沉降菌监测规程

沉降菌监测规程

一、目的

建立沉降菌监测方法，规范沉降菌监测操作。

二、范围

适用于西厂区车间洁净室、无菌检查室、阳性室、洗衣房、取样间、微生物室的沉降菌监测。

三、职责

检验中心人员负责车间洁净室、洗衣房、取样间的采样工作；负责各部分所需的材料准备、培养、菌落计数，以及无菌检查室、阳性室、微生物室监测的采样内容的执行。

质量中心负责人负责本规程执行情况的监督检查。

四、内容：

1.仪器与用具

1.1 培养皿（φ90mm）

1.2 恒温培养箱

1.3 高压蒸汽灭菌锅

2.监测程序

2.1 将已准备好的合格的空白培养皿放入物料缓冲间。

2.2 检测人员按人员进入洁净区的要求穿好洁净服，戴好口罩进入洁净室。

2.3 按此《沉降菌监测规程（西厂区）》对环境进行监测。

3.测试规则

3.1测试条件

3.1.1温度和相对湿度

沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温度和相对湿度应与生产工艺等要求相适应（温度控制在18～26℃，相对湿度控制在45%～65%之间）。

3.1.2压差

沉降菌测试前，洁净区与非洁净区之间、不同级别洁净室（区）之间的压差应当不低于10帕斯卡，空气洁净度级别要求高的洁净室（区）对相邻的空气洁净级别低的洁净室（区）一般要求相对正压。

3.1.3换气次数、空气流速

3.2测试状态

静态测试：静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

动态测试：洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。

测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。（在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。）

3.3测试时间

3.3.1对单向流，如C级背景下的局部A级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。

3.3.2 对非单向流，如C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

3.4测试方法

采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。

3.4.1采样方法

静态：将已制备好的培养皿按4项的要求及采样点平面图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中0.5h后，再将培养皿盖盖上。

动态：将已制备好的培养皿按4项的要求及采样点平面图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中4h后，再将培养皿盖盖上。动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。

3.4.2培养

3.4.2.1全部采样结束后,将培养皿倒置于30℃～35℃恒温培养箱中培养，时间不少于72h。

3.4.2.2用于检测的培养皿应经过预培养合格后使用，为避免运输过程造成影响，在每次取样时，取3个培养皿与其他采样皿同法操作但不暴露采样，然后与采样后的培养皿同时培养，结果应无菌生长。

3.4.3菌落计数

3.4.3.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查是否有遗漏。

3.4.3.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

3.5 测试人员要求

测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。

静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

4.采样点数目及布置

4.1采样次数

每个采样点一般取样一次。

4.2最少采样点数目参照表：

面积（m2）

洁净度级别

A级C级D级

＜10 2～3 2 2

≥10～＜20 4 2 2

≥20～＜40 8 2 2

≥40～＜100 16 4 2

≥100～＜200 40 10 3

≥200～＜400 80 20 6

400 160 40 13

注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面面积。对于非单向流洁净室是指房间的面积。

4.3洁净区灌装间、配制间的沉降菌取样点监测位置根据《沉降菌取样风险评估报告》确定。

不能确定的点根据GB/T 16294-2010和2010版GMP附录要求均匀分布沉降菌的取样监控点，具体分布规则如下：

注：为采样点

4.4工作区采样点的位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。

可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。

4.5 最少培养皿数

满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数。

洁净度级别

所需培养皿数（φ90mm）

（静态以沉降0.5h计，动态以沉降4h计。）

5.

表1：

5.2采样点见附件,监测结果记录于相应的沉降菌监测记录中，记录应包括：房间温度、相对

湿度、压差及测试状态等项目。

6.结果计算

6.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

6.2平均菌落数的计算，见下式：

M 1+M

2

+…+M

n

平均菌落数 M = _________________ n

式中：M 平均菌落数；

M 1 1号培养皿菌落数； M 2 2号培养皿菌落数；

M n n 号培养皿菌落数

n 培养皿总数。

7.结果评定

用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。 7.1每个测点的平均菌落数不得超过所选定的评定标准。

7.2 若某个测点的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新连续采样两次，两次测试结果均须合格。

8.合格标准和纠偏限、警戒限

8.1合格标准

（2）单个沉降碟的暴露时间可以少于

4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测,并累积计数。(即：同一位置多个沉降碟监测的时间总和符合要求,静态要求：各沉降碟暴露时间总和为0.5h ；动态要求：各沉降碟暴露时间总和为4h 。) 8.2 纠偏限和警戒限

9.若沉降菌检测不符合要求，检验人员将检测结果反馈相关部门进行原因分析并采取必要