实验八微生物的生理生化反应实验九微生物的生理生化实验.pptx
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实验八酵母菌形态观察细菌生理生化反应
实验八
酵母菌的形态观察、 细菌的生理生化反应
2020/4/13
1
一、目的
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区 分酵母菌死活细胞的实验方法，学习观察酵 母菌液泡、肝糖粒的方法；
2、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的 重要作用；
3、了解吲哚、甲基红、伏-普反应的原理及其 在肠道菌鉴定中的意义和方法。
2、培养基：牛肉膏蛋白胨斜面培养基，PDA液体培养基、 葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试 管、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基
3、试剂：吕氏碱性美兰染色液、中性红染色液、碘液、甲 基红指示剂，40％KOH，5％α-萘酚，乙醚，吲 哚试剂等。
4、仪器或其他用具： 显微镜、酒精灯、载玻片、 盖玻片等。
吲哚、甲基红、伏-普这三个试验主要是用来快速鉴
别大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的细菌学检查。大肠杆
菌虽非致病菌，但在饮用水中若超过一定数量，则表示受
粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水
时要将两者分开。
2020/4/13
3
三、器材
1、菌种：酿酒酵母、热带假丝酵母培养约2d的培养物；大 肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
2020/4/13
2
二、基本原理
酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖。美 兰是一种无毒性的染料可用于鉴别细胞的死活。
糖分解试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道 细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为 碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的 差异。发酵培养基含有蛋白胨，指示剂，倒置的德汉氏小 管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫 色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。气体的产生可由倒置的 德汉氏小管中有无气泡来证明。
酵母菌的形态观察、 细菌的生理生化反应
2020/4/13
1
一、目的
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区 分酵母菌死活细胞的实验方法，学习观察酵 母菌液泡、肝糖粒的方法；
2、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的 重要作用；
3、了解吲哚、甲基红、伏-普反应的原理及其 在肠道菌鉴定中的意义和方法。
2、培养基：牛肉膏蛋白胨斜面培养基，PDA液体培养基、 葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试 管、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基
3、试剂：吕氏碱性美兰染色液、中性红染色液、碘液、甲 基红指示剂，40％KOH，5％α-萘酚，乙醚，吲 哚试剂等。
4、仪器或其他用具： 显微镜、酒精灯、载玻片、 盖玻片等。
吲哚、甲基红、伏-普这三个试验主要是用来快速鉴
别大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的细菌学检查。大肠杆
菌虽非致病菌，但在饮用水中若超过一定数量，则表示受
粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水
时要将两者分开。
2020/4/13
3
三、器材
1、菌种：酿酒酵母、热带假丝酵母培养约2d的培养物；大 肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
2020/4/13
2
二、基本原理
酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖。美 兰是一种无毒性的染料可用于鉴别细胞的死活。
糖分解试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道 细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为 碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的 差异。发酵培养基含有蛋白胨，指示剂，倒置的德汉氏小 管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫 色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。气体的产生可由倒置的 德汉氏小管中有无气泡来证明。
实验八 微生物生理生化特性检测(糖发酵、氨化作用、IMVC、硫化氢试验等)
杆菌，第三支不接做对照； 取蔗糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草
杆菌，第三支不接做对照；
取乳糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草 杆 菌，第三支不接做对照。 将接种的和做对照的9支试管放置28~30℃培养2~3天。
表1 糖发酵试验结果
试验菌种 发酵特性 葡萄糖 大肠杆菌 枯草杆菌 对照 产酸 产气 产酸 产气 产酸、产气 供试糖 蔗糖 乳糖
1 目的要求
2 基本原理
3 试验材料
4 操作步骤
1 目的要求
学习掌握IMVIC试验原理。 学习硫化氢试验检测细菌产生硫化氢的原理和方法。 学习掌握IMVIC试验及H2S试验在肠道菌鉴定中的方法及意 义。
2 基本原理
IMVC是吲哚（indol）、甲基红（methyl red test）、 伏—普（Voges-Prokauer test）和柠檬酸盐 （citrate test）四个实验的缩写，主要用于快速鉴 别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水细菌学检查。H2S
刺线有无细菌生长和是否变色。黑色为阳 性，没有黑色产生为阴性。
试验结果记录
见书P58。
实验报告
按实验内容分别书写。要求每个实验写出：
1 实验目的
2 实验原理
3 实验结果。
实验结果用表格形式给出，并对实验结果进行分析。 4 讨论
三 IMVC试验
一 糖发酵试验
1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤
1 目的要求
了解糖发酵的原理。 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物接种技术
2 基本原理
不同细菌对糖的分解利用能力存在较大 差异，且产物不同，是常用的鉴别微生物的 生化方法。有些细菌能分解某种糖产生有机 酸和气体；有些细菌只产酸不产气。若产酸，
杆菌，第三支不接做对照；
取乳糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草 杆 菌，第三支不接做对照。 将接种的和做对照的9支试管放置28~30℃培养2~3天。
表1 糖发酵试验结果
试验菌种 发酵特性 葡萄糖 大肠杆菌 枯草杆菌 对照 产酸 产气 产酸 产气 产酸、产气 供试糖 蔗糖 乳糖
1 目的要求
2 基本原理
3 试验材料
4 操作步骤
1 目的要求
学习掌握IMVIC试验原理。 学习硫化氢试验检测细菌产生硫化氢的原理和方法。 学习掌握IMVIC试验及H2S试验在肠道菌鉴定中的方法及意 义。
2 基本原理
IMVC是吲哚（indol）、甲基红（methyl red test）、 伏—普（Voges-Prokauer test）和柠檬酸盐 （citrate test）四个实验的缩写，主要用于快速鉴 别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水细菌学检查。H2S
刺线有无细菌生长和是否变色。黑色为阳 性，没有黑色产生为阴性。
试验结果记录
见书P58。
实验报告
按实验内容分别书写。要求每个实验写出：
1 实验目的
2 实验原理
3 实验结果。
实验结果用表格形式给出，并对实验结果进行分析。 4 讨论
三 IMVC试验
一 糖发酵试验
1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤
1 目的要求
了解糖发酵的原理。 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物接种技术
2 基本原理
不同细菌对糖的分解利用能力存在较大 差异，且产物不同，是常用的鉴别微生物的 生化方法。有些细菌能分解某种糖产生有机 酸和气体；有些细菌只产酸不产气。若产酸，
细菌的生理生化反应ppt课件
硫化铅或硫化铁沉淀物。
材料 菌种：大肠杆菌、变形杆菌
培养基： H2S试验培养基（固体）
步骤 1 试管标记:取装有H2S试验固体培养基的试管2支，分别标记大肠 杆菌、变形杆菌 。 2 接种培养:以无菌操作分别用接种针挑取少量菌苔到以上相应试 管做穿刺接种，置37℃恒温箱中培养24～48h。
结果观察
原理
培养基 步骤
同V.P试验 同V.P试验
1 标记试管:取2支装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，分别标记大 肠杆菌、产气肠杆菌。 2 接种培养 :以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中。 置37℃恒温箱中，培养24～48h。
结果观察
取出以上试管，各加入2～3滴甲基红指示 剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养液 上层。
（五）柠檬酸盐试验
原理 有些细菌能够利用柠檬酸钠作为碳源，如产气肠杆菌；而另一些细菌则不能 利用柠檬酸盐，如大肠杆菌。细菌在分解柠檬酸盐后，产生碱性化合物，
使培养基的pH升高，当培养基中加入1%溴麝香草酚蓝指示剂时，就会由绿 色变为深蓝色。（溴麝香草酚蓝的指示范围为：pH小于6.0时呈黄色，pH 在6.0~7.6时为绿色，pH大于7.6时呈蓝色。）
结果观察
取出以上试管，在培养液中加入乙醚1～2ml，经充分振荡使吲哚萃取 至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入 5～10滴吲哚试剂（加入吲哚试剂后切勿摇动试管，以防破坏乙醚层影 响结果观察）。 如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性反应，否则为 阴性反应，阳性用“＋”、阴性用“－”表示。
三、 材料
3.1 菌种 大肠杆菌（Escherichia coli） 产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes） 普通变形杆菌（Proteus vulgaris） 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种 3.2 培养基 糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖）、葡萄糖蛋白胨水培养基、 蛋白胨水培养基、淀粉培养基、H2S试验培养基、柠檬酸盐培养 基
微生物的生理生化实验
实验名称：微生物的生理生化实验姓名：学号：系别：实验日期：同组同学名单：摘要：本实验通过应用细菌鉴定中常用的生理生化反应及原理，验证了几种常见菌种的生理生化特性，充分体现了微生物生理学实验在微生物分类鉴定中的意义。
实验目的：1.学习细菌鉴定中常用的生理生化反应及原理2.了解微生物与氧的关系3.学习抗菌谱的测定方法4.学习微生物学生理学实验的观察方法。
5.学习微生物生理学实验在微生物分类鉴定中的意义。
实验材料：1.各种药品、指示剂、试剂（吲哚试剂、甲基红试剂、V. P. 试剂、抗生素等）2.玻璃器皿3.高压灭菌器4.菌种：E. coliStaphylococcus arueusEnterobacter aerogenes (产气肠杆菌)Proteus vulgaris (变形杆菌)Bacillus subtilisClostridium acetobutylicum (丙酮丁醇梭菌)实验方法及步骤：一、各种培养基的配制以及物品的准备(一)培养基的配制：1.名称：葡萄糖蛋白胨水培养基分装：5支中试管（5ml/支）用途： V. P. 实验、甲基红实验2.名称：蛋白胨水培养基分装：5支中试管（5ml/支）用途：吲哚实验3.名称：葡萄糖发酵培养基分装：4支中试管（5ml/支）用途：糖发酵4.蔗糖发酵培养基分装：4支中试管（5ml/支）用途：糖发酵5.乳糖发酵培养基分装：4支中试管（5ml/支）用途：糖发酵6.名称：酚红半固体柱状培养基分装：大试管，20ml/支，每组3支用途：微生物与氧的关系7.名称：牛肉膏蛋白胨固体培养基分装：100ml/250ml 三角瓶用途：微生物与抗生素的关系8.名称：牛肉膏蛋白胨液体培养基分装：2支中试管，2ml/支2支三角瓶，5ml/支8支中试管， 4.5ml/支用途：细菌转导9.名称：素琼脂培养基（9）分装： 6支中试管，4ml/支用途：细菌转导10.名称：EMB（10），碳源：半乳糖分装： 100ml/250ml三角瓶用途：细菌转导(二)物品准备1.小培养皿，内装一只大头针；2.0.2ml和1ml吸头等；3.培养皿12套。
实验九微生物的生理生化反应
实验九 微生物的 生理生化反应
一、实验目的
通过不同细菌（以细菌为代表来说明微生物）
对不同含碳、氮化合物分解利用的情况不同来
了解不同细菌碳、氮代谢类型的多样性。
二、实验原理
不同微生物对同种碳、氮化合物利用情况不 同，而同一微生物对不同碳、氮化合物分解利 用情况也不相同，反映出微生物具有不同酶系 导致代谢类型的差异（酶系包括胞外酶系及胞 内酶系）。因此，不同的微生物具有不同的酶 系，利用不同物质作为底物进行反应后，产生 不同的产物，在添加适当指示剂的条件下会显 示不同的结果，所以可以利用微生物的不同生 理生化反应来作为对微生物分类和鉴定的重要 依据。
思考题
1. 假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发 酵试验应该出现什么结果？（P120，2 ） 2. 解释在细菌培养中吲哚检测的化学原理， 为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色 氨的酶活性的指示剂，而不用丙酮酸? P123，2（2）
3. 说明在硫化氢试验中，醋酸铅的作用。可 以用哪种化合物代替醋酸铅 ? P123，2（4）
大肠杆菌
√
√
√
√
√
产气杆菌
变形杆菌 培养基
√
√
√
√
√
√
√ 蛋白胨 水 培养基 葡萄糖蛋白胨水 培养基 柠檬酸 盐斜面 乳糖 发酵
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ接种方式
液体
液体
液体
斜面
葡 萄 糖 发 液体酵
醋酸铅 培养基
穿刺
2. 培养37℃ 24- 48h 3. 结果观察： ①吲哚试验： 1ml 乙醚萃取，剧烈摇晃静置分层， 沿壁缓加吲哚试剂，观察玫瑰环。 ② M.R 试验：加入 2 滴甲基红试剂，阳性为红色。 ③ VP 试验 : 加 40 ％ KOH 约 10 滴，再加等量 5 ％ α －奈酚,酒精灯加热，阳性红色。 ④柠檬酸盐试验：直接观察，阳性蓝色。 ⑤糖发酵试验：直接观察，产酸黄色 ; 产气，杜 氏小管中有气泡。 ⑥H2S试验：直接观察，阳性有黑色沉淀。
一、实验目的
通过不同细菌（以细菌为代表来说明微生物）
对不同含碳、氮化合物分解利用的情况不同来
了解不同细菌碳、氮代谢类型的多样性。
二、实验原理
不同微生物对同种碳、氮化合物利用情况不 同，而同一微生物对不同碳、氮化合物分解利 用情况也不相同，反映出微生物具有不同酶系 导致代谢类型的差异（酶系包括胞外酶系及胞 内酶系）。因此，不同的微生物具有不同的酶 系，利用不同物质作为底物进行反应后，产生 不同的产物，在添加适当指示剂的条件下会显 示不同的结果，所以可以利用微生物的不同生 理生化反应来作为对微生物分类和鉴定的重要 依据。
思考题
1. 假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发 酵试验应该出现什么结果？（P120，2 ） 2. 解释在细菌培养中吲哚检测的化学原理， 为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色 氨的酶活性的指示剂，而不用丙酮酸? P123，2（2）
3. 说明在硫化氢试验中，醋酸铅的作用。可 以用哪种化合物代替醋酸铅 ? P123，2（4）
大肠杆菌
√
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产气杆菌
变形杆菌 培养基
√
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√ 蛋白胨 水 培养基 葡萄糖蛋白胨水 培养基 柠檬酸 盐斜面 乳糖 发酵
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ接种方式
液体
液体
液体
斜面
葡 萄 糖 发 液体酵
醋酸铅 培养基
穿刺
2. 培养37℃ 24- 48h 3. 结果观察： ①吲哚试验： 1ml 乙醚萃取，剧烈摇晃静置分层， 沿壁缓加吲哚试剂，观察玫瑰环。 ② M.R 试验：加入 2 滴甲基红试剂，阳性为红色。 ③ VP 试验 : 加 40 ％ KOH 约 10 滴，再加等量 5 ％ α －奈酚,酒精灯加热，阳性红色。 ④柠檬酸盐试验：直接观察，阳性蓝色。 ⑤糖发酵试验：直接观察，产酸黄色 ; 产气，杜 氏小管中有气泡。 ⑥H2S试验：直接观察，阳性有黑色沉淀。
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---敢为天下先，勇争第一
10、阅读一切好书如同和过去最杰出 的人谈 话。08:14:5808 :14:580 8:143/5 /2021 8:14:58 AM
11、越是没有本领的就越加自命不凡 。21.3.5 08:14:5 808:14 Mar-21 5-Mar- 21
12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人 的错儿 。08:14:5808:1 4:5808:14Friday , March 05, 2021
菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯 草杆菌、普通变形杆菌、绿脓杆菌、产 气肠杆菌
三、实验原理和步骤
大分子水解实验
不同微生物分解利用生物大分子能力各有不 同。只有那些能够产生并分泌跑外酶的微生
物才能利用大分子有机物。
油脂水解、淀粉水解、明胶液化 脂肪酶、 淀粉酶、 蛋白酶
糖发酵实验 细菌在分解糖或醇(如葡萄糖、乳糖、蔗 糖、甘露醇、甘油)的能力有很大的差异。
IMV 验
培养基
iC反 V.P实验 葡萄糖蛋白胨水
应
培养基
柠檬酸盐 柠檬酸盐培养基 实验
H2S实验 H2S培养基
菌种
金黄葡、枯 草 枯草、大肠
接种 方式 平板
平板
大肠、枯草、穿刺 绿脓
大肠、变形 试管
大肠、变形 大肠、产气 大肠、产气
试管 试管 试管
大肠、产气 试管
大肠、产气 斜面
大肠、产气 穿刺
现象
有些细菌发醇某种糖后产生各种有机酸 (如乳酸、醋酸、甲酸、琥珀酸)及各种 气体(如氢、甲烷、二氧化碳)。有的细
菌只产酸不产气。酸的产生可利用指示
剂来指示。在配制培养基时可预先加入 溴甲酚紫【pH 5(黄)－pH7(紫)】。当细
菌发酵糖产酸时，可使培养基由紫色变
为黄色。气体的产生可由糖发酵管中倒 置的杜氏小管中有元气泡来证明。
水解出现红色斑点
加入碘液后出现透明水 解圈 沿穿刺接种的痕迹进行 明胶的液化水解 颜色变化、有气泡积聚
同上 产生红色玫瑰吲哚 丙酮酸分解为小分子酸， 使得培养基颜色变红 丙酮酸不分解，氧化后 与α-萘酚形成红色 可以利用柠檬酸盐， pH升高，颜色变蓝 产生PbS黑色沉淀
9、有时候读书是一种巧妙地避开思考 的方法 。21.3. 521.3.5 Friday , March 05, 2021
13、知人者智，自知者明。胜人者有 力，自 胜者强 。21.3.5 21.3.50 8:14:58 08:14:5 8Marc h 5, 2021
14、意志坚强的人能把世界放在手中 像泥块 一样任 意揉捏 。2021 年3月5 日星期 五上午8 时14分 58秒08 :14:582 1.3.5
15、最具挑战性的挑战莫过于提升自 我。。2 021年3 月上午 8时14 分21.3.5 08:14 March 5, 2021
IMViC反应： 吲哚实验 甲基红实验 V.P.实验 柠檬酸盐实验 H2S实验
实验名称
培养基
大分 子水 解实
验
油脂水解 淀粉水解 明胶液化
油脂培养基 淀粉培养基 明胶培养基
糖发 葡萄糖发 葡萄糖发酵培养
酵实 酵
基
验 乳糖发酵 乳糖发酵培养基
吲哚实验 蛋白胨水培养基
甲基红实 葡萄糖蛋白胨水
由于微生物代谢类型多样性，使得微生物在自然 界的物质循环中起着重要作用，同时也为人类开 发利用微生物资源提供更多的机会与途径。
此外，微生物代谢类型多样性具体表现在生化反 应的多样性，因此人们在微生物的分类鉴定工作 中，常利用其生化反应作为重要依据。
二、实验器材
培养基：油脂培养基、淀粉培养基、明 胶培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳 糖）、
实验八 微生物的生理 生化反应
何伟 2006－04
一、实验目的
微生物代谢与其他生物代谢有着许多相似之处， 也有不同之处。微生物代谢重要持征之一，就是 代谢类型的多样性。即使同属化能异养菌中的不 同微生物，它们分解生物大分子的能力，分解利 用含碳化合物、含氮化合物的途径和产生代谢产 物也各不相同等等。
16、业余生活要有意义，不要越轨。2 021年3 月5日 星期五8 时14分 58秒08 :14:585 March 2021
17、一个人即使已登上顶峰，也仍要 自强不 息。上 午8时14 分58秒 上午8 时14分0 8:1
You made my day!