分子克隆工具酶部分答案
分子克隆工具酶部分答案
分子克隆工具酶答案（选择和判断）题1关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。
B. 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶题目2Ⅱ型限制性内切核酸酶：( )D. 限制性识别非甲基化的核苷酸序列题目3Ⅲ型限制性内切核酸酶：( )E. 不同亚基的识别位点甲基化和限制活性相互排斥：MS亚基促使甲基化，R亚基促使限制题目4限制性片段长度多态性(RFLP)是：( )E. 物种中的两个个体限制性图谱间的差别题目5下面有关限制酶的叙述哪些是不正确的?( )E. 限制酶是外切酶而不是内切酶题目6因研究λ噬菌体的限制与修饰现象的本质而获得诺贝尔奖的科学家是：( )C. WArber题目7第一个被分离的Ⅱ类酶是：( )A. HindⅡ题目8双链DNA中一段自我互补的序列被称为回文序列，这种序列不具有下列特征：( )B. 可增强基因的表达题目9在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( )B. 酶量酶量题目10在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2＋离子?( )A. EGTA题目11在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( )C. Bal 31核酸酶题目12限制性内切核酸酶可以特异性地识别：( )B. 双链DNA的特定碱基序列题目13限制性内切核酸酶的星号活性是指：( )B. 在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。
题目14下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( )C. 酶切反应时酶浓度过低题目15关于回文序列，下列各项中，( )是不正确的B. 是高度重复序列题目16关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当D. 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶题目17T4DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E．coli中分离的，这种连接酶( ) B. 既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接题目18DNA连接酶在体内的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，( )A. 将双链DNA分子中的5，磷酸基团同3，-OH末端重新形成磷酸二酯键题目19在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( )A. T7DNA聚合酶题目20末端转移酶是合成酶类，( )D. 在C0 2＋的存在下，可以在3’突出末端延长DNA链题目21在基因工程中，可用碱性磷酸酶( )B. 防止DNA的自身环化题目22从E．coli中分离的连接酶：( )C. 需要NAD作辅助因子题目23下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性C. λ核酸外切酶题目24下列哪一种酶作用时需要引物? ( )D. 反转录酶题目25S1核酸酶的功能是( )B. 以上有两项是正确的题目26Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了( )的活性C. 5’-3’外切酶题目27用Bal31核酸酶作系列缺失突变时，( )A. 需要Ca 2＋作辅助因子题目28在cDNA技术中，所形成的发夹环可用( )A. 用S1核酸酶切除题目29可以在切口部位起作用的酶是( )A. S1核酸酶题目30T4RNA连接酶：( )A.作用时不需要模板题目31限制性内切核酸酶在DNA中的识别／切割位点的二级／三级结构也影响酶切效率。
第二章：分子克隆的工具酶
加几个和加哪几个的问题
/techinfo/re/restrdigpcrii.htm
比如设计引物5'端导入酶切位点的时候, 一般导入3–4 个;导入的碱基, 最好是A/G/C/T比较平均,并能部分平衡 整个引物的GC%和Tm;G/C为主,可以使引物5'形成所谓GC Clamp(有的软件,认为这样好). 别的就没什么了.
1. 现象
* 1975 EcoRI切割 phage (Lambda)中的5个 位点，并不是随机的，靠近右端的位点， 比分子中间的位点切割快10倍。
* 有4个 SacII位点 三个在中央 一个在右臂（Right-terminus）
at 40,386 中央三个快50倍
NEB检测了许多限制酶，有许多酶 的差异在10倍的范围上，但有许多 酶有较大的差异, 如
三、限制酶产生的末端种类 1.粘性末端
１）３’-端突起， ２）５’-端突起，个数为２或４个核苷酸
2. 平末端
SmaI 5’-CCCGGG-3’ 3’-GGGCCC-5’
5’-CCC 3’-GGG
GGG-3’ CCC-5’
在对称轴上同时切割DNA的两条链
HaeIII
GG↓CC
EcoRV GAT↓ATC
双酶切 PCR产物
AccI HindIII
EcoRI
CCGGTCGACCGG
2hr 20hr 00
CAAGCTTG CCAAGCTTGG CCCAAGCTTGGG
00 00 10% 75%
GGAATTCC
>90 >90
PstI
GCTGCAGC TGCACTGCAGTGCA
AACTGCAG(N) 14 CTGCAG(N) 20
基因工程主要知识点整理
第一章基因克隆基因工程的基本技术有哪些？答：对核算分子的分离、纯化、回收、分析和检测、切割、连接和修饰，以及序列测定、诱变、扩增和转移等基因操作技术。
构建基因文库一般使用什么作为载体？答：一般使用大肠杆菌作为载体克隆与亚克隆？答：克隆在一等程度上等同于基因的分离。
亚克隆是将目的基因所对应的小段的DNA片段找出来。
PCR对基因克隆有什么作用？答：现在基因克隆可以不用通过构建基因文库来实现，可以通过理性设计和PCR扩增获得大多数所需要的基因。
但是尽管如此，在不知道基因序列的情况下，如相互作用的基因，表达调控因子，新基因等，还需要构建基因文库来进行基因克隆。
第二章分子克隆工具酶限制与修饰系统？答：限制系统可以排除外来DNA。
限制的作用实际就是降解外源DNA，维护宿主稳定的保护机制。
甲基化是常见的修饰作用，宿主通过甲基化来达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的作用。
并且能够保证自身的DNA不被降解。
使用最广泛的限制酶？答：EcoR I是应用最广泛的限制性内切酶限制性内切酶的命名？答：宿主属名第一字母、种名头两个字母、菌株号+序列号。
如：HindIII限制与修饰系统分类？答：至少可分为3类。
II类所占比例最大，其酶分子为内切酶与甲基化分子不在一起，识别位点为4-6bp的回文序列，切割位点为识别位点中或者靠近识别位点。
其限制反应与甲基化反应是分开的反应。
不需要ATP的参与。
限制酶识别的序列长度？结构？答：一般为4-6个bp，即每256和每4096个碱基中存在一个识别位点。
回文序列，不对称序列，多种不同序列，间断对称序列限制酶产生的末端？答：1、黏末端2、平末端3、非对称突出末端什么是同裂酶？分类？答：识别相同序列的限制酶称为同裂酶。
但他们的切割位点有可能不同。
分为：1、同位同切酶2、同位异切酶3、同工多位酶4、其他限制性内切酶的作用是什么？它的反酶是什么？答：什么是同尾酶？答：许多不同的限制酶切割DNA产生的末端是相通的，切实对称的，即他们可产生相同的黏性突出末端。
第二章 (用)分子克隆工具酶
W=A or T S=C or G
6：EcoRI HindIII
G AATTC A AGCTT
>6 Not I
GC GGCCGC 8
BbvCI CC TCAGC
7
PpuMI RG GWCCY 7
2.结构 ① 回文对称（旋转镜像对称） DNA两条链的对称位置。
切割位点在
EcoRI
GAATTC CTTAAG
化酶
酶
分子不在一起
4-6bp, 大多数 5-7bp 非对称 为回文对称结 构
在识别位点中 在识别位点下 或靠近识别位 游 24-26bp 点
分开的反应 同时竞争
限制作用是否 Yes
No
Yes
需用 ATP
类型II(type II)占93%
识别回文序列(palindromic sequence),
在回文序列内部或附近切割,产生带3’-OH和
•全部辅音按字母读,如pstⅠ
限制性酶和修饰酶的数量
早前上是限制性酶加R，是修饰酶加M,且菌株 号和序号小写 1968年 下半年 615R 98M 1998年 10000细菌 古细菌
3000种酶 200多特异性 到2006年2月为止,共发现3773种限制酶,810种 甲基化酶
到2011年？（查）
三、限制性核酸内切酶的类型
5’-P基团的DNA产物 需Mg2+,相应的修饰酶只
需SAM。
• EcoRI
GAATTC CTTAAG
识别序列(recongnition sequence)主 要为4-6bp,或更长且呈二重对称的特殊序 列。
但有少数酶识别更长的序列或简并序 列(degenerate sequence),切割位置因酶 而异,有些是隔开的。
分子克隆中常用的四种工具酶及其应用
分子克隆中常用的四种工具酶及其应用分子克隆是利用分子生物学技术对目标DNA进行扩增及克隆的过程。
在分子克隆的过程中，常常需要使用许多酶类工具来完成不同的任务。
以下介绍了分子克隆过程中最常用的四种酶类工具及其应用。
1. 限制性内切酶限制性内切酶（Restriction endonuclease）又称限制酶，是一类可特异性切割DNA特定序列的酶。
它可以在DNA的特定位置切割成不同的碎片，而不会破坏DNA的结构。
因此，限制酶被广泛应用于DNA的纯化、分析和重组等领域。
在分子克隆中，限制酶通常用于切割DNA的特定序列，以获得所需的DNA片段。
同时，也可以用于制备载体DNA的端部修饰，方便插入外来DNA片段。
此外，限制酶还可以用于分析DNA序列的变异和同源性等特征。
2. DNA连接酶DNA连接酶（DNA ligase）是一种催化DNA连结软帽酶，用于连接具有互补末端的DNA片段。
连接酶广泛应用于DNA重组、引物连接、克隆和测序等领域。
在分子克隆中，DNA连接酶通常使用于将外来DNA片段连接到载体 DNA 上。
此外，为了克隆具有完整DNA序列的目标基因，连接酶还可以用于连接PCR扩增出来的目标DNA序列。
3. PCR酶聚合酶链反应（Polymerase chain reaction, PCR）是一种快速、有效、敏感的DNA扩增技术。
在PCR过程中，通过PCR酶催化下的DNA扩增反应，能够在很短的时间内扩增目标DNA的数量。
在分子克隆中，PCR酶通常用于扩增目标DNA片段。
利用PCR技术，可以选择性增加目标DNA的数量并在容易处理的基本DNA片段之间产生特定的限制酶切断部位，为后续分子克隆实验提供方便。
4. 接头酶接头酶（T4 DNA ligase）是一种针对DNA单链断裂或缺口进行修复和连接的酶。
在分子克隆中，接头酶主要用于将外来DNA片段和载体DNA粘到一起。
在分子克隆的过程中，外来DNA片段和载体DNA之间通常存在一些不兼容的末端或过于短的重叠部分。
级五年制本科《分子生物学》考试B卷
卷1．反式作用因子的结构域包括 、 、 。
2．顺式作用元件包括 、 、 。
3．II 型限制酶切割产生的两种切口是 和 。
4．理想载体应有多克隆位点，供 ；必须有自身的复制子， 才能 。
5．DNA 分子体外连接的方法有 、 、 和 。
6．探针标记物分为 和 两种。
7．核酸杂交中，检测细胞或组织中的核酸要用 ；检测固定在膜上，未经分离的DNA 分子要用 。
8．PCR 的每一轮循环均需经过 、 和 三步。
9．列出四种癌基因家族 、 、 和 。
10．mRNA 相对定量分析常用的方法为 和 。
11．基因治疗的主要策略有 、 和 三种。
二、单项选择题（每题1分，共30分）1.关于基因的描述,错误的是:( ) A.基因是含有编码RNA 或肽链的信息单位C.真核结构基因是断裂基因D.基因结构中不含有调控序列E.基因片段可以是DNA,也可以是RNA2.启动子是( )A.mRNA开始被翻译的序列B.开始转录生成mRNA的DNA序列C.RNA聚合酶识别和结合的DNA序列D.阻遏蛋白结合DNA的部位E.产生阻遏物的基因3．顺式作用元件不包括（）A．TA TA盒B．CAAT盒C．GC盒D．沉默子E．以上都不是4．真核基因的结构特点，错误的是（）A．真核基因组结构庞大B．转录产物是多顺反子C．含大量重复序列D．真核结构基因是断裂基因E．90%左右的序列为非编码序列5．基因表达过程不包括（）A．DNA甲基化B．转录C．翻译D．RNA剪切E．RNA复制6.分子克隆技术中，除下列何种酶外，均为常用的工具酶（）A.逆转录酶B.DNA连接酶C.末端转移酶D.拓扑异构酶E.限制性核酸内切酶7.COS位点存在于( )A.pBR322分子内B.pUC系列载体分子内C.λ噬菌体分子内D.病毒载体分子内E.YAC分子内8.关于SD序列，错误的是（）A.存在于原核生物细胞内B.是1974年Shine和Dalgarno发现的C.是位于mRNA中AUG上游约3—11bP的富含嘌呤的序列D.存在于真核细胞内E.是mRNA与30S核糖体亚基之间的识别与结合序列9.对于cDNA文库,下列叙述中错误的是:A.从cDNA文库中可筛选得到真核基因B.cDNA文库是细胞总mRNA的克隆,其中各个克隆所含的外源DNA的片段是相同的C.cDNA文库只包含表达蛋白质或多肽的基因D.特异性探针可从cDNA文库中得到E.cDNA文库中某一克隆的扩增即是特异的cDNA克隆10．抑癌基因可（）A．促进细胞生长与增殖B．抑制细胞分化和成熟C．促进细胞凋亡D．活化时可诱导肿瘤发生E．正常组织中不表达11．原癌基因活化的机制，错误的是（）A．获得启动子或增强子B．基因易位C．原癌基因的甲基化修饰D．原癌基因扩增E．原癌基因点突变12．Rb基因，错误的是（）A．是一种抑癌基因B．是视网膜母细胞瘤基因C．表达产物可促进细胞分化，抑制细胞增殖D．最初发现于视网膜母细胞瘤中E．该基因活化可致视网膜母细胞瘤13．P53基因的作用错误的是（）A．编码P53蛋白是一种核内磷酸化蛋白B．可识别细胞内DNA的损伤，并参与修复过程C．可促进细胞生长、增殖、分化D．可促进DNA损伤的细胞凋亡E．可抑制肿瘤发生14．下列哪项不属于基因诊断的范畴（）A．检测遗传病基因的结构B．检测病原体基因的结构C．检测肿瘤相关基因D．检测基因表达水平E．检测DNA的合成和分解状况15．对基因诊断，下列概念中错误的是（）A.是病因诊断，有较强的针对性B.只能检测处于活化状态的基因。
分子生物学试卷(含答案)
分子生物学试卷姓名：__________ 考试时间：_______ ___一、填空题，根据题意，将正确答案补充完整(本大题满分20分,每小题2分)1. 反式作用因子可划分为( )、组织特异性转录因子和( )三类。
2. 分子克隆中常用的工具酶有( )、( )、( )、( )。
3. 常用的核酸探针包括( )、( )和( )。
4. 限制性核酸内切酶的作用特点是识别位点的DNA序列呈二重旋转对称，即具有( )、切割DNA均产生含( )和3'-羟基的末端、错位切割产生具有5'-或3'-突出的粘性末端；而沿对称轴切割双链DNA产生平头末端，也称( )、少数不同的限制酶可识别和切割相同的( )。
5. 顺式作用元件按功能可划分为( )、( )、( )和( )。
6. 影响PCR的因素有( )、( )、耐热DNA聚合酶活性和用量、( )、( )、PH、温度、( )。
7. 原核细胞中各种RNA是催化一种酶催化( )种RNA生成的，而真核细胞基因的转录分别由( )种RNA聚合酶催化，其中rRNA基因由( )转录，hnRNA基因由( )转录，各类小分子量RNA则是( )的产物。
8. 体外重组常用方法有( )、平齐末端连接法、( )、( )和适配子连接法。
9. DNA切除修复需要的酶有( )、 ( )、( )。
10. PCR技术的基本过程是( )、( )、( )。
二、判断题，以下各题只有对错两个选项(本大题满分10分,每小题1分)1. Km值是酶的特性常数之一，与酶的浓度、pH、离子强度等条件或因素无关。
( )2. 有两个核酸制剂A和B,A的A250/A280=2.0,B的A250/A280=1.5,因此可判定制剂A的纯度比制剂B的要高。
( )3. 卫星DNA是一类高度重复序列，通常由串联重复序列组成。
( )4. 目前已知的G蛋白都是由α和βγ亚基组成的。
( )5. 生物膜中脂质的流动性受胆固醇含量的影响。
三四章分子克隆载体---答案_完_
三四章分⼦克隆载体---答案_完_第三章分⼦克隆载体（Molecular cloning vectors）⼀、名词解析1.质粒：质粒是染⾊体外的遗传因⼦，能进⾏⾃我复制（但依赖于宿主编码的酶和蛋⽩质）；⼤多数为超螺旋的双链共价闭合环状DNA分⼦（covalently closed circle , cccDNA），少数为线性；⼤⼩⼀般为1～200Kb，有的更⼤。
2.质粒拷贝数：质粒拷贝数(plasmid copy numbers)是指细胞中单⼀质粒的份数同染⾊体数之⽐值,常⽤质粒数/每染⾊体来表⽰。
不同的质粒在宿主细胞中的拷贝数不同。
3.质粒的不相容性：两个质粒在同⼀宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第⼆个质粒导⼊后，在不涉及DNA 限制系统时出现的现象。
不相容的质粒⼀般都利⽤同⼀复制系统，从⽽导致不能共存于同⼀宿主中。
4.质粒的转移性：质粒具转移性。
它是指在⾃然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作⽤转移到新宿主内。
它需要移动基因 mob ，转移基因 tra ，顺式因⼦ bom 及其内部的转移缺⼝位点 nic。
5.穿梭质粒：既能在真核细胞中繁殖⼜能在原核细胞中繁殖的载体。
这类载体必须既有细菌的复制原点或质粒的复制原点，⼜含有真核⽣物的复制原点，还具备酶切位点和合适的筛选指标。
它⽤来转化细菌，⼜可以⽤于转化真核细胞。
6.α-互补：α-互补是指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶（β -galactosidase ，由 1024 个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。
α-互补是基于在两个不同的缺陷β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补⽽建⽴的7.温和噬菌体：既能进⼊溶菌⽣命周期⼜能进⼊溶源⽣命周期的噬菌体。
8.溶源性细菌：具有⼀套完整的噬菌体基因组的细菌叫溶源性细菌。
9.整合：如果噬菌体的DNA是被包容在寄主细菌染⾊体DNA中，便叫做已整合的噬菌体DNA。
医学细胞与分子生物学习题库标准答案
医学细胞与分子生物学习题库标准答案一、名词解释：1．高度重复基因：在真核生物细胞基因组中重复出现可达106次以上的DNA序列，称为高度重复序列基因或高度重复序列DNA。
2．断裂基因：真核生物大部分基因含有内含子，基因是不连续的，故称断裂基因。
3．基因组：细胞或生物体的整套(单倍体)遗传物质，称为基因组。
基因组的大小用全部DNA的碱基对总数表示。
4．基因：是核酸分子中遗传信息的基本单位，是指RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。
现代分子生物学的基因概念是合成有功能的蛋白质或RNA所必需的全部DNA序列（除部分病毒RNA），即一个基因不仅包括编码蛋白质或RNA的核酸序列，还应包括为保证转录所必需的调控序列。
5．微卫星DNA：6．基因文库：是指含有某种生物体（或组织、细胞）全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体。
7．内含子：真核生物DNA分子中插入外显子之间的非编码序列。
8．外显子：真核生物DNA分子中编码蛋白质的序列。
9．基因表达的调控：机体的各种细胞中含有相同的遗传信息(相同的结构基因)，但并非在所有细胞中同时表达，而必须根据机体的不同发育阶段、不同的组织细胞及不同的功能状态，选择性、程序性地表达特定数量的特定基因，这就叫基因表达的调控。
10．卫星DNA：是出现在非编码区的串联重复序列。
11．基因表达：是指原核生物和真核生物基因组中特定的结构基因所携带的遗传信息，经过转录、翻译等一系列过程，合成具有特定的生物学功能的各种蛋白质。
表现出特定的生物学效应的全过程。
12．增强子：指位于启动子上游或下游并通过启动子增强邻近基因转录效率的DNA 顺序，增强子本身不具备启动子活性。
13．顺式作用元件：指某些能影响基因表达但不编码蛋白质和RNA的DNA序列，按照功能分为启动子、增强子、终止子、沉默子和衰减子等。
14．SD序列：SD序列是与细菌16S rRNA 3，端互补的序列。
原核生物在起始密码AUG上游方向4-13个碱基之间有一段富含嘌呤的序列，其一致序列为AGGAGG，称为SD序列。
重庆大学考研分子生物学题库+答案
高级分子生物学1.试述利用基因工程的技术调控基因表达的主要方法原位杂交技术原位杂交(In Situ Hybridization,ISH)是用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织、细胞、间期核及染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。
通常可以分为两大类：1、RNA原位杂交：用放射性或非放射性(如地高辛、生物素等)标记的特异性探针与被固定的组织切片反应，若细胞中存在与探针互补的mRNA分子，两者杂交产生双链RNA，就可以通过检测放射性标记或经酶促免疫显色，对该基因的表达产物在细胞水平上作出定性定量分析；2、荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)：首先对于寡核苷酸探针做特殊修饰和标记，然后用原位杂交法与靶染色体或DNA上特定的序列结合，再通过与荧光素分子相偶联的单克隆抗体来确定该DNA序列在染色体的位置。
定点突变技术定点突变是重组DNA进化的基础，该方法通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列，常用于研究某个氨基酸残基对蛋白质的结构、催化活性以及结合配体能力的影响，也可用于改造DNA调控元件特征序列、修饰表达载体、引入新的酶切位点等。
RNAi技术RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA，从而阻断体内靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。
其过程一般为：1、在Dicer的参与下，细胞中的双链RNA首先被降解形成21-25个核苷酸的小片段双链RNA(siRNA)；2、siRNA中的反义链指导合成一种被称为RNA诱导的沉默复合体(RISC)的核蛋白体；3、RISC再介导切割目的mRNA分子中与siRNA反义链互补的区域，从而实现干扰基因表达的功能。
2.论述原核生物和真核生物基因表达调控的异同答：1、真核生物基因组大,染色体数量多,且结构复杂,存在基因家族和断裂基因；原核生物基因组小,染色体数量少,结构简单,有重叠基因和操纵子结构，基因表达调控可以在复制、扩增、基因激活、转录、转录后、翻译和翻译后等多级水平上进行,但转录水平调控是主要的。
第二章 分子克隆工具酶题目
第二章分子克隆工具酶一、选择题1.有关基因工程的叙述正确的是（）A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成在细胞内完成C.质粒都可作运载体D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料2.限制性内切酶EcoRⅠ在野生型的λ噬菌体DNA中有5个切点，Hind Ⅲ有7个切点。
调整这些酶切位点的数量，主要通过（）。
A.体内突变B.完全酶切后连接C.部分酶切D.先用甲基化酶修饰后再酶切二、填空题1.如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5‟突出的黏性末端，则可以用__________进行3‟末端标记。
如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3‟突出的黏性末端，可以用__________________ 进行3‟末端标记。
2.可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。
三、判断题1. pBR327是在pBR322的基础上去掉了1089bp的片段，留下了ampR和tetR的完整片段。
pBR327比pBR322有更高的拷贝，每个细胞中含有30-45个拷贝。
同时pBR327具有接合能力，能直接转入其他细胞（）四、名词解释1. DNA聚合酶2. 限制性内切酶3. 甲基化酶4. T4-DNA连接酶5. 核酸酶6. Klenow酶7. T4 DNA聚合酶8. Taq DNA聚合酶9. 逆转录酶10. 同裂酶11. 核酶五、简答题1.限制性内切酶分为哪几大类，各有什么特点？2. DNA修饰酶主要有哪些，各有什么作用？3.简述Klenow聚合酶的用途。
4.比较E.coli DNA 连接酶和Taq DNA 连接酶的作用特点。
5.限制性内切酶I 的识别序列和切点是——GATCC G ↓，限制性内切酶II 的识别序列和切点是——GATC ↓。
在质粒上有酶I 的1个切点，在目的基因的两侧各有l 个酶II 的切点。
用上述两种酶分别切割质粒和含有目的基因的DNA 。
分子生物模考试题与参考答案
分子生物模考试题与参考答案一、单选题（共111题，每题1分，共111分）1.关于探针叙述错误的是：A、具有特定序列B、带有特殊标记C、可以是基因组D、必须是双链的核酸片段E、片段F、可以是抗体正确答案：D2.克隆的基因组DNA不宜在以下哪种系统中表达A、E.coli表达体系B、酵母表达体系C、COS细胞表达体系D、昆虫表达体系E、哺乳动物细胞表达体系正确答案：A3.DNA的解链温度指的是A、A260达到最大值时的温度B、A260达到最大值的50％时的温度C、DNA完全解链时所需要的温度D、DNA开始解链时所需要的温度E、以上都不是正确答案：B4.核酸变性后，可产生的效应是A、增色效应B、溶液黏度增加C、最大吸收波长发生转移D、溶液黏度减小E、失去对紫外线的吸收能力正确答案：A5.下列关于DNA双螺旋结构的叙述，正确的是A、一条链是左手螺旋，另一条链是右手螺旋B、双螺旋结构的稳定纵向靠氢键的维系C、A+T与G+C的比值为1D、两条链的碱基间以共价键相连E、磷酸、脱氧核糖构成螺旋的骨架正确答案：E6.分子生物学领域中，分子克隆主要是指A、DNA的大量复制B、DNA的大量剪切C、RNA的大量剪切D、RNA的大量复制E、蛋白质分子的大量复制正确答案：A7.加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响，称为A、DNA变性B、DNA复性C、DNA杂交D、DNA重组E、DNA重排正确答案：A8.多重PCR反应体系中引物数量为A、不加引物B、半对引物C、一对引物D、两对引物E、两对以上引物正确答案：E9.核酸的基本组成单位是A、戊糖和磷酸B、戊糖和碱基C、核苷酸D、戊糖、碱基和磷酸E、以上均不正确正确答案：C10.有关原核基因组的说法正确的是A、结构基因中存在大量内含子B、原核生物的基因多以操纵子的形式存在C、基因组中的重复序列很多D、基因组通常有多个DNA复制起始点E、基因组较小,存在大量基因重叠情况正确答案：B11.常用于催化PCR的酶是A、DNA聚合酶IB、DNA聚合酶IIC、Taq-DNA聚合酶D、DNA聚合酶IIIE、逆转录酶正确答案：C12.细胞癌基因A、正常人细胞中也检测到癌基因B、只在肿瘤细胞中出现C、是正常人感染了致癌病毒才出现的D、是细胞经过转化才出现的E、加入化学致癌物在正常细胞中才会出现正确答案：A13.外显子的特点通常是A、编码蛋白质B、调节基因表达C、不被转录也不被翻译D、不编码蛋白质E、只被转录但不翻译正确答案：A14.基因工程操作中转导是指A、重组质粒导入宿主细胞B、把DNA重组体导入真核细胞C、DNA重组体导入原核细胞D、把外源DNA导入宿主细胞E、以噬菌体或病毒为载体构建的重组DNA导入宿主细胞正确答案：E15.重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是：A、DNA聚合酶B、RNA聚合酶C、DNA连接酶D、RNA连接酶E、限制性核酸内切酶正确答案：C16.采用配体的特异性亲和力分离纯化蛋白的方法是A、凝胶过滤层析B、离子交换层析C、亲和层析D、离心E、盐析正确答案：C17.催化聚合酶链反应的酶是：A、DNA连接酶B、反转录酶C、末端转移酶D、DNA聚合酶IE、Taq正确答案：E18.DNA变性时其结构变化表现为A、磷酸二酯键断裂B、N—C糖苷键断裂C、戊糖内C—C键断裂D、碱基内C—C键断裂E、对应碱基间氢键断裂正确答案：E19.下述哪种碱基，只存在于RNA而不存在于DNA中A、鸟嘌呤B、腺嘌呤C、尿嘧啶D、胸腺嘧啶E、以上都不是正确答案：C20.右手DNA双螺旋模型是何年提出的A、1950年B、1953年C、1958年D、1955年E、1919年正确答案：B21.下列有关mRNA的叙述，正确的是A、为线状单链结构，5’端有多聚腺苷酸帽子结构B、可作为蛋白质合成的模板C、链的局部不可形成双链结构D、3’末端特殊结构与mRNA的稳定无关E、三个相连核苷酸组成一个反密码子正确答案：B22.具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链,这一过程称为A、复杂性B、变性C、复性D、杂交E、探针正确答案：C23.核酸分子杂交的原理是：A、氨基酸残基配对B、核苷酸分子间形成磷酯键配对C、抗原抗体结合D、配体受体结合E、碱基互补配对正确答案：E24.PCR产物具有特异性是因为A、合适的变性、退火、延伸温度B、TaqDNA酶具有剪切错配碱基的能力，保证了产物的特异性C、选择特异性的引物D、引物的Tm值不同E、循环次数正确答案：C25.下列有关核酸分子杂交的叙述，不正确的是A、杂交可发生在碱基序列部分互补的核酸分子之间B、杂交可发生在碱基序列完全互补的核酸分子之间C、具有双螺旋结构的核酸分子之间才能杂交D、不同来源的DNA分子之间可以杂交E、以上都不正确正确答案：C26.已知序列的情况下，获得目的DNA最常用的是A、筛选cDNA文库B、化学合成法C、DNA合成仪合成D、聚合酶链式反应E、基因组DNA文库分离正确答案：D27.目前常用的基因表达体系细胞包括A、大肠埃希菌B、哺乳动物细胞C、昆虫细胞D、酵母细胞E、以上都是正确答案：E28.同一种哺乳细胞中，下列哪种情况是正确的A、在过剩的DNA存在下，所有RNA都能与DNA杂交B、在过剩的RNA存在下，所有DNA片段能与RNA杂交C、RNA与DNA有相同核苷酸组成D、RNA与DNA有相同的碱基比例E、以上都不正确正确答案：A29.有关PCR的描述，不正确的为A、引物决定扩增的特异性B、是一种酶促反应C、以DNA或RNA作为模板D、扩增的序列是氨基酸残基E、是在体外进行的核酸复制过程正确答案：D30.α互补筛选法属于：A、标志补救筛选B、原位杂交筛选C、免疫化学筛选D、抗药性标志筛选E、酶联免疫筛选正确答案：A31.原核生物染色体基因组是A、线性双链DNA分子B、环状双链DNA分子C、线性单链DNA分子D、线性单链RNA分子E、环状单链DNA分子正确答案：B32.下列有关蛋白质提取和分离的说法,错误的是A、采用透析法的是蛋白质与其它小分子化合物分离开来B、离心沉降法通过控制离心速率使分子大小.密度不同的蛋白质分离C、蛋白质在电场中与其自身所带电荷相同的电极方向移动D、透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质不能通过半透膜的特性E、在蛋白质溶液中加入大量中性盐可使蛋白质沉淀析出正确答案：C33.下列几种DNA分子的碱基组成比例,哪一种的Tm值最高A、A+T=15%B、C+G=25%C、C+G=40%D、A+T=80%E、C.C+G=60%正确答案：E34.在实际工作中,基因扩增实验室污染类型包括A、扩增产物的污染B、天然基因组DNA的污染C、试剂污染D、标本间交叉污染E、以上都可能正确答案：E35.有关mRNA的恰当解释是A、所有生物的mRNA分子中都有较多的稀有碱基B、大多数真核生物的mRNA都有5’末端多聚腺苷酸结构C、原核生物mRNA的3’末端是7-甲基鸟嘌呤D、大多数真核生物mRNA5’端为m7GpppN结构E、有3’-CCA-OH结构正确答案：D36.无抗四环素的细菌培养感染了来自抗四环素细菌溶菌液的病毒。
分子克隆简答题
简述基因克隆的两个基本特征？基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子（一般情况下都是 DNA）在不同宿主中的繁殖，打破自然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征，基因操作的另一个重要特征是繁殖。
如何理解 gene 及其产物的共线性和非共线性？基因决定蛋白质的序列组成，是由密码子对应特定氨基酸所决定的。
当一个基因的核苷酸序列与其产物的氨基酸序列是一一对应时，则表明它们是共线性的。
在原核生物中，基因及其产物是共线性的。
70 年代以来，在真核生物中，发现了间断基因，后来发现这种间断基因在真核生物中普遍存在，也就是后来所说的基因间存在着内含子。
内含子指真核生物基因中不能被翻译成蛋白质的 DNA 片断，但可被转录，当两侧序列的转录 RNA 被剪接在一起时，就将内含子转录的 RNA 从整个转录物中除去。
外显子是指能够翻译成蛋白质的任一间断的基因片段，一个基因可有多个外显子。
内含子并不是一成不变的，具有相对性，对一个 DNA 片断来说，在某个基因中是内含子，但在另一个基因中却可以作为外显子。
什么是 gene cloning ？什么是亚克隆（subcloning）？基因克隆：一定程度上等同于基因的分离，即从复杂的生物体基因组中，经过酶切，消化等步骤，分离带有目的基因的 DNA 片段。
基因亚克隆：初步克隆中的外源片段往往较长，含有许多目的基因片段以外的 DNA 片段，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，因此必须将目的基因所对应的一小段 DNA 找出来，这个过程叫“亚克隆”。
假如从一个原核生物中 cloning 某基因（1-2kb），请谈谈它的基本步骤？①对原核生物染色体 DNA 进行不完全酶切，纯化所得到的 DNA 片断，并与载体连接，转化大肠杆菌；②得到转化子后，根据目标基因两侧的已知序列设计探针，杂交，筛选转化子；③所得到的转化子中含有目标基因，进一步作亚克隆，一步步地向目标基因逼近，最后可得到目标基因什么叫基因工程（Gene Engineering），试从理论和技术两个方面谈谈 Gene Engineering 诞生的基础？基因工程（Gene Engineering ）又称基因操作（Gene Manipulation）、重组 DNA 。
分子克隆工具酶(1)
1
体外重组DNA技术所 需的基本条件？
A. 用于核酸操作的工具酶 B .用于基因克隆的载体 C. 用于基因转移的受体菌或细胞
用于核酸操作的工具酶有哪些？
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2
第二章 分子克隆工具酶 Enzymes Used in Molecular
Cloning
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3
在基因工程的实际操作中，工具酶 的使用是一项基本技术。
限制酶是一类能够识别双链DNA分子中 的某种特定核苷酸序列，并由此切割 DNA双链结构的核酸水解酶。
限制酶存在于细菌中，也存在于一些病 毒中，真核生物中没有限制酶。
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17
一、限制酶的命名与分类
1、命名
1973年H.O. Smith和D. Nathams首次提出命名原则， 1980年Roberts在此基础上进行了系统分类
主要特性
Ⅱ型
Ⅰ型
Ⅲ型
酶分子 内切酶与甲基化酶不在 三亚基双功能酶 二亚基双功能酶
一起
识别位点 4-6bp，多为回文序
二分非对称
5-7bp非对称
列
切割位点 识别序列内或附近特异 无特异性，距识别序 距识别序列下游24-
切割
列1kb外
26bp处
在体外对DNA进行分离纯化、连接 重组或者修饰合成等，都会涉及一 系列酶促反应。
用于基因工程的工具酶种类繁多， 根据其功能可粗略分为限制酶、连 接酶、聚合酶和修饰酶4类。
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4
基因工程的操作，是在分子水平上 的操作，是依赖一些酶 (如限制性 核酸内切酶，连接酶，DNA聚合酶 等)作为工具对基因进行人工切割， 拼接和扩增等操作。所以把这些酶
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分子克隆工具酶答案（选择和判断）
题1
关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。
B. 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
题目2
Ⅱ型限制性内切核酸酶：( )
D. 限制性识别非甲基化的核苷酸序列
题目3
Ⅲ型限制性内切核酸酶：( )
E. 不同亚基的识别位点甲基化和限制活性相互排斥：MS亚基促使甲基化，R亚基促使限制
题目4
限制性片段长度多态性(RFLP)是：( )
E. 物种中的两个个体限制性图谱间的差别
题目5
下面有关限制酶的叙述哪些是不正确的?( )
E. 限制酶是外切酶而不是内切酶
题目6
因研究λ噬菌体的限制与修饰现象的本质而获得诺贝尔奖的科学家是：( )
C. WArber
题目7
第一个被分离的Ⅱ类酶是：( )
A. HindⅡ
题目8
双链DNA中一段自我互补的序列被称为回文序列，这种序列不具有下列特征：( )
B. 可增强基因的表达
题目9
在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( )
B. 酶量酶量
题目10
在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2＋离子?( )
A. EGTA
题目11
在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( )
C. Bal 31核酸酶
题目12
限制性内切核酸酶可以特异性地识别：( )
B. 双链DNA的特定碱基序列
题目13
限制性内切核酸酶的星号活性是指：( )
B. 在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。
题目14
下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( )
C. 酶切反应时酶浓度过低
题目15
关于回文序列，下列各项中，( )是不正确的
B. 是高度重复序列
题目16
关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当
D. 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
题目17
T4DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E．coli中分离的，这种连接酶( ) B. 既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接
题目18
DNA连接酶在体内的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，( )
A. 将双链DNA分子中的5，磷酸基团同3，-OH末端重新形成磷酸二酯键
题目19
在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( )
A. T7DNA聚合酶
题目20
末端转移酶是合成酶类，( )
D. 在C0 2＋的存在下，可以在3’突出末端延长DNA链
题目21
在基因工程中，可用碱性磷酸酶( )
B. 防止DNA的自身环化
题目22
从E．coli中分离的连接酶：( )
C. 需要NAD作辅助因子
题目23
下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性
C. λ核酸外切酶
题目24
下列哪一种酶作用时需要引物? ( )
D. 反转录酶
题目25
S1核酸酶的功能是( )
B. 以上有两项是正确的
题目26
Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了( )的活性
C. 5’-3’外切酶
题目27
用Bal31核酸酶作系列缺失突变时，( )
A. 需要Ca 2＋作辅助因子
题目28
在cDNA技术中，所形成的发夹环可用( )
A. 用S1核酸酶切除
题目29
可以在切口部位起作用的酶是( )
A. S1核酸酶
题目30
T4RNA连接酶：( )
A.作用时不需要模板
题目31
限制性内切核酸酶在DNA中的识别／切割位点的二级／三级结构也影响酶切效率。
一般来说，完全切割质粒或病毒DNA，要比切割线状DNA需要更多的酶，最高的需要20倍。
正确的答案是“对”。
题目32
限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的修饰和对自身DNA的限制实现的。
正确的答案是“错”。
题目33
如果限制性内切核酸酶的识别位点位于DNA分子的末端，那么接近末端的程度也影响切割，如HpaⅡ和MboI要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。
正确的答案是“对”。
题目34
能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸酶识别的序列。
正确的答案是“错”。
题目35
已知某一内切核酸酶在一环状DNA上有3个切点，因此，用此酶切割该环状DNA,可得到3个片段
正确的答案是“对”。
题目36
迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链DNA，又能作用于单链DNA
正确的答案是“错”。
题目37
基因工程中使用的Ⅱ类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的活性
正确的答案是“错”。
题目38
甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5％以下。
正确的答案是“对”。
题目39
在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制性酶就不能切割了。
正确的答案是“错”。
题目40
T4DNA连接酶和E．coli连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接。
正确的答案是“错”。
题目41
T4DNA连接酶和E．coli连接酶都能催化双链DNA和单链DNA的连接。
正确的答案是“错”。
题目42
Bal31核酸酶(Bal31nuclease)是Ca2+依赖性的，在反应混合物中加入EDTA便可抑制它的活性。
正确的答案是“错”。
题目43
T4DNA连接酶和E．coli连接酶作用时都需要A TP和NAD +作为辅助因子
正确的答案是“错”。
题目44
DNA聚合酶I有三种酶活性，其中3’-5’外切核酸酶的活性在较多的dNTP存在下，常被5’-3’合成酶的活性所掩盖。
正确的答案是“对”。
题目45
用同一种酶切割载体和外源DNA得到黏性末端后，为防止它们自身环化，要用CIP 将它们脱磷酸。
正确的答案是“错”。