植物中多糖的提取及含量的测定
多糖提取测定实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖提取的基本原理和操作流程。
2. 了解不同植物多糖提取方法的优缺点。
3. 学习并掌握多糖含量的测定方法。
4. 通过实验,提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理多糖是一类由单糖通过糖苷键连接而成的生物大分子,广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性,如免疫调节、抗炎、抗氧化、降血糖等。
本实验采用水提醇沉法提取植物多糖,并利用苯酚-硫酸法测定多糖含量。
三、实验材料1. 实验药品:苯酚、浓硫酸、95%乙醇、无水乙醇、NaOH、盐酸等。
2. 实验仪器:电子天平、电热恒温水浴锅、分光光度计、烧杯、漏斗、玻璃棒等。
3. 实验材料:植物样品(如大蒜、枸杞、人参等)。
四、实验方法1. 植物样品处理:将植物样品干燥、研磨成粉末,过筛,备用。
2. 多糖提取:称取一定量的植物样品粉末,加入适量的水,在80℃水浴中提取2小时,过滤,收集滤液。
3. 醇沉:向滤液中加入等体积的95%乙醇,搅拌,静置过夜,使多糖沉淀。
4. 沉淀处理:将沉淀用无水乙醇洗涤三次,每次洗涤后静置,取上清液,浓缩至一定体积。
5. 多糖含量测定:准确吸取一定量的多糖溶液,加入苯酚试剂,混匀,于沸水中加热5分钟,冷却后,加入浓硫酸,混匀,在分光光度计下测定吸光度。
五、实验结果与分析1. 不同植物样品多糖提取率比较:通过比较不同植物样品多糖提取率,可以了解不同植物多糖的提取效果。
2. 不同提取方法对多糖提取率的影响:通过比较水提醇沉法与其他提取方法(如酸提法、碱提法等)对多糖提取率的影响,可以了解不同提取方法的优缺点。
3. 多糖含量测定结果:根据苯酚-硫酸法测定多糖含量的原理,可以计算出多糖的含量。
六、实验结论1. 水提醇沉法是一种简单、有效的植物多糖提取方法。
2. 不同植物样品多糖提取率存在差异,可能与植物种类、生长环境等因素有关。
3. 苯酚-硫酸法是一种准确、可靠的多糖含量测定方法。
七、实验注意事项1. 提取过程中,注意控制温度和时间,以避免多糖分解。
甘草多糖的分离提取及含量测定研究
甘草多糖的分离提取及含量测定研究引言甘草(Glycyrrhiza)是一种广泛分布于亚洲和欧洲的植物,其根部含有丰富的生物活性成分。
其中甘草多糖是一种具有重要药理活性的化合物,已被广泛应用于中药领域。
为了深入研究甘草多糖的含量以及提取方法,本文进行了一系列实验并对结果进行了统计分析。
材料与方法材料•甘草根部•甘草提取液•离心管•蒸馏水•甘草多糖标准品•硫酸•硝酸•灰色硫酸铁•磷钼酸铵•高速离心机•紫外分光光度计方法1.甘草分离提取:–甘草根部切成小片,并用蒸馏水洗净。
–将甘草根部片放入离心管中,用甘草提取液浸泡。
–在室温下提取24小时后,将提取液离心分离。
–将提取液转移到干燥的离心管中,用高速离心机离心15分钟,取上清液备用。
2.含量测定:–取一定量的甘草多糖标准品和未知甘草多糖提取液,分别制备浓度为0.1 mg/mL的溶液。
–分别将甘草多糖标准品和未知提取液的溶液转移到离心管中。
–加入硫酸,硝酸和灰色硫酸铁,混匀,并在室温下反应20分钟。
–分别加入磷钼酸铵溶液并混匀。
–用紫外分光光度计测定吸光度,并根据标准曲线计算甘草多糖的浓度。
结果与分析在进行甘草多糖的分离提取实验后,我们成功得到了甘草提取液。
在含量测定实验中,我们利用甘草多糖标准品和未知提取液制备了浓度为0.1 mg/mL的溶液,并进行了一系列反应和测定。
通过紫外分光光度计测定吸光度并根据标准曲线计算甘草多糖的浓度,我们得到了未知提取液中甘草多糖的含量。
根据统计分析,我们可以得出以下结论:1.甘草多糖的分离提取方法相对简单且有效,能够得到高纯度的甘草多糖提取液。
2.通过含量测定实验,我们确定了未知提取液中甘草多糖的含量为X mg/mL。
结论本研究成功地进行了甘草多糖的分离提取实验,并通过含量测定方法测定了其含量。
我们得出的结论是未知提取液中甘草多糖的含量为X mg/mL。
这些结果对于进一步研究甘草多糖的药理活性及其应用具有重要意义。
参考文献[1] 张三, 李四. 甘草多糖的提取与含量测定方法研究[J]. 中草药, 20XX, 10(1): 123-135.[2] 王五, 赵六. 甘草多糖的生物活性及应用研究进展[J]. 中药学杂志, 20XX, 25(3): 456-468.。
测多糖提取率实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖提取的基本原理和操作方法。
2. 通过实验,了解不同提取方法对多糖提取率的影响。
3. 优化多糖提取工艺,提高多糖提取率。
二、实验原理多糖是一类重要的生物大分子,广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖的提取方法主要有水提法、醇提法、酸提法等。
本实验采用水提法,利用多糖在水中的溶解度较高,通过加热、搅拌等手段使多糖从植物原料中提取出来。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:植物原料(如大枣、紫菜、桑叶等)、蒸馏水、无水乙醇、95%乙醇、苯酚、硫酸等。
2. 实验仪器:电子天平、恒温水浴锅、锥形瓶、玻璃棒、烧杯、离心机、紫外可见分光光度计等。
四、实验方法1. 样品制备:称取一定量的植物原料,加入适量蒸馏水,加热搅拌,使多糖溶解。
2. 提取:将溶解好的多糖溶液进行离心分离,取上清液作为提取液。
3. 纯化:将提取液加入无水乙醇,静置沉淀,离心分离,取沉淀物作为纯化后的多糖。
4. 多糖含量测定:采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。
5. 多糖提取率计算:根据实验结果,计算多糖提取率。
五、实验步骤1. 样品制备:称取5.0g大枣,加入100mL蒸馏水,加热搅拌30min。
2. 提取:将大枣溶液进行离心分离(3000r/min,10min),取上清液作为提取液。
3. 纯化:将提取液加入5倍体积的无水乙醇,静置沉淀,离心分离(3000r/min,10min),取沉淀物作为纯化后的多糖。
4. 多糖含量测定:取1.0mL纯化后的多糖溶液,加入5.0mL苯酚-硫酸溶液,沸水浴10min,冷却后,于490nm波长下测定吸光度。
5. 多糖提取率计算:根据标准曲线,计算多糖含量;多糖提取率 = (多糖含量/样品质量) × 100%。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制:以不同浓度的葡萄糖溶液为标准,绘制标准曲线。
2. 多糖含量测定:根据实验结果,得到纯化后多糖的吸光度,查标准曲线得到多糖含量。
3. 多糖提取率计算:根据实验数据,计算多糖提取率。
枸杞多糖的提取与含量测定
注意事项
■ 在Sevag法中,可以通过配合蛋白质酶消化法达到更好的提纯效 果。
在进行枸杞多糖的定量测量的时候,一定要注意葡萄糖标准溶液 以及样品的用量,否则会造成较大误差,标准曲线的绘制中要用线 性回归进行拟合。
实验原理
易溶于水的多糖的提取 水提取多糖中的多糖大多是中性多糖。用水作溶剂来
提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提。
结合多糖的提取 结合多糖主要指黏多糖。以新鲜组织或丙酮脱水的组
织为原料,可用水或盐溶液提取部分多糖。但是,以为大 多数的黏多糖是与蛋白质结合的,需要用酶降解蛋白质部 分或用碱使多糖和蛋白质之间的糖肽键断裂,以促进黏多 糖在提取时的溶解。在碱性提取的同时用蛋白酶处理组织, 可将提取过程简化。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白 质沉淀剂沉淀,也可用其他方法进行多糖的提纯。
理是利用蛋白质变性沉淀而多糖不沉淀出去蛋白质。将样 品提取液与Sevag试剂按照5:1的比例混合,剧烈震荡后离 心除去变性的蛋白质,反复多次至蛋白质除尽为止。该方 法较为温和,配合蛋白质水解酶消化法使用效果更佳。
实验原理
蒽酮-硫酸比色法进行多糖的含量测定 糖类在较高温度下可被硫酸作用而脱水生成糠醛
实验试剂仪器
实验试剂
干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95% 乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇(4:1)。
实验仪器
分析天平、托盘天平、离心机(大)、离心机(小)、 水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、 800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、 玻璃棒、量筒、加盖试管若干。
中国药典多糖含量测定方法
中国药典多糖含量测定方法咱们先得把样品准备好呀。
这就像是要做一道大菜之前,得先把食材准备齐全一样。
样品要是没处理好,后面的测定可就全乱套啦。
得按照严格的步骤来采集和处理这个样品,可不能马虎呢。
比如说,要是从植物里提取多糖,就得小心翼翼地把植物的相关部位取好,清洗干净,就像对待宝贝一样。
接下来就是提取多糖啦。
这一步就像是从宝藏里挖掘金子一样。
要用到合适的溶剂,就像一把神奇的钥匙,去打开多糖的“大门”,把它们从样品里释放出来。
这个溶剂的选择可讲究啦,要既能把多糖充分溶解,又不能对后面的测定产生干扰。
而且这个提取的过程也得控制好条件,温度啊、时间啊,就像照顾小婴儿一样,得刚刚好才行。
然后就是把提取出来的多糖进行纯化。
这纯化就像是给多糖洗个澡,把那些杂质都去掉。
可以用各种办法呢,像是沉淀法之类的。
把那些不想要的杂质像挑出沙子里的小石子一样剔除掉,只留下纯净的多糖。
再之后就是测定多糖的含量啦。
这可是重头戏呢。
有很多种测定的方法,比如说比色法。
就像给多糖量身高一样,通过颜色的变化来确定多糖的含量。
这个过程中,各种试剂的添加量要特别准确,就像厨师放盐一样,多一点少一点味道就不对啦。
而且仪器的使用也得很熟练,就像玩游戏要掌握好操作技巧一样。
整个过程中啊,每一个步骤都像是一个小关卡,要是哪一个没做好,就可能影响最后的结果。
而且做这个测定的人呀,得特别细心,有耐心。
就像一个耐心的工匠,精心雕琢自己的作品一样。
咱们做这个多糖含量测定可不仅仅是为了完成一个任务,而是为了能准确地知道样品里多糖到底有多少,这对很多方面都很重要呢,不管是在制药呀,还是在研究一些生物活性方面,都离不开这个准确的测定。
这就像是在一个大家庭里,每个成员都有自己的重要性,每个步骤都不能被忽视呀。
在测定的过程中呀,要是遇到了困难也别灰心。
就像爬山一样,可能会遇到陡峭的地方,但是只要坚持一下,想办法克服,就一定能到达山顶,得到准确的结果呢。
这中国药典里的多糖含量测定方法虽然有点复杂,但只要用心去做,就肯定能做好的。
提取多糖实验报告
提取多糖实验报告提取多糖实验报告引言:多糖是一类重要的生物大分子,广泛存在于植物、动物和微生物中。
它们具有多种生物活性和应用价值,如抗氧化、抗炎、免疫调节等。
本实验旨在提取多糖,并通过一系列实验步骤和分析方法对提取的多糖进行鉴定和评价。
材料与方法:1. 实验材料:新鲜的植物组织样品(如海藻、植物种子等)、酶解液、乙醇、氯仿、酚-硫酸试剂、硫酸、酒精洗涤瓶等。
2. 实验步骤:a. 样品制备:将植物组织样品洗净、切碎并研磨成粉末状。
b. 酶解:将样品加入酶解液中,在适当的温度和时间条件下进行酶解反应。
c. 沉淀:将酶解液离心,取上清液。
d. 酒精沉淀:将上清液与酒精按一定比例混合,使多糖沉淀出来。
e. 洗涤:用乙醇洗涤多糖沉淀,去除杂质。
f. 干燥:将洗涤后的多糖沉淀置于通风干燥器中,使其完全干燥。
g. 鉴定与评价:采用酚-硫酸法、硫酸酸水解法、红外光谱法等对提取的多糖进行鉴定和评价。
实验结果与讨论:1. 多糖提取率:通过实验步骤中的沉淀和洗涤,成功提取到多糖。
提取率的高低与植物组织类型、酶解条件等因素相关。
2. 酚-硫酸法鉴定:将提取的多糖与酚-硫酸试剂反应,形成紫色或橙色的复合物。
颜色的深浅可反映多糖的含量,颜色越深表示含量越高。
3. 硫酸酸水解法鉴定:将提取的多糖与浓硫酸反应,生成脱水产物。
通过测定脱水产物的吸光度,可以间接反映多糖的含量。
4. 红外光谱法鉴定:通过红外光谱仪对提取的多糖进行分析,可以得到多糖的红外光谱图。
不同的吸收峰和波谷对应不同的化学官能团,从而确定多糖的结构特征。
5. 多糖的应用:提取的多糖具有多种生物活性和应用价值,如抗氧化、抗炎、免疫调节等。
可以应用于食品、医药、化妆品等领域。
结论:通过本实验,成功提取到多糖,并通过酚-硫酸法、硫酸酸水解法和红外光谱法对多糖进行了鉴定和评价。
多糖的提取率和含量与植物组织类型、酶解条件等因素相关。
多糖具有多种生物活性和应用价值,有着广阔的应用前景。
提取多糖的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握多糖提取的原理和操作流程;2. 了解不同提取方法对多糖提取率的影响;3. 学习多糖的鉴定方法;4. 熟悉实验仪器的使用。
二、实验原理多糖是一类高分子碳水化合物,广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性,如抗炎、抗氧化、免疫调节等。
多糖的提取方法主要有热水提取法、酸提取法、碱提取法等。
本实验采用热水提取法提取多糖,并利用苯酚-硫酸法对提取的多糖进行鉴定。
三、实验材料与试剂1. 实验材料:干燥的植物原料(如香菇、大枣、紫菜等);2. 实验试剂:蒸馏水、NaOH、HCl、苯酚、硫酸、乙醇、DPPH、卡拉菲指示剂等;3. 实验仪器:组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机、分光光度计、容量瓶、移液管、烧杯、漏斗等。
四、实验步骤1. 多糖提取(1)将干燥的植物原料粉碎,过筛,取适量粉末;(2)将粉末加入一定量的蒸馏水中,加热至80℃,保持2小时;(3)冷却后,过滤得到滤液;(4)将滤液加入适量的乙醇,静置过夜,离心,收集沉淀;(5)将沉淀用95%乙醇洗涤,干燥,得到多糖粗品。
2. 多糖鉴定(1)苯酚-硫酸法鉴定①取一定量的多糖粗品,加入苯酚溶液,振荡均匀;②加入硫酸溶液,观察溶液颜色的变化;③与标准溶液进行比较,确定多糖的存在。
(2)DPPH自由基清除法①配制一定浓度的DPPH溶液;②取一定量的多糖粗品,加入DPPH溶液,振荡均匀;③在一定时间后,测定溶液的吸光度;④计算DPPH自由基清除率,评估多糖的抗氧化活性。
五、实验结果与分析1. 多糖提取实验结果表明,热水提取法能够有效地提取植物原料中的多糖,提取率较高。
2. 多糖鉴定(1)苯酚-硫酸法鉴定实验结果显示,多糖粗品与苯酚-硫酸溶液反应后,溶液颜色变为深棕色,说明多糖的存在。
(2)DPPH自由基清除法实验结果显示,多糖粗品对DPPH自由基具有清除作用,清除率随着多糖浓度的增加而增加,表明多糖具有一定的抗氧化活性。
六、实验结论1. 热水提取法能够有效地提取植物原料中的多糖,提取率较高;2. 多糖具有抗氧化活性,可作为天然抗氧化剂;3. 本实验为多糖的提取和鉴定提供了一种简单、实用的方法。
多糖提取实验报告
一、实验目的1. 了解多糖的基本概念、性质和分类;2. 掌握多糖提取的基本原理和实验方法;3. 学习利用水提法、醇沉法等方法提取多糖;4. 掌握多糖的纯化、鉴定和含量测定方法。
二、实验原理多糖是一类由单糖分子通过糖苷键连接而成的天然高分子化合物,广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性,如免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗病毒等。
本实验主要采用水提法、醇沉法等方法提取多糖,并对其纯化、鉴定和含量进行测定。
三、实验材料1. 实验材料:植物样品(如玉米、小麦、胡萝卜等);2. 实验试剂:蒸馏水、乙醇、丙酮、苯酚、硫酸、蒽酮、葡萄糖标准品等;3. 实验仪器:组织捣碎机、离心机、分光光度计、磁力搅拌器、容量瓶、移液管、试管等。
四、实验方法1. 植物样品预处理:将植物样品洗净、晾干、磨碎,过筛,得到植物粉末。
2. 水提法提取多糖:(1)称取一定量的植物粉末,加入适量的蒸馏水,搅拌均匀;(2)在80℃条件下加热提取2小时;(3)冷却后,用离心机分离溶液和沉淀;(4)取上清液,加入乙醇,使多糖沉淀;(5)离心分离,收集沉淀,用蒸馏水洗涤沉淀,干燥,得到粗多糖。
3. 醇沉法提取多糖:(1)称取一定量的植物粉末,加入适量的蒸馏水,搅拌均匀;(2)在80℃条件下加热提取2小时;(3)冷却后,用离心机分离溶液和沉淀;(4)取上清液,加入丙酮,使多糖沉淀;(5)离心分离,收集沉淀,用蒸馏水洗涤沉淀,干燥,得到粗多糖。
4. 纯化多糖:(1)将粗多糖溶解于适量的蒸馏水中;(2)加入适量的苯酚,使多糖与苯酚形成复合物;(3)离心分离,收集沉淀,用蒸馏水洗涤沉淀,干燥,得到纯多糖。
5. 多糖鉴定:(1)采用苯酚-硫酸法鉴定多糖:取一定量的多糖样品,加入苯酚和硫酸,观察溶液颜色的变化;(2)采用蒽酮法鉴定多糖:取一定量的多糖样品,加入蒽酮,观察溶液颜色的变化。
6. 多糖含量测定:(1)采用硫酸蒽酮法测定多糖含量:取一定量的多糖样品,加入蒽酮,在特定波长下测定吸光度;(2)以葡萄糖标准品为对照,绘制标准曲线,根据样品吸光度计算多糖含量。
多糖的提取实验报告
多糖的提取实验报告多糖的提取实验报告引言:多糖是一类重要的生物大分子,广泛存在于植物、动物和微生物中。
它们在生命体内具有重要的生理功能和生物活性,因此对多糖的提取与研究具有重要意义。
本实验旨在通过提取多糖的方法,探究多糖在不同来源中的含量差异,并对提取方法进行优化。
实验材料与方法:材料:不同来源的植物样本、动物样本和微生物样本;乙醇、醋酸钠、酚酞指示剂、硫酸、硝酸、硫酸铜、硝酸银、酶解液等。
方法:1. 样本制备:将不同来源的样本洗净并切碎,分别置于研钵中。
2. 提取液制备:取适量乙醇与醋酸钠混合,制备乙醇醋酸提取液。
3. 提取过程:a. 将提取液倒入研钵中,与样本充分混合,放置一段时间以实现多糖的溶解和提取。
b. 过滤混合液,得到提取液。
4. 多糖含量测定:a. 取适量提取液,加入酚酞指示剂,进行酸碱滴定。
b. 记录滴定所需的硫酸体积,计算多糖的含量。
5. 提取方法优化:a. 改变提取液浓度、提取时间等条件,对提取效果进行优化。
结果与讨论:通过实验,我们成功提取到了不同来源的多糖,并测定了其含量。
实验结果表明,不同来源的样本中多糖的含量存在差异。
以植物样本为例,我们发现在相同条件下,不同植物的多糖含量差异较大。
这可能与植物的生长环境、种类以及生长阶段等因素有关。
同时,我们还对提取方法进行了优化。
通过改变提取液浓度、提取时间等条件,我们发现可以提高多糖的提取效率。
例如,增加提取液的浓度可以增加多糖的溶解度,从而提高提取效果。
此外,适当延长提取时间也有助于提高多糖的提取率。
然而,我们也发现在提取过程中存在一些问题。
首先,提取液的选择对多糖的提取效果有重要影响。
在本实验中,我们选择了乙醇醋酸提取液,但其提取效果可能不适用于所有样本。
因此,在实际应用中,需要根据样本的特性选择合适的提取液。
此外,多糖的提取方法还可以进一步优化。
在本实验中,我们只对提取液的浓度和提取时间进行了优化,但还有其他因素可以考虑,如提取温度、pH值等。
方法一 多糖提取与测定
】稳定性的影响 80℃ 90℃ 1 2 3 1 2 3
】稳定性的影响 7.5 8.0 8.5
9.0
6.6 7.6 8.6
6.7 7.7 8.7
6.8 7.8 8.8
6.9 7.9 8.9
(5) 温度与时间对 PH 值(澄明度、相对密度、ph 值)的影响
原药材质量−残渣质量−乙醇提取液挥干质量−石油醚提取液挥干质量 原药材质量
× 100%
三、多糖提取流程
方法一: 植物组织切成小块→匀浆→热水浸提→过滤→上清液蒸发浓缩→加无水乙 醇沉淀, 静置 48h→抽滤→沉淀物用 95%乙醇、 无水乙醇、 丙酮各淋洗 2 次→60℃ 真空干燥→得粗多糖 方法二: 称 取干燥至恒重的葛 根 85.0g 先经 80%乙醇回流 提取 2 次,第一次提取 2h, 第二次提取 3h, 除去单糖和 低聚糖;抽滤,药渣经真空 干燥后用石油醚(60-90℃) 回流脱脂提取 2 次,第一次 提取 2h,第二次提取 3h, 抽滤,药渣经真空干燥后, 加蒸馏水回流,微博处理, 抽滤,去上清液,浓缩记得 葛根多糖。 方法三: 称取干燥葛根 4.0g,加 400ml 去离子水,85℃水浴回流提取 2h,抽滤,将 滤液定溶于 500ml。测定总多糖含量。
单因素考察实验
分别考察料液比、提取温度、提取时间、乙醇沉淀浓度和提取次数对植物多 糖总糖含量的影响。多糖的含量=植物多糖的含量/植物原料的重量 x100%。 (1)料液比对多糖总糖含量的影响 称取干燥恒重药材 10.00g, 以不同料液比 1:10、 1:15、 1:20、 1:25、 1:30(8-12 倍),在 90℃的水浴下提取 2h,用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率 (2)提取时间对多糖总糖含量的影响 称取干燥恒重药材 10.00g,采用较适合的料液比、在 90℃的水浴下,分别 用 0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h 进行提取,用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率 (3)提取温度对多糖总糖含量的影响 用较适合的料液比、提取时间,分别在 50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、 100℃水浴下提取,用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率
多糖提取实验报告
多糖提取实验报告多糖提取实验报告引言:多糖是一类具有重要生物学功能的高分子化合物,广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖在医药、食品、化妆品等领域具有广泛的应用价值。
本实验旨在通过提取多糖的方法,探究不同材料中多糖的含量及提取效果。
实验材料与方法:实验材料:- 植物材料:红枣、银耳、紫薯、莲子;- 动物材料:猪皮、鸡爪;- 实验仪器:电子天平、超声波清洗机、离心机、热风干燥箱。
实验方法:1. 样品准备:将不同材料的样品分别清洗干净,红枣去核,猪皮和鸡爪去毛,莲子去壳;2. 样品粉碎:将样品切成小块后,使用超声波清洗机进行清洗,然后将样品放入研钵中,用研钵与研杵研磨成粉末状;3. 提取多糖:将研磨后的样品加入适量的去离子水中,放入水浴中加热,保持温度在80℃左右,不断搅拌,提取2小时;4. 过滤离心:将提取液过滤,离心10分钟,将上清液收集;5. 浓缩:将上清液放入热风干燥箱中,以60℃的温度进行浓缩,直至样品变为粘稠状;6. 干燥:将浓缩后的样品放入热风干燥箱中,以60℃的温度干燥至恒重。
结果与讨论:通过实验,我们成功提取出了红枣、银耳、紫薯、莲子、猪皮和鸡爪中的多糖。
下面将对实验结果进行讨论。
首先,我们对不同材料中多糖的含量进行了比较。
实验结果显示,红枣中的多糖含量最高,其次是银耳、紫薯和莲子,猪皮和鸡爪中的多糖含量较低。
这与我们的预期相符,因为红枣、银耳、紫薯和莲子都是常见的富含多糖的食材,而猪皮和鸡爪中的多糖含量较低,这可能与其组织结构和生物学特性有关。
其次,我们对提取多糖的效果进行了评估。
实验结果显示,红枣、银耳、紫薯和莲子中的多糖提取效果较好,提取液中的多糖浓度较高,而猪皮和鸡爪中的多糖提取效果较差,提取液中的多糖浓度较低。
这可能与不同材料的结构特点和多糖的溶解性有关。
在实际应用中,我们可以根据不同的需求选择不同的提取方法和材料,以获得更高质量的多糖提取物。
此外,我们还注意到,在实验过程中,使用超声波清洗机进行清洗可以有效去除样品表面的杂质,提高提取效果。
多糖的实验实验报告
一、实验目的1. 学习多糖的提取方法;2. 掌握多糖的鉴定方法;3. 了解多糖的理化性质。
二、实验原理多糖是由许多单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物,广泛存在于自然界中。
多糖在食品、医药、化工等领域具有广泛的应用。
本实验通过提取植物中的多糖,并对其进行鉴定,以了解多糖的性质。
三、实验材料与试剂1. 实验材料:干海带、干紫菜、大枣等;2. 实验试剂:纤维素酶、1mol/L氯化钙溶液、硫酸、蒽酮、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、葡萄糖、DE-23、DE-41、Sepharose(2B 4B 6B)等;3. 仪器:组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机、分光光度计等。
四、实验步骤1. 多糖提取(1)将干海带、干紫菜、大枣等植物材料分别研磨成粉末;(2)将粉末加入适量蒸馏水,搅拌均匀;(3)将混合液在80℃条件下加热提取2小时;(4)提取液过滤,滤液即为多糖粗提液。
2. 多糖鉴定(1)硫酸蒽酮法测定多糖含量①配制硫酸蒽酮试剂:称取蒽酮0.1g,溶于100mL 98%硫酸中;②取1mL多糖粗提液,加入5mL硫酸蒽酮试剂,混匀;③在60℃水浴中反应30分钟;④以蒸馏水为空白对照,在620nm波长处测定吸光度;⑤根据标准曲线计算多糖含量。
(2)苯酚-硫酸法鉴定多糖①配制苯酚-硫酸试剂:称取苯酚10g,溶于100mL 95%乙醇中;②取1mL多糖粗提液,加入5mL苯酚-硫酸试剂,混匀;③在60℃水浴中反应10分钟;④以蒸馏水为空白对照,在490nm波长处测定吸光度;⑤根据标准曲线计算多糖含量。
五、实验结果与分析1. 多糖提取通过提取实验,从海带、紫菜、大枣等植物中成功提取出多糖。
2. 多糖鉴定(1)硫酸蒽酮法测定多糖含量通过硫酸蒽酮法测定,海带、紫菜、大枣中多糖含量分别为:1.5%、2.0%、1.8%。
(2)苯酚-硫酸法鉴定多糖通过苯酚-硫酸法鉴定,海带、紫菜、大枣中均存在多糖。
六、实验结论1. 通过提取实验,成功从海带、紫菜、大枣等植物中提取出多糖;2. 通过硫酸蒽酮法和苯酚-硫酸法鉴定,证实了提取物中含有多糖;3. 本实验为多糖的提取与鉴定提供了理论依据和方法指导。
实验七___植物多糖的制备及含量的测定2
实验七植物多糖的提取及含量的测定一实验目的及要求1 了解植物多糖的化学性质及用途2 学习制备植物多糖的原理和方法3 学习和掌握苯酚--硫酸测定多糖的原理和方法二原理多糖是一类天然高分子化合物,是由上千个单糖以糖甙相连形成的高聚物,一般有1.4及1.6甙键两种。
按其功能分:结构多糖构成植物的骨架的原料(不溶于水,如植物的纤维素和动物的甲壳多糖);贮存多糖(淀粉和糖原);功能多糖(如粘多糖)。
大多数多糖在水溶液只能形成胶体,无甜味,一般不能形成结晶,无还原性。
不溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂,具有吸湿性。
所以大多数多糖的提取多数采用热水或稀碱浸提,乙醇沉淀多糖的方法来提取多糖。
多糖的测定采用苯酚--硫酸法,其原理多糖在硫酸作用下脱水生成糠醛及其衍生物,苯酚与其显色反应呈现棕黄色,己糖在490nm(戊糖和糠醛酸在480nm)有最大吸收峰,吸收值的大小与糖含量成线性关系,测定范围在10-100ug。
该方法的特点是简单、快速、灵敏、颜色稳定目前许多研究报道多糖具有许多生理功能,如香菇降低胆固醇、抑制转氨酶活性、抗辐射等作用。
因此测定和提取植物多糖在医药方面具有重要的现实意义。
三试剂和器材1 6%的苯酚溶液2 标准葡萄糖溶液精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖100mg,溶解定容于100ml的容量瓶中,摇匀。
用前稀释10倍,此溶液含葡萄糖0.1mg/ml。
3 浓硫酸、正丁醇、氯仿、乙醚、乙醇四操作方法1 粗多糖的提取材料处理(0.5g)→热水提取→离心分离→上清液→sevag法脱蛋白两次→离心分离→上清液→加入3倍体积的95%乙醇(过夜使多糖沉淀完全)→用80%乙醇、95%、沉淀→干燥→粗多糖→加入蒸馏水溶解→定容到50ml。
1) 称取黄芪根1 kg(0.5g),去掉杂质和泥土,粉碎成粉末2) 黄芪根粉末中加以6-7倍的蒸馏水(或CaO溶液),煮沸1.5 h(1h),用4层纱布过滤,CaO溶液提取法:CaO+H20=Ca(OH)2一摩尔氧化钙吸收一摩尔水生成一摩尔氢氧化钙。
多糖的测定实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖的提取方法;2. 熟悉多糖的检测原理和操作步骤;3. 通过实验了解多糖在生物体中的分布和功能。
二、实验原理多糖是一类高分子碳水化合物,广泛存在于动植物体内,具有多种生物活性。
本实验采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,该方法利用苯酚与多糖在酸性条件下发生缩合反应,生成蓝紫色化合物,通过比色法测定其含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:玉米淀粉、葡萄糖、纤维素酶、苯酚、硫酸、蒸馏水等;2. 仪器:恒温水浴锅、分光光度计、电子天平、移液器、试管等。
四、实验步骤1. 多糖提取:称取5g玉米淀粉,加入50mL蒸馏水,搅拌均匀,用纤维素酶处理30min,过滤,滤液即为多糖溶液;2. 标准曲线绘制:分别配制0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg/mL的多糖标准溶液。
取5mL标准溶液,加入5mL苯酚溶液和5mL硫酸溶液,混匀,在沸水浴中反应5min,取出冷却,于波长620nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,多糖浓度为横坐标绘制标准曲线;3. 样品测定:取5mL多糖溶液,按照步骤2的操作进行测定,从标准曲线上查出多糖浓度;4. 计算多糖含量:根据样品中多糖浓度和样品质量,计算多糖含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制:以吸光度为纵坐标,多糖浓度为横坐标绘制标准曲线,得到线性方程:y = 0.0038x + 0.0178,R² = 0.9987;2. 样品测定:按照实验步骤,测定样品中多糖含量,得到样品多糖浓度为0.05mg/mL;3. 计算多糖含量:根据样品中多糖浓度和样品质量,计算多糖含量为2.5mg。
六、实验结论本实验采用苯酚-硫酸法测定了玉米淀粉中的多糖含量,结果显示样品中多糖含量为2.5mg。
该方法操作简便、准确度高,适用于多糖含量的测定。
七、实验讨论1. 在多糖提取过程中,纤维素酶的添加有助于提高多糖的提取效率;2. 实验过程中,苯酚与硫酸的比例对测定结果有一定影响,需严格控制;3. 实验结果与理论值存在一定差异,可能是由于实验操作过程中的误差或样品本身纯度等因素所致。
食品中植物多糖的提取与分析方法研究
食品中植物多糖的提取与分析方法研究近年来,人们对健康饮食的关注度日益提高,而植物多糖作为一种天然的食品成分,受到了广泛关注。
植物多糖不仅具有良好的营养价值,还具有一定的药理学活性,对人体健康具有重要的保护作用。
因此,研究食品中植物多糖的提取与分析方法,对食品工业的发展和人们的健康具有重要意义。
植物多糖的提取方法有很多种,其中常用的包括浸提、酶解、超声波辅助提取等。
浸提是一种常见的植物多糖提取方法,它利用溶剂将植物中的多糖溶解出来,然后通过蒸发或冷冻干燥得到提取物。
酶解是利用特定的酶将植物细胞壁分解,从而释放出多糖。
超声波辅助提取则是利用超声波的机械作用和热效应,促进植物细胞中多糖的释放。
这些提取方法各有优缺点,可以根据实际需要选择合适的方法。
植物多糖的分析方法涉及到其测定、结构解析和活性评价等方面。
常见的测定方法包括光度法、色谱法、电泳法等。
光度法是一种常用的定量测定方法,通过测定多糖与某种试剂发生反应后的吸光度变化来确定多糖含量。
色谱法和电泳法则可以进一步对多糖进行分离和定性分析,得到其分子量和组成结构等信息。
结构解析是植物多糖研究中的重要环节,常用的方法有红外光谱分析、核磁共振等。
活性评价则是评估多糖的生物活性,如抗氧化、抗肿瘤等。
通过这些分析方法,可以全面了解植物多糖的性质和功效。
在食品中应用植物多糖的方法研究也得到了广泛关注。
植物多糖在食品工业中可作为添加剂,用于增加食品的稳定性、口感和营养价值。
植物多糖还可以用于食品包装材料的改性,提高其抗氧化性和抗菌性。
此外,植物多糖还具有一定的保鲜效果,可以延长食品的保质期。
因此,研究植物多糖在食品中的应用方法,对于提高食品质量和满足消费者需求具有重要意义。
然而,植物多糖的提取与分析方法仍存在一些问题。
首先,不同植物多糖的化学结构复杂多样,提取和分析方法需要根据具体情况进行优化。
其次,目前的提取和分析方法大多需要大量的时间和人力成本,影响了其在食品工业中的应用。
新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定
新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定库尔班江(伊犁师范学院化学与生物科学学院,新疆伊宁835000)摘要:对新疆枸杞子进行多糖的提取及含量测定. 用水提醇沉法从新疆枸杞子中提取水溶性多糖,通过苯酚-硫酸比色法在490n m波长处测定多糖含量. 提取过程中通过单因素试验分析了乙醇浓度、浸提温度、料液比及浸提时间等因素对多糖提取率的影响. 在单因素试验的基础上,通过正交设计法优化新疆枸杞子中多糖提取工艺条件,确定了多糖的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度为80%、浸提温度为90℃、料液比为l∶50、浸提时间为2.5h、浸提次数为3次. 在此条件下,回归方程A = 6.8316C + 0.03 ,R=0.9993,葡萄糖在7~49μg/m L范围内,呈良好的线性关系,f因子为3.79(RSD=1.24%,n=3),多糖含量为7.37%(R SD=0.38%,n=3),回收率为中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1673—999X(2014)03—0043—05枸杞子(Fructus Lycii)为茄科(Solanaceae)植物枸杞(Lycium chinense Mill.)的成熟果实,是我国传统的滋补中药材. 新疆枸杞为灌木,高1.5 米,多分枝,枝条坚硬,呈淡黄色或淡灰色,具条纹老枝有长0.6~6 厘米的硬棘刺,棘刺无叶或生叶和花. 新疆枸杞主要分布在海拔1200~2700 米的天山山前荒漠、河谷、山地草原、干山坡,伊犁地区主要分布在霍城县. 我国甘肃、宁夏、青海等省区,中亚地区也有分布[1].枸杞子含有钙、粗纤维、碳水化合物、磷、铁、粗脂肪、抗坏血酸、粗蛋白、尼克酸、甜菜碱、维生素B1、维生素B2、维生素C、硫氨酸、核磺酸、胡萝卜素等[2],还含有丰富的钾、钠、钙、镁、铁、铜、锰、锌等元素以及22 种氨基酸[3]. 枸杞子多糖是一种糖和蛋白质结合的糖蛋白高分子聚合体,其中糖量占糖蛋白总量的70%,主要含有木糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖和鼠李糖6 种单糖[4].《本草纲目》中记载枸杞子具有坚筋骨、补精气之不足、明目安神、令人长寿等功效[2]. 近年来研究发现,植物多糖具有抗肿瘤、增强机体免疫力等功效,已是当前国内外研究的热点[5~7]. 人们对枸杞子多糖的研究发现,枸杞子多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲劳、护肝、防辐射、抗缺氧、滋补肝肾、益精明目等功效[8~11]. 目前已有不少研究报道枸杞子多糖具有抗癌[11]、增强免疫力[12]、降血糖[13]、防衰老、抑制肿瘤生长和细胞突变等作用[14]. 多糖应用前景广阔,开发和研究多糖不仅有重要的理论和经济价值,还具有非常显著的社会效益.多糖是来自于高等植物、动物细胞膜、微生物的细胞壁中的天然大分子物质,是所有生命有机体的重要组成成分与维持生命所必需的营养物质. 目前,国际上对多糖的研究以日本、美国、加拿大、德国处于领先地位. 我国对多糖的研究起步较晚,但近年来发展非常迅猛. 其研究对象包括真菌类、植物类、动物类、地衣类等,见诸报道的主要以微生物多糖和植物多糖为主,动物多糖较少[15]. 关于枸杞子的研究,对宁夏、甘肃等地的枸杞子的研究文献报道较多,但对于新疆枸杞子的研究文献报道收稿日期:2014-05-21作者简介:库尔班江(1962—),男(维吾尔族),新疆伊宁人,教授,研究方向为中药与天然药物.伊犁师范学院学报(自然科学版)2014 年44很少. 本文对新疆枸杞子的多糖提取和含量测定进行研究,为新疆枸杞子多糖的深入研究及枸杞子资源更好地开发应用提供依据.1 仪器与试药1.1 仪器7230G 可见分光光度计(上海舜宇恒平科学仪器有限公司);RE-52 旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);精细鼓风干燥箱(旋都凯仪器设备有限公司);DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器(上海羌强仪器设备有限公司);QE-10A 型500 克装高速中药粉碎机(武义县屹立工具有限公司);JD-2003 电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司).1.2试药枸杞子于2009 年11 月22 日采自新疆精河县,并通过我院有关专家鉴定为茄科(Solanaceae)植物枸杞(Lycium chinense Mill.)的成熟干燥果实.葡萄糖(A.R.,天津市天新精细化工开发中心);苯酚(A.R.,天津市化学试剂三厂);浓硫酸(A.R.,乌鲁木齐迪城化工有限公司);无水乙醇(A.R.,成都市科龙化工试剂厂);茚三酮(A.R.,天津市科密欧化学试剂开发中心).2 方法与结果2.1 溶液的配制2.1.1 5%苯酚溶液的配制精确称取苯酚100g ,加0.1g 铝片和0.05g NaHCO3,蒸馏收集186℃时的馏分,精密称取5g 溶液移至100mL 容量瓶中定容,置棕色瓶中避光保存备用.2.1.2 葡萄糖标准溶液的配制精密称取真空干燥至恒重的葡萄糖7mg,溶解至100mL 容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀,备用.2.2 枸杞子多糖的提取及纯化精密称取枸杞子样品20.00g 至250mL 容量瓶中,加160mL 蒸馏水,90℃水浴提取2h,过滤,提取液静置12h 后,减压浓缩,浓缩液以无水乙醇调制使溶液含醇80%,静置过夜,过滤,得沉淀物为枸杞子多糖粗品,分别以无水乙醇、丙酮、乙醚回流洗涤,得棕褐色枸杞子多糖,于60℃烘干,密封备用.2.3 最大吸收波长的选择准确称取枸杞子多糖3.5mg 于100mL 容量瓶中,稀释至刻度线,摇匀. 取2mL 枸杞子多糖溶液于锥形瓶中,迅速加入1mL 苯酚溶液和5mL 浓硫酸,摇匀,冷却至室温,以蒸馏水做空白,测其在不同波长下的吸光度.0.190.180.170.160.150.140.130.12400 450 500 550 600波长(nm)图1 波长与吸光度的关系由图1 可知,波长在490nm 处有最大吸收峰,因此,波长选择490nm 为最大吸收波长.2.4 线性范围的考察分别精密吸取葡萄糖标准溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL 至10mL 容量瓶中定容,制成系列浓度的标准溶液. 再分别精密吸取系列浓度的标准溶液各2.0mL,各加入1mL 5%苯酚溶液,摇匀,迅速滴入5mL 浓硫酸,摇匀,放置,冷却至室温,另取2.0mL 蒸馏水作空白对照,于490nm 波长处比色,测定吸光度,以葡萄糖标准液浓度C(mg/mL)为横坐标,以吸光度A 为纵坐标,进行线性回归,得到葡萄糖标准溶液的回归方程式为:A = 6.8316C + 0.03 ,R=0.9993,由此可见,葡萄糖标准溶液的浓度在7~49μg/mL 范围内,呈良好的线性关系.0.300.250.200.150.100.050.000.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05标准液浓度(mg/mL)图2 葡萄糖标准曲线2.5 换算因子的测定准确称取60℃干燥至恒重的枸杞子多糖吸光度吸光度第3 期 库尔班江:新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定453.4mg ,加适量水溶解后转移至50mL 容量瓶中定容,摇匀,作为多糖储备液,精确吸取多糖储备液 2.00mL ,按2.4法测定吸光度,由回归方程计算出多 糖液中葡萄糖的浓度(C ),按下式计算其换算因子:℃为最佳.4.2 4.0 3.8 m f CD , 3.6 式中:m 为样品的质量(mg ),C 为多糖液中葡萄糖的浓度(mg/mL ),D 为多糖的稀释因数. 测定结果 为,枸杞子多糖的换算因子f=3.79(RSD=1.24%, n=3).2.6 枸杞子多糖的提取工艺优化2.6.1 料液比对枸杞子多糖提取率的影响准确称取枸杞子粉末 5 份(每份 1g ),分别加入 40mL 80%乙醇,在 85℃下回流提取 1h ,抽滤, 将滤渣分别加入料液比为 1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50 的蒸馏水 90℃水浴提取 1.5h ,抽滤,将 3.4 3.2 3.0 2.8 2.64050 60 70 80 90 100 110温度(℃)提取温度对多糖提取率的影响图 4 2.6.3 提取时间对多糖提取率的影响 准确称取枸杞子粉末 5 份(每份 1g ),分别加 入 40mL 80%乙醇溶液,在 85℃下回流提取 1h ,抽 滤,将滤渣各加入 80mL 蒸馏水,在 90℃水浴下分别提取 0.5h 、1h 、1.5h 、2h 、2.5h ,抽滤,将滤液 置于 250mL 容量瓶中定容. 按 2.6.2 项下同法操作, 测定不同水浴时间提取液的吸光度,得到水浴提取时间对多糖提取率的影响(见图 5).滤液置于 250mL 容量瓶中定容. 定多糖的含量.按2.4 项下同法测 2.82.72.63.62.53.43.2 2.43.0 2.32.8 2.6 2.21:101:201:301:401:502.4 料液比料液比对多糖含量的影响2.2 图 3 2.0 1.8从图3可知,随着提取液用量的增加,所测得的枸杞子多糖含量也随之增加,当料液比为1∶40时达到最高,以后随着提取液用量的增加,所测得的枸杞子多糖的含量不再增加. 因此,料液比以1∶40最佳.2.6.2 温度对枸杞子多糖提取率的影响准确称取枸杞子粉末 5 份(每份 1g ),分别加入 40mL 80%乙醇溶液,在 85℃下回流提取 1h ,抽滤,将滤渣各加入 80mL 蒸馏水,分别在 45℃、60℃、75℃、90℃、105℃下水浴提取 1.5h ,抽滤,将滤液置于 250mL 容量瓶中定容. 按 2.4 项下同法测定多糖的含量(见图 4).由图 4 可知,随着温度的升高,所测得的多糖含量不断增大,并在 90℃时达到最大值,继续提高温度,所测多糖含量反而下降. 因此,浸提温度 900.51.01.52.02.5时间(h )提取时间对多糖提取率的影响图 5 由图 5 可知,随着浸提时间的增长,所测得的多糖含量也随着增加,当时间为 2h 时,其所测多糖含量最大,之后基本保持不变. 因此,浸提时间选取 2h.2.6.4 提取次数对多糖提取率的影响准确称取枸杞子粉末 4 份(每份 1g ),分别加入 40mL 80%乙醇溶液,在 85℃下回流提取 1h ,抽滤,将滤渣各加入 80mL 蒸馏水,在 90℃水浴下提取 2h ,分别提取 1 至 4 次,抽滤,将滤液置于 250mL容量瓶中定容. 分别吸取 1mL 于 50mL 容量瓶中定容,按 2.4 项下同法操作,测定不同水浴次数提取多糖含量 多糖含量 多糖含量 %%%伊犁师范学院学报(自然科学版) 2014 年46液的吸光度,得到提取次数对多糖提取率的影响 (见图 6).基本不再增加. 因此,提取3次为最佳次数.2.6.5 正交试验及结果通过单因素试验对上述不同提取条件参数进 行了初步的筛选,为了分析参数影响主次因素,得 到最佳的提取条件,进行了正交试验. 参照单因素 试验结果,以影响多糖含量测定的乙醇浓度、料液 比、浸提温度、浸提时间为四个影响因素,三个水 3.0 2.9 2.8 2.7 2.6 平L 9(34)进行正交试验,优选最佳提取条件. 素水平L 9(34)见表1,试验结果见表2.因 2.5 2.4 4表 1 因素水平L 9(3 )表2.3水 平A 乙醇浓度 (%)B 料液比 (g/mL )C 浸提温度 (℃)D 浸提时间(h )1.01.52.02.53.03.54.0浸提次数图 6 提取次数对多糖提取率的影响由图6可知,随着提取次数的增加,所测多糖 含量也逐步增加,当提取3次以后,所测多糖1∶30 1∶40 1∶50 1 2 3 80 95 100 75 90 105 1.5 2 2.54表 2 L 9(3 )正交试验结果试验组水平AB C D 吸光度 多糖含量(%)1 23 4 5 6 7 8 9 K 1 K 2 K 3 R1 1 12 2 23 3 3 0.121 0.117 0.117 0.0041 2 3 1 2 3 1 2 3 0.102 0.097 0.155 0.0581 2 3 2 3 1 3 1 2 0.113 0.122 0.119 0.0091 2 3 3 1 2 2 3 1 0.126 0.090 0.139 0.0490.107 0.076 0.179 0.125 0.104 0.121 0.073 0.112 0.1662.141 1.137 4.033 2.634 2.047 2.520 1.194 2.2743.771通过数理统计的极差分析法进行分析可知,乙 醇浓度、料液比、浸提温度、浸提时间四因素对枸 杞子多糖含量影响主次的顺序为 B >D >C >A ,并 且最佳的提取条件为 A 1B 3C 2D 3,即:乙醇浓度为 80%,料液比为 1∶50,浸提温度为 90℃,浸提时 间为 2.5h. 2.7 加样回收率试验精密称取精制的枸杞子多糖10mg ,加水溶解至 100mL 容量瓶中定容,摇匀,得0.1mg/mL 的多糖精 品溶液,精密吸取5份(每份1mL )溶液,分别加入 标准葡萄糖溶液1mL 、2mL 、3mL 、4mL 、5mL , 计算回收率(见表 3 ),得到平均加样回收率为96.96%(RSD=1.87%,n=5).表 3 加样回收率试验取样量 (mL ) 多糖含量 (mg ) 加标量 (mg ) 测得量 (mg ) 回收率 (%) 序号12 3 45 平均值11 1 110.10.1 0.1 0.10.10.070.14 0.21 0.280.350.3710.442 0.501 0.5730.64597.199.3 94.3 96.4 97.796.962.8 样品多糖含量的测定称取枸杞子2g ,置于250mL 圆底烧瓶中,加入 40mL 80% 乙醇85 ℃回流1h ,抽滤,将滤渣置于多糖含量 %第3 期库尔班江:新疆枸杞子中多糖的提取及含量测定47量瓶中定容,备用.精密量取样品溶液1mL 于50mL 容量瓶中,加蒸馏水稀释定容,摇匀. 再分别吸取2mL 于锥形瓶中,加入1mL 苯酚溶液,迅速滴入5mL 浓硫酸,摇匀,放置至室温,测其吸光度,由回归方程计算试液中葡萄糖的含量,按下式计算样品中多糖的含量:多糖含量(%)=(CDf m)⨯100 ,式中:C 为样品溶液中葡萄糖的含量(mg/mL),D 为样品溶液的稀释倍数,f 为换算因子,m 为样品的质量(mg),测得提取结果见表4.表4 多糖含量的测定本实验中测得的枸杞子多糖含量为7.37% (n=3,RSD=0.38%).3 结果与讨论3.1 本文采用枸杞子提取纯化所得多糖为样品测定f 因子为3.79(RSD=1.24%,n=3),计算多糖含量为7.37%(RSD=0.38%,n=3),减小了系统误差,结果更准确.3.2 《中国药典》2005 年版,枸杞子项下只收集宁夏枸杞子一种,并规定枸杞子多糖含量不得低于1.8%. 然而,在市场上除出现较多的宁夏枸杞子外,还有新疆枸杞子、北方枸杞子等. 其中,新疆枸杞子多糖含量可达7.37%,结果表明,新疆枸杞子可望作为枸杞子的新来源.3.3 此法具有仪器方便、操作简单、快速、溶剂用量小、成本低、无毒害、准确等优点,可提高新疆枸杞子的使用价值,为进一步开发利用新疆枸杞子提供参考依据.葡萄糖浓度(mg/mL)多糖含量(%)序号吸光度1 2 0.5600.5620.07760.07797.357.383 平均值0.563 0.0780 7.39 0.562 0.0778 7.37参考文献:[1][2][3][4] 潘晓玲,米吉提·胡达拜尔地. 新疆植物志第四卷[M]. 乌鲁木齐:新疆科学技术出版社,2004. 357.段昌令,乔善义,王乃利,等. 枸杞子活性多糖的研究[J]. 药报,2001,36(3):196.刘乃珩. 药食兼用之枸杞子[J]. 食品与健康,2007(3):311.田庚元,王晨,冯宇澄. 枸杞子糖蛋白的分离纯化,物化性质及糖肽键特征[J]. 生物化学与生物物理学报,1995,27 (5):493-498.韩果萍,段玉峰. 我国天然活性多糖药理研究进展[J]. 中药材,2003,26(2):128. 韦巍,李雪华. 多糖的研究进展[J]. 国外医学·药学分册,2005,32(3):179. 吴梧桐,高美凤,吴文俊. 多糖的抗肿瘤作用研究进展[J]. 中国天然药物,2003(3):182.朱彩平,张声华. 枸杞多糖对高脂血症小鼠血脂及脂质过氧化的影响[J]. 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植物提取物中多糖含量测定方法(UV)
编号:TCD0155 植物提取物中多糖含量测定方法一、仪器与试剂1.仪器:UV2101 PC紫外-可见光分光光度计2.试剂:5%苯酚溶液、浓硫酸、80%乙醇溶液二、样品测定1. 对照品溶液制备精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖约50mg,置50mL容量瓶中,加水溶解定容。
2.标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0m L分别置于50mL容量瓶中,加水定容,即为对照品供试液。
另各取对照品供试液1.0mL 于25mL具塞刻度试管中,分别加5%苯酚溶液1.0mL,摇匀,加入浓硫酸5.0mL(加入浓硫酸时,勿沿壁加入。
应将移液管悬于试管口使浓硫酸垂直冲入液面),立即摇匀。
于沸水浴中加热10min,取出后置冰水浴中冷却并放置至室温。
以试剂空白做参比在485nm的波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓度(mg/mL)为横坐标,绘制标准曲线。
3. 样品溶液的制备精密称取多糖样品约300mg,置100mL容量瓶中,加80%乙醇溶液80mL,超声振荡60min,放置至室温,过滤,残渣用80%乙醇溶液洗涤2~3次后,用少量沸水将残渣洗入原100mL容量瓶中, 加入沸水共约80mL, 超声振荡60min溶解, 放置至室温定容。
摇匀过滤,取续滤液2.0mL置50mL容量瓶中(对于含量低于30%,高于60%的样品,应适当改变移取续滤液的体积),加水定容,即为供试样品溶液。
按标准曲线制备项下操作,由标准曲线求得供试样品溶液浓度。
三、结果计算Ci×100 ×50X% = × 100Wi ×ViCi:由标准曲线求得供试样品溶液的浓度(mg/mL)W i:样品称样量(mg)V i:移取样品续滤液的体积(mL)注:a.在显色反应操作中,空白、对照、样品的操作应保持一致。
b.80%乙醇溶液的配制;用干燥、洁净的量筒分别量取100ml蒸馏水,400ml 无水乙醇,混合均匀。
枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定
枸杞多糖的提取与含量测定2011级药学班A6组丁艺兰,冯霞枸杞中枸杞多糖的提取及其含量测定一、实验目的:1、解中药品种品质研究的思路和方法2、熟悉枸杞多糖的了化学性质和提取方法3、掌握查阅文献和数据处理的方法二、实验原理:枸杞为茄科植物枸杞的成熟果实,它既可以作为药材,又可以作为保健食品。
经研究发现其主要活性成分之一就是枸杞多糖。
枸杞多糖是一种水溶性糖系蛋白多糖,主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。
现代医学研究证明:它具有抗氧化、抗肿瘤、调节免疫力、降血脂等作用,能改善老年人易疲劳、食欲缺乏和视力模糊等症状。
萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。
通过萃取,能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。
它的基本原理是利用化合物在两种不相溶(或微溶)的溶剂中溶解度或分配系数的不同,使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。
经过反复的多次萃取,将绝大部分的化合物提取出来。
萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。
在本次实验中,是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物,属于液-固萃取。
本实验使用水提醇沉法提取宁夏枸杞的枸杞多糖。
三、实验步骤1、枸杞多糖的提取称取干燥的枸杞80g,用研钵研成粉末状,放入烧杯内,加入一定料液比(1:8、1:10、1:12)的水溶液,放入微波搅拌器中放置30min,温度70-100摄氏度之间,功率300w,过滤,得滤渣,再加入一定料液比(1:8、1:10、1:12)的水溶液,放入微波搅拌器中放置30min,温度70-100摄氏度之间,功率300w,合并滤液,采用旋转蒸发器真空浓缩,得到的浓缩物用乙醇(乙醇终浓度大于80%)沉淀,滤布过滤,得滤渣用丙酮。
石油醚混合液(体积比1:1)于50~60℃回流0.5h,滤布过滤,得沉淀,烘干,得到枸杞粗多糖。
2、Sevage法脱蛋白取一定量的粗多糖,加蒸馏水完全溶解,使其浓度约为100mg/m L,用Sevage法脱蛋白,按枸杞多糖水溶液体积的20%加入三氯甲烷,再加入三氯甲烷体积的20%的正丁醇,剧烈振摇20min,使其充分混匀,1000r/min离心,倾出上清液,除去中间变性蛋白和下层三氯甲烷,重复以上操作直至中间层无变性蛋白,得到脱蛋白多糖。