呼吸道标本的培养与鉴定
呼吸道标本培养(51页)精选全文
17、一个人即使已登上顶峰，也仍要 自强不 息。202 4/10/2 2024/1 0/22024 /10/22 024/10/ 2ຫໍສະໝຸດ 析前一、痰（细菌）培养适应症
针对肺部感染患者：
特别是ICU及住院的社区获得性肺炎（CAP） 慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD) 肺脓肿（咳痰非最适标本）等适应症 可疑细菌性病原引起的肺部感染患者（见附录A）
下呼吸道感染细菌培养
痰的来源？ 是否被上呼吸道污染？
草绿色链球菌 奈瑟菌属 嗜血杆菌属 莫拉菌属
细胞内病原引起非典型肺炎 ： • 肺炎支原体 • 肺炎/ 鹦鹉热衣原体 • 嗜肺军团菌 • 柯克斯体（Q热）
常见引起细菌性社区感染典型肺炎病原菌： • 肺炎链球菌 • 流感嗜血杆菌 上呼吸道正常菌群 • 金黄色葡萄球 • 卡他莫拉菌
注3：暴露在特殊气溶胶环境：与飞沫有关的结核分枝杆菌、与尘暴和鸟排泄 物有关的双相真菌等。
痰涂片对下呼吸道感染病原菌诊断的作用
除引起社区非典型肺炎的病原不能常规培养外，其他 常见肺部感染的病原菌均可常规培养方法分离；
但培养方法敏感性低，无法判断分离菌的来源。
涂片革兰染色方法：
宿主细胞、蛋白质和肺部炎症反应的分泌物等来自下呼吸 道痰的组分，可反映感染的状况； 痰经咳嗽从肺深部进入气道，未受损的粘膜纤毛运动将痰 送入口腔，痰标本会被上呼吸道和口腔定植菌污染； √评价痰标本是否合格； √涂片还可发现培养不能生长的细菌。 √涂片方法提高了培养方法的特异性及敏感性。
厌氧菌，金黄色葡萄球菌， 需氧G-b
医院获得性肺炎
G-b (肠杆菌属/克雷伯菌属/不 动杆菌属/假单胞菌属)， 金黄色葡萄球菌，厌氧菌， 社区获得性肺炎的典型菌
军团菌，肺炎链球菌
呼吸道标本的处理
选择性培养基（如表1） 5%羊血琼脂 含抗生素的Thayer Martin 琼脂（GC+）和无抗生素的<GCO>(仅用于淋病奈瑟菌病例) 巧克力琼脂（仅用于会厌炎和喉气管炎病例）
质量控制 培养基使用之前，QC由培养基组负责。
上呼吸道标本处理程序
即使符合标准，也要结合临床和放射检查结果判断。 慢阻肺、或支气管插管病人即使没有肺实质感染的症状，也有持续性脓痰且可连续分离出占
第七部分 临床细菌室报告制度的规范
细菌实验室应对不同的细菌检验报告时间和内容应有相应的规定，并告诉临床各科，依此
可防止不明原因的报告延迟
应分两种报告形式：
1.
危重感染报告：
2.
常规报告：
涂片报告
1、革兰染色：危重报告30分钟报告。报告内容应包括染色反应、是细菌或真菌、细菌形态。有 无细胞内吞嗜现象，有无菌丝。
4. 有条件的单位可开展真菌药敏试验（应用稀释法报告MIC结果），真菌耐药监测为临床用 药提供参考。
第五部分 药物敏感试验规范
基层细菌室应开展K-B纸片扩散法药敏试验，应用WHONET软件开展本单位的耐药监测为临床 用药提供参考
药敏标准
1.
用CLSI指南推荐的K-B药敏标准进行常规药敏试验判断
构。如革兰染色见到革兰阳性球菌，是葡萄状排列；又如革兰染色见到真菌小分生孢子及菌 丝。 2、抗酸染色：抗酸染色报告应显示找到或未找到或可疑抗酸杆菌三种结果，报告中应加号 体现标本中抗酸杆菌的存在量。如找到抗酸杆菌++；见到染色不典型抗酸杆菌+，建议再送 标本。
趋向性鉴定试验
革兰阳性球菌：触酶试验、凝固酶试验 革兰阴性杆菌：氧化酶试验
呼吸道标本细菌学检验
呼吸道标本细菌学检验标准操作程序1.检验目的规范呼吸道标本细菌学检验操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。
3.标本采集与运送3.1 采集时间以晨痰为好。
3.2 采集方法3.2.1 自然咳痰法用清水反复漱口后从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。
3.2.2 气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
3.2.3 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
3.2.4 呼吸机采集法使用呼吸机的病人，可利用呼吸机吸取深部痰入专用采集器内送检。
3.2.5 为了明确扁桃体炎、会厌炎、鼻咽部化脓性感染的病原体，可以采集拭子送检。
首先拭子用无菌生理盐水沾湿，然后用力在感染部位擦拭，采集标本与无菌管送检。
3.3 标本运送3.3.1 采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2h。
3.3.2 延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存（疑为肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌感染除外），以免杂菌生长，但必须在24h内处理。
3.3.3 对可疑烈性呼吸道传染病的患者检验标本，在采集、运送及保存过程中必须注意生物安全防护。
4.检验步骤4.1接种：用无菌拭子蘸取脓性部分，接种于血平板和巧克力平板第一区，再用一次性接种环分区划线接种。
4.2 涂片在接种的同时进行涂片。
用铅笔在磨砂部位编号，每片只涂一份标本。
4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。
4.4 涂片染色镜检：涂片革兰染色，自然干燥后镜检。
先用低倍镜浏览整片，计数平均每个低倍视野WBC、上皮细胞的数量。
标本合格与否参考表1，合格标本再用油镜观察，主要观察片中主要细菌类型、WBC内吞噬什么细菌等，以作为看板时决定什么细菌要做的依据。
表1 痰液标本分级4.5 培养结果观察4.5.1 口咽部正常寄生的需氧菌主要是腐生的奈瑟菌、草绿色链球菌，4.5.2 有明确意义的病原菌： A群溶血性链球菌(咽炎)、流感嗜血杆菌（b型5y以下儿童急性会厌炎、急性支气管炎）、肺炎链球菌（急性支气管炎常继发于病毒感染、大叶性肺炎）、百日咳鲍特菌（咳嗽、支气管扩张）、金黄色葡萄球菌（肺炎）、军团菌（肺炎）、白喉棒状杆菌。
呼吸道感染实验室诊断流程
呼吸道感染实验室诊断流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!呼吸道感染是常见的疾病之一，实验室诊断对于明确病因、指导治疗和预防具有重要意义。
呼吸道标本的采集与送检要求
呼吸道标本的采集与送检要求1.采集标本的选择：常用的呼吸道标本有咽拭子、喉拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液等。
对于喷嚏液或唾液等非特异性标本的采集，不推荐用于病原体的检测。
2.采集时间：最佳的标本采集时间是在症状出现后24小时内采集，对于特定病原体如流感病毒等，应在症状出现48小时内采集。
3.采集方法：采用无菌的采集器具，如棉签、拭子等。
采集咽拭子时，应当将拭子的头部置于扁桃体和咽后壁的分泌物位置，不应担心引起患者咳嗽反射。
鼻拭子的采集方法是将拭子插入鼻腔内，盘旋擦拭鼻腔黏膜。
4.采集指导：采集者应经过专业培训并熟悉标本采集的技术要领。
采集过程中需要保持呼吸道的湿润，确保采集到的标本质量。
5.标本保存与运输：采集得到的标本应立即置于透明的标本袋中，封口完好。
若运输时间不长，可将标本放入4℃冰箱保存，不得冷冻。
如果运输时间较长，应采用冷冻方式运输（-20℃）。
运输过程中应尽量避免震动或损坏。
6.标本的处理：采集得到标本后，应尽快送往实验室进行处理。
痰液在送往实验室前应保持在4℃存放。
对于支气管肺泡灌洗液等标本，需要在接收实验室前制备样本。
7.实验室检测：送往实验室后，应当及时进行病原体的检测。
常用的检测方法包括细菌培养、病毒核酸检测（如PCR）、真菌培养等。
根据病情需要，还可以进行药敏试验、抗体检测等。
8.结果解读与报告：实验室所得结果需要专业人员进行解读，并及时生成报告。
报告应如实反映标本的检测结果，并提供相应的临床意义和建议。
在进行呼吸道标本的采集与送检时，需要确保采集者具备必要的知识与技能，并严格按照采集与送检要求进行操作，以保证最终的结果准确可靠，为诊治提供有力的支持。
呼吸道病毒检测方法
呼吸道病毒检测方法呼吸道病毒是引起呼吸道感染的主要病原体之一，包括流感病毒、腺病毒、冠状病毒等。
及时准确地检测呼吸道病毒对于临床诊断和治疗至关重要。
本文将介绍几种常见的呼吸道病毒检测方法，希望能对相关人员有所帮助。
首先，常见的呼吸道病毒检测方法包括病毒培养、免疫荧光染色、PCR技术等。
病毒培养是一种传统的检测方法，通过将患者样本接种到细胞培养物中，观察是否出现细胞破坏现象来判断病毒是否存在。
免疫荧光染色则是利用特异性抗体与病毒抗原结合的原理，通过荧光显微镜观察样本中是否有病毒颗粒存在。
而PCR技术则是通过扩增病毒核酸序列来进行检测，具有高灵敏度和特异性。
其次，针对不同的呼吸道病毒，还可以采用特异性的检测方法。
例如，对于流感病毒，可以利用快速抗原检测、实时荧光定量PCR等方法进行检测。
快速抗原检测是一种简便快速的检测方法，通过检测病毒抗原与特定抗体结合产生的颜色变化来判断病毒是否存在。
实时荧光定量PCR则是一种高度敏感的检测方法，可以对病毒进行定量检测，有助于了解病毒载量和感染程度。
此外，近年来还出现了一些新的呼吸道病毒检测技术，如纳米孔测序技术、质谱技术等。
纳米孔测序技术是一种高通量测序技术，可以对病毒核酸进行快速测序，有助于了解病毒的基因组结构和变异情况。
质谱技术则是通过检测病毒蛋白质的质谱图谱来进行检测，具有高度特异性和灵敏度。
综上所述，针对呼吸道病毒的检测方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用范围。
在临床实践中，应根据具体情况选择合适的检测方法，并结合临床症状和流行病学调查进行综合分析，以提高呼吸道病毒感染的诊断准确性和治疗效果。
希望本文所介绍的内容能够对相关医护人员和科研人员有所帮助，促进呼吸道病毒检测技术的进步和临床应用。
呼吸道标本的培养与鉴定
呼吸道标本的培养与鉴定人体的上呼吸道有常居的细菌群，下呼吸道是无菌的。
上呼吸道常居菌主要有：草绿色链球菌、α、β链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、拟杆菌、梭杆菌、口腔厌氧球菌、奈瑟菌（致病菌除外）等。
1. 下呼吸道感染的病原菌种类因感染部位而有所差异。
（1）.咽炎最常见的病原菌是A群链球菌；（2）.喉炎的病原菌以流感嗜血杆菌为主；（3）.中耳炎常见病原菌为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌及口腔厌氧菌；（4）.社区获得性下呼吸道感染的常见病原菌包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎衣原体、肺炎支原体、卡他莫拉菌、化脓性链球菌、结核分枝杆菌、嗜肺军团菌、诺卡菌等，金黄色葡萄球菌可引起社区获得性、进行性、坏死性肺部病变;(5)长期使用广谱抗菌药物及激素、粒细胞减少的患者容易受到侵袭性真菌的感染。
2.检验方法与程序通常用鼻咽拭子采集标本。
痰和支气管灌洗液用无菌痰杯留取。
应由临床医生指导留取。
痰标本及上呼吸道拭子标本应在2小时内送到实验室。
3.涂片检查直接涂片、革兰染色、镜检。
痰液标本每低倍视野上皮细胞应小于10个，白细胞应大于25个。
还可以初步判定是否有病原菌存在及病原菌的种类。
比如，念珠菌可直接在高倍镜下检查孢子及菌丝。
4.细菌培养通常采用分区划线接种的方法进行标本的初次接种。
①血平板适用于分离各类细菌，特别是β溶血性链球菌②巧克力平板于5%co2环境下分离嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌或淋病奈瑟菌③中国蓝/麦康凯平板用于分离革兰氏阴性杆菌④沙氏平板用于分离念珠菌及其他酵母菌或真菌⑤厌氧血平板放厌氧环境，分离厌氧菌⑥罗-琴培养基或米氏7H10培养基，用于结核分枝杆菌的培养。
35℃培养18-24小时，观察细菌菌落形态及特点，呼吸道标本中的常居菌群不用鉴定，培养后生长于平板第二区或第三区的中等或大量细菌，或仅在第一区生长的纯种细菌，都是需要鉴定的细菌。
若无致病菌或呼吸道正常菌群生长，可能提示正常菌受抗菌药物的抑制。
呼吸道标本的细菌培养
整理ppt
15
国内概况：
• 国内最早儿童肺炎链球菌脑膜炎个案报告
在1942年。60年代中期以前研究资料显示 SP肺炎、脑膜炎在冬春季发病较多，是儿 科住院病人中常见病例多发生在婴幼儿。 SP性脑膜炎占化脑的11.1-22.1％，仅次于 流脑。SP也是小儿肺炎的重要病原菌之一， SP所致大叶性肺炎，5岁以下儿童中可占70 ％。
整理ppt
9
（三）痰标本细菌培养存在的问题。
• 痰标本的培养时间：
呼吸道(痰)标本培养应该为24~72小时。24小 时培养后细菌生长稀少或未生长的平板应继续培 养到72小时后再作报告，防止一些生长缓慢的细 菌会遗漏，如卡他莫拉菌、奴卡菌、嗜血杆菌等。
整理ppt
10
（四）呼吸道（痰）标本的接种处理
儿童呼吸道常见细菌培养鉴定技术
整理ppt
1
病原菌确定原则
• 自从发现细菌以来，已经确定上百种疾病的病原菌，对这
些常见的传染病，通常只要检出已经确定的病原菌，就可 以认定这种疾病的原因。
• 新出现的传染病，需要用确定病原菌的古老标准来确定。
• 对病人组织、器官中分离到的一种微生物，不足以说明就
是疾病的原因。对于细菌性疾病，需要满足郭霍原则 （Koch）。
齐。
• 不典型的SP菌落有水滴样，菌落较大，边缘不整
齐；还有细小、似草绿色链球菌但较湿润的菌落 也需注意。
整理ppt
23
整理ppt
24
细菌染色形态
• 革兰氏染色阳性，呈矛头状，成双或链状排列，
有荚膜；在痰标本中大多数成双排列。
整理ppt
25
鉴定要点：
• Optochin敏感，胆汁溶菌和荚膜肿
胀试验阳性，菊糖分解试验阳性， 小鼠毒力试验阳性。
呼吸道病毒及检验.
结构：
分三部分
核心 核蛋白（NP）——衣壳 包膜
1、核心：
含RNA及RNA多聚酶
RNA分节段，7~8段
易发生基因重组，导致基因编码的蛋白抗原发 生变异而出现新亚型。
2、衣壳：核蛋白（NP）
呈螺旋对称 其抗原性稳定，具有型特异性。
核蛋白
3、包膜
内层：基质蛋白（MP），分型依据。 据NP和MP分型：
H3 N2
1977 ~
甲1
*：A型/U/S分SR离/地90点/7/7编号/分离年份
甲3
N2
H1 N1 H3
二、流感病毒的致病性
主要是病人、隐性感染者、病禽 飞沫（主要）、接触感染 多为冬春季
发热、畏寒 咳嗽、咽痛 全身酸痛、疲乏无力 头痛 腹泻、呕吐（部分病人）
重者继发肺炎、呼吸衰竭、甚至死亡
包括：体液免疫和细胞免疫
呼吸道病毒及检验
呼吸道病毒：是指主要以呼吸道为
侵入门户，引起呼吸道以及全身感染。临 床上的急性呼吸感染中有90～95%是由这 群毒引起的。
感染特点
主要种类
RNA病毒——
正粘病毒科：流感病毒 副粘病毒科：副流感病毒、呼吸道合胞病毒、
麻疹病毒、腮腺炎病毒； 其他病毒如：风疹病毒、冠状病毒、鼻病毒等
DNA病毒——腺病毒
（1） 甲型流感病毒抗原变异的幅度小，属于量 变，可引起小规模流感的流行，称抗原漂移 （Antigenic drift）
（2） 若抗原变异幅度大，系质变，形成新的亚 型，可以引起大规模甚至世界性的流感流行，称抗 原转变(Antigenic shift)。
为什么抗原变异与流行 密切相关？
甲型流感病毒在不同年代的抗原变化
五呼吸系统标本微生物检验
支气管肺泡灌洗液
应尽快送检，室温下不超过2小时； 如不能及时送检，应4℃保存，不超 过24小时。
呼吸系统感染常见微生物
01
02
03
细菌
肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、 金黄色葡萄球菌、卡他莫拉菌
等。
病毒
呼吸道合胞病毒、流感病毒、 副流感病毒、腺病毒等。
真菌
白色念珠菌、曲霉菌等。
04
其他微生物
支原体、衣原体等。
定期演练和培训
定期组织实验人员进行应急演练和培训，提高应对生物安全事件的 能力和水平。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
肺炎链球菌检验
通过血平板培养、Optochin敏感试验和胆汁溶菌试验等方法进行 鉴定。
流感嗜血杆菌检验
采用巧克力平板进行分离培养，并通过卫星现象、X因子和V因子依赖 试验等方法进行鉴定。
05 微生物检验结果解读与临 床意义
检验结果解读原则及注意事项
遵循微生物学原则
在解读检验结果时，需遵循微生物学的基本原则，包括微生物的 种类、数量、生长特性等。
高度的敏感性和特异性。
真菌学检验
1 2 3
直接镜检
采集患者的呼吸道分泌物或组织样本，在显微镜 下直接观察真菌的形态和结构特征，以初步判断 真菌的种类。
培养法
将样本接种于适当的培养基上，进行真菌培养， 观察真菌的生长情况和菌落特征，以鉴定真菌种 类。
血清学检测
利用特异性抗体与真菌抗原的结合反应，进行血 清学检测，如凝集试验、沉淀试验等，以辅助诊 断真菌感染。
病毒
如流感病毒、呼吸道合胞病毒等，病毒感染一般采取对症治疗和支持治疗。
真菌
如白色念珠菌、曲霉菌等，真菌感染多见于免疫力低下患者，治疗需考虑抗真菌药物。
下呼吸道标本结果报告
下呼吸道标本结果报告
一、标本类型：下呼吸道标本包括痰液、支气管肺泡灌洗液等。
二、检验项目：
外观：观察标本的颜色、性状、有无血丝、脓性分泌物等。
细胞学检查：计数白细胞、红细胞、鳞状上皮细胞、柱状上皮细胞等，了解炎症程度和细胞类型。
微生物学检查：检测细菌、病毒、真菌等微生物，明确感染的病原体类型。
抗原检测：针对某些特定病原体，检测其抗原成分，以明确诊断。
抗体检测：检测血清中针对某些病原体的抗体，了解感染情况及免疫状态。
细菌培养：对痰液或支气管肺泡灌洗液进行细菌培养，明确病原菌的种类及药敏试验，指导临床用药。
结核分枝杆菌检查：对疑似肺结核患者进行痰液或支气管肺泡灌洗液的结核分枝杆菌检查，明确诊断。
其他特殊检查：根据临床需要，进行其他相关的特殊检查，如分子生物学检测等。
三、报告形式：下呼吸道标本结果报告应以书面形式出具，包括检验项目、结果、参考值、结论等内容。
如有异常
结果，应在结论中注明，并给出相应的建议和处理方案。
四、报告时限：一般情况下，下呼吸道标本的微生物学检查、细菌培养等项目需要一定时间进行培养和鉴定，因此报告时限可能会有所延长。
具体时限应根据实验室实际情况而定，一般会在24-48小时内出具报告。
如有特殊情况，应及时通知相关医生或患者。
呼吸道标本采集
（4）标本运送：
咽拭子标本的运送宜采用带 保湿功能的运送培养基，避 免由于送检时间过长而干燥。 如未采用运送培养基，应于 0.5h 内 送 检 。 即 使 采 用 运 送 培养基，室温保存也不应超 过24h。
02 痰液标本
痰培养仅用于下呼吸道感染，主 要是肺部感染的诊断。
（1）临床采样指征：
咳嗽、脓性痰，伴有发热，影 像学检查出现新的或扩大的浸 润影；气道开放患者，出现脓 痰或血性痰；考虑下呼吸道感 染患者采集痰液标本，同时送 血培养标本。
（3）标签及申请单：
申请单除应包括患者基本信息外，患者的临床诊断、 症状、是否使用了抗菌药物、检测目的，标识是普通 培养、抗酸杆菌还是真菌培养。一定要注明标本种类 为肺泡灌洗液，以及采集时间。无菌管上的标签要求 有唯一标识号或条码，注明标本采集时间、检测目的。
（4）标本运输：
标本采集后需尽快送到实验室，不要冷藏标本。
质量不合格标本：显微镜下细胞学检查发现 标本受口咽部菌群污染。合格痰标本鳞状上 皮细胞＜10个/低倍视野，白细胞＞25个/低 倍视野，或白细胞与鳞状上皮细胞的数量比 值＞2.5。
无标签或标签贴错。
标识信息不明，未提供 采集时间及送检目的等。
超过2h送达实验室，且未 正确保存的标本。
运送容器有渗漏。
同一天同一项目重 复送 检的痰标本。
（2）采集要求：
痰标本的采集时机十分关键，应严格遵循以下 原 则采集标本：
争取首剂抗菌药物治疗使用前及更换抗菌药物前采集。 标本采集后保证2h内送达实验室并得到接种。 只要有可能得到合格的痰标本，应马上采集、送检。 宜在医护人员直视下留取合格痰标本。 送检痰标本后三天内不主张再次送检。
（3）标本采集 ：
呼吸道感染的实验室诊断
LOREM IPSUM DOLOR
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipisicing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Ut enim ad minim veniam, quis nostrud exercitation ullamco laboris nisi ut aliquip ex ea commodo consequat.
28
29
' '
30
31
32
33
34
35
检验方法
涂片
细菌涂片 真菌涂片 抗酸染色 奴卡菌涂片 六胺银染色
培养
细菌培养 真菌培养 厌氧培养 TB培养 奴卡菌培养
36
呼吸道标本细菌培养
血平板
• 肺炎链球菌 • β溶血链球菌 • 金黄色葡萄球
菌 • 卡他莫拉菌 • 奴卡菌
万古巧克力
• 流感嗜血杆菌 • 副流感嗜血杆
肺部特殊病原体感染：放线菌，组织胞浆菌，结核分枝 杆菌，奴卡菌，隐球菌，马红球菌，立克次体
9
痰涂片的目的
确定标本是否合格：帮助分辨是 感染、污染或正常菌群
为临床提供第一手资料，初步判 定是否有病原菌存在：细菌、真 菌、分枝杆菌等
10
痰涂片的影响因素
标本 是否 合格
镜下检查
痰涂片制备
11
12
SECTION
13
根据痰涂片评价标本质量
注释：分类中1-3类不做培养，要求重新留取标本；4、5类为合格标本； 6类为气管穿刺时，如未见白细胞，而鳞状上皮细胞>10/低倍视野应 重新留取标本。
呼吸道标本的细菌培养11.10
（三）痰标本细菌培养存在的问题。
痰标本的培养时间：
呼吸道(痰)标本培养应该为24~72小时。 24小时培养后细菌生长稀少或未生长的平板应 继续培养到72小时后再作报告，防止一些生长 缓慢的细菌会遗漏，如卡他莫拉菌、奴卡菌、 嗜血杆菌等。
（四）呼吸道（痰）标本的接种处理
涂片革兰氏染色，观察痰标本是否合格。 血琼脂：哥伦比亚琼脂或胰大豆胨琼脂、 5％绵羊血、或加适量抑制剂如庆大霉素 有利于肺炎链球菌生长。 巧克力琼脂：哥伦比亚琼脂+5％马血或兔 血+3mg/100mL去甲万古霉素或杆菌肽， 有利于嗜血杆菌的分离培养。
本地耐药情况和趋势：
结 论： 广州地区临床治疗儿童SP感染应首选青 霉素加霉抑制剂的复合药物或三代头孢 菌素。
SP血清学分型：
肺炎链球菌的血清分型可以为肺炎链球 菌疫苗研究提供可靠依据，也是一种流 行病学调查手段。 肺炎链球菌的抗原成分较多，有菌体核 蛋白、菌体种属特异性抗原、荚膜多糖 抗原等。
培养基
血琼脂平板：胰大豆蛋白胨琼脂或哥伦 比亚琼脂加5%绵羊血； 加庆大霉素的血琼脂平板：在普通血琼 脂中加入抑制剂庆大霉素注射液，混匀 倾倒平板，琼脂中庆大霉素最后浓度相 当于1.25 mg/250mL。
标本接种及培养条件
用鼻咽拭子采取患儿鼻咽分泌物、痰、咽拭子、 肺泡灌洗液等呼吸道标本接种庆大霉素血平板 或普通血平板，置于35℃，5％CO2温箱培养 18-24小时。初次分离培养在5~10%的CO2条 件下生长良好。 血液、脑脊液标本用血培养基增菌后转种庆大 霉素血平板或普通血平板置于35℃5％CO2温箱 培养18-24小时。
国内概况：
呼吸道标本采集
呼吸道标本采集
【一】评估和观察要点
1.评估患者年龄、病情、治疗、排痰情况及配合程度。
2.评估患者口腔黏膜有无异常。
3.观察痰液的颜色、性质、量、分层、气味、黏稠度和有无肉眼可见的异常物质等。
【二】操作要点
1.自行咳痰采集法晨痰为佳，用冷开水漱口，深吸气后用力咳出呼吸道深部痰液，标本量不少于1ml，痰量少或无痰患者可采用10%盐水加至45度左右雾化吸入后，将痰液咳出。
2.难于自然咳痰、不合作或人工辅助呼吸患者的痰液采集法患者取适当卧位，先叩击患者背部，然后将集痰器与吸引器连接，抽吸痰液2~5ml于集痰器内。
3.气管镜采集法协助医生在气管镜引导下，直接采集标本。
4.咽拭子采集法患者用清水漱口，取出无菌拭子蘸取少量无菌生理盐水；用压舌板轻压舌部，迅速擦拭患者口腔两侧腭弓及咽、扁桃体的分泌物，避免咽拭子触及其他部位；迅速把咽拭子插入无菌试管内塞紧。
5.24h痰标本采集法在广口集痰瓶内加少量清水。
患者起床后进食前漱口后第一口痰开始留取，至次日晨进食前漱口后最后一口痰结束，全部痰液留入集瓶内，记录痰标本总量、外观和性状。
【三】指导要点
1.告知患者正确留取标本对检验结果的重要性
2.告知患者痰标本留取的方法及注意事项
3.告知患者避免将唾液、漱口水鼻涕等混入痰中。
【四】注意事项
1.除24h痰标本外，痰液收集时间宜选择在清晨。
2.查痰培养及肿瘤细胞的标本应立即送检。
3.避免在进食后2h内留取咽拭子标本，以防呕吐，棉签不要触及其他部位以免影响检验
结果。
市第一人民医院细菌室下呼吸道标本的细菌学检验
市第一人民医院细菌室下呼吸道标本的细菌学检验1. 下呼吸道标本培养常见病原菌
金黄色葡萄球菌
脑膜炎奈瑟氏菌
化脓性链球菌
流感嗜血杆菌
肺炎链球菌
肠杆菌科细菌
结核分支杆菌
非发酵菌
白喉棒状杆菌
嗜肺军团菌
假丝酵母菌
2.标本收集：
2.1下呼吸道标本采集的基本要求是采集深部的痰液，具体方法有以下几种：1.自然咯痰法 2.气管镜采集法
3.小儿取痰法
4.气管穿刺法
5.胃内采痰法。
2.2标本采集的注意事项
2.2.1标本采集以晨痰为佳，咳前应充分嗽口，减少口腔正常菌群的污染。
2.2.2标本采集后应及时送检，以防某些细菌在外环境中死亡。
做结核分枝杆菌或真菌培养的痰液如不能及时送检，应放入4℃冰箱，以免杂菌生长。
3.检验步骤：
3.1一般细菌涂片检查挑取痰液的脓性或带血部分放在两张玻片中，置室温自然干燥，经火焰固定后，做革兰氏染色，另一张根据检验需要做抗酸染色或其他染色。
如标本中每个低倍视野内鳞状上皮细胞多于25
个，脓细胞又少于10个，并找不到病变部分，表示标本来自唾液，标本不合格，不必进一步检查，要求重新送检。
3.2分离培养一般细菌培养分别接种于血平板、麦康凯、巧克力平板，巧克力应置于CO2环境中35℃培养18～24小时。
4.报告结果：检出细菌，应报告菌名和药敏结果。
下呼吸道感染细菌学检验操作规范
下呼吸道感染细菌学检验操作规范下呼吸道感染细菌学检验操作规范1. 检验前准备检验前要检查所需器材是否齐备，且有使用期限、试剂是否过期。
根据标本性质准备适当的试验室和器材，如培养基、消毒剂、培养皿、显微镜、荧光显微镜等。
2. 标本的采集下呼吸道感染标本需由医生经过特殊训练后采集。
标本采集应在患者用药前进行，避免影响细菌培养。
应采集晨起的第一口咳痰标本，或在空腹情况下采集医生所要求的标本。
标本采集应该避免因细菌其他来源被污染。
3. 标本的存储和运输标本应在采集后尽快送至检验室。
标本在送到检验室的途中应密封，并且避免被震动或过热过冷。
气管切开标本应立即进行培养，对于咳痰标本应在收到后的半小时内进行处理。
4. 标本的处理将留有量行的痰液用橡皮塞挤入干净的西门子杯内，有时也可采用锡制雾化器或喷雾器快速将痰液或分泌物喷在玻片上。
用火焰或消毒器对冷凝吸入性肺炎标本进行消毒，尽可能在细菌沉淀区进行采样。
迅速挤压蓝色鼻咽拭子并置入培养皿内。
标本处理时要注意避免散播细菌。
5. 涂片染色将涂片涂上标本，然后进行染色。
无需特殊之处，可以参照常规的涂片染色法。
6. 培养用普通、选择性和不同的富集培养基进行培养。
常用的培养条件和相关的检测菌株如下：a. 长链球菌–用5%的羊血琼脂培养，将其置于CO2孵育箱中。
b. 肺炎球菌，草绿色链球菌，葡萄球菌–用血精灵琼脂培养。
c. 肺炎链球菌–用富集培养基，如VP培养基、耐苯唑芥庚烷琼脂（PBG琼脂）等。
为了纯化不同类型的肺炎链球菌，还可以选择使用灭菌的吞噬细胞进行富集，例如照片长杆菌（F. tularensis.）。
d. 泡沫状微生物和厌氧菌–分别用PPLO或厌氧和普通琼脂培养。
7. 鉴定和鉴别根据培养结果和临床表现，可对菌株进行初步鉴定和分类。
在进行鉴定过程中，应遵循规范化的步骤，选择正确的API、鉴定手段等，并在鉴定手册中查找相关鉴定概念、流程、依据以及最近的病原学方面的知识，避免误判或漏判。
下呼吸道细菌感染标本评估
03
标本处理
处理方法
采集
通过痰液、支气管肺泡灌洗液等途径采集下呼吸道标本。
保存
将采集的标本放入无菌容器中，并立即送往实验室进行检测。
预处理
在实验室中对标本进行预处理，包括离心、去沉淀物、稀释等步 骤。
处理注意事项
01
02
03
避免污染
采集和保存标本时应严格 遵守无菌操作，避免外界 细菌污染。
对标本进行预处理，包括离心、去沉淀物 、稀释等步骤。
对预处理后的标本进行细菌培养、药敏试 验等检测分析，以确定病原菌种类和药物 敏感性。
04
评估指标
评估标准
01
准确性
评估结果应与实际感染情况相符， 误差小。
敏感性
评估结果应能及时反映感染情况， 避免漏诊。
03
02
可靠性
评估结果应稳定可靠，不受其他因 素干扰。
下呼吸道细菌感染标本评估
目录
• 引言 • 标本采集 • 标本处理 • 评估指标 • 评估结果分析
01
引言
目的和背景
目的
评估下呼吸道细菌感染标本，为临床诊断和治疗提供依据。
背景
下呼吸道细菌感染是常见的呼吸系统疾病，其诊断依赖于对标本的准确评估。 随着医疗技术的进步，对下呼吸道细菌感染标本的评估要求也越来越高。
特异性
评估结果应能准确区分感染与非感 染情况，避免误诊。
04
评估方法
1 2
实验室检测
通过细菌培养、涂片镜检、免疫学检测等方法进 行评估。
临床诊断
结合患者症状、体征、影像学检查等进行评估。
3
流行病学调查
了解患者感染来源、传播途径等信息，为评估提 供参考。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
呼吸道标本的培养与鉴定
人体的上呼吸道有常居的细菌群，下呼吸道是无菌的。
上呼吸道常居菌主要有：草绿色链球菌、α、β链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、拟杆菌、梭杆菌、口腔厌氧球菌、奈瑟菌（致病菌除外）等。
1. 下呼吸道感染的病原菌种类因感染部位而有所差异。
（1）.咽炎最常见的病原菌是A群链球菌；
（2）.喉炎的病原菌以流感嗜血杆菌为主；
（3）.中耳炎常见病原菌为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌及口腔厌氧菌；
（4）.社区获得性下呼吸道感染的常见病原菌包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎衣原体、肺炎支原体、卡他莫拉菌、化脓性链球菌、结核分枝杆菌、嗜肺军团菌、诺卡菌等，金黄色葡萄球菌可引起社区获得性、进行性、坏死性肺部病变;
(5)长期使用广谱抗菌药物及激素、粒细胞减少的患者容易受到侵袭性真菌的感染。
2.检验方法与程序
通常用鼻咽拭子采集标本。
痰和支气管灌洗液用无菌痰杯留取。
应由临床医生指导留取。
痰标本及上呼吸道拭子标本应在2小时内送到实验室。
3.涂片检查
直接涂片、革兰染色、镜检。
痰液标本每低倍视野上皮细胞应
小于10个，白细胞应大于25个。
还可以初步判定是否有病原菌存在及病原菌的种类。
比如，念珠菌可直接在高倍镜下检查孢子及菌丝。
4.细菌培养通常采用分区划线接种的方法进行标本的初次接种。
①血平板适用于分离各类细菌，特别是β溶血性链球菌
②巧克力平板于5%co2环境下分离嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌或淋病奈瑟菌
③中国蓝/麦康凯平板用于分离革兰氏阴性杆菌
④沙氏平板用于分离念珠菌及其他酵母菌或真菌
⑤厌氧血平板放厌氧环境，分离厌氧菌
⑥罗-琴培养基或米氏7H10培养基，用于结核分枝杆菌的培养。
35℃培养18-24小时，观察细菌菌落形态及特点，呼吸道标本中的常居菌群不用鉴定，培养后生长于平板第二区或第三区的中等或大量细菌，或仅在第一区生长的纯种细菌，都是需要鉴定的细菌。
若无致病菌或呼吸道正常菌群生长，可能提示正常菌受抗菌药物的抑制。
标本运送和处理的延迟会使培养结果为假阴性。
对痰液中检出的呼吸道常居菌虽不做鉴定，但在报告时给予说明，当其为生长优势菌时（均占90%以上）可做鉴定和报告。
经过鉴定确认为呼吸道重要病原菌时，应作出培养阳性的结果报告。
Welcome !!! 欢迎您的下载，资料仅供参考！。