外植体消毒方法

外植体消毒

1 、材料：油菜、番茄、芝麻等种子或其他培养材料。

2 、仪器：超净工作台，含 MS 培养基的培养瓶，镊子，培养皿，酒精灯，接种器械（解剖刀、剪子、镊子等）。

3 、试剂： 70% 酒精， 95% 酒精， 0.1% 升汞或漂白粉、无菌水等。

方法步骤

1 、用水和肥皂洗净双手，穿上灭过菌的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。

2 、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射 20 分钟。

3 、上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，然后用 70% 酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面。

4 、先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸 95% 酒精在酒精灯火焰上灼烧，放置冷却。

5 、修整接种材料，除去不用的部分，然后进行外植体消毒：

（1）水洗，滤纸吸干。

（2） 70% 酒精中浸泡约 30-60 秒（注意：酒精穿透力很强，时间不宜过长，以免损伤材料组织细胞）。

（3）在 0.1% 升汞中浸泡 10 分钟；或在 10% 漂白粉上清夜中泡 10-15 分钟；（4）无菌水冲洗 3-5 次。

6 、接种：将种子或其他培养材料放到培养基上。

（1）先解开包口纸，将试管或培养瓶拿成斜角，使瓶口在酒精灯火焰上方灼烧数秒钟。

（2）用灼烧过的冷却的镊子取外植体材料转接到试管或培养瓶中，轻轻插入或放在培养基表面。

（3）接种完毕后，将瓶口在火焰上转动灼烧，封口。

（4）操作期间应经常用 70% 酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在 95% 酒精中浸泡和火焰上灼烧灭菌。注意：双手不能离开工作台，不能说话、走动或咳嗽等。

7 、接种结束后，清理和关闭超净工作台，并用 70% 酒精擦拭工作台面。