免疫细胞的检测
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术传统的免疫细胞功能检测方法主要包括流式细胞术、细胞增殖试验和细胞毒性试验等。
其中，流式细胞术是一种常用的细胞表面标记物检测方法，可以通过检测细胞表面标记物的表达情况来评估免疫细胞的活性和状态。
细胞增殖试验可以评估免疫细胞的增殖能力，常用的方法包括MTT法和BrdU法等。
细胞毒性试验可以评估免疫细胞对靶细胞的杀伤能力，常用的方法包括细胞色素释放试验和细胞活性检测试剂盒等。
然而，传统的免疫细胞功能检测方法存在一些局限性。
首先，这些方法往往需要大量的细胞数目，且操作繁琐，不适用于临床应用。
其次，这些方法只能评估其中一方面的免疫功能，无法全面评估免疫细胞的整体功能状态。
此外，传统方法对于一些免疫细胞功能的检测灵敏度较低，无法满足一些特殊研究和临床需求。
近年来，随着生物技术的发展，一些新的免疫细胞功能检测技术逐渐崭露头角。
其中，高通量测序技术的应用为免疫细胞功能检测带来了革命性的突破。
高通量测序可以同时检测上千个基因的表达水平，可以用来评估免疫细胞的基因表达谱，并通过生物信息学方法分析不同样本的差异。
通过这种方法，可以全面了解免疫细胞的活性和功能状态。
另外，单细胞技术也是一种新兴的免疫细胞功能检测技术。
传统的免疫细胞功能检测方法通常是对大量细胞进行分析，无法检测到细胞群体中不同细胞的异质性。
而单细胞技术可以对单个细胞进行检测和分析，可以检测到不同细胞的功能差异，并研究细胞在群体中的相互作用。
单细胞技术可以通过扩增检测目标区域的方法，同时检测多个指标，可以全面评估免疫细胞的功能状态。
除了高通量测序和单细胞技术，还有一些新兴的免疫细胞功能检测技术值得关注。
例如，质谱技术可以定量检测细胞因子的分泌水平，可以评估免疫细胞的功能状态。
另外，光学显微镜技术可以直接观察免疫细胞的活动过程，可以评估细胞的运动能力和活跃度。
总而言之，免疫细胞功能检测技术的发展为了解免疫细胞的功能状态提供了新的手段。
高通量测序、单细胞技术、质谱技术和光学显微镜技术等新兴技术可以全面、准确地评估免疫细胞的功能状态，有望在临床和科研领域发挥重要作用。
免疫细胞功能检测的方法
免疫细胞功能检测的方法
免疫细胞功能检测的方法主要包括以下几个方面：
1. 淋巴细胞转换试验：这是一种测定机体免疫功能的指标，通过淋巴细胞转化率的高低反映机体细胞免疫水平。
淋巴细胞转化率正常值一般为60.1%±7.6%，如果不在这个范围内，可能是患有出血热、麻疹等疾病。
2. FBC玫瑰花试验：这是一种检测人体T淋巴细胞的方法。
如果结果异常，可能是患有麻疹、鼻咽癌等疾病。
3. 淋巴细胞毒试验：这一般可以作为体外测定肿瘤患者细胞免疫的指标。
如果结果异常，可能是患有肾病综合征、药疹等疾病。
4. NK细胞活性测定：自然杀伤（NK）细胞是一群异质性多功能的免疫细胞，是与特异性免疫应答无关的自然毒杀伤细胞。
如果结果异常，可能是患有小儿X-连锁严重联合免疫缺陷病、先天性肿瘤等疾病。
此外，还有淋巴因子产生试验、细胞介导的细胞毒试验、抗体分泌细胞的检测、嗜中性粒细胞吞噬功能的检测、嗜中性粒细胞NBT 还原试验、巨噬细胞吞噬功能的测定等方法。
需要注意的是，患者在做细胞免疫检查的前3日，最好禁止食用
肉类以及含动物血的食物，另外检查当天的早晨一般需要空腹，否则可能会影响检查结果。
以上信息仅供参考，如有需要，建议咨询专业医师。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术嘿，咱今儿就来说说这免疫细胞功能检测技术。
你知道吗，咱身体里的免疫细胞那可真是一群了不起的“小战士”呀！它们时刻准备着和各种病菌、有害物质作战，保卫着咱们的身体。
那这免疫细胞功能检测技术呢，就像是给这些“小战士”来个大体检。
就好比咱去医院体检，能知道自己身体哪儿好哪儿不好，这检测技术也能让咱清楚免疫细胞的状态咋样。
你想想看，要是咱能清楚地知道这些“小战士”的战斗力强不强，是不是就能更好地了解自己的身体状况啦？要是检测出来它们有点弱，那咱就得想办法给它们加加油、鼓鼓劲呀！不然，敌人来了可咋办呢？这检测技术有很多种方法呢。
比如说，有一种可以检测免疫细胞的增殖能力。
你就理解成看看这些“小战士”能不能快速地增加数量，人多力量大嘛！要是它们增殖得快，那说明它们很有活力呀，咱就放心不少。
还有检测它们杀伤能力的。
这就好比看这些“小战士”能不能一下子就把敌人给消灭掉，要是它们的杀伤能力强，那咱身体里的那些坏家伙就不敢随便捣乱啦。
再比如说，检测免疫细胞分泌细胞因子的能力。
细胞因子就像是“小战士”们的秘密武器，能帮助它们更好地作战。
要是分泌得多，那它们打起仗来肯定更厉害呀！那这检测技术重要不？那可太重要啦！就好像你要去打仗，总得先知道自己手里的武器好不好使，自己的士兵厉不厉害吧？这检测技术就是帮咱了解免疫细胞这个“军队”的情况呀。
要是没有这个技术，咱就像蒙着眼睛走路一样，都不知道自己身体的免疫防线到底咋样。
万一有点啥问题，咱都不知道该怎么应对呢。
你说，这免疫细胞功能检测技术是不是很神奇？它就像是给咱身体里的免疫系统开了一扇窗，让咱能看到里面的情况。
而且，随着科技的不断进步，这检测技术肯定也会越来越先进，能检测的东西也会越来越多。
咱可得好好重视这个技术呀，毕竟身体是自己的，咱得对自己负责呀！别觉得这事儿离你很远，说不定哪天你就需要它来帮你了解自己的身体呢。
免疫细胞功能检测技术，真的是咱身体健康的好帮手呀！你说是不是呢？。
免疫细胞表型检测的方法
免疫细胞表型检测的方法
免疫细胞表型检测的方法主要包括流式细胞术、免疫组化、免疫印迹、免疫荧光等技术。
其中，流式细胞术是最常用的技术之一。
它通过标记不同的抗原，使不同种类的免疫细胞在荧光染色后产生不同的信号，再通过流式细胞仪对这些信号进行检测和分析。
流式细胞术具有高通量、高灵敏度、高分辨率等优点，能够同时分析多个细胞表面分子的表达情况，可用于分析免疫细胞亚群的分布、测定细胞表面分子的表达量和分子结构等。
但是，其结果受到样本制备、实验条件等多种因素的影响，需要严格控制实验条件，保证结果的准确性和可重复性。
免疫细胞表型检测的方法在免疫学研究、疫苗开发、临床诊断和治疗等方面具有广泛应用。
例如，在肿瘤治疗中，流式细胞术可用于鉴定和分离肿瘤免疫细胞，评估肿瘤免疫监视功能，指导肿瘤免疫治疗策略的选择和调整。
在感染性疾病的诊断中，免疫组化、免疫印迹等技术可用于检测病原体的抗原或抗体，加强病原体的鉴别和定量分析。
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细胞免疫检测
Advanced molecular immunology-2011 Experimental Methods Experimental Methodsof Immunologyof ImmunologyKang YouminKang Youmin2011-4-20一、细胞免疫检测细胞免疫检测T细胞免疫检测指标1. T subsets2. Proliferation3. Cytotoxicity4. CytokinesQ1：CD代表？1. T subsets1T subsetsT细胞分化抗原测定T细胞膜表面分子具有不同的抗原性：CD2/CD3/CD4/CD8等。
（1）CD3分子:T细胞特有标志，反映T细胞总数的变化。
（2）CD4分子:辅助性T细胞（Th）表达。
（3）CD8分子:是杀伤性T细胞的标志。
（4）CD4/CD8比值:降低提示免疫抑制;升高提示亢进,免疫性疾病。
CD-分化群：Cluster of differentiation将识别同一分化抗原的来自不同实验室的单克隆抗体归为一个分化群Effector Th cell differentiation实验样品的处理●单细胞悬液的制备：细胞株（胰酶消化），脾脏细胞，淋巴结，胸腺，脊髓，脑组织。
●抗体染色：抗原抗体反应-高度的特异性结合物的量与反应物的浓度有关●非特异结合的去除洗涤FcR（CD16/CD32）封闭抗体●最适pH值范围是6—8抗原与抗体结合曲线CD3/CD4/CD8 T ll b tT cell subsetsCD4+CD25+ T cell staining5-10%Anti-CD4-FITCA ti CD4FITC2.T细胞增殖试验2T细胞增殖试验原理刺激物淋巴细胞DNA合成分化细胞变大细胞浆扩大母细胞空泡核仁明显核染色质疏松刺激物非特异性刺激物-有丝分裂原：指刺激多克隆淋巴细胞增殖的物质(植物血凝集素)PHA ------T细胞(植物血凝集素)PHA------T细胞（刀豆素A）ConA ------T细胞(美洲商陆)PMA -------T/B细胞（脂多糖）LPS-------B细胞（脂多糖）LPS -------B细胞特异性刺激物：异种抗原/同种组织抗原T cell proliferation methodsp gy●Morphology●3H-thymidine label●MTTFACS CFSE t i i●FACS-CFSE staining●Mixed lymphocytes reaction(MLR)Mixed lymphocytes reaction(MLR)●CTL形态学方法未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞过渡型细胞大小(直径μm)12～2012～166～8核大小、染色质增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4个有或无无有丝分裂有或无无无胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色浆内空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无proteinP iti t l Negative controlN ti t l Positive control3H-thymidine label3H-TdRproliferationPHAStimulation Index:cpm average value(+PHA) Stimulation Index: cpm average value (+PHA)C ontrol cpm average value (-PHA)CPM是每分钟脉冲的次数MTTMTT：全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，汉语化学名为3-(4，diphenyltetrazolium bromide，汉语化学名为5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
细胞免疫功能检测报告怎么看
细胞免疫功能检测报告怎么看当我们拿到一份细胞免疫功能检测报告时，可能会感到一头雾水，不知道从哪里开始解读。
别担心，接下来我将用通俗易懂的方式为您详细介绍如何看懂这份报告。
首先，我们要了解细胞免疫功能检测的目的是什么。
简单来说，它是通过检测身体内各种免疫细胞的数量、活性和功能状态，来评估我们的免疫系统是否正常工作，以及是否有能力抵抗疾病和病原体的侵袭。
报告中常见的检测项目包括 T 细胞、B 细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）等的检测。
T 细胞是细胞免疫的核心力量。
T 细胞又分为不同的亚群，如CD4+T 细胞和 CD8+T 细胞。
CD4+T 细胞通常被称为辅助性 T 细胞，它们在激活其他免疫细胞、协调免疫反应方面发挥着重要作用。
如果CD4+T 细胞的数量或比例降低，可能意味着免疫系统功能下降，容易受到感染或患上免疫相关疾病。
CD8+T 细胞则被称为细胞毒性 T 细胞，主要负责直接杀伤被病原体感染的细胞或肿瘤细胞。
其数量和功能的异常也能反映出免疫问题。
B 细胞产生抗体，是体液免疫的重要参与者。
检测 B 细胞的数量、成熟度以及抗体产生能力等指标，可以了解体液免疫的状况。
NK 细胞具有天然的杀伤活性，不需要预先致敏就能对肿瘤细胞和病毒感染细胞发起攻击。
NK 细胞数量和活性的降低可能提示免疫监视功能减弱。
除了这些细胞的数量，报告中还可能会有关于它们功能的检测指标，比如细胞增殖能力、细胞因子分泌水平等。
细胞增殖能力反映了免疫细胞在受到刺激后自我复制和扩增的能力。
如果增殖能力下降，可能意味着免疫细胞在应对病原体时无法迅速增加数量，从而影响免疫防御。
细胞因子是免疫细胞分泌的小分子蛋白质，它们在免疫调节中起着关键作用。
常见的细胞因子如白细胞介素（IL）、干扰素（IFN）等。
检测这些细胞因子的水平可以了解免疫系统的激活状态和免疫调节的平衡情况。
另外，报告中还可能会有一些比值的指标，比如CD4+／CD8+比值。
正常情况下，这个比值在一定范围内波动。
免疫细胞的检测方法
免疫细胞的检测方法
《免疫细胞的检测方法》
嘿，你知道吗？我们身体里有一群超级厉害的“战士”，那就是免疫细胞。
它们可是保护我们健康的重要力量呢！那怎么才能知道这些“战士”的情况呢？这就涉及到免疫细胞的检测方法啦。
一种常见的方法就是流式细胞术。
简单来说，就是让细胞一个一个地通过检测通道，然后仪器就像个超级侦探一样，能分辨出不同类型的免疫细胞，还能知道它们的数量和状态。
这可真是个神奇的技术呀！
还有一种叫免疫组化的方法。
它就像是给免疫细胞“上色”，通过特定的染色剂，让我们能在显微镜下清楚地看到免疫细胞在哪里，它们在干什么。
另外，细胞因子检测也很重要哦。
因为细胞因子就像是免疫细胞之间传递信号的“小信使”，检测它们的水平，就能知道免疫细胞的活动情况啦。
酶联免疫吸附测定也是常用的，它能很准确地检测出一些特定的免疫细胞相关物质。
总之，这些检测方法都各有各的厉害之处，能帮助我们更好地了解身体里免疫细胞的状况。
免疫细胞的检测非常重要，只有清楚地知道它们的状态，我们才能更好地保护自己的健康呀！。
细胞免疫检测.
二. 细胞免疫测定的方法：
方法
体内试验: 皮内试验
体外试验: 免疫功能的测定 淋巴细胞计数
细胞免疫功能测定
T细胞转化试验 巨噬细胞移动抑制试验 混合淋巴细胞培养 K与NK细胞活性检测
淋巴细胞 计数测定
T细胞花结形成试验 细胞表面受体测定 B细胞膜表面IgG测定
细胞表面分化抗原 T淋巴细胞亚群测定 B细胞表面分化抗原测定
2. NK细胞可引发自身免疫病
过去一般认为多数自身免疫性疾病与自 身反应性T细胞的产生有关。随着NK细胞 识别机制的发现，尤其是HLAI类分子变化 与NK细胞关系的阐明，少数学者推测自身 反应性NK细胞或正常组织因某种原因而引 起HLAI类分子的丢失也许是引发自身免疫 性疾病的原因。
NK细胞的发育与重大疾病的重新解 释
七．淋巴细胞亚群的检测方法
1．免疫荧光检测法： 荧光显微镜
流式细胞仪：快速、准确、简便。 2．免疫组化法：
碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶（APAAP）免 疫桥联染色法； 免疫金银染色法（IGSS）。
小结
一. 细胞免疫概念 二.细胞免疫检测种类 三.T淋巴细胞分群、功能及临床意义(★) 四.B淋巴细胞 五.淋巴细胞分化抗原在白血病免疫学分型中的
(二) 肿瘤病人治疗效果的判定及预后
免疫功能正常的病人，一般预后较好， 反之预后差。
接受常规治疗的肿瘤病人，若治疗引起 了免疫抑制，则这种病人的预后较差，缓 解期的白血病病人，其免疫功能突然下降， 是白血病复发的信号。
六. 淋巴细胞表面标志物在白血病免疫学 分型中的作用
B 系细胞白血病的相关性标记：CD10、 CD19、CD20、CD22 T 系细胞白血病的相关性标记：CD2、 CD3、CD5、CD7、CD4、CD8
免疫细胞检测项目
免疫细胞检测项目
免疫细胞检测是一种通过检测血液中各种免疫细胞的数量和功能，来评估人体免疫系统状态的检测方法。
以下是一些常见的免疫细胞检测项目：
1. 白细胞计数和分类：通过检测血液中白细胞的数量和类型，了解免疫系统的基本状况。
2. 淋巴细胞亚群分析：检测血液中不同类型淋巴细胞（如 T 细胞、
B 细胞、NK 细胞等）的数量和比例，评估免疫系统的功能。
3. 细胞因子检测：检测血液中各种细胞因子的水平，如干扰素、白细胞介素等，了解免疫系统的活化状态。
4. 自身免疫抗体检测：检测血液中自身免疫抗体的水平，如抗核抗体、类风湿因子等，辅助诊断自身免疫性疾病。
5. 免疫球蛋白检测：检测血液中免疫球蛋白 （如 IgG、IgA、IgM 等）的水平，了解机体的体液免疫状态。
免疫细胞检测技术
免疫细胞是泛指所有参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞及其前身，包括造血干细胞、淋巴细胞、单核巨噬细胞及其他抗原提呈细胞、粒细胞、红细胞、肥大细胞等。
各种免疫细胞的分离、纯化及其功能测定对于了解其在免疫应答中的作用及相互关系有着重要意义。
免疫细胞的检测即是用体外试验对机体各种参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞进行分离、纯化鉴定、计数和功能测定，藉以了解机体的免疫状态，并对某些临床疾病的诊断、疗效观察及预后判断等也有一定意义。
本综述将就免疫细胞的分离、免疫细胞功能的检测和细胞凋亡的检测三个方面主要方法的基本原理作简要介绍。
一．免疫细胞的分离免疫细胞包括多种细胞成分，例如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、红细胞等。
它们具有不同的形态和功能特性，这不仅是我们认识各种免疫细胞的依据，也是分离各种免疫细胞的基础。
细胞的形态特征反映在其物理性质上，如各种细胞的大小、比重、表面电荷和粘附能力等存在差异;而细胞的功能特征往往由该细胞膜表面的蛋白质(表面标记)来体现，例如各种免疫细胞执行特定功能必须表达的受体等。
根据不同形态和功能特征，可以将各种免疫细胞从混合细胞群体中分离出来。
免疫细胞分离原理基本上可以归纳为基于细胞物理性状的分离方法和基于细胞表面标记的分离方法。
基于细胞物理性状的分离方法(一)根据各种细胞比重的差异1.自然沉降法2.密度梯度离心法人外周血单个核细胞(PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为1.00左右，而淋巴细胞和单个核细胞比重为 1.075左右。
利用密度在l.077万±0.001之间近于等渗的Ficoll-Hypque混合溶液(称为淋巴细胞分层液)作密度梯度离心时，各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集。
血浆和血小板由于密度较低，故悬浮于分层被的上部;红细胞与粒细胞由于密度较大，故沉于分层液的底部;PBMC密度稍低于分层液，故位于分层被界面上，这样就可获得PBMC o（如图1-1所示）图1-1 淋巴细胞分离示意图3.改变细胞密度法巨噬细胞能够吞噬铁粉，增加其比重，通过密度梯度离心或磁场将其分离;T 细胞能够与绵羊红细胞形成花环，形成的花环复合物比重大，借助密度梯度离心将T细胞分离。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫细胞大致可分为两类：一类能识别特异性抗原，一旦被激活则显示出特异性应答的功能，主要指淋巴细胞群，包括T细胞、B细胞、NK细胞、K细胞等。
另一类能捕获抗原，处理抗原，以一定方式递呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。
第一节淋巴细胞的功能检测淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。
体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定。
体内试验主要是进行迟发型超敏反应，借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应。
一、T细胞功能检测（一）T细胞增殖试验1.原理T细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后，细胞的代谢和形态发生变化，主要表现为胞内蛋白质和核酸合成增加，发生一系列增殖反应，如细胞变大、胞质增多、胞质出现空泡、核染色质疏松、核仁明显，并转化为淋巴母细胞。
2、刺激物体外刺激T细胞增殖反应的刺激物包括植物血凝素（PHA）、刀豆素A （ConA）和美洲商陆（PWM）、白喉类毒素、破伤风类毒素、纯化蛋白衍生物（PPD）和白色念珠菌。
3.方法学检测T细胞增殖反应的方法有：（1）形态学检查法：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。
缺点是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。
（2）3H-TdR掺入法：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好，但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。
（3）MTT比色法：本方法的敏感性虽不及3H-TdR掺入法，但操作简便，无放射性污染。
（二）T细胞分泌功能测定体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后，分泌各种细胞因子，可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子的含量、生物学活性和基因表达水平，以反映T细胞功能。
（三）T细胞介导的细胞毒试验T细胞介导的细胞毒试验是细胞毒性T细胞的特性，凡致敏T细胞再次遇相应靶细胞抗原，可表现出破坏和溶解靶细胞，它是评价机体细胞免疫水平的一种常用指标。
免疫细胞检测流程
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免疫细胞功能检测方法
免疫细胞功能检测方法
咱今天就来说说免疫细胞功能检测方法。
你知道吗，这免疫细胞就像是咱身体里的小战士，它们时刻都在为咱的健康奋战呢！那怎么检测这些小战士厉不厉害呢？
先来说说淋巴细胞转化试验吧。
这就好比是一场考试，看看淋巴细胞这个小战士能不能通过考验，变得更强大。
把淋巴细胞放在特定的环境里，看看它们能不能增殖转化，要是能，那说明它们挺有潜力的呀！
还有细胞毒试验呢！这就像是让免疫细胞去攻打“坏人”，看看它们的攻击力怎么样。
把靶细胞和免疫细胞放在一起，瞧瞧它们能不能把那些靶细胞给干掉，这可很关键呢，要是连“敌人”都打不过，那可不行哟！
迟发型超敏反应检测也很有意思。
就好像是给身体来个小挑战，看看免疫细胞能不能快速响应。
在皮肤上做点小测试，观察会不会有反应，要是反应很迅速，那说明免疫细胞很机灵呀！
流式细胞术检测呢，这可高级啦！就像给免疫细胞拍个特写，把它们的各种特征都看得清清楚楚。
能知道它们的数量啊、状态啊等等，是不是很厉害？
那咱想想，要是没有这些检测方法，咱怎么知道身体里的这些小战士状态好不好呢？那不就像打仗没了情报一样，两眼一抹黑嘛！所以这些检测方法可重要啦！
咱再想想，要是免疫细胞功能不行了，咱是不是容易生病呀？那可不得了，感冒发烧可能就会经常找上门啦。
那生活得多难受呀，不能出去玩，不能好好享受美食。
所以呀，免疫细胞功能检测方法真的是帮了我们大忙呢！让我们能及时了解身体里的这些小战士的情况，该给它们加油打气的时候就加把劲，让它们更好地为我们的健康保驾护航。
你说是不是这个理儿？咱可得重视起来这些检测方法，让自己的身体一直健健康康的呀！。
免疫细胞浸润检测方法
免疫细胞浸润检测方法
免疫细胞浸润检测方法一般包括以下几种：
1. 免疫组织化学染色（IHC）：该方法是通过使用特定的抗体来检测免疫细胞的存在和位置。
该方法可以识别特定的免疫细胞，如T 细胞、B细胞和巨噬细胞等。
2. 流式细胞术（FCM）：该方法是通过将细胞样本标记上特定的抗体并通过流式细胞仪来测量和分析细胞数和细胞类型。
该方法可以定量分析多种免疫细胞，并确定它们的浸润情况。
3. 基因表达分析（GEP）：该方法是通过研究RNA或DNA的表达来识别免疫细胞的存在和活性。
该方法可以鉴定免疫细胞的特殊标记或基因表达模式，并进一步了解其浸润的机制和功能。
4. 光学显微镜（OM）：该方法是通过在组织切片上观察免疫细胞的分布和形态来检测免疫细胞的浸润情况。
该方法主要适用于早期的免疫细胞浸润检测。
这些方法结合使用可以更全面地了解免疫细胞的浸润情况，并有助于进一步研究免疫细胞在免疫反应和免疫疾病中的作用。
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三、免疫细胞的检测
对机体参与免疫应答的细胞进行鉴定,计数 及功能测定 (一)细胞计数 1. 荧光抗体染色 2. 免疫酶染色技术: *ABC法 *APAAP法 3. 免疫金银染色法(IGSS) 4．免疫细胞化学法 5．四聚体法 6．TCR链测定
(二)免疫细胞功能的测定 1. T细胞功能测定：肿瘤，病毒感染，免疫
免疫学检测与免疫学技术
一、抗原抗体的检测技术 二、免疫细胞的检测 三、细胞因子的检测 四、免疫相关基因分析 五、免疫标记技术 六、免疫PCR(IM-PCR)技术 七、杂交瘤技术与T细胞克隆技术 八、新型抗体的制备技术 九、抗原的制备技术
一、概述 免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列 测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因 子的实验手段及分子生物学技术在免疫学研究 中的应用。 免疫学技术的应用极为广泛,疾病的诊断、 疗效评价及理论研究等。 二、抗原抗体的检测技术 * 根据反应的基本原理与表现主要分为凝集 反应、沉淀反应和补体参与的各种反应 *根据抗原抗体反应设计的试验还有标记抗 原(或抗体)检测相应物质的标记技术。
(4)化学发光法
(5)流式细胞术：应用FCM检测NK细胞活性是
根据PI染料排斥法。PI渗入死亡细胞内与DNA 和RNA结合，在488nm波长激发下产生绿色荧 光。此法既可以测定单个细胞毒活性，也可以 用于总细胞毒活性试验。 *还可利用荧光染料法,细胞光扫描法，双标记 细胞毒法测定细胞毒性细胞的杀伤效应。
四、细胞因子的检测
（一）免疫学检测法
免疫学检测的基本原理是将细胞因子作 为抗原进行定量检测。如免疫斑点法、 ELISA 法、 RIA 法和免疫印迹法等均已用于 细胞因子的检测。某些细胞因子含量甚微的 样品(如脑脊液)可用免疫聚合酶链反应 (immuno-PCR)进行检测。
（二）生物学测定法
1. 促进细胞增殖和增殖抑制法 * 多种 IL 、表皮生长因子、转化生长因子 α 、 神经生长因子、血小板衍生生长因子、成纤维 细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子 *各种CSF作用于造血系统的不同细胞,可 促进其增殖及在半固体琼脂凝胶系统中克隆培 养骨髓细胞的集落形成,故可采用集落形成试验 研究CSF的水平 *常用的检测细胞增殖的方法有3H-TdR掺 入法、比色法、染色法和直接计数法等。其中 测定细胞代谢酶反应细胞增殖数的比色法包括 MTT、XTT、MTS和NAG等方法。
2. B细胞功能判定 (1)B细胞增殖(转化)试验： *PWM、SAC，LPS（对小鼠B细胞）； *抗IgM抗体及EB病毒等 (2)溶血空斑形成试验 (3)反向溶血空斑试验 (4)酶联免疫斑点法(ELISPOT):ELISPOT是一种 可检测抗体分泌细胞，又可测定抗体分泌量的体 外实验方法。 *此法的主要优点是: ① 稳定、特异，且抗原用量少； ②可同时检测不同抗原诱导的抗体分泌，并可定 量测定； ③可检 细胞毒活性测定法 许多细胞因子 (TNF) 针对转化的细 胞及病毒感染的细胞具有溶细胞或抑制 细胞生长的活性。
3.抗病毒活性测定法 常用于检测抗病毒活性的细胞株有 WISH,Hep2/c,L929,A549 和 MDBK 等 。 其 中 WISH和Hep2/c细胞株用以检测人干扰素 ,L929 细胞株用于检测小鼠干扰素 ,Ratec 细胞株用于 检测大鼠干扰素 , 而 MDBK 细胞株则可用于检 测多种族的IFN-α和IFN-γ。 常用于攻击细胞的病毒有滤泡性口炎病毒 (VSV) 、鼠脑心肌炎病毒 (EMCV) 以及 Sindbis virus等病毒。 检测抗病毒活性的方法:测定细胞因子抑 制病毒的致细胞病变效应(CPE)、抑制病毒蚀 斑形成或抑制病毒的产量等。
3. NK细胞活性测定 体外检测NK细胞活性的方法有形态学检查
法，放射性核素释放法，酶释放法，化学发光 法及流式细胞术等。测定人NK细胞活性常以 K562细胞株作为靶细胞，测定小鼠NK细胞活 性常用YAC－1 细胞为靶细胞。 (1)形态学检查法 (2)放射性核素释放法：用放射性核素(51Cr、 125I －UdR)标记靶细胞。 (3)酶释放法：测定靶细胞膜受损后从胞浆内 释放至介质中的乳酸脱氢酶(LDH)活性。 *NAG酶荧光比色法:NAG酶是细胞浆中存在的 一种溶酶体酶,与其底物作用后,生成荧光产物, 应用荧光分光光度计测定，敏感性明显高于 LDH比色法。而且方法简单，结果稳定，重复
4．吞噬细胞功能测定 (1) 中性粒细胞趋化功能测定：一般采用滤膜渗 透法(Boyden小室法)或琼脂糖平板法。 (2)中性粒细胞吞噬、杀菌功能测定 1)显微镜检法 2)NBT 试验：此项试验是测定中性粒细胞吞噬、 杀菌功能的一种简易方法。 3) 化学发光测定法：中性粒细胞在吞噬过程中 出现呼吸爆发 ,产生活性氧代谢产物。此类活性 氧化基团与细胞内杀菌作用密切相关，同时又 能激发细胞内某些物质产生化学发光。
缺陷，自身免疫病等 (1)细胞增殖(转化)试验：可分为非特异性丝 裂原和特异性抗原两类。 *丝裂原主要有PHA、Con A和PWM； * 抗原刺激物有破伤风类毒素、 PPD 和白色 念珠菌等； *同种MHC及抗CD3单抗等 *肿瘤细胞-自体淋巴细胞混合培养 (2)T细胞介导的细胞毒试验：CTL (3)分泌功能检测 (4)T细胞功能的体内检测法 *接触性超敏反应*移植物抗宿主反应
(4) 巨噬细胞细胞毒测定 : 通常取小鼠腹腔巨
噬细胞，以 - 干扰素为激活剂使其活化，作 为效应细胞。用 125I-UdR 标记的 DBA/2 小鼠 肥大细胞瘤P815作为靶细胞。 (3)巨噬细胞吞噬功能测定：中药斑蝥酒精浸 液敷贴法诱发无菌性皮炎，从皮肤水泡渗出 液中收集巨噬细胞，在体外进行鸡红细胞吞 噬试验，计算吞噬率和吞噬指数，作为判断 巨噬细胞吞噬功能的指标。
根据细胞因子对特定的生物学活性 , 应用 相应的指示系统 ,同时与标准品对比测定 ,从而 得知样品中细胞因子的活性水平 , 一般以活性 单位(U/ml)表示。 靶细胞可直接从组织中分离 , 如骨髓细胞的 集落形成试验和胸腺细胞(脾细胞)的增殖试验, 或用体外培养的依赖细胞因子才能生长的细胞 因子依赖株及对细胞因子杀伤敏感的细胞作为 靶细胞。