愈合，形成了一个新的皮肤层。
随着时间的推移，伤口逐渐愈合，最终完全恢复。
这个实验显示了皮肤的惊人恢复能力。
皮肤用药毒性试验
皮肤急性毒性试验一.试验目的观察动物完整皮肤及破损皮肤短期内接触受试物所产生的毒性反应。
二.实验材料1.动物：选用成年健康家兔(2kg)、白色豚鼠(300g)、白色小型猪(7kg)或大鼠(200g)。
家兔或小型猪每组4只，豚鼠或大鼠每组10只。
受试动物应皮肤光滑、无损伤、无皮肤病。
2.受试物：膏剂、液体或粉末。
前两者可直接试验，后者需用适宜赋形剂(如羊毛脂、凡士林等)混匀，以保证受试物与皮肤良好接触。
三试验方法1 受试动物皮肤制备：①完整皮肤制备：动物在给药前24h，将背部脊柱两侧去毛，可采用剪、剃或适宜的脱毛剂，如8%Na2S等。
去毛范围约相当于体表面积的10%左右，即家兔约150cm2左右，豚鼠、大鼠约40cm2左右，小型猪约300cm2。
去毛后24小时检查去毛皮肤是否因去毛而受伤，受伤的皮肤不宜做完好皮肤的毒性试验。
②破损皮肤准备：按上述方法将受试动物去毛，消毒皮肤后，用消毒手术刀做井字形划破表皮，或用砂布纸摩擦打毛皮肤等，以皮肤出现轻度渗血为度。
2 剂量选择和分组：分对照组和试验组。
对照组应设赋形剂组或空白组。
试验组分为完整皮肤组和破损皮肤组，各2～3个剂量组。
每组动物数为家兔或小型猪4只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半。
低剂量组以临床用制剂(含辅料)用量不低于1g或1ml，高剂量组为低剂量组的2～4倍，或各剂量组间间距根据受试物毒性大小和预试结果而定，一般以0.65～0.85为宜。
根据中药具体特点，可以提高浓度或增加24小时内用药次数。
若用受试物剂量超过有效浓度20倍以上，仍未出现异常反应或死亡，则只设一个高剂量组3 给药方法及观察时间：试验时，将受试物均匀的涂敷于动物背部脱毛区，破损皮肤则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物，并用无刺激性砂布、胶布或网孔尼龙绷带加以固定。
给受试物24小时后，可用温水或适当溶剂去除残留的受试物或赋形剂，每日观察，连续观察7天。
给受试物时应注意，若受试物是固体粉末或中药散剂，则需加适量水或赋形剂(如羊毛脂、凡士林、橄榄油等)混匀，以保证受试物与皮肤的良好接触。
药物的安全性评价试验方法
40
长期毒性试验
• 试验目的：观察动物直肠或阴道反复多 次接触受试药物后产生的毒性反应或死 亡情况。
• 试验材料 • 试验方法
41
局部刺激试验
• 试验目的：观察动物直肠一次或多次接 触受试药物后产生的刺激反应情况。
42
作出恰当的评价 3、通过实验结果确定毒性靶器官和毒性表
现 4、可结合其他试验同时观察
第三节 制剂的全身毒性试验
一、静脉注射制剂的全身毒性试验 1、血管刺激性试验 目的：观察受试静脉注射制剂经多次给药后对血
管刺激反应情况。 试验方法： 动物：家兔 分组：试验组、空白对照组 给药方法：多次静脉注射 观察指标：肉眼观察
2、试验材料： （1）动物：大鼠、豚鼠或家兔 （2）药物：液体或粉末制剂 3、试验方法： （1）试验分组：3个剂量组 （2）给药途径：滴入或吸入 （3）观察指标：全身状况、体重、呼吸、循环、
中枢神经系统、四肢活动等变化。 38
滴鼻剂和吸入剂刺激试验
1、试验目的：观察药物一次或多次滴入或吸入后动 物产生的刺激反应。
皮肤。
角质层
表皮 颗粒层
生发层
真皮依附于皮下组织，厚约2mm。
胶原
真皮 弹性硬蛋白
纤维母细胞
31
二、化学物质对皮肤毒性作用的类型 （一）皮肤原发性刺激 指药物直接作用于皮肤引起的病理学反应。
原发性刺激的表现：红斑、水肿、水疱 疹、溃疡、荨麻疹等 作用机理：1、直接刺激作用
类型等。
29
第十九章 局部用药的毒性研究
局部用药的毒性试验是根据局部用药部 位的解剖和生理特点设计的。
涂剂、擦剂
皮肤用药 膏剂、凝胶剂
其他透皮吸收制剂
皮肤刺激实验报告讨论
皮肤刺激试验是一种常用的安全性评价方法，主要用于评估物质对皮肤刺激性的影响。
本实验通过对某物质进行皮肤刺激试验，探讨其皮肤刺激性，为该物质的安全应用提供依据。
二、实验方法1. 实验材料（1）受试物质：某物质（2）溶剂：无刺激溶剂（3）实验动物：豚鼠（4）实验器材：皮肤刺激试验仪、显微镜、量筒、移液器、培养皿、消毒棉签等2. 实验方法（1）实验动物分组：将实验动物随机分为实验组和对照组，每组10只。
（2）皮肤准备：将豚鼠背部皮肤用消毒棉签进行清洁，待皮肤自然干燥。
（3）受试物质制备：将某物质用无刺激溶剂配制成一定浓度的溶液。
（4）涂抹受试物质：将受试物质均匀涂抹于豚鼠背部皮肤，对照组涂抹无刺激溶剂。
（5）观察与记录：涂抹后，用敷料覆盖固定，粘贴时间至少4小时。
实验期间，每天观察豚鼠皮肤反应，记录红斑、水肿等刺激性表现。
（6）数据处理：根据实验结果，采用统计分析方法对数据进行处理。
三、实验结果1. 实验组与对照组豚鼠皮肤刺激反应对比实验结果显示，实验组豚鼠皮肤出现明显红斑、水肿等刺激性表现，对照组豚鼠皮肤无明显变化。
2. 皮肤刺激性程度评价根据实验结果，实验组豚鼠皮肤刺激性程度为轻度，对照组豚鼠皮肤无刺激性。
1. 实验结果分析本实验结果显示，某物质对豚鼠皮肤具有一定的刺激性，表现为轻度红斑、水肿。
这可能与该物质的化学性质有关，如刺激性较强的化学物质可能导致皮肤刺激性增强。
2. 皮肤刺激性试验方法评价本实验采用皮肤刺激试验方法，该方法操作简便、结果可靠，是评估物质皮肤刺激性的常用方法。
然而，该方法也存在一定局限性，如实验动物个体差异、实验条件等因素可能影响实验结果。
3. 实验结果应用本实验结果可为某物质的安全应用提供参考。
在实际应用过程中，应根据该物质的皮肤刺激性特点，采取相应的防护措施，降低皮肤刺激性风险。
4. 实验改进与展望为提高皮肤刺激性试验的准确性和可靠性，可从以下几个方面进行改进：（1）优化实验动物选择：选择与人类皮肤刺激性反应相似的实验动物，提高实验结果的代表性。
毒理学实验三
毒理学实验三皮肤刺激、眼刺激试验一、实验目的1、掌握家兔备皮技术2、掌握皮肤刺激性试验方法3、掌握家兔眼刺激试验方法4、学会观察受试物对皮肤和眼的损害作用二、实验材料与器材1、试验动物：家兔，每组1只，4人1组2、器材：手术剪、镊子、注射器，滴管、纱布、无刺激性胶布、玻璃纸三、实验内容及试验方法1、家兔脱毛及皮肤染毒（1）准备：备皮（家兔背部脊柱两侧），不要伤皮肤，范围3 cm×3 cm；（2）染毒：取受试物0.5 ml(500μg)涂一侧皮肤，另一侧为对照（记号笔画）；（3）2.5 cm×2.5 cm两层纱布覆盖，加一层油纸后，无刺激性胶布固定；（4）固定时间10min；（5）10min后，用温水除去残留受试物；（6）除去受试物后10min 、20min、30min 观察，对皮肤刺激反应进行评分，评价刺激强度。
2、皮肤刺激反应观察、评分及评价（1）10min 、20min、30min分别评分，每个时间段除以实验动物数（每只动物平均分）选最高分为总积分（最强刺激）(见评价表)；（2）皮肤刺激：红斑和水肿（不同程度），按表评价刺激强度；（3）多次皮肤刺激试验试验时间为14天，每天涂抹，1 小时后观察，总积分为总和除以实验动物数（每只动物）。
3、家兔眼染毒（1）染毒：受试物0.1ml(100g)滴入家兔一侧眼结膜囊内（轻轻拉开家兔一侧眼睛的下眼睑），另一侧作为空白对照；（2）冲洗：被动闭合1秒（分以下三种情况）(不冲洗、4秒后冲洗、30秒后冲洗）（生理盐水冲洗)；（3）观察：记录10s、20s、30s眼局部反应和恢复情况，必要时用2%荧光素钠溶液或裂隙灯、放大镜检查角膜及虹膜的变化；4、眼刺激反应观察、评分及评价四、实验结果1、皮肤刺激反应观察、评分及评价（1）实验观察结果及评分记录10min：红斑形成（0分），水肿形成（0分）。
20min：红斑形成（0分），水肿形成（0分）。
30min：红斑形成（0分），水肿形成（0分）。
皮下试验实验报告
一、实验背景皮下试验是一种常用的体外试验方法，主要用于评估化学物质、药物或其他物质对皮肤的反应性。
本实验旨在通过皮下试验方法，对某化学物质进行安全性评估，并探讨其潜在的皮肤刺激性。
二、实验目的1. 评估某化学物质对皮肤的潜在刺激性。
2. 了解该化学物质对皮肤反应的剂量-反应关系。
3. 为该化学物质的安全使用提供科学依据。
三、实验材料与设备1. 实验材料：- 某化学物质（实验组）- 纯净水（对照组）- 实验动物（豚鼠）- 皮肤刺激剂（十二烷基硫酸钠）- 生理盐水- 无菌手术器械- 无菌注射器2. 实验设备：- 生物显微镜- 电子天平- 皮肤刺激试验仪- 数据处理软件四、实验方法1. 实验动物选择：选取健康成年豚鼠10只，体重200-250g，随机分为实验组和对照组，每组5只。
2. 实验动物处理：将豚鼠麻醉后，无菌条件下进行背部皮肤消毒，并在实验动物背部中央区域制备皮肤刺激试验位点。
3. 实验分组与处理：- 实验组：将某化学物质以不同浓度（0.1%、0.5%、1%、5%）分别注入实验动物背部皮肤刺激试验位点，每组设置3个剂量水平。
- 对照组：将等体积的纯净水注入对照组动物背部皮肤刺激试验位点。
4. 观察与记录：- 注射后24小时、48小时、72小时、96小时、120小时观察并记录实验动物皮肤刺激试验位点的反应情况，包括红斑、水肿、结痂等。
- 比较实验组和对照组的皮肤反应差异，分析剂量-反应关系。
5. 数据处理与分析：- 对实验数据进行统计分析，包括描述性统计、方差分析、相关性分析等。
- 根据实验结果，评估某化学物质的皮肤刺激性。
五、实验结果1. 实验动物注射某化学物质后，随着剂量的增加，皮肤刺激反应逐渐增强。
低浓度组（0.1%）和对照组皮肤反应不明显，高浓度组（5%）皮肤刺激反应明显。
2. 实验组动物皮肤刺激试验位点的红斑、水肿、结痂等反应程度与剂量呈正相关，即剂量越高，皮肤刺激反应越严重。
3. 实验结果表明，某化学物质具有一定的皮肤刺激性，且存在剂量-反应关系。
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实验三一次给药皮肤刺激实验
一、实验目的
掌握皮肤染毒技术，了解受试物对皮肤是否有刺激或腐蚀作用。
二、实验器材
1、实验动物：
小鼠24只，每组4只
2、材料
共用：剃毛器1把、剪毛剪2把、记号笔1支、透明胶1卷、纯桉叶油素10 mL、50%桉叶油素10 mL、25%桉叶油素10mL、3%吐温80 10mL、清洁温水500 mL 每组：长镊子1支、医用手套2双、、注射器（1 mL）1支、烧杯（50 mL）1个、纱布（1.5 cm×1.5 cm）8张。
三、实验内容与步骤
1、保定：一人用一手抓住小鼠颈部皮肤，另一手抓住小鼠尾部，轻轻按住固定在操作台面上。
2、剃毛：小鼠保定后，一人用电动剃毛剪将小鼠背部脊柱两侧的毛剃净，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约2 cm×2 cm。
注意需将皮肤绷紧，把剪刀贴紧皮肤剪，但不可用手提起被毛，以免剪破皮肤；依次剪毛，不要乱剪；剪下来的被毛集中在一个装水的烧杯内，勿遗留在和操作台周围。
3、破损皮肤的制备：给药前24 h，用75%酒精消毒小鼠裸露皮肤部位，用消毒针头在剃毛部位做“井”字状划划痕，划破皮肤，以有组织液和血液渗出为度。
3、染毒：吸取1 mL受试物滴于两层灭菌纱布（1.5 cm×1.5 cm）上，将浸有受试物的纱布覆盖在左侧裸露皮肤区域，用透明胶布固定，右侧皮肤以3%吐温80为对照。
4、观察：一次给药4 h后，以温水洗去残留受试物，观察1 h，24 h、48 h、72 h涂抹部位的红斑和水肿等反应。
按表1进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，将观察结果填入表3中。
5、结果判定：根据24、48和72 h各观察时点最高积分均值，按表2判定皮肤刺激强度。
6、实验分组：见表4
四、注意事项
在实验操作过程中，注意安全，以免被小鼠咬伤，防止小鼠丢失；实验使用的有毒化学药品妥善处理；做好实验观察记录。
五、思考题
皮肤刺激实验与皮肤毒性实验有何区别？
表 1 皮肤刺激反应评分
表3 皮肤刺激强度分级
表 3 桉叶油素对小鼠急性皮肤刺激性试验结果
动物编号
1 h 24 h 48 h 72h
样品对照样品对照样品对照样品对照
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
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分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总分
1
2
3
4
总积分均值
刺激强度分级
表4 实验分组情况
组别ⅠⅡⅢⅣⅤⅥ完整皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25% 完整皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25% 破损皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25% 破损皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25%。