EI操作手册稳态瞬态荧光光谱仪(FLS 920)操作说明书

Edinburgh InstrumentFLS920User Manual目录一、开机步骤 (2)二、实验操作 (4)1、实验前准备 (4)2、稳态实验 (6)A、发射光谱实验 (6)B、激发光谱实验 (9)C、同步谱 (10)D、Map (11)E、偏振光谱 (12)3、低温实验 (17)A、液氮冷却系统(Oxford) (17)B、ARS冷却系统 (19)4、样品衰减操作 (22)A、纳秒、皮秒级衰减 (22)纳秒灯为光源 (22)激光器为光源 (27)B、微妙、毫秒级衰减 (29)三、数据处理 (32)1、数据一般处理 (32)2、稳态光谱 (33)3、瞬态光谱 (33)四、附录 (36)1、氢灯清洗方法 (36)一、开机步骤1、打开总电源（开之前保证所有仪器开关关闭）2、开启PH13、开启PMT制冷电源CO14、开启光谱仪控制电源CD920（控制盒）或样品室下方的控制板电源此为控制盒此为控制板5、根据需要的光源开启氙灯或是其它灯源电源此为氙灯电源此为氢灯电源6、开启电脑，同时将谱仪样品室上方盖子移开。

待进入操作系统后进入F900软件。

二、实验操作 1、实验前准备在做实验前有几点需要注意：A 、 对于红敏PMT （R928），其制冷必须达到一定温度，一般为室温-40℃左右。

待C O 1显示在-17℃左右的时候，在软件的S i g n a l R a t e 窗口里观察E m 1的C P S 读数显示。

若其读数维持在50C P S 以下，则表明读数正常，P M T 制冷达到工作状态，可以用该探测器进行实验。

Fig.2.1 B 、 对于近红PMT （5509），其必须准备以液氮杜瓦罐（约15升左右），将制冷部件的管子插入罐中，开启制冷电源Fig.2.2制冷电源杜瓦罐通气管道电源开启后，其显示屏上有两行显示，一行为设定的80k，一行为PMT的温度显示。

PMT温度显示会很快显示为80k（约一分钟内）。

待冷却30分钟后方可打开PMT 高压电源。

Fig.2.3开启电源后，再点击电源盒左边的上电按钮，将实际高压加到PMT上去。

开启软件，在Signal Rate窗口里在Detector选框里选择切换NIR PMT（5509）。

此时Em1显示为NIR PMT的暗噪声读数。

若其显示为200K以下即可进行测试。

C、对于普通InGaAs探测器（300），需要在开启谱仪控制电源半小时后方可进行操作。

可在切换至该探测器后观察Em的暗噪声读数，待其数值稳定后即可进行操作。

Fig.2.4D、对于中红探测器InSb或其他使用液氮冷却的探测器，需要在罐中加入液氮冷却，待冷却后，观察Signal Rate窗口里该探测器对应的暗噪声读数稳定后即可进行操作。

Fig.2.5E、灯源开启。

根据需要打开相应的光源。

2、稳态实验A 、发射光谱实验 常温下样品测试：对于液体样品，将样品装入比色皿后放置于样品室内的样品架上。

对于固体样品须将样品置于固体样品架上。

在Signal Rate 窗口里设置好相关的激发波长。

Fig.2.6若已知峰位，可在Em wavelength 栏里设置相应的发射波长。

在⊿λ栏里（先设定为0.1左右数值）。

在Source 栏里选择灯源（稳态情况下需要选择Xe lamp 若使用激光器则需要将Source 打到其他灯源：nf 或μf ，在如下图的位置将激光导入。

将衰减片设为衰减最强位置）Fig.2.7在Detector 里选择需要的探测器。

可见一般为R928，近红一般为5509或InGaAs ，中红约为InSb 或其他。

盖上顶盖。

适当调整Ex 和Em 的⊿λ的数值使Em 内的显示数值变大：若可见PMT 需要使其值增大到20K 左右（其噪音值为＜50CPS ），不能大于1M （1，000，000）CPS ；若为NIR PMT 需要在其噪音值（＜200K ）的基础上增加，但不能超过1M CPS ； 若为InGaAs 或其他探测器，调整使其值适当增加到为原来噪音值1倍以上。

衰减片入射口要注意的是：对于固体样品，需要用样品室外面的旋钮对样品进行调整。

一般应调到最大值。

图中红圈内的旋钮。

Fig.2.8点击File/New Spectral Measurement或工具栏上的Spectral Measurement快捷键，进入Emission Scan窗口，Fig.2.9Emission scan对话框若是T型结构，在Measurement Mode里选T，若选择L1，则选用发射通道1，若选择L2则是选用发射通道2。

若选择T则发射通道1、2相继使用。

在T型结构时，发射通道1和2之间可设置相对的偏移。

Fig.2.10上图黄框内表示为T型，表示有两路发射单色仪。

其中红色虚线框表示为L1发射单色仪通道，蓝色虚线框为L2发射单色仪通道。

在General选项里可选择在测量时使用校正。

可选：Ex Correction V alue: 选中则进行单色仪激发校正。

Em1 Correction File Data: 选中则进行单色仪及探测器光谱校正。

光谱仪内所用的标准450W氙灯是非常稳定的，因此如果发射扫描需要校正，只需要在Em1 Correction File Data框内选中，选中emission correction后，软件会自动根据获得的数据自动选择校正数据。

在Excitation 选框内（Fig2.11），单色仪波长，狭缝带宽，光源和偏振片的值都在Signal Rate 窗口里设置显示。

如果需要，可以选择单色仪波长，灯源和偏振片，并且可进一步更改。

在Emission 选框内（Fig2.12），狭缝带宽，探测器和偏振片在Signal Rate窗口里设置。

如果需要，可以选择单色仪波长，灯源和偏振片，并且可进一步更改。

在Emission Scan Parameters选框内（Fig2.13），可以设置波长范围（Scan from/to），扫描步数（step），在每个波长的积分时间（Dwell Time），以及扫描叠加次数（Number of Scans）。

点中Start之后，所有设置的值将被检查是否在硬件的合法范围内。

任何非法值会被提示，扫描不能进行。

Fig.2.11Emission Scan对话框，Excitation选项Fig.2.12Emission Scan对话框，Emission选项Fig.2.13T型结构和样品架选项下的Emission Scan对话框Fig.2.14Emission Scan，T型模式下的Emission 2选项B、激发光谱实验激发光谱的设置与发射光谱类似。

一般是在发射光谱做完后对样品进行进一步的测试，则需要做激发光谱。

点击File/New Spectral measurement/Excitation进入激发扫描窗口(Fig.2.15).Fig.2.15在主对话框内可选择校正数据。

校正选项有：在Excitation 选框里（Fig.2.16）单色仪的波长，狭缝带宽，灯源和偏振片可在Signal Rate 窗口里设置。

如果需要，可以选择单色仪波长，灯源和偏振片，并且可进一步更改。

Fig.2.16Excitation Scan 对话框，Excitation选项在Emission选项里（Fig.2.17）单色仪的波长，狭缝带宽，灯源和偏振片可在Signal Rate 窗口里设置。

如果需要，可以选择单色仪波长，灯源和偏振片，并且可进一步更改。

Fig.2.17Excitation Scan 对话框，Emission选项在Emission Scan Parameters选框内（Fig），可以设置波长范围（Scan from/to），扫描步数（step），在每个波长的积分时间（Dwell Time），以及扫描叠加次数（Number of Scans）。

点中Start之后，所有设置的值将被检查是否在硬件的合法范围内。

任何非法值会被提示，扫描不能进行。

要注意的是：a、在做激发和发射谱的时候需要在发射单色仪一侧放置一高通滤光片来消除有激发光带来的二级谱影响，如图所示。

具体放置型号为大于激发光小于发射波长的滤光片。

Fig.2.18b、光谱校准。

在做激发或发射谱的时候，由于仪器自身对不同波长的光有不同的相应。

因此在出厂安装前就对其进行标准灯的调试，并将校准数据存入电脑中。

对于发射光谱，不同的探测器有不同的校准曲线，以可见PMT为例，在450nm处有明显的凹陷，因此校准曲线是非常必要的。

Fig.2.19如图为咔唑的光谱以及发射单色仪配套928-P的PMT对应的校准数据。

划线为原始咔唑谱线，蓝色点线为仪器校准数据，红色点线为原始谱线校准后的实际谱线。

可发现经校准后的谱线没有凹陷，符合真实值。

C、同步谱同步扫描时，激发和发射单色仪以固定的偏移量进行扫描。

这一扫描可以用来分离和鉴别混合物中的荧光。

对于低浓度物体，每种分子在同步光谱里有特征峰位。

点击File/New Spectral measurement/Synchronous Scan，即可进入如图Fig.2.20对话框。

可在Signal Rate 窗口进行参数设置，并可在此扫描窗口内进一步进行设置。

Fig.2.20 Synchronous Scan Excitation 选项在Emission选项里，可以设置激发发射波长之间的偏差。

若能设为接近斯托克斯位移的值则可得到较好的同步谱。

在Excitation Scan Parameters选框内，可以设置波长范围（Scan from/to），扫描步数（step），在每个波长的积分时间（Dwell Time），以及扫描叠加次数（Number of Scans）。

点中Start之后，所有设置的值将被检查是否在硬件的合法范围内。

任何非法值会被提示，扫描不能进行。

D、MapF900软件可以将多组发射谱进行采集处理，一般软件可以使用的有发射Map Emission Map，同步Map Synchronous Map。

Emission Map如图为相应的对话窗口。

Fig.2.22在Emission Map Parameters里Ex Scan from为选取的激发波长范围，在step里设置激发波长选取的间隔。

Em Scan from为选取的发射波长范围，在step里设置发射波长选取的间隔。

Dwell Time 为积分时间Number of Scans 为多次累加次数。

Synchronous MapFig.2.23Synchronous Map ParametersEx Scan from 为激发波长选取的范围，以step 设置其相应的增加的间隔 Em Offset from 为发射波长起始点与激发波长的偏离值。