冷冻保藏法
冷冻干燥保藏法的基本原理与步骤
冷冻干燥保藏法的基本原理与步骤嘿，朋友们！今天咱来聊聊冷冻干燥保藏法这神奇的玩意儿。
你想啊，就像冬天里的那些冰挂，水变成了固体，能保存好久好久呢。
冷冻干燥保藏法差不多也是这个道理。
它就是把含有微生物的样品冻得硬邦邦的，然后通过特殊的方法把里面的水分给弄走，让微生物处在一个好像冬眠的状态里。
那具体咋操作呢？先得把要保藏的东西准备好呀，这就好比要给它们收拾好行李准备“睡觉”啦。
然后把它们放进冷冻的设备里，温度得足够低，让它们好好地冻起来。
这时候它们就像是进入了一个寒冷的小屋子。
接着呢，就是关键的一步啦，把水分抽走！就好像把小屋子里的潮湿空气都给吸走一样。
这个过程可得慢慢来，不能着急，得让微生物们舒舒服服地进入那个干燥的状态。
等这一切都做好了，就把它们放在合适的地方保存起来。
就像是给它们找了个安静的小窝，让它们能安心地睡大觉。
这冷冻干燥保藏法有啥好处呢？嘿，好处可多啦！微生物们在这种状态下能保存好长时间呢，而且等需要用的时候，让它们“醒过来”，还能继续发挥作用，就跟新的一样！这多厉害呀！你说这像不像给微生物们施了个魔法，让它们能暂停时间，等需要的时候再继续前进？而且这种方法能很好地保持微生物的特性，不会让它们有太大的变化。
咱平时生活中也有类似的呀，比如有些食物我们也会用冷冻干燥的方法来保存，这样能放好久呢。
这冷冻干燥保藏法在很多领域都大有用处呢，科研啦、生产啦，都离不开它。
所以啊，朋友们，可别小看了这冷冻干燥保藏法，它就像是微生物们的“时间暂停器”，能让它们在需要的时候随时被唤醒，继续为我们服务呢！这多神奇，多了不起呀！这就是冷冻干燥保藏法，一个看似简单却蕴含着大奥秘的方法，是不是很有意思呀？。
冷冻真空干燥保藏法的原理
冷冻真空干燥保藏法的原理
冷冻真空干燥保藏法，又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法，是一种常用的微生物保藏方法。
其原理是在低温下快速将含菌样品冻结，然后在减压条件下抽真空，使水分子直接从固态升华到气态，从而实现对样品的干燥保藏。
具体操作过程如下：首先，将需要保藏的菌悬液或孢子悬液制备成适当的浓度，并添加适量的保护剂以提高菌种稳定性。
接着，将样品装入安瓿管中，并在低温下快速将含菌样品冻结。
然后，将安瓿管置于真空干燥设备中，在减压条件下进行抽真空处理。
由于水分子直接从固态升华到气态，无需经过液态，因此可以有效地避免菌种在干燥过程中的损伤。
最后，将干燥后的菌种管放置在4℃或-20℃的低温环境中保存。
冷冻真空干燥保藏法的优点在于能够有效地保存菌种，且保存时间较长，一般可达到几年或几十年。
此外，该方法还具有较高的保藏效果，菌种在复苏后仍具有较高的活力和生长能力。
因此，冷冻真空干燥保藏法被广泛应用于微生物学、生物制品和医药研究领域。
食品工艺学之食品的冷冻保藏概述
食品工艺学之食品的冷冻保藏概述1. 引言食品的冷冻保藏是目前运用最广泛的食品保藏方式之一。
通过降低食品的温度，可以有效地减缓微生物活动、酶促反应、食品品质变化等过程，从而延长食品的保藏期限。
本文将对食品的冷冻保藏进行概述，包括冷冻保藏原理、常用的冷冻方法以及冷冻保藏的优缺点等内容。
2. 冷冻保藏原理冷冻保藏的基本原理是通过降低食品的温度至冰点以下，使食品中的水分形成冰晶，达到冻结的目的。
冻结过程中，冰晶的形成可以导致细胞内外水分的渗出，从而降低食品的活性。
此外，低温环境还能够减缓化学反应速率、抑制微生物的繁殖、降低酶的活性，从而延缓食品的品质变化。
3. 常用的冷冻方法3.1. 慢冻法慢冻法是将食品逐渐降温至冰点以下，然后再冷冻至所需保藏温度。
这种方法能够有效地冻结食品，并保持食品的组织结构完整，避免冷冻过程中的质量损失。
慢冻法主要适用于肉类、鱼类等食品。
3.2. 快速冻结法快速冻结法是迅速将食品的温度降低至冰点以下，以加快冷冻速度并减少冰晶的生成。
常用的快速冻结方法包括快速传热法、快速气化法和快速冷冻法等。
这些方法能够在很短的时间内完成冷冻过程，有效保留食品的品质和营养成分，特别适用于果蔬、海鲜等易腐食品。
3.3. 冷冻储存冷冻储存是将冷冻食品存放在低温环境下，以保持其冷冻状态并延长保藏期限。
常用的冷冻储存方法包括冷库储存和冷冻柜储存等。
在冷冻储存过程中，需要控制储存温度、相对湿度等因素，以保持食品的质量和风味。
4. 冷冻保藏的优缺点4.1. 优点•延长食品的保质期：冷冻可以有效地降低微生物活性、抑制酶的反应等，从而延长食品的保藏期限。
•保持食品的品质和营养成分：冷冻过程中的快速冻结能够有效地保留食品中的水分和营养成分，避免了长时间暴露在高温环境下导致的品质损失。
•方便储存和运输：冷冻食品体积小，重量轻，便于储存和运输，适用于大规模生产和销售。
4.2. 缺点•能耗高：冷冻保藏需要低温环境，对设备和能源的要求较高，因此消耗较多的能源。
甘油冷冻保藏法
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。
也可用没有球部的管状安瓿管。
塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。
（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。
细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。
一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。
（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。
（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。
将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。
将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4-5分钟，即可使悬液结冰。
论述菌种的保藏方法
论述菌种的保藏方法菌种的保藏是指将某一种菌株保存在适宜的条件下，以确保其长期存活和保持其遗传特性的一种操作。
菌种的保藏对于科学研究和应用具有重要意义，因为菌株的失活或突变可能导致实验结果的不准确性或应用价值的丧失。
本文将介绍几种常见的菌种保藏方法。
一、冷冻保藏法冷冻保藏法是将菌株保存在低温条件下，以减缓菌株的代谢和生长速率，达到延长其存活时间的目的。
常见的冷冻保藏方法有两种：液氮冷冻和低温冷冻。
1. 液氮冷冻：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，然后分装至冷冻管中，迅速将冷冻管浸入液氮中进行冷冻保存。
液氮的温度极低，可以有效地抑制菌株的代谢活动，保证其长期存活。
2. 低温冷冻：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，然后分装至冷冻管中，置于-80℃的低温冰箱中保存。
相比于液氮冷冻，低温冷冻的操作更加简便，且可以在普通实验室条件下进行。
二、干燥保藏法干燥保藏法是将菌株保存在无水条件下，通过降低菌株周围环境的水分含量，抑制菌株的代谢活动，并防止细胞内酶的活性。
常见的干燥保藏方法有两种：冷冻干燥和真空干燥。
1. 冷冻干燥：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的保护剂，然后在真空下进行冷冻干燥。
冷冻干燥的过程中，通过降低温度和压力，使水分直接从固态转变为气态，从而达到保护菌株的目的。
2. 真空干燥：将培养基中的菌株悬浮液均匀涂布在无菌的滤纸或硅胶膜上，然后将其置于真空干燥器中进行真空干燥。
真空干燥的过程中，通过降低压力，将水分从菌株周围环境中蒸发掉，使菌株处于无水状态。
三、液氮冷冻法液氮冷冻法是将菌株保存在液氮中的一种方法。
液氮的温度极低，可以有效地抑制菌株的代谢活动，保证其长期存活。
该方法适用于多种菌株的保藏，包括细菌、真菌和酵母等。
液氮冷冻法的操作步骤如下：1. 将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，以增加菌株的抗冻性。
2. 将菌株悬浮液分装至冷冻管中，每支约0.5-1.0 mL，然后封闭冷冻管。
菌种保藏方法
菌种保藏方法菌种保藏方法菌种保藏是指将某一种菌株或菌种保存在一定的条件下，以便长期保存并用于研究或应用。
菌种保藏的目的是为了防止菌株的变异和降低其性状的丧失，以便在需要的时候能够重新培养出相同或相似的菌株。
下面将介绍几种常见的菌种保藏方法。
一、冷冻保藏法冷冻保藏法是将菌种保存在低温条件下，一般为-80℃或液氮温度。
这种方法比较简单，操作方便，且保存效果较好。
首先，将菌株从培养基上接种到含有10%-15%甘油的液体培养基中，然后用无菌冻存管将菌液分装好，经过冷冻机或液氮罐进行冷冻保存。
在需要使用菌株时，只需将冻存管快速解冻并转移到新的培养基上即可。
二、真菌分生孢子的枯燥保存法真菌的分生孢子经过枯燥保存后，能够在相对湿度较低的条件下长期保存。
这种保存方法主要适用于真菌，特别是产生分生孢子的真菌。
首先，从培养基上接种分生孢子，培养出菌丝后进行枯燥处理。
一般采用短暂的枯燥处理，依靠菌丝中的水分进行干燥。
然后将枯燥的菌丝放置在无菌瓶中密封保存，放在相对湿度低于30%、温度介于10℃和25℃之间的干燥环境中。
三、气干法气干法是将菌株保存在干燥剂中，以保持菌株的活力。
这种方法适用于较短时间的菌种保存。
首先，将菌株从培养基上接种到含有干燥剂的培养基中，待培养基中的水分被干燥剂吸收后，将菌株封存在密封袋或密封瓶中。
干燥剂一般选择无水硅胶或干燥剂片，确保环境的干燥程度。
四、冷藏法冷藏法是将菌株保存在低温条件下，一般为4℃至10℃之间。
这种方法适用于细菌、酵母和一些真菌的保存。
菌株保存在含有15%-30%甘油的稀释培养基中，然后在低温条件下保存。
需要使用时，只需从低温保存中取出，接种到新的培养基中即可。
总结起来，菌种保藏是一项重要的科研工作，不同的菌种可以采用不同的保藏方法。
冷冻保藏法适用于大部分微生物的保存，真菌的分生孢子的枯燥保存法适用于真菌的保存，气干法适用于较短时间的保存，冷藏法适用于细菌、酵母和一些真菌的保存。
菌种冷冻保藏
7.4采用酒精喷灯进行封管时，烧的温度要适宜。封管后不要立即放在台面上，以防受冷撕裂。
附图：泪滴型安瓿管长颈毛细玻璃管
多头岐管
附：1、冷冻保藏改进方法（一）
因真空冷冻干燥器价格比较昂贵，通常抗生素生产厂都采用自制的简单易行办法，可达到同样的目的。即：
6.2制备脱脂乳
取市售新鲜、清洁、无抗生素污染的原牛奶300ml煮沸，在5000 r/min下离心10分钟，除去上层奶皮、油脂，吸取下层奶液，经脱脂棉过滤，如此反复3次脱去脂肪，然后分装入两个250 ml三角瓶中，加棉塞并用牛皮纸包头、扎牢，在115℃25min高压蒸汽灭菌，冷却后做无菌试验，4℃冰箱保存备用。
6.6预冻
因为迅速超低温预冻可保持菌体细胞结构成份原状，利于细菌存活。故将分装好的冷冻管及指示管置于低温冰箱冷冻室-70℃下快速冷冻过夜。无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。也可用液氮。将冷冻管插入冷冻剂，只需冷冻4—5分钟，即可使悬液结冰。也可用液氮预冻。还可用低温冰箱-80℃预冻1～2小时后转入冷冻真空干燥。
由于同时满足菌种保藏三要素，使微生物始终处在低温、干燥、缺氧的条件下，能克服传代、沙土管简单保藏方法的不足，保藏菌种范围广、时间长（保藏期可达数年至十数年）、存活率高、保存过程不易失活和退化等。
3、主要步骤为：
3.1将待保藏菌种的细胞或孢子悬浮于保护剂（如脱脂牛奶）中；
3.2在低温（-45℃以下）下使微生物细胞快速冷冻；
6.7冷冻真空干燥
真空冷冻干燥器有成套的装置出售（长药厂新近成立菌种中心，购有该机）。按其方法操作。冷冻干燥机要先开机预冷30分钟以上，再根据冷冻干燥机的水分蒸发能力，确定一次放入的冷冻管数量。将预冻好的冷冻管及指示管于次日取出迅速放入已预冷的冷冻干燥机的干燥箱内，开动真空泵进行一级真空抽干，待指示管出现由粉红色变全兰色时，再进行二级抽干12h。二级真空干燥既保持菌体细胞干燥度，又避免细胞反复冻结造成保存中菌体死亡，因而能更长期保存菌种，并能提高其存活率，又不会发生菌株的变异
简述菌种保藏的几种方法及条件。
简述菌种保藏的几种方法及条件。
菌种保藏是重要的生物资源的保护和利用过程，其主要方法有：
一、冷冻法。
冰冻法是最常用的保藏菌株的方法，也是目前最理想的保藏方法之一，其主要原理是将活菌体放入冰冻室，温度由常温降至-80℃，使得菌种活动受到抑制，在-80℃的状态下可以长期保存。
二、液氮法。
液氮法是一种依靠低温和高压技术保存菌种的方法，主要是将活菌体置入液氮容器中，使其处于-195℃的极低温状态。
三、干燥法。
干燥法是将活菌体及高浓度营养培养基同时干燥，使其中的水份完全蒸发而获得半干燥的状态，这种状态下可以防止菌种的增殖。
四、水银法。
水银法是一种利用活菌体对水银的耐受性，将活的菌体悬浮在7%的水银中的保存方法。
保藏菌种的条件：
1、环境温度应该控制在0~4℃，并保持温度稳定。
2、控制保藏过程中的湿度，干燥法中的湿度应在10%～15%之间，而冷冻、液氮保藏则要求保证容器中有足够多的液氮，避免菌种因温度过高而复苏。
3、控制光照，避免菌株遭受接触紫外线的伤害、褪色、衰退和增强其致病性等。
4、控制空气中的致病因子；
5、定期检测样品的质量，确保其始终处于较好的保藏状态。
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水产品冷冻保藏方法
水产品冷冻保藏方法1、船冻现在很多海鲜在捕捞后，海鲜鲜活的状态下，在船上立刻进行加工处理，经过低温急冻，最大限度的保证了海鲜的品质，经解冻后，能呈现出鲜活的口感和充分的营养，新鲜感甚至要比那些经过长途运输的活海鲜好。
一般现代的远洋捕捞，都会用“船冻”方式。
比如野生阿根廷红虾的捕捞，就是运用这种冷冻方式。
所以，进口的阿根廷红虾在我国很畅销。
这样你既可吃到野味，又可补充营养。
2、岸冻这是与“船冻”相对的一种冷冻方式，顾名思义，海鲜被捕捞后，在船上通过加冰，使海鲜保持低温，随着捕捞船漂泊返程，等船靠岸后，再将海鲜进行冷冻（在这过程中，已经不能保证海产品的口感和营养了）。
这种冷冻方式，若是远海捕捞，就不能保证海鲜是鲜活的了，返程中有死亡的情况是正常的；若是近海捕捞，海鲜死亡率会低一些。
海鲜上岸后，大型的捕捞公司会对其进行分拣，然后进行冷冻。
当然，岸冻海鲜的品质与船冻海鲜是没法比的。
在船冻和岸冻的基础上，又分为“生冻”、“漂烫”和“熟冻”。
3、生冻生冻，如字面，生海鲜直接低温无冰急冻，大部分鱼类海鲜都可以生冻的哦。
4、熟冻熟冻，即是将捕捞上来的海鲜（多甲壳类海鲜）用海水煮熟，然后迅速低温无冰冷冻。
常见熟冻海鲜有北极虾、北极贝、面包蟹、帝王蟹、龙虾等。
5、漂烫漂烫，是将捕捞上来的海鲜（多甲壳类海鲜）用海水漂烫，即“半熟”，然后迅速低温无冰冷冻，常见漂烫冷冻海鲜有龙虾，贻贝，翡翠螺等。
6、死冻这种冷冻方式实属无奈：一些小型捕捞渔船，由于船上没有先进的冷冻设备，只能通过加冰来保持海鲜的低温状态，加上长时间捕捞海鲜，不能及时返航，可能通过专业运输船来运载海鲜，这过程中很难保持海鲜的鲜活——最常见的带鱼，不过还是挺美味的。
菌种保藏的方法
菌种保藏的方法菌种保藏是一种重要的微生物资源保护方式，对于研究、应用和开发微生物具有重要意义。
以下是几种常见的菌种保藏方法及其操作步骤。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻是一种常用的微生物保藏方法，适用于大多数真菌、细菌和酵母菌。
其主要原理是将菌株保存在低温下，使其生理活动缓慢，以延长菌种的保藏时间。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，常用的保存液有甘油、甘露醇等。
4. 菌种保存：将菌株用保鲜膜包裹，放入保存管中，加入保存液，密封保存管。
5. 冷冻保存：将保存管放入低温冰箱或液氮罐中进行冷冻保存。
二、干燥保藏法干燥保藏法是一种简便、经济的保藏方法，适用于真菌、细菌、放线菌等微生物。
其基本原理是将菌种与干燥剂混合，使其水分含量降低，从而实现微生物的休眠状态。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备干燥剂：根据不同菌株的需要，选择合适的干燥剂，如硅胶、氧化钙等。
4. 菌种混合：将菌株与干燥剂按照一定比例混合均匀。
5. 干燥保存：将混合物均匀地散布在无菌培养基上，置于通风干燥的环境中进行保存。
三、冷冻冻干保存法冷冻冻干保存法是一种较为复杂的菌株保藏方法，适用于难保存的微生物，如厌氧菌、放线菌等。
其主要原理是将菌株在低温下冻结干燥，从而保护微生物的活力。
操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。
2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。
3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，如甘油、甘露醇等。
4. 冷冻过程：将菌株加入保存液中，放入冷冻机冷冻至低温（通常为-80℃）。
5. 冻干过程：将冷冻的菌株经过真空排气、结冰降温等步骤进行冻干处理。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。
恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。
本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。
其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。
该方法具有诸多显著优点。
低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。
低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。
操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。
在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。
常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。
制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。
将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。
在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。
低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。
然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。
二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。
常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。
沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。
该方法具有操作简便、成本低廉的特点。
在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。
甘油冷冻保藏法
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。
也可用没有球部的管状安瓿管。
塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。
（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。
细菌和HYPERLINK "/Search.asp?Field=Title&ClassID=&keyword=酵母" 酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。
一般，细菌要求24—48小时的培养物；HYPERLINK "/Search.asp?Field=Title&ClassID=&keyword=酵母" 酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。
（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。
冷冻保藏的基本原理
冷冻保藏的基本原理
冷冻保藏是指利用低温条件，将食品存储在冷冻状态下，以延长其保鲜期和营养成分的保存。
其基本原理是在低温下降低食品的活性，抑制微生物繁殖和酶的作用，从而降低自然衰老和腐败速度，延长保鲜期。
在冷冻保藏过程中，将食品降至-18℃以下的温度，使其中的水分分子减慢运动速度，从而达到防腐目的。
此外，冷冻还能够减少氧气的含量，维持食品营养成分及风味的相对稳定。
这些都有助于保护食品，延长食品的保质期。
此外，该方法还需要注意选择适当的食品保藏方式。
常见的包括真空包装和密闭容器包装等多种形式。
密闭的包装方式有助于减少食品与外界接触，避免氧化和腐败产生，同时还能够避免冰晶的形成。
冰晶的形成会破坏食品的结构，降低口感和质量。
总的来说，冷冻保藏的基本原理是避免食品的自然衰老和腐败。
利用低温条件降低食品水分子的运动，抑制微生物的繁殖，达到延长保质期的目的。
而不同的食品还需要不同的包装方式，以充分利用这种保鲜方式的优点，避免食品口感等问题的产生。
冻结保藏的原理
冻结保藏的原理冻结保藏是一种保藏物品的方法，通过低温环境下的冷冻处理，将物品中的水分转化为冰，使其在时间的长河中保持其原貌和质量，并延长其保存期限。
其原理主要包括以下几点：1. 低温抑制微生物生长：低温环境下，微生物的代谢活动和繁殖速率都会显著降低，从而减少了与物品接触的细菌、真菌等微生物的生长和繁殖。
这样可以防止微生物引起的腐败和变质现象，保持物品的原始状态。
2. 阻断酶活性：低温可以抑制物品中的酶的活性，延缓或阻止酶引起的化学反应。
酶是介导细胞代谢的重要催化剂，对物质的分解、合成和转化起着关键作用。
冷冻可以降低酶的活跃性，减缓化学反应速率，从而延缓食物、药品等物品的衰变。
3. 降低水分活动：水分是微生物繁殖和物质分解的重要因素，降低水分活动可以减缓微生物的繁殖速度和水解反应的进行。
低温冷冻能够将物品中的水分转化为冰晶，从而减少水分的自由活动性，进一步降低微生物的繁殖速率和化学反应速率。
4. 防止氧化反应：冷冻可以有效减缓氧化反应的进行。
氧化反应是许多食物、化妆品和药物衰变的主要原因，通过将物品冷冻保存，可以减少氧气的接触，并降低氧化反应的速率，保持物品的品质和新鲜度。
5. 冷冻保存方法：冷冻保藏可以采用快冻和慢冻两种方法。
快冻是将物品迅速置于极低温环境中，使其迅速达到低温状态，减少冻结产生的冰晶对物品的损伤。
慢冻是将物品温度逐渐降低，使冰晶逐渐形成，减少冻结产生的冰晶对物品的损伤。
选择适当的冷冻方法和冷冻条件，可以最大限度地保留物品的营养成分和风味。
总之，冻结保藏通过低温环境的创造和控制，抑制微生物生长、酶活性、水分活动以及氧化反应的进行，延长物品的保存期限，保持其原貌和质量。
选择合适的冷冻方法和冷冻条件是实现冻结保藏的关键，从而在时间的长河中保存物品的新鲜和品质。
食用菌菌种保藏的基本方法
食用菌菌种保藏的基本方法食用菌是一类具有高营养价值和药用价值的真菌，其菌种保藏是保证菌种保存和传承的重要手段。
食用菌菌种的保藏可以确保菌株的纯度和可持续利用性，同时也有助于研究和开发新的品种。
食用菌菌种保藏的基本方法有以下几种：1. 冷冻保藏法：将食用菌菌种培养物制备成含有20%-50%的甘油或乙二醇的保存液，然后使用低温冷冻设备将菌种保存在-80°C或更低的温度下。
这种方法适用于大部分食用菌，能够长期保存菌种并保持其活力。
2. 干燥保藏法：将菌种培养物培养于无菌条件下，然后使用高温低湿或低温高湿的方法进行干燥，最后将干燥的菌丝体保存于密封的容器中。
这种方法适用于一些耐干燥的食用菌，如魔芋菌和杂色红菇。
3. 微冻保藏法：将菌种培养物制成菌丝片，然后在无菌条件下冷冻菌丝片，再保存在低温条件下。
这种方法适用于一些不易用液体保存液保存的食用菌菌种，如松茸菌。
4. 低温液氮保藏法：将菌体或菌丝体培养物直接置于液态氮中保存。
液态氮的温度非常低，可以有效防止菌种的老化和突变，但需要特殊的设备和操作技术。
5. 镂空冻干保藏法：将菌种培养物整理成菌丝体块，并利用真空冷冻干燥和低温方式保存。
这种方法适用于一些难以保存的菌种，如鸟肝菌和杜松菌。
在进行食用菌菌种保藏时，还需要注意以下几点：1. 选择纯净的菌种：保藏前要确保菌种的纯度，排除污染物和其他细菌的干扰。
检查菌种是否含有目标菌株，并进行传代培养，确保纯净度。
2. 使用无菌器具：在进行菌种保藏时，使用无菌器具和培养基，避免交叉感染。
保持实验室的无菌环境，防止污染。
3. 标记菌种信息：在保存菌种的容器上标记好菌种的信息，包括菌株编号、保存液配方和保存日期等，避免混淆。
4. 定期检测和传代：定期检测保存的菌种的活力，可以通过接种到适合的培养基上进行观察。
同时，对菌种进行传代培养，保持菌种的活力和纯度。
5. 储存条件的选择：根据不同的菌种特性选择适合的储存条件，包括温度、湿度和光照等。
菌种保藏方法范文
菌种保藏方法范文菌种保藏是指将具有特定遗传性状的菌种保持在一定的条件下存活和保存，以便于后续的研究和利用。
菌种保藏的目的是保持菌种的稳定性、纯度和活力。
下面将对常见的菌种保藏方法进行详细介绍。
1.冷冻保藏法：冷冻保藏法是最常见和常用的菌种保存方法之一、该方法是将菌种在适宜的培养基上生长至适宜的阶段，然后通过添加甘油或其他保护剂来增加菌种的耐冻存活力，并放入低温环境下冷冻保存。
通常使用-20℃或更低的温度进行保存。
这种方法简单易行，成本较低，在短时间内能够保持菌株的复原性很好。
2.干燥保藏法：干燥保藏法又称为脱水保藏法，是将菌种长时间保存于干燥状态中。
先将菌种培养至适宜的生长阶段，然后用无菌方法将菌种制成干燥菌粉，放入干燥瓶中密封保存。
常见的干燥剂有二氧化硅凝胶、无水CaCl2等。
干燥保藏法保存的菌种潜伏期长，比较安全可靠，但复苏的条件较为苛刻。
3.液氮保藏法：液氮保藏法又称为低温保存方法，是将菌种保存在液态氮中。
通过将菌种培养至适宜生长阶段后，将其转接入试管中，用无菌方法加入等体积的冷冻保护剂（例如甘油），放入液氮中保存。
液氮的温度达到-196℃，在这种环境下菌种可以长时间保存，但需要特殊的设备和条件。
4.胶体保藏法：胶体保藏法是将菌种培养至适宜生长阶段，然后将其与无菌明胶混合均匀，制成菌胶球，通过培养基中的各种成分供应菌种的生长和维持菌株的复原性。
这种保藏方法具有较长的复苏潜伏期，并且易于携带和传递，是一种较为理想的保存方法。
5.冷冻干燥保藏法：冷冻干燥保藏法是将菌种通过冷冻干燥的方法进行保存。
首先将菌种培养至适宜生长阶段，然后用无菌方法将菌种在-40℃或更低温度下冷冻干燥，形成冷冻干燥粉末。
这种方法保存的菌种潜伏期长，但复苏条件较为苛刻。
除了以上的常见保存方法，还有一些新兴的菌种保藏方法，例如微柱保存法、冷冻解冻保存法等。
这些方法在不同的实验室和研究领域可能有着不同的适用性和优势。
综上所述，菌种保藏方法有多种多样，每一种方法都有其自身的特点和适用范围。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。
这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。
冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。
在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。
二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。
这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。
常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。
干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。
三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。
在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。
这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。
四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。
这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。
液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。
五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。
这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。
总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。
不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。
在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。
冷冻保藏的概念
冷冻保藏的概念冷冻保藏是指通过将物品或食品存放在低温环境下，以延长其保存期限和保持其质量的一种方法。
冷冻可有效降低细菌和其他微生物活动的速率，从而延长食品的保鲜期，并保持食品的营养价值和口感。
下面将详细介绍冷冻保藏的概念及其相关知识。
首先，冷冻保藏的原理是通过迅速降低物品或食品的温度，将其冷冻成冰晶，从而阻止微生物生长和化学反应的进行。
一般来说，当温度降至0摄氏度以下时，大部分微生物的生长活动会暂停，而将温度降至-18摄氏度以上时，则能够有效杀灭绝大多数细菌和寄生虫卵。
因此，冷冻是食品保鲜的一种非常有效的方法。
其次，冷冻保藏对于食品的保存具有众多优点。
首先，冷冻能够延长食品的保存期限，使食品能够在较长时间内保持其新鲜度、口感和营养价值，使消费者能够在任何时候都能够享用美味的食品。
其次，冷冻能够减少浪费。
在大部分地区，冷冻食品是食品超市的常见商品，消费者购买后可以随时食用，无须在短时间内消耗掉，从而减少了食物的浪费。
此外，冷冻还能够提高食品质量，保持食品的色泽、口感和风味，提供更好的食用体验。
然而，冷冻保藏也有其局限性和注意事项。
首先，冷冻并不是一种消灭细菌和微生物的方法，而是将其活动速率降低。
因此，在解冻和食用冷冻食品时，需要格外注意食品的卫生安全，避免潜在的细菌感染风险。
其次，冷冻过程中，一些食品的质地和口感容易受到影响。
比如，某些水果和蔬菜在冷冻过程中容易产生结冰、软化和变色等变化，影响其食用质量。
因此，在选购和使用冷冻食品时，需要仔细阅读产品标签和使用说明，选择适合的冷冻产品和使用方法。
在实际应用中，冷冻保藏广泛应用于食品行业和医药行业。
在食品行业，冷冻是常见的食品加工和保存方法，包括冻肉、冷冻蔬菜、冷冻水果、冷冻海鲜等。
这些冷冻食品可以长时间保存，方便消费者随时食用。
在医药行业，冷冻保藏在医药制造、储存和运输过程中起着重要作用。
一些生物制品、药物原料和试剂需要在低温环境下保存，以延长其有效期限和保持其质量。
食品保藏技术之冷冻保藏
食品保藏技术之冷冻保藏冷冻保藏是目前食品工业中应用最普遍的食品保藏方法。
冷冻保藏也称低温保藏，即降低食品所处的贮藏温度，维持低温水平或冻结状态，抑制微生物生长繁殖，延缓食品中的生化反应，抑制酶的活力，达到保藏食品的方法。
1.原理利用水分冻结抑制微生物的生长繁殖，延缓食品及微生物中的各种生化反应，抑制各种酶类的活性，以达到保藏食品的目的。
通常在IO℃以下，大多数微生物难以繁殖，到-10℃时几乎停止生长。
而大多数酶的适宜作用温度在30～40℃，如果将温度控制在18℃以下，酶的活性将受到很大程度的抑制，从而延缓食品的腐败和变质。
2.方法根据保藏时低温的程度分为冷却保藏(0～10℃)和冻结保藏(冻结时-23℃，贮藏时-18％)。
(1)冷却保藏：将食品的温度下降到食品冻结点以上的某一适宜温度，保持食品中的水分不结冰，降低酶和微生物活性的储藏方法。
新鲜蔬菜水果的储藏一般采用冷却保藏。
冷却方式较多，常用的有空气冷却法、冷水冷却法和真空冷却法等。
空气冷却可在冷藏库的冷却间或过堂内进行，风速约0.5m／s，将果蔬冷却至冷藏温度后入库冷藏；冷水冷却是利用专用设备对果蔬进行喷淋或浸渍，冷水温度一般0～3℃，此法冷却速度快、干耗小，适合于冷却根类菜和较硬的果蔬；真空冷却多用于表面积大的叶类蔬菜，冷却温度一般为2～3℃。
最常用的食品冷却温度是4～8℃，若冷却处理妥当，在一定的贮存期内，对食品风味、质地、营养价值等的不良影响很小，比热处理、辐照等贮藏方面带来的不良影响要小。
但是，对大多数食品来说，冷藏不能像热处理或冷冻那样长期有效地阻止食品腐败变质，而只能延缓食品的变质速度，是一种效果较弱的保藏技术，只适用于短期贮藏，一般贮藏期为几天到几周。
(2)冻结保藏指将保藏温度降至冰点以下，使水部分或全部冻结的储藏方法。
冻结保藏有缓冻冷藏法和速冻冷藏法两种类型。
缓冻冷藏法指食品在绝热的低温室内并在静止的空气中进行冷冻的方法，其冻结速度慢，质量低于速冻食品。
酵母菌的冷冻保藏方法
酵母菌的冷冻保藏方法
酵母菌的冷冻保藏方法可以分为以下几个步骤：
1. 选择合适的培养基：酵母菌的冷冻保存需要使用特定的培养基。
一般常用的培养基有YEPD（yeast extract peptone dextrose），YPD（yeast extract peptone glucose）等。
2. 准备冷冻培养基：根据所使用的培养基配方准备适量的冷冻培养基，并添加适量的甘油（最常用浓度为20%）作为保护剂。
3. 收集酵母菌：从已培养的酵母菌液体培养物或固体培养物中取出适量的酵母菌。
4. 制备冻存管：在已准备好的冷冻培养基中加入酵母菌，混匀后加入冻存管中。
每个冻存管一般加入适量的酵母菌液体培养物（一般为1-2 mL），然后密封。
5. 冷冻：将密封的冻存管放入低温冰箱或液氮罐中冷冻保存。
温度一般可以设置为-80℃或更低的温度。
6. 保存：将冷冻保存的酵母菌定期检查，并在需要时重新接种到新的培养基上进行培养。
需要注意的是，冷冻保存的酵母菌应该尽可能快地进行解冻，并立即接种到适当的培养基上进行培养，以确保存活率。
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甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。
也可用没有球部的管状安瓿管。
塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。
（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。
细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。
一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。
（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。
（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。
将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。
将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4-5分钟，即可使悬液结冰。
（5）真空干燥为在真空干燥时使样品保持冻结状态，需准备冷冻槽，槽内放碎冰块与食盐，混合均匀，可冷至-15℃。
装置仪器，安瓿管放入冷冻槽中的干燥瓶内。
抽气一般若在30分钟内能达到93.3Pa（0.7mmHg）真空度时，则干燥物不致熔化，以后再继续抽气，几小时内，肉眼可观察到被干燥物已趋干燥，一般抽到真空度26.7Pa （0.2mmHg），保持压力6-8小时即可。
（6）封口抽真空干燥后，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管继续抽气，约10分钟即可达到26.7Pa（0.2mmHg）。
于真空状态下，以煤气喷灯的细火焰在安瓿管颈中央进行封口。
封口以后，保存于冰箱或室温暗处。
此法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，即使对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存。
适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年，但设备和操作都比较复杂。
滤纸保藏法（1）将滤纸剪成0.5×1.2cm的小条，装入0．6×8cm的安瓿管中，每管1-2张，塞以棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟。
（2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。
（3）取灭菌脱脂牛乳1-2ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。
（4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。
（5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。
（6）将棉花塞入管内，用火焰熔封，保存于低温下。
（7）需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。
细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14-17年之久。
此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。
滤纸保藏法（1）将滤纸剪成0.5×1.2cm的小条，装入0．6×8cm的安瓿管中，每管1-2张，塞以棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟。
（2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。
（3）取灭菌脱脂牛乳1-2ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。
（4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。
（5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。
（6）将棉花塞入管内，用火焰熔封，保存于低温下。
（7）需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。
细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14-17年之久。
此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。
沙土保藏法（1）取河沙加入10％稀盐酸，加热煮沸30分钟，以去除其中的有机质。
（2）倒去酸水，用自来水冲洗至中性。
（3）烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。
（4）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。
（5）烘干，碾碎，通过100目筛子过筛，以去除粗颗粒。
（6）按一份黄土、三份沙的比例（或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）掺合均匀，装入10×100mm的小试管或安瓿管中，每管装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌，烘干。
（7）抽样进行无菌检查，每10支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养48小时，若仍有杂菌，则需全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。
（8）选择培养成熟的（一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好）优良菌种，以无菌水洗下，制成孢子悬液。
（9）于每支沙土管中加入约0.5ml（一般以刚刚使沙土润湿为宜）孢子悬液，以接种针拌匀。
（10）放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分，抽干时间越短越好，务使在12小时内抽干。
（11）每10支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长，如出现杂菌或菌落数很少或根本不长，则说明制作的沙土管有问题，尚须进一步抽样检查。
（12）若经检查没有问题，用火焰熔封管口，放冰箱或室内干燥处保存。
每半年检查一次活力和杂菌情况。
（13）需要使用菌种，复活培养时，取沙土少许移入液体培养基内，置温箱中培养。
此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广，效果亦好，但应用于营养细胞效果不佳。
斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2-8℃的冰箱中保藏。
保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2-4个月，移种一次。
酵母菌两个月，移种一次。
细菌最好每月移种一次。
此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。
缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。
液氮冷冻保藏法（1）准备安瓿管用于液氮保藏的安瓿管，要求能耐受温度突然变化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1.2mm 液体的。
（2）加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时，则将空安瓿管塞上棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌15分钟：若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓿管内预先加入保护剂如10％的甘油蒸馏水溶液或10％二甲亚砜蒸馏水溶液，加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限，而后再用1.05kg/cm2>，121.3℃灭菌15分钟。
（3）接入菌种将菌种用10％的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液，装入已灭菌的安瓿管；霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块，放入含有保护剂的安瓿管内，然后用火焰熔封。
浸入水中检查有无漏洞。
（4）冻结再将已封口的安瓿管以每分钟下降1℃的慢速冻结至-30℃。
若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。
（5）保藏经冻结至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。
液氮保藏器内的气相为-150℃，液态氮内为-196℃。
（6）恢复培养保藏的菌种需要用时，将安瓿管取出，立即放入38-40℃的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。
再打开安瓿管，将内容物移入适宜的培养基上培养。
此法除适宜于一般微生物的保藏外，对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。
缺点是需要特殊设备。
液体石蜡保藏法（1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。
（2）将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。
（3）用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝。
（4）将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）。
此法实用而效果好。
霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1-2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内，亦可保藏3个月之久。
此法的优点是制作简单，不需特殊设备，且不需经常移种。
缺点是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。
从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意。