紫外吸收光谱法测定苯甲酸山梨酸和未知物
紫外光谱吸收法测定雪碧中的防腐剂
3、利用上一步测定的最大吸光度处的 λmax 测定苯甲酸标准溶 液的吸光度，平行测三组（苯甲酸标准溶液的浓度为 6.4ug/mL）。
4、绘制雪碧吸收曲线（A-λ）。 5、由朗比定律计算得出配制的雪碧溶液中苯甲酸的浓度
三、 数据记录及处理
1、苯甲酸钠最大吸收峰的寻找
λ（nm） 210
215
220
222
224
226
227
228
吸光度 A
λ(nm)
230
235
240
245
250
255
Байду номын сангаас
260
吸光度 A
2、待测液、标准溶液在 λmax 处的吸光度平行测定
测量液 测量次序
雪碧溶液 标准溶液
1 2 3
3、根据测定数据绘制雪碧吸收曲线（A-λ）如例图所示。
4、浓度计算
由 A∝C 可知 雪碧 = େ雪碧 进而计算出雪碧中苯甲酸的
标准液
େ标准液
浓度（注意：求得的浓度为稀释后的浓度，需换算成原液浓
度）。
实验三：紫外光谱吸收法测定雪碧中的防腐剂
一、 实验目的 1、了解苯甲酸钠的紫外吸收特性，利用该特性检测食物中的
防腐剂 2、进一步掌握朗伯比尔定律
二、实验原理 为防止食物在储藏、运输等过程中变质、腐败等现象的发生，
食品生产者常在食品中加入一定量的防腐剂。苯甲酸和山梨酸以 及它的钠盐都是卫生组织允许的主要防腐剂。
苯甲酸具有芳香结构，在 210nm-260nm 范围内有最大吸收 峰，由朗比定律 A=lg(1/T)=Kbc 可知，吸光度 A 与溶液浓度 C 成正比，可根据苯甲酸钠的吸光度测量雪碧中的苯甲酸含量。 二、 实验步骤
紫外可见分光光度法测定苯甲酸
紫外可见分光光度法测定苯甲酸实验目的：1、掌握用PH计测定溶液PH的操作。
2、掌握755型紫外分光光度计的使用方法。
3、通过实验，加深对溶液PH和溶液含量测定原理和方法的理解。
实验原理：1、直接电位法测定溶液PH长选用玻璃电极作为指示电极，饱和甘汞年级作为参比电极，浸如待测溶液中组成原电池，原电池的电动势与溶液的PH呈线性，由于K中包括难于计算的不对称电位和液接电位，实际工作中采用仪器直读法，即首先用已知PH的缓冲液校准酸度计，然后直接测量待测溶液的PH。
2、在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐，对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长在225nm。
可采用紫外分光光度计测定物质在紫外光区的吸收光谱并进行定量分析。
实验器材：试药：邻苯二甲酸氢钾缓冲液、混合磷酸盐缓冲液、0.01mol/L、0.1mol/L氢氧化钠、苯甲酸仪器：量瓶、烧杯、752型紫外分光光度计、石英比色杯、PHS-25型酸度计实验内容与方法：一、用酸度计测定溶液的PH值1、安装电极先把电极夹子夹在电极杆上。
夹上甘汞电极，把引线叉连接在电极接线柱上。
再将玻璃电极夹在夹子上，使玻璃球泡略高于甘汞电极，把电极插头插入电极孔内，旋紧螺丝。
2、连接电源检查电源电压与仪器电压相符合后，将PH-mV开关置“0”，接通电源。
对PHS-25型酸度计，若用交流电源，接通电源后指示灯亮，若用直流电源，指示灯不亮。
3、定位（1）将标准缓冲液倾入测试杯中，侵入电极，将PH-MV开关旋至与缓冲液相应量程范围。
（2）查表5-1，调节定位调节器，使指针指向本缓冲液该温度下的PH。
并摇动测试杯，使指针稳定为止，重复调节定位调节器，定位后，定位调节器不可再旋动。
4、测量（1）移开缓冲液测试杯。
用纯水淋洗电极，并用滤纸轻轻吸干。
（2）将被测溶液倾入测试杯中（温度应和缓冲液一样，否则应按其温度重性调节温度补偿器）浸入电极对，读数即可。
二、紫外可见分光光度法测定苯甲酸的含量1、苯甲酸标准储备液的制备精确称取苯甲酸100mg，用0.1mol/L氢氧化钠溶液100ml溶解后，再用蒸馏水稀释1000ml。
苯甲酸的测定实验报告紫外
本文旨在介绍苯甲酸的测定实验，首先介绍实验的原理，然后对实验的步骤进行详细的介绍，最后总结实验结果。
一、苯甲酸的测定实验原理
苯甲酸是一种重要的有机化合物，它可以在溶液中通过紫外分光光度法来测定。
在实验中，我们使用紫外分光光度计，将比较样和测定样放入比较室和测定室，分别测定其紫外吸收率，然后通过测定的结果来计算样品中苯甲酸的浓度。
二、苯甲酸的测定实验步骤
1.准备实验仪器：首先准备好紫外分光光度计，并且准备好苯甲酸的比较样和测定样，比
较样中的浓度应该比测定样低；
2.稀释测定样：将测定样稀释至比较样浓度相当，以便于比较；
3.测定紫外吸收率：将比较样和测定样分别放入比较室和测定室，在紫外分光光度计上测
定其紫外吸收率；
4.计算苯甲酸浓度：根据测得的紫外吸收率，计算样品中苯甲酸的浓度。
三、实验结果
通过苯甲酸的测定实验，可以准确的测定出样品中的苯甲酸的浓度，从而更好的掌握苯甲
酸的特性。
正如古人所言：“知己知彼，百战不殆”，只有通过测定实验，才能更好的掌握
苯甲酸的性质，从而有效的应用苯甲酸。
紫外吸收光谱法测定苯甲酸(精)
因此紫外光谱可用于判别有机化合物中发色团和助色团的种类、位
置、数目，以及区别饱和与不饱和化合物，测定分子中共轭程度等。但
是仅依靠紫外光谱来推断未知化合物的结构是困难的。
4 苯甲酸与山梨酸的性质与用途
苯甲酸别名安息香酸，白色单斜晶系片状或针状结晶体，略带安息
紫外吸收光谱法测定苯甲酸 山梨酸和未知物
化学生物系 吴 丹
பைடு நூலகம்
一、实验目的
1 通过实验了解苯甲酸，山梨酸的紫外吸收特征，并利用这些 特征对未知物进行定性鉴定。
2 通过测定有机化合物紫外吸收光谱，掌握鉴别化合物中发色
团及其化合物类型的方法。
3 掌握有机化合物结构与紫外吸收光谱之间内在联系的规律。
二、实验原理
苯甲酸具有环状共轭结构，在波长 228nm 和272nm 处有 E吸收带和B 吸收带 （芳香族化合物的特征吸收） ；
山梨酸（2，4-己二烯酸）无色针状结晶或白色结晶性粉末，无嗅或稍
带刺激性臭味。分子量112.13。熔点132-135℃。沸点228℃(分解)。微溶于 水。溶于有机溶剂。对光、热稳定，但在空气中长期放置易被氧化着色。
波长 (nm)
310
吸光 度(A)
吸光度(A)从吸收曲线上确定未知物的最大波长λmax = 所以该化合物为？？？
nm
六、数据处理
1
利用谱图进行定性分析
从紫外光谱仪上读出各波长的吸光度，以波长
为横坐标，吸光度为纵坐标作图，就得紫外吸收光
谱图。由光谱图可定出λmax ，并将未知物谱图与
已知化合物的谱图对照，推测未知物为苯甲酸或山
紫外分光光度法测定未知物
紫外分光光度法测定未知物1.仪器1.1紫外分光光度计（uv-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个1.2容量瓶（100ml）：10个；容量瓶（250ml）1个1.3吸量管（10ml、5ml）：各1支1.4移液管（20ml、25ml、50ml）：各1支2.试剂2.1标准溶液（1mg/ml）：维生素c、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别硝酸锶1mg/ml的标准溶液，做为储备液。
2.2未知液：浓度约为（40~60ug/ml）。
（其必为给出的五种物质之一）3.实验操作3.1比色皿配套性检查石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。
3.2未知物的定性分析将五种标准储备液均吸收成10ug/ml的试液（酿制方法由球手自的定）。
以蒸馏水为滴定法，于波长200~350nm范围内读取五种溶液，绘制稀释曲线，根据所获得的稀释曲线对照标准谱图，确认被测物质的名称，并依据稀释曲线确认测量波长。
五种标准物质溶液的稀释曲线参五种标准物质溶液的稀释曲线参五种标准物质溶液的稀释曲线参五种标准物质溶液的稀释曲线参照吴际顺托福附图附图附图附图。
3.3未知物定量分析根据未明液稀释曲线上测量波长处的喷光度，确认未明液的吸收倍数，并酿制试样溶液3份，展开平行测定。
所推荐方法3.3.1维生素c含量的测定：准确吸取1mg/ml的维生素c标准储备液50.00ml，在250ml容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/ml）。
再分别准确移取1、2、4、6、8、10ml上述溶液，在100ml容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20ug/ml）。
准确移取20.00ml维生素c未知液，在100ml容量瓶中定容，于最小稀释波长处分别测量以上溶液的喷光度。
由标准曲线上Malvaleix未明液的浓度。
3.3.2苯甲酸含量的测量：精确汲取1mg/ml的苯甲酸标准储备液25.00ml，在250ml容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/ml）。
紫外分光光度法测定未知物
紫外分光光度法测定未知物1.仪器1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支2.试剂2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。
2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。
（其必为给出的五种物质之一）3.实验操作3.1比色皿配套性检查石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。
3.2未知物的定性分析将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。
以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。
五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。
3.3未知物定量分析根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。
推荐方法3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1m g/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200u g/mL）。
再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。
准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。
紫外吸收光谱法测定苯甲酸山梨酸和未知物ppt
因此紫外光谱可用于判别有机化合物中发色团和助色团的种类、位
置、数目，以及区别饱和与不饱和化合物，测定分子中共轭程度等。但
是仅依靠紫外光谱来推断未知化合物的结构是困难的。
4 苯甲酸与山梨酸的性质与用途
苯甲酸别名安息香酸，白色单斜晶系片状或针状结晶体，略带安息
用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中加水至距标线约1cm处等12分钟使附在瓶颈内壁的溶液流下后再用滴管滴加水至弯液面下缘与标线相切然后盖上瓶塞左手用食指按住塞子其余手指拿住瓶颈标线以上部分右手指尖托住瓶底将容量瓶倒转使气泡上升到顶使瓶振荡正立后再次倒转进行振荡如此反复1520次以上使瓶内溶液混合均匀
波长 (nm)
310
吸光 度(A)
吸光度(A)从吸收曲线上确定未知物的最大波长λmax = 所以该化合物为？？？
nm
六、数据处理
1
利用谱图进行定性分析
从紫外光谱仪上读出各波长的吸光度，以波长
为横坐标，吸光度为纵坐标作图，就得紫外吸收光
谱图。由光谱图可定出λmax ，并将未知物谱图与
已知化合物的谱图对照，推测未知物为苯甲酸或山
四、实验仪器与试剂
1 仪器
UV－9100紫外可见分光光度计
容量瓶(50ml)
烧杯(250ml)
洗耳球
玻璃比色皿(1cm)
洗瓶
吸量管(1ml, 2ml, 5ml, 10ml)
2 试剂
山梨酸 苯甲酸 乙醇 未知物
五、实验内容
1 配制溶液 取10 mg苯甲酸，用乙醇溶解，移入100 mL容量瓶中，用乙醇定容
实验一 紫外分光光度法测定苯甲酸
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2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
三 实验步骤
1.苯甲酸吸收曲线的绘制
吸取苯甲酸贮备液4.00ml，放入50ml容量瓶中， 用0.01mol/L的NaOH溶液定容，摇匀得标准苯甲 酸溶液S（此溶液1ml含8μg苯甲酸）。
测量条件 参比液： 0.01mol/L的NaOH溶液；测 量波长：210、215、218、220、222、224、225、 226、228、230、235、240nm。
紫外分光光度法测定苯甲酸
一 实验目的
学习运用标准对比法求样品含量 掌握752型紫外分光光度计的使用方法
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1
二 实验原理
在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐， 对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的 最大吸收波长在225nm。可采用紫外分 光光度计测定物质在紫外光区的吸收光 谱并进行定量分析。
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10
4、使用比色皿时, 还应特别注意通光方向。一般比色皿 的毛玻璃面上都刻有箭头, 或在透光面上蚀刻有标记, 以供 使用者辨认通光方向。 5、不能把装有溶液的比色皿放在仪器上以防止溅湿仪器。
6、比色皿在使用后，应立即用水冲洗干净，收好。
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8
实验课要求
穿白大褂，带笔记本记录数据 严肃认真操作实验，严禁大声喧哗 实验前后把仪器清洗干净并放回原位置
以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制苯甲酸 的紫外吸收曲线。
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3
2. 标准对比法测定样品液苯甲酸的含量
取10.00ml样品液，放入50ml容量瓶中，用 0.01mol/L的NaOH溶液定容，摇匀得稀释好的 样品液X。
在上述曲线中找出最大吸收波长，以此作测定波 长。以0.01mol/L的NaOH溶液为参比液。在完 全相同的条件下测出稀释好的样品液X的吸光度 值。
紫外光谱法测定食品中防腐剂
紫外光谱法测定食品中防腐剂实验目的1.进一步了解和熟悉紫外-分光光度计的结构和工作原理。
2.掌握利用苯甲酸和山梨酸的紫外吸收光谱图。
3.学会用标准曲线法测定样品中苯甲酸和山梨酸含量。
实验原理1．食品在储存、运输过程中易发生腐蚀、变质，因此常在食品中添加少量防腐剂。
苯甲酸和山梨酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。
苯甲酸具有芳香结构，在波长228nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。
山梨酸具有α,β-不饱和羰基结构，在波长250nm处有π—π*跃迁的K吸收带，且吸光度与浓度的关系符合朗伯比尔定律，因此可根据它们的紫外吸收光谱特征可以对它们进行定性鉴定和定量测定。
2．由于食品中防腐剂用量很少， GB2760-2011 规定0.2-1.5g/kg，并且食品样品中其它的成分也可能对防腐剂的测定具有干扰作用，因此一般可预先将样品中的防腐剂与其它成分进行分离，再经过提纯和浓缩进行测定。
常用的分离方法包括蒸馏法和溶剂萃取法等。
本实验采用溶剂萃取法，先用HCl酸化样品，再用乙醚从样品中萃取出苯甲酸和山梨酸；萃取物经过碱性溶液（NaOH）溶解，用乙醚稀释后进行紫外光谱检测。
仪器和试剂1.紫外可见分光光度计 751G型（上海分析仪器厂），分析天平，1.0cm石英比色皿溶液（1%）、2.HCl溶液（0.05mol·L-1,0.1mol·L-12 mol·L-11:1）、NaHCO3NaCl 、乙醚、苯甲酸、山梨酸。
3.试样（酱油、果汁、果酱等流状食品）实验步骤1.样品预处理准确称取样品1.5-2.5g，置于150mL分液漏斗中，加入40mL蒸馏水，用蒸馏水冲洗取样器皿，将洗液并入分液漏斗。
加入适量粉状NaCl，待溶解后加入0.5mL1:1HCl。
依次用30mL、25mL、20mL乙醚萃取样品溶液，合并萃取液,弃去水相，用2份30 mL0.05mol·L-1HCl洗涤乙醚萃取液，弃去水相。
苏秀琴--紫外分光光度法同时测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠.
甘肃联合大学学生毕业论文题目：紫外分光光度法同时测定饮料中的苯甲酸钠和山梨酸钾作者：苏秀琴指导老师：展惠英化工学院学院系工业分析与检验专业 2010 级三年制工业分析与检验班2012年 6 月 20 日紫外分光光度法同时测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠内容摘要：介绍了饮料中山梨酸钾和苯甲酸钠的紫外分光光度法同时测定方法。
实验表明该方法可快速准确地测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠，样品中山梨酸钾最小检出限为0.00067g/L,回收率为92%-94%;苯甲酸钠最小检出限为0.0014g/L,回收率为94%-96%。
关键词：山梨酸钾；苯甲酸钠；同时测定；紫外分光光度法一﹑实验目的(一)通过实验了解食品防腐剂的紫外光谱吸收特性,并利用这些特性对食品中所含的防腐剂进行定型鉴定.(二)掌握工作曲线的制作方法，并对食品中防腐剂的含量进行定量测定.二﹑实验原理食品添加剂对于改善食品色﹑香﹑味，延长食品保质期具有重要作用.山梨酸和苯甲酸及它们的盐在饮料中使用较为广泛，但都具有一定的毒性，其中苯甲酸还是防腐剂中使用量最大者.监测它们在饮料中的使用量，对于保障人们身体健康具有重要的现实意义.为了防止食品在储存﹑运输过程中发生变质﹑腐败，常在食品中添加少量防腐剂.防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸和山梨酸以及他们的钠盐﹑钾盐是食品标准允许使用的两种主要防腐剂.苯甲酸具有芳烃结构，在波长228nm和272nm处有K吸收带和B吸收带，山梨酸具有α不饱和羟基结构，在波长250nm处有β跃迁的K吸收带，因此根据他们的紫外吸收光谱特征可以对他们进行定性鉴定和定量测定.由于食品中防腐剂的用量很少，一般在千分之一左右，同时食品中其他成分可能产生干扰.因此需要预先将防腐剂与其他成分分离，并经提纯浓缩后进行测定.常用的从食品中分离防腐剂的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等.本实验可以采用溶剂萃取的方法，用乙醚将防腐剂从样品中提取出来，在经碱性水溶液处理及乙醚萃取以达到分离﹑提纯的目的.三﹑试剂山梨酸钾标准溶液:0.0052㎎/ml﹑苯甲酸钠标准溶液：0.0052㎎/ml﹑盐酸（1:1）；乙醚（AR）﹑饱和NaCl溶液，以上试剂为分析纯，水为重蒸馏水，7%的葡萄糖饮料.四﹑仪器UV-1201紫外分光光度计五﹑实验部分(一)实验方法取一定量实验所用溶液于分液漏斗中，加入20ml饱和NaCl溶液，再加入10ml 盐酸（1：1）和25ml乙醚充分振摇5min后静置弃去无机相，以试剂空白为参比测吸光度。
紫外分光光度法测定山梨酸及苯甲酸(精)
紫外分光光度法测定山梨酸及苯甲酸2009-11-10 15:16:32| 分类:| 标签:|字号大中小订阅为了防止食品在储存、运输过程中发生变质、腐败,常在食品中添加少量防腐剂。
防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格规定。
苯甲酸和山梨酸以及它们的钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的两种防腐剂。
苯甲酸具有芳烃结构。
在波长 228nm 和 272nm 处有 K 吸收带和 B 吸收带;山梨酸具有α、β不饱和羰基结构。
又称花椒酸,其化学结构为:为了防止食品在储存、运输过程中发生变质、腐败,常在食品中添加少量防腐剂。
防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格规定。
苯甲酸和山梨酸以及它们的钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的两种防腐剂。
苯甲酸具有芳烃结构。
在波长 228nm 和 272nm 处有 K 吸收带和 B 吸收带;山梨酸具有α、β不饱和羰基结构。
又称花椒酸,其化学结构为:CH3CH=CHCH=CHCOOH在波长 250nm 处有π→π*跃迁 K 吸收带,因此,根据它们的紫外吸收光谱特征可以对它们进行定性和定量测定。
由于食品中防腐剂用量很少,一般在 1/1000左右,同时食品中其它成分也可能产生干扰,因此,需要预先将防腐剂与其它成分分离,并经提纯浓缩后进行测定。
常用的从食品中分离防腐剂的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。
本实验采用溶剂萃取法,用乙醚将防腐剂从样品中提取出来,再经碱性水溶液处理及乙醚萃取以达到分离、提纯的目的。
采用最小二乘法处理标准溶液的浓度和吸光度数据,以求得浓度与吸光度之间的回归直线方程,并根据直线方程计算样品中防腐剂的含量。
在波长 250nm 处有π→π*跃迁 K 吸收带,因此,根据它们的紫外吸收光谱特征可以对它们进行定性和定量测定。
由于食品中防腐剂用量很少,一般在 1/1000左右,同时食品中其它成分也可能产生干扰,因此,需要预先将防腐剂与其它成分分离,并经提纯浓缩后进行测定。
紫外分光光度法测定食品中苯甲酸含量
标准曲线的绘制： 标准曲线的绘制：
取苯甲酸标准使用液0、1、2、4、6ml分 取苯甲酸标准使用液0 6ml分
别置于100ml容量瓶中，各加入5%NaHCO 别置于100ml容量瓶中，各加入5%NaHCO3 100ml容量瓶中 溶液2ml (1+2v)盐酸溶液 ml， 2ml， 盐酸溶液２ 溶液2ml，(1+2v)盐酸溶液２ml，加水至 刻度，摇匀。放置15min,尽量让CO 逸尽。 15min,尽量让 刻度，摇匀。放置15min,尽量让CO２逸尽。 用1cm吸收池于波长230nm处测定其吸光 1cm吸收池于波长230nm处测定其吸光 吸收池于波长230nm 以吸光度为纵坐标， 度。以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐 标绘制标准曲线。 标品: 液体样品: 酱油、食醋、饮料取10ml于１２５ml分 酱油、食醋、饮料取10ml １２５ml 10ml于 ml分
流漏斗中，加入(1+2v)盐酸溶液２ml进 流漏斗中，加入(1+2v)盐酸溶液２ml进 (1+2v)盐酸溶液 行酸化，用无水乙醚萃取二次，每次３ 行酸化，用无水乙醚萃取二次，每次３ ml，每次振摇１min。 ０ml，每次振摇１min。 合并乙醚层于另一干净分流漏斗中，用 合并乙醚层于另一干净分流漏斗中， NaCL溶液洗涤二次 每次５ 溶液洗涤二次， ５％NaCL溶液洗涤二次，每次５～１０ ml。然后蒸馏瓶回收乙醚， ml。然后蒸馏瓶回收乙醚，用 溶液溶解，定容至１ 20ml5%NaHCO3溶液溶解，定容至１00ml 备用。 备用。
(GB2760—1996)规定： (GB2760 1996)规定： 1996)规定 苯甲酸及苯甲酸钠在碳酸饮料中的最大 使用量为0.2g kg； 0.2g／ 使用量为0.2g／kg； 低盐酱菜、酱菜、蜜饯、食醋、果酱(不 低盐酱菜、酱菜、蜜饯、食醋、果酱( 包括罐头) 最大使用量为0.5g kg(以 0.5g／ 包括罐头)、最大使用量为0.5g／kg(以 苯甲酸计)。 苯甲酸计)
吸收光谱法同时检测食品中的苯甲酸钠与山梨酸钾_李秋萍
LI Qiu-ping1* ，ZHUO Jing2 ，ZHOU Shu-jing1
（ 1． College of Pharmacy，Jiamusi University，Jiamusi 154007，China； 2． Ministry of Education Key Laboratory of Analysis ＆ Detection Technology for Food Safety，Fuzhou University，Fuzhou 350108，China）
目前，国内外测定山梨酸钾和苯甲酸钠的方法主要有紫外光度法［5 － 6］、离子色谱法［7 － 8］、气相色
收稿日期： 2012 － 06 － 18； 修回日期： 2012 － 07 － 17 基金项目： 黑龙江省教育厅项目（ 11551508） * 通讯作者： 李秋萍，副教授，研究方向： 光谱分析，Tel： 18606093316，E － mail： liqiuping0706@ 163. com
第 12 期
李秋萍等： 吸收光谱法同时检测食品中的苯甲酸钠与山梨酸钾
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谱法［9］和液相色谱法 ［10 － 11］等。气相色谱法和液相色谱法是有效的多组分分析方法，但这些方法分析 成本高且费时； 光度法由于具有简便、可靠和重现性好等特点而广泛应用于食品分析中。偏最小二乘 变量筛选法是一种基于偏最小二乘的变量筛选，其优点是先利用偏最小二乘法处理含有全部变量的数 据，建立一个预报稳定性较高的模型，再用其中回归系数等有关信息来筛选变量，在不降低模型预报 能力的前提下，获得变量系数少、预报准确的模型［12 － 13］。紫外光度结合偏最小二乘变量筛选法对山梨 酸钾和苯甲酸钠同时测定未见报道，本研究利用苯甲酸钠和山梨酸钾紫外吸收光谱的特点，采用分光 光度法和偏最小二乘变量筛选法进行了饮料、调色酒、糕点、蜜饯样品中两者含量的同时测定。
实验一 紫外分光光度法测定苯甲酸
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2
三 实验步骤
1.苯甲酸吸收曲线的绘制
吸取苯甲酸贮备液4.00ml，放入50ml容量瓶中， 用0.01mol/L的NaOH溶液定容，摇匀得标准苯甲 酸溶液S（此溶液1ml含8μg苯甲酸）。
测量条件 参比液： 0.01mol/L的NaOH溶液；测 量波长：210、215、218、220、222、224、225、 226、228、230、235、240nm。
显示器显示“220nm,----Abs” 4.打开样品室盖，将参比液比色皿和待测液比色皿放入样
品室盖上样品室盖
5.将参比液比色皿拉入光路中，按100%T键调零 调零完成时显示器显示“220nm,0.000Abs”
6.将待测溶液拉入光路中，直接读数 注意：每改变波长，必须重新调零
注意倒溶液时远离仪器，避免溅湿仪器
试剂瓶用完后放回原位置；讲台上的试剂瓶不 能拿走；注意避免滴管和瓶盖的交叉污染
桌面保持整洁，小心避免损坏仪器
每次做完实验签名，值日生打扫干净，经老师 检查通过后才能离开
实验报告下次课前交精选完整pp Nhomakorabea课件9
实验报告的格式
一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、实验数据与处理 五、结果与讨论
作图统一用Excel格式并打印粘帖
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4、使用比色皿时, 还应特别注意通光方向。一般比色皿 的毛玻璃面上都刻有箭头, 或在透光面上蚀刻有标记, 以供 使用者辨认通光方向。 5、不能把装有溶液的比色皿放在仪器上以防止溅湿仪器。
6、比色皿在使用后，应立即用水冲洗干净，收好。
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实验课要求
穿白大褂，带笔记本记录数据 严肃认真操作实验，严禁大声喧哗 实验前后把仪器清洗干净并放回原位置
1.紫外分光光度法测定未知样含量-方案+公式+图
【相关计算及公式】
1.校准曲线 由试验点经最小二乘法对试验数据进行回归计算，得出一元一次线性回归方程，并 计算出该方程的相关系数。然后在坐标纸上画出该回归方程的直线。回归方程为： y a bx
其中： b
Lxy Lxx
x )2
a y bx Lxx Lxy Lyy
RSD
S 100 % x
(x
i
x) 2 100 %
n 1 x
4.未知稀释液含量：稀释后未知溶液中待测组分的浓度应由回归方程计算而得。
y1 a A a 1 b b y a A a 2 x 2 2 2 b b y a A a 3 x 3 3 3 b b x1 x 2 x3 则： x 3 1 x 1
紫外分光光度法测定未知样含量 (含方案、公式、标准误吸收光谱图)
1.仪器 1.1 紫外可见分光光度计(T6 型)； 1.2 石英吸收池(1cm)：2 只； 1.3 比色管（50mL）10 支； 1.4 吸量管 5mL：2 支。 2.试剂 2.1 苯甲酸、水杨酸标准溶液(0.1mg/mL)； 2.2 未知液：浓度约为 40～60ug/mL。 3.实验操作 3.1 吸收曲线的绘制 3.1.1 标准苯甲酸吸收曲线绘制 在一支 50mL 比色管中由 2.1 配制成浓度为 0～10ug/mL 范围内的溶液，以水定容， 并摇匀。于波长 200～350nm 范围内每间隔 10nm 测定一次吸光度，在最大吸收波长附近 间隔 5 nm 测定一次测定吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔 1 nm 测定一次吸光 度，绘制吸收曲线，从曲线上确定苯甲酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。 附图：苯甲酸的吸收曲线。 3.1.2 标准水杨酸吸收曲线绘制 在一支 50mL 比色管中由 2.1 配制成浓度为 0～10ug/mL 范围内的溶液，以水定容， 并摇匀。于波长 200～350nm 范围内每间隔 10nm 测定一次吸光度，在最大吸收波长附近 间隔 5 nm 测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长附近，间隔 1 nm 测定一次吸光度， 绘制吸收曲线，从曲线上确定水杨酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。 附图：水杨酸吸收曲线。 3.1.3 未知液吸收曲线的绘制 准确吸取含苯甲酸的未知液若干体积（5mL）于一支 50mL 比色管中，以水定容并 摇匀。以蒸馏水为参比，于波长 200～350nm 范围内每间隔 10nm 测定一次吸光度，在最 大吸收波长附近间隔 5 nm 测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔 1 nm 测 定一次吸光度， 绘制吸收曲线。 （观察 3.1.1 和 3.1.2 各自所得吸收曲线有什么相同之处？ 这说明了什么问题？对于一个未知样品如何利用分光光度法进行定性？） 附图：未知液的吸收曲线。 3.2 吸收池配套性检查 石英吸收池装蒸馏水，于定量测定波长处，以一个吸收池为参比，测定并记录另一 吸收池的吸光度（其偏差应小于 0.5%，可配成一套使用，否则更换）作为校正值。 3.3 校准曲线的绘制及未知样含量的测定 准确移取与未知样相同的物质的标准溶液若干体积于 50mL 比色管中，以水定容， 制成一系列相同体积不同浓度的标准溶液（0～10ug/mL），在最大吸收波长处，以水为 参比，测定各自吸光度。由实验数据计算回归方程及相关系数，以浓度（ρ/ ug· mL-1） 为 横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制校准曲线。 在相同条件下，测定样品稀释液（配制方法同 3.1.2）的吸光度，代入回归方程计算 出样品稀释液的浓度。试样平行测定三份。 4.结果计算 根据未知液的稀释倍数，求出未知溶液中水杨酸的含量。
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系在瓶颈上）。
❖ （2）洗涤：
❖
一般先用自来水洗，最后用蒸馏水水洗3次备用。
❖ （3）定量稀释溶液：
❖
用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，加水至距标线约1cm处，等1～2分钟，使
附在瓶颈内壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至弯液面下缘与标线相切，然后盖上瓶塞，
左手用食指按住塞子，其余手指拿住瓶颈标线以上部分，右手指尖托住瓶底，将容量瓶倒
二、实验原理
❖ 1 电磁波谱范围表
光谱名称 X射线 远紫外光 紫外光
可见光 近红外光 中红外光 远红外光 微波 无线电波
波长范围 0.01－－10 nm 10－－200 nm 200－－400 nm
400－－750 nm 0.75－－2.5 μm 2.5－－5.0 μm 5.0－－ 1000 μm 0.1－－100 cm 1－－1000 m
紫外吸收光谱法测定苯甲酸 山梨酸和未知物
化学生物系 吴 丹
一、实验目的
❖ 1 通过实验了解苯甲酸，山梨酸的紫外吸收特征，并利用这些 特征对未知物进行定性鉴定。
❖ 2 通过测定有机化合物紫外吸收光谱，掌握鉴别化合物中发色 团及其化合物类型的方法。
❖ 3 掌握有机化合物结构与紫外吸收光谱之间内在联系的规律。
有所增大）及附近的结构特征，而不能反映整个分子的特征。
❖ 因此紫外光谱可用于判别有机化合物中发色团和助色团的种类、位 置、数目，以及区别饱和与不饱和化合物，测定分子中共轭程度等。但 是仅依靠紫外光谱来推断未知化合物的结构是困难的。
4 苯甲酸与山梨酸的性质与用途
❖ 苯甲酸别名安息香酸，白色单斜晶系片状或针状结晶体，略带安息 香或苯甲醛气味。熔点122.4 ℃.在100℃时迅速升华，它的蒸气有很强 的刺激性，吸入后易引起咳嗽。苯甲酸在常温下微溶于水，石油醚，但 溶于热水,水溶液呈酸性；易溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂,也溶于非挥发 性油。对霉菌，酵母和细菌等有较好的抑制作用，因而对微生物有强烈 毒性，但对人体毒害不明显。 苯甲酸及其钠盐可用作乳胶、牙膏、果酱或其他食品的抑菌剂和防 腐剂，也可作染色和印色的媒染剂。
❖
3 有机化合物的紫外波谱性质
❖
有机化合物的紫外吸收光谱具有少数几个宽的吸收带，缺乏精细结
构，它只能反映分子中生色团和助色团（生色基团就是可以吸收光子而
产生跃迁的原子基团，主要指化合物分子内能吸收紫外及可见光的原子
基团。助色基团是指含有未成对电子的非生色基团。当它与某一生色基
团相连时，能使该生色基团的吸收波长位置向长波方向移动且光谱强度
用途：化妆品防腐剂。属有机酸类防腐剂。添加量一般在0.5％以下。防腐活
性与溶液pH值有密切关系。当溶液pH值为4时，离解率为14％，当pH值为6时，
离解率即高达94％。因此通常在酸性范围内(pH值4.0-5.5)使用。在pH值为8以下
防腐和杀毒作用稳定，毒性低，我们常用其钾盐作为食品防腐剂。
❖
山梨酸CH3-CH=CH-CH=CH-COOH，具有α，β-不饱和羰基结构，在波长
三、实验技能
❖ 1、容量瓶的使用
❖ （1）使用前检漏：
❖
加水至标线附近，盖好瓶塞后，左手用食指按住塞子，其余手指拿住瓶颈标线以上部
分，右手指尖托住瓶底，将瓶倒立2分钟，如不漏水，将瓶直立，转动瓶塞180°，再倒立
2分钟，如不漏可使用。（使用中，玻璃塞不应放在桌面上，以免玷污，操作时可用一手
的食指和中指夹瓶塞的扁头，当操作结束后随手将瓶盖盖上，也可用橡皮筋或细绳将瓶塞
❖
❖ 苯甲酸具有环状共轭结构，在波长 228nm 和272nm 处有 E吸收带和B 吸收带 （芳香族化合物的特征吸收） ；
❖
山梨酸（2，4-己二烯酸）无色针状结晶或白色结晶性粉末，无嗅或稍带刺
激性臭味。分子量112.13。熔点132-135℃。沸点228℃(分解)。微溶于水。溶于
有机溶剂。对光、热稳定，但在空气中长期放置易被氧化着色。
转，使气泡上升到顶，使瓶振荡，正立后再次倒转进行振荡，如此反复15～20次以上，使
瓶内溶液混合均匀。❖ 2、 Nhomakorabea液管的使用
❖ （1）洗涤
❖ （2）润洗
❖
使用前用吸水纸将尖端内外的水除去，然后用待吸液润洗三次：左手持洗耳球，右手
拇指和中指拿住标线以上部分，将移液管管尖插入约溶液1～2cm，将待吸液吸至球部1/4
跃迁类型 K和L层电子 中层电子 价电子
价电子 分子振动 分子振动 分子转动和低位振动 分子转动
分析方法 X射线光谱法 真空紫外光谱法 紫外光度法
比色及可见光度法 近红外光谱法 中红外光谱法 远红外光谱法 微波光谱法 核磁共振光谱法
2 ❖
用紫外或可见光照射含有共轭结构的不饱和化合物时，分子中的
价电子会从基态向激发态跃迁，此时，电子吸收了某一波长的紫外（可 见）光。能级跃迁所需的能量与被吸收的紫外（可见）光波长之间的关 系，可按下式计算：
250 nm 处有π→π* 跃迁的K 吸收带。
利用紫外吸收光谱鉴定有机物，其主要依据是化合物的吸收光谱特 征，如吸收曲线的形状，吸收峰数目以及各吸收峰波长及摩尔吸收系数 等。
一般来说同一化合物浓度不同时，光吸收曲线形状相同，最大吸收 波长不变，只是相应的吸光度大小不同。 ❖ 本实验将通过测定苯甲酸、山梨酸及未知物的紫外吸收光谱，根据 它们的紫外吸收光谱特征鉴定未知物是苯甲酸还是山梨酸。
E = hf = hc / λ
式中： h---普郎克常数 △E—电子能级的能量差（KJ·mol-1） f ， λ—被吸收光的频率和波长
❖ 电子跃迁主要有σ→σ* ，n→σ*, π→π*, n→π* 四种形式，它们跃迁所需能量大小为： σ→σ* ＞ n→σ* ≥ π→π* ＞ n→π* 其中σ→σ* 及n→σ* 的跃迁能量大，吸收的光 的波长落在真空紫外部分，而n→σ* 和共轭体系 π→π* 跃迁能量较小，落在紫外可见光的范围内。
处，移出，荡洗，弃去（切记从尖口放出,应保持上管口和食指干燥）。
❖ （3）移液：
❖
左手持洗耳球，右手拇指和中指拿住标线以上部分，将移液管管尖插入约溶液1～2cm，
将待吸液吸至标线以上，迅速移去洗耳球，同时用右手食指堵住管口，左手改拿盛待吸液
的容器。然后，将移液管往上提起，使之离开液面，并将原深入溶液部分沿容器内部轻转