外植体消毒方法
最新植物组培外植体消毒详解
植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
（2）消毒方法①茎尖、茎段及叶片等的消毒消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。
一种组织培养中外植体消毒的方法与流程
一种组织培养中外植体消毒的方法与流程本发明涉及组织培养技术领域，更具体地说，涉及一种组织培养中外植体消毒的方法。
背景技术：植物组织培养用的外植体材料大部分取自田间，但因为在植物表面上附着大量的微生物。
因此在植物材料接种前必须要进行消毒处理，目的是既要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤植物材料而不至于影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要的一环。
目前在组织培养中常用的外植体消毒过程中主要存在以下突出问题：外植体处理不当，导致外植体成活率低或外植体消毒不彻底，导致污染率高，影响了组培繁殖的效率和产量。
技术实现要素：有鉴于此，本发明提供一种组织培养中外植体消毒方法，该消毒方法对外植体消毒彻底，且损伤率降低。
一种组织培养中外植体消毒的方法，包括：清洗干净外植体表面，得到清洗后外植体；将所述清洗后外植体浸泡在70％的酒精中，在第一设定温度条件下超声波震荡第一预设时间，得到第一预处理外植体；将所述第一预处理外植体浸泡在5％-10％的NaClO溶液中，在所述第一设定温度条件下超声波震荡第二预设时间，得到第二预处理外植体；将所述第二预处理外植体浸泡在无菌水中，在所述第一设定温度条件下超声波震荡第二预设时间，得到第三预处理外植体；冲洗所述第三预处理外植体，得到消毒后外植体。
优选地，清洗干净外植体表面实现为：将外植体用自来水冲洗5-7次，再将所述外植体材料切成段或块或片状，自来水清洗外植体表面达到10-15min。
优选地，在第一设定温度条件下超声波震荡第一预设时间实现为：升温至40℃，并在40℃条件下，同时利用120W的超声波震荡10-20s。
优选地，在所述第一设定温度条件下超声波震荡第二预设时间实现为：升温至40℃，并在40℃条件下，同时利用120W的超声波震荡5-10min。
优选地，冲洗所述第三预处理外植体包括：利用无菌水冲洗所述第三预处理外植体材料10-15min。
外植体消毒方法
外植体消毒方法
外植体消毒
1 、材料：油菜、番茄、芝麻等种子或其他培养材料。
2 、仪器：，含MS 培养基的，镊子，培养皿，酒精灯，接种器械（解剖刀、剪子、镊子等）。
3 、试剂： 70% 酒精， 95% 酒精， % 升汞或漂白粉、无菌水等。
方法步骤
1 、用水和肥皂洗净双手，穿上灭过菌的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。
2 、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射 20 分钟。
3 、上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，然后用 70% 酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面。
4 、先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸 95% 酒精在酒精灯火焰上灼烧，放置冷却。
5 、修整接种材料，除去不用的部分，然后进行外植体消毒：
（1）水洗，吸干。
（2） 70% 酒精中浸泡约 30-60 秒（注意：酒精穿透力很强，时间不宜过长，以免损伤材料组织细胞）。
（3）在% 升汞中浸泡10 分钟；或在10% 漂白粉上清夜中泡10-15 分钟；（4）无菌水冲洗 3-5 次。
6 、接种：将种子或其他培养材料放到培养基上。
（1）先解开包口纸，将或拿成斜角，使瓶口在酒精灯火焰上方灼烧数秒钟。
（2）用灼烧过的冷却的镊子取外植体材料转接到或培养瓶中，轻轻插入或放在培养基表面。
（3）接种完毕后，将瓶口在火焰上转动灼烧，封口。
（4）操作期间应经常用70% 酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在 95% 酒精中浸泡和火焰上灼烧灭菌。
注意：双手不能离开工作台，不能说话、走动或咳嗽等。
7 、接种结束后，清理和关闭超净工作台，并用 70% 酒精擦拭工
作台面。
4 外植体的选择和灭菌
吐温的使用:0.1%,表面活性剂, 吐温的使用:0.1%,表面活性剂,浸润作用 无菌水: 无菌水:在用灭菌剂之前和之后均需用无菌水冲 洗数遍. 洗数遍.
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二,外植体的灭菌方法
具体的灭菌方法和步骤: 具体的灭菌方法和步骤:依不同的材料而不同
P61:图4-1 P61: 植物外植体消毒的一般程序
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第三节 外植体的接种和培养
二,外植体的接种
擦—冲—开—灭—切— 冲 开 灭 切 烧—取—烧—夹—放—烧—包 取 烧 夹 放 烧 包
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三,培养条件
温度:25±2℃; 温度:25±2℃; 光照:包括光照,光质和光周期; 光照:包括光照,光质和光周期; 培养基的pH:5.6-6.0;但若培养基中含有铁 培养基的pH:5.6-6.0;但若培养基中含有铁 pH:5.6 离子, pH应在5.2以下 应在5.2以下. 离子, pH应在5.2以下. 湿度:培养容器的湿度常保持在100%; 湿度:培养容器的湿度常保持在100%; 培养 室的湿度70 70室的湿度70-80%. 气体: 气体:氧;二氧化碳;乙烯等. 二氧化碳;乙烯等.
2
Байду номын сангаас
外植体种类
带芽外植体 胚 分化器官, 分化器官,组织 花粉, 花粉,雌配子体中的单倍体细胞
3
外植体的部位选择
原则上可用植物的任何部位; 原则上可用植物的任何部位 但不同种类植物及同 一植物的不同部位对诱导条件反应不同; 一植物的不同部位对诱导条件反应不同 选择优良种 质,增殖能力强的外植体 外植体应容易得到 应考虑得到无毒苗 注意:外植体的幼化程度,年龄 与着生部位. 注意:外植体的幼化程度, 与着生部位. 易形成花器官. 植物主轴 向上的部分 生理年龄老 易形成花器官 向基部的部分 生理年龄小 易形成根等器官. 易形成根等器官 幼年组织较老年组织具有较高的形态发生能力
萱草组培方案
三、方法与步骤
1.外植体消毒：将选取的萱草外植体放入含有洗涤剂的水中浸泡10分钟，用软刷轻轻刷洗表面，然后用流水冲洗干净。将外植体放入75%的酒精中浸泡30秒，再用0.1%的氯化汞溶液消毒5-10分钟，最后用无菌水冲洗3-5次。
七、总结
本方案旨在通过植物组织培养技术，建立一套高效、稳定的萱草组培体系。通过严格的无菌操作、合理的培养基配方和适宜的培养条件，实现萱草种苗的高效繁殖。同时，本方案遵循国家相关法律法规，确保组培过程的合法合规。在实际操作过程中，应根据具体情况调整方案，以达到最佳培养效果。
第2篇
萱草组培方案
一、前言
萱草，别名忘忧草，属多年生草本植物，具有较高的观赏价值和药用价值。为满足市场需求，提高萱草种苗繁殖效率，降低繁殖成本，本方案通过植物组织培养技术，建立一套高效、稳定的萱草组培体系。
二、材料与设备
1.材料：选择健康、生长旺盛的萱草植株，以茎尖、茎段或叶片作为外植体。
2.设备：无菌操作台、高压灭菌锅、移液器、培养箱、显微镜、无菌瓶、培养基等。
萱草组培方案
第1篇
萱草组培方案
一、背景与目的
随着生物科技的发展，植物组织培养技术已广泛应用于花卉、药材等繁殖与生产。萱草，又名忘忧草，具有极高的观赏价值和药用价值。为提高萱草繁殖效率，降低种苗成本，本方案旨在建立一套科学、规范、高效的萱草组培体系。
二、材料与设备
1.材料：选取健康、生长旺盛的萱草植株，取其茎尖、茎段或叶片作为外植体。
2.培养基配制：根据萱草生长需求，选择合适的培养基配方。常用的基本培养基有MS、B5、N6等。本方案采用MS培养基，添加适量的植物生长调节剂（如6-BA、NAA等）。
实验二 外植体消毒和接种
实验三的准备工作
• 另外，任一组帮忙配：配YEB培养基 500mL(固体)
• 配方：牛肉浸膏 5.0 g/L
•
酵母浸膏 1.0 g/L
•
蛋白胨 5.0 g/L
•
蔗糖 5.0 g/L
•
MgSO4.7H2O 0.002 mol/L
•
pH7.0
• 分装至菌种培养瓶
实验三的准备工作
• 每组需另准备： • 无菌水 8瓶 • 空瓶 2个，其中一个
重新消毒后才能使用。 • 6、不要用手直接接触无菌的物品。
在超静工作台上接种植物材料
注意坐姿？不要说话？ 无菌操作？ 避免交叉感染？
标签格式(例)
材料名称:烟草(叶)，其它（待定） 培养基名称:例如：MS+NAA2mg/L+6-BA1mg/L 接种日期:2010.4.26 姓名:xxx
其它图案标志等少用，如三角形，脸谱， 卡通图
动等进行增效。
不同外植体的消毒方法：
• 茎尖，叶片及茎段等的消毒：取材—自来水冲洗（肥 皂水）---75%EtOH浸泡10-30秒---无菌水冲洗----2%或 10% NaClO或0.1%HgCl2浸泡10-15 min—无菌水冲洗34次----接种。（升汞浓度与消毒时间的关系）
• 种子消毒，与此类同。 • 根及地下部器官的消毒： • 根（来自土壤，水冲洗充分）---0.1%升汞或NaClO浸
• 颜色 • 质地 ➢ 诱导率(%)=形成愈伤组织的材料数/接种总材料数×100
如污染严重或没有诱导出愈伤组织,则需重做实验!
请大家“给力”，精心呵护你的“宝贝”（被培养材料）
其它实验内容
• 为第三周发根农杆菌遗传转化作准备
实验三,毛状根的诱导和培养 的准备工作
猪笼草组织培养繁殖方法
猪笼草组织培养繁殖方法
猪笼草组织培养繁殖方法，
1).外植体诱导材料消毒的方法：在生长季节选取生长旺盛猪笼草的3～4厘米长的的顶芽或带侧芽的茎段为外植体，在自来水下冲洗干净后，先在70％酒精中浸泡30秒，再用0.1％升汞溶液消毒15分钟，无菌水冲洗4～5次，切掉基部伤口褐化部分，接种到培养基1/2MS+6-苄基嘌呤1.0毫克/升+萘乙酸0.05毫克/升+0.05％活性炭。
5天后再转入新的同种培养基中防止褐化，40天能形成不定芽；
2).不定芽诱导和继代增殖：将诱导出的不定芽切割后再继代培养在相同的培养基增殖。
一般40天为1个继代增殖周期，每1个继代增殖周期由1个芽可增殖形成3～4个芽；
3).生根培养：丛芽高约3～4厘米高时，切下接种到生根培养基1/2MS+6-苄基嘌呤0.1毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+0.05％活性炭培养基上，根刚长出时较白，然而生出黑色的根毛，生根率可达95％，每个分化芽有根数6～8条。
4).试管苗移栽：当不定根长至1.5厘米以上时，在自然光照下炼苗10天，然后打开瓶塞，再炼苗2天，然后用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由沙和珍珠岩各半混合成的基质中，注意浇水、遮荫、保温，成活率可达95％以上。
移栽后约40天后可上盆栽培。
外植体消毒方法比较
外植体消毒方法比较组培实验室是生命科学及相关学科实验室建设中必备的实验室。
组培实验室的消毒是实验室日常管理工作的重要环节，直接关系着组培实验的成功与否和组培幼苗的质量高低。
组培实验室的消毒一般又可分为环境消毒、培养基消毒和外植体的消毒。
培养基的消毒主要是在高压灭菌锅中进行，在此不再赘述。
环境消毒和外植体的消毒则有多种方法，这些方法各有优劣，使用不当时还会对人体产生伤害，为此，笔者特对这些典型方法进行分析比较，为组培实验室的科学管理提供一些参考。
1 组培实验室的环境消毒保持组培实验室的空气清洁度是减少组培污染的重要条件，用于实验室消毒的常规消毒方法包括紫外线照射法、甲醛熏蒸法、新洁尔灭(苯扎溴铵溶液)法等，比较新的方法有中草药消毒法。
1.1 紫外线照射法紫外线是波长在10-400 nm之间辐射光的总称，能引起细菌、病毒等微生物遗传物质的结构发生变化，从而影响DNA复制、RNA转录和蛋白质的翻译，导致病菌或病毒死亡。
此外，紫外线辐射所产生的臭氧和各种自由基可损伤蛋白质和酶分子，导致功能改变。
紫外线消毒具有广谱性，可杀灭细菌、病毒、真菌、支原体等各种微生物。
紫外消毒具有较高的杀菌效率，且由于未使用化学药剂，消毒过程中不会产生对人体和环境有害的副产物。
该技术运行维护简单，费用较低。
采用室内悬吊式紫外线消毒时，室内安装紫外消毒灯的数量为每平方不少于1. 5 W，照射时间不少于30 min。
但需要指出的是，过量的紫外线照射对人体有一定的危害乃至致癌作用。
紫外线作用于中枢神经系统，可出现头痛、头晕、体温升高等症状。
过量辐射会诱发皮肤癌。
紫外辐射对眼睛的损伤特别明显，严重时可能诱发白内障。
因此，当组培实验室在用紫外消毒期间，工作人员不要呆在正消毒的空间内，切忌用眼睛注视紫外灯。
特别的，如超净工作台内的紫外灯打开消毒时，应避免将手长时间暴漏于紫外灯下。
一般在接种室用紫外线消毒后，不要立即进入接种室，此时室内充满高浓度的臭氧，会对人体，尤其是呼吸系统造成伤害。
接种外植体实训报告
一、实训目的本次实训的主要目的是通过实际操作，掌握外植体的消毒、切割、接种等基本技能，了解植物组织培养的基本原理和操作流程，提高无菌操作能力，为后续植物繁殖和育种工作打下基础。
二、实训时间2023年11月1日三、实训地点植物组织培养实验室四、实训内容1. 外植体的选取与消毒- 选取生长健壮、无病虫害的植物材料作为外植体，如茎段、叶片、芽等。
- 使用70%的酒精对外植体进行表面消毒，时间约30秒。
- 使用无菌水冲洗消毒后的外植体，去除残留的酒精。
2. 外植体的切割- 根据不同的外植体类型，采用不同的切割方法。
- 茎段：将消毒后的茎段切割成1-2cm的小段，保留1-2个腋芽。
- 叶片：将消毒后的叶片切割成0.5-1cm²的小块，背面朝下接种。
- 芽：将消毒后的芽切割成0.5-1cm的小段，保留1-2枚叶原基。
3. 外植体的接种- 将切割好的外植体接种到装有培养基的培养皿中。
- 接种过程中注意保持无菌操作，避免污染。
4. 培养条件的控制- 将接种好的培养皿放置在适宜的温度、光照和湿度条件下进行培养。
- 定期观察外植体的生长状况，调整培养条件。
五、实训结果与分析1. 外植体的生长状况- 经过一段时间培养，大部分外植体成功诱导出愈伤组织或芽。
- 部分外植体由于污染或切割不当等原因未能成功诱导。
2. 原因分析- 污染：在消毒、切割、接种等过程中，如操作不当，可能导致外植体污染。
- 切割：切割不当，如切割过深或过浅，可能导致外植体死亡。
- 培养条件：培养条件不适宜，如温度、光照、湿度等，可能导致外植体生长缓慢或死亡。
六、实训体会1. 无菌操作的重要性- 在植物组织培养过程中，无菌操作至关重要。
任何污染都可能导致外植体死亡或培养失败。
2. 操作技巧的掌握- 在实训过程中，掌握了外植体的消毒、切割、接种等基本操作技巧，为后续的植物繁殖和育种工作打下了基础。
3. 理论与实践相结合- 通过本次实训，将所学理论知识与实际操作相结合，提高了自己的动手能力和实践能力。
外植体消毒的一般步骤
外植体消毒的一般步骤在植物组织培养中，外植体消毒是非常重要的一步，它关系到实验的成败。
以下是外植体消毒的一般步骤：1.剪取外植体在消毒前，需要选取健康、无病虫害的外植体。
剪取时要保证无菌操作，避免污染。
一般选取植物的新鲜、幼嫩的部分作为外植体。
2.清洗外植体剪取后的外植体需要用无菌水或酒精进行清洗。
要多次清洗，以去除表面的杂质和细菌。
在清洗时，应注意不要损伤外植体。
3.切除两端为了防止两端感染，在外植体两端用火焰消毒或75%酒精浸泡2-3分钟。
然后切除两端，减小接触面积，避免污染。
4.浸泡在酒精中将外植体完全浸泡在75%酒精中，取出后用无菌水冲洗。
这样可使外植体表面的细菌和病毒失去活性，提高消毒效果。
5.取出并用无菌水冲洗将外植体从酒精中取出，用无菌水冲洗干净。
在冲洗时，要确保每个外植体都冲洗到位，以避免残留物影响培养效果。
6.消毒剂处理在外植体上涂抹一层消毒剂，进行进一步的杀菌处理。
涂抹时要适量，避免过度使用导致外植体损伤。
7.无菌水冲洗用无菌水冲洗外植体，重复多次，确保外植体表面没有消毒剂残留。
在冲洗时，要注意更换无菌水，以确保冲洗效果。
8.滤纸吸干表面水分在外植体表面用滤纸吸干水分，确保外植体保持干燥。
这一步可以有效避免培养过程中出现水分过多导致霉变的情况。
9.接种到培养基中将外植体轻轻插入培养基中，注意不要损坏外植体和培养基。
接种时需要保证无菌操作，避免带入新的污染源。
以上就是外植体消毒的一般步骤，希望能对你有所帮助。
在进行实验时，一定要注意无菌操作，确保每个步骤都符合要求，以获得良好的实验效果。
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒1、外植体的选择外植体是指植物组织培养中的各种接种材料。
从理论上讲，植物细胞都具有全能性，能够再生新植株，任何器官、任何组织、单个细胞和原生质体都可以作为外植体。
但实际上，不同品种、不同器官之间的分化能力有巨大差异，培养的难易程度不同。
为保证植物组织培养获得成功，选择合适的外植体是非常重要的。
（1）选择优良的种质及母株无论是离体培养繁殖种苗，还是进行生物技术研究，培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的种质、特殊的基因型和生长健壮的无病虫害植株。
尤其是进行离体快繁，只有选取优良的种质和基因型，离体快繁出来的种苗才有意义，才能转化成商品；生长健壮无病虫害的植株及器官或组织代谢旺盛，再生能力强，培养后容易成功。
（2）选择适当的时期组织培养选择材料时，要注意植物的生长季节和生长发育阶段，对大多数植物而言，应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高。
若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。
花药培养应在花粉发育到单核靠边期取材，这时比较容易形成愈伤组织。
百合在春夏季采集的鳞茎、片，在不加生长素的培养基中，可自由地生长、分化；而其他季节则不能。
叶子花的腋芽培养，如果在1月至翌年2月间采集，则腋芽萌发非常迟缓；而在3-8月间采集，萌发的数目多，萌发速度快。
（3）选取适宜的大小培养材料的大小根据植物种类、器官和目的来确定。
通常情况下，快速繁殖时叶片、花瓣等面积为5mm2，其他培养材料的大小为0.5~1.0cm。
如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。
材料太大，不易彻底消毒，污染率高；材料太小，多形成愈伤组织，甚至难以成活。
（4）外植体来源要丰富为了建立一个高效而稳定的植物组织离体培养体系，往往需要反复实验，并要求实验结果具有可重复性。
因此，就需要外植体材料丰富并容易获得。
（5）外植体要易于消毒在选择外植体时，应尽量选择带杂菌少的器官或组织，降低初代培养时的污染率。
将植物组织培养流程
附录一
植物组织培养流程及相应图片
1、配制培养基并进行高温蒸汽灭菌20min；
2、接种工具以及超净工作台灭菌：接种工具用高温蒸汽灭菌，超
净工作台用紫外灯灭菌30min；
3、外植体消毒：首先用流水冲洗外植体，用酒精灭菌30s，再用
0.1%升汞消毒10min，最后用无菌蒸馏水冲洗4-5次；
4、用75%酒精对手进行灭菌消毒；
5、接种：用剪刀剪取1cm2左右的叶片或者1cm长的茎段，迅速
放入三角瓶中，并立即封口；
6、将接种的三角瓶放入组培室中进行培养，大约2周后（时间根
据培养条件不同而不同）长出愈伤组织，如图1、2；
图1 西瓜茎段愈伤组织图2 烟草叶片愈伤组织7、长出愈伤组织后，即可进行继代和分化培养，具体流程与接种
一致，只是将外植体换成愈伤组织，并注意无菌条件的控制，如图3、4；
图3 西瓜愈伤分化 图4烟草愈伤分化 8、 将继代分化的愈伤组织放入适宜的条件下进行光照培养，诱导
出芽和根，如图5、6
图5 西瓜诱导发芽 图6西瓜诱导发芽生根
9、 将诱导出根和芽的植株进行练苗； 10、 练苗后的植株移栽到自然条件下，让其自然生长繁殖，最终达
到植物组织培养的目的。
植物组培外植体消毒详解
植物组培外植体消毒详解Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
外植体灭菌的一般流程
外植体灭菌的一般流程
外植体消毒一般程序有自来水冲洗，酒精浸泡，消毒剂消毒，无菌水冲洗等。
外植体消毒程序较多，首先需要用自来水冲洗30min以上，然后用70%～75%酒精浸泡30秒，再然后使用消毒剂表面消毒外植体3-10min，最后使用无菌水冲洗3～10次。
外植体表面消毒和灭菌时需要注意：
1、外植体取回后要及时修整、表面清洗和流水冲洗。
2、根据外植体种类、取材时间和老嫩程度综合确定灭菌方案。
3、严格掌握酒精灭菌时间。
4、灭菌液要浸没材料，随时轻轻摇动，表面灭菌后要尽快切取所需外植体接入培养基中，以减少外植体在空气中的暴露时间，避免风干和褐化。
外植体消毒需要严格按照消毒程序清洗，以免造成不良影响。
无菌操作技术实验报告
无菌操作技术实验报告实验四植物材料的准备与无菌操作技术实验四植物材料的准备与无菌操作技术一、实验目的1.通过实验掌握选择合适的外植体，并进行科学的体表灭菌，获得无菌植物材料的方法。
2.通过在超净工作台上进行无菌操作训练，掌握植物组织培养的无菌操作技术。
二、实验药品与用具超净工作台、75%酒精、次氯酸钠、MS培养基、接种器械（接种盘、解剖刀、镊子）、酒精灯、植物材料、小型喷雾器。
三、实验方法（一）外植体消毒1、外植体处理后在自来水流水下冲洗。
（以下的步骤都在超净工作台上进行）2、放到75%酒精中浸泡30 s，倒掉后用无菌水冲洗。
3、用2%次氯酸钠处理10min后，无菌水清洗数次，备用。
（二）无菌操作技术1．操作人员进入接种室前必须用水和肥皂洗净双手，换上已消毒的工作服、帽子、口罩、鞋子后方可进入接种室。
2．接种前用70-75%酒精喷雾或擦洗工作台台面，开紫外灯照射20~30min；，在送风15~30min，让过滤空气吹拂工作台面和台壁四周。
3．用75%酒精消毒双手，并用酒精将装有培养基的培养瓶进行消毒后放进工作台上。
4．接种工具用95%酒精浸泡后在酒精灯上灼烧灭菌。
，5．接种时，腰带口罩，不准讲话或对着实验材料或培养容器呼吸。
打开瓶塞或瓶盖时注意不要污染瓶口。
瓶口在拔塞前灼烧灭菌。
手不能接触接种器械的前半部分（及直接切割植物材料的部分），接种操作时（包括拧开或拧上培养瓶盖时），培养瓶、试管或三角瓶应水平放置或倾斜一定角度（45。
以下），避免直立放置而增大污染机会。
手和手臂应避免在培养基、植物材料、接种器械上方经过。
在接种过程中，接种器械要重新灼烧灭菌。
6．切割外植体时，应在预先经灭菌的接种盘或培养皿、牛皮纸上进行。
7．在每次操作之前尽量把操作过程中必须使用器械盒药品先放入台内，不要中途拿进。
同时，台面上放置的东西也不宜太多，特别注意不要把东西迎面堆得太高，以致挡住气流。
四、实验作业1.将本次的实验内容整理成实验报告。
外植体表面消毒
外植体表面消毒
1)取健康，无病害的植株三株，每株剪取5mm-10mm茎尖，根尖，嫩叶先取
一株实验
无菌水冲洗3次—70%H2O2中浸泡10min—无菌水冲洗3次
c:自来水冲洗—75%乙醇浸泡1min—无菌水冲洗3次—2%NaOCl 25-30min—无菌水冲洗3次
3)将消毒后的外植体放入MS培养基中进行培养，记录（外植体形态，长菌）
4)每一表面消毒方案，设置以下三种对照检验，记录
a:不做消毒的外植体直接接种，做对照组检验表面消毒效果
b:空白培养基对照
c:最后一次淋洗的无菌水取0.1ml涂布到培养基上，做对照组检验表面消毒效果操作不规范未取到或超过1ml
对外植体伤害相对较小的方案
培养基消毒，采用先配好分装，最后灭菌的方式，若MS培养基需要加激素等，则等灭菌完用过滤注射器注入
操作设备：超净台（对外植体消毒过程），高压灭菌锅（器皿，用具，培养基杀菌），恒温培养箱（培养观察）
前期准备步骤：1用具灭菌2配制培养基MS，无菌水3消毒剂配制
用具：镊子，培养皿，锥形瓶，剪刀，量筒，烧杯，玻棒，（封口膜，手套，口罩），酒精灯，脱脂棉，滤纸。
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外植体消毒
1 、材料：油菜、番茄、芝麻等种子或其他培养材料。
2 、仪器：超净工作台，含 MS 培养基的培养瓶，镊子，培养皿，酒精灯，接种器械（解剖刀、剪子、镊子等）。
3 、试剂： 70% 酒精， 95% 酒精， 0.1% 升汞或漂白粉、无菌水等。
方法步骤
1 、用水和肥皂洗净双手，穿上灭过菌的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。
2 、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射 20 分钟。
3 、上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，然后用 70% 酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面。
4 、先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸 95% 酒精在酒精灯火焰上灼烧，放置冷却。
5 、修整接种材料，除去不用的部分，然后进行外植体消毒：
（1）水洗，滤纸吸干。
（2） 70% 酒精中浸泡约 30-60 秒（注意：酒精穿透力很强，时间不宜过长，以免损伤材料组织细胞）。
（3）在 0.1% 升汞中浸泡 10 分钟；或在 10% 漂白粉上清夜中泡 10-15 分钟；（4）无菌水冲洗 3-5 次。
6 、接种：将种子或其他培养材料放到培养基上。
（1）先解开包口纸，将试管或培养瓶拿成斜角，使瓶口在酒精灯火焰上方灼烧数秒钟。
（2）用灼烧过的冷却的镊子取外植体材料转接到试管或培养瓶中，轻轻插入或放在培养基表面。
（3）接种完毕后，将瓶口在火焰上转动灼烧，封口。
（4）操作期间应经常用 70% 酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在 95% 酒精中浸泡和火焰上灼烧灭菌。
注意：双手不能离开工作台，不能说话、走动或咳嗽等。
7 、接种结束后，清理和关闭超净工作台，并用 70% 酒精擦拭工作台面。