结核分枝杆菌检测及相关内容
结核分枝杆菌、厌氧菌及其它微生物的检测
最终鉴定需要进行生化反应及终末代谢产物等检 查。
生化试验主要包括多种糖类发酵试验、吲哚试验 硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂 酶试验、明胶液化试验、硫化氢试验等——厌氧 API条。
目前用于厌氧菌快速鉴定还有自动微生物鉴定系 统等。
实验内容
1、记录抗酸染色步骤。 2、油镜下观察抗酸杆菌涂片，并记
厌氧菌的分离与鉴定
（三）标本接种
标本接种3个血琼脂平板，分别置于有氧、 无氧和含5-10%CO2的环境中培养。若只 要求检测厌氧菌，只需接种1个厌氧血琼 脂平板。
厌氧菌的分离与鉴定
（四）耐氧试验
当厌氧血平板上有细菌生长时，为了确 定是否为厌氧菌，必须做耐氧试验。挑 取菌落分别转种2块需氧血琼脂平板和1 块厌氧血琼脂平板，然后将平板分别放 置在需氧、厌氧和CO2环境中培养。
荧光染色结果报告
—：观察70个视野未发现抗酸杆菌； ±：70个视野内发现1-2条抗酸杆菌； 1+：50个视野内发现2-18条抗酸杆菌； 2+：10个视野内发现4-36条抗酸杆菌； 3+：每个视野内发现4-36条抗酸杆菌； 4+：每个视野内发现36条以上抗酸杆菌。
厌氧菌的分离与鉴定
厌氧菌标本的采集 涂片与染色 标本接种 耐氧试验 鉴定试验
干后油镜下观察结果。
抗酸染色结果观察
油镜下观察涂片，在淡蓝色背景下可见染成红 色细长或分枝状杆菌，此为抗酸染色阳性细菌 。
抗酸染色结果报告
—：观察300个视野未发现抗酸杆菌； ±：300个视野内发现1-2条抗酸杆菌； 1+：100个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 2+：10个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 3+：每个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 4+：每个视野内发现9条以上抗酸杆菌。
结核检验项目
结核检验项目结核病是一种由结核分枝杆菌引起的感染性疾病，其传播途径主要是通过空气中的飞沫传播。
为了及早发现和治疗结核病，医学界开展了多种结核检验项目。
本文将介绍几种常见的结核检验项目，以及其作用和操作步骤。
一、结核菌素皮肤试验结核菌素皮肤试验是诊断结核病最常用的方法之一。
这项检验通过注射结核菌素溶液到皮下，观察注射部位的反应情况来判断是否感染结核分枝杆菌。
注射后48-72小时，如果注射点周围形成红斑和硬结，直径大于5毫米，则说明感染了结核分枝杆菌。
二、结核病原学检验结核病原学检验是通过检测痰液、组织活检等样本中的结核分枝杆菌，来确定结核病的诊断和治疗方案。
常用的方法有涂片法、培养法和PCR法。
涂片法是将样本涂抹在玻璃片上，经染色后观察结核分枝杆菌的形态。
培养法是将样本放入培养基中培养，待菌落形成后进行进一步鉴定。
PCR法是通过扩增结核分枝杆菌DNA的特定片段来检测其存在。
三、结核抗体检测结核抗体检测是通过检测人体内特定的抗体来判断是否感染了结核分枝杆菌。
这种方法可以辅助结核病的诊断和监测治疗效果。
目前常用的结核抗体检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光免疫分析法（FIA）。
这些方法通过检测血液中的抗体水平来判断感染情况。
四、结核药物敏感性检测结核药物敏感性检测是为了确定结核病患者对抗结核药物的敏感性，从而选择合适的药物治疗方案。
常用的方法有比例法和荧光法。
比例法是将结核分枝杆菌培养物与不同浓度的药物一起培养，观察菌落生长情况来判断药敏性。
荧光法是通过检测结核分枝杆菌培养物中的荧光信号来判断抗药性。
结核检验项目的开展，能够帮助医生及时发现和治疗结核病，减少疾病的传播。
通过结核菌素皮肤试验、结核病原学检验、结核抗体检测和结核药物敏感性检测等项目的综合应用，可以提高结核病的诊断准确性和治疗效果，为控制结核病的蔓延起到重要作用。
希望通过这些结核检验项目的研究和应用，能够更好地保护人们的健康，并减少结核病的发病率。
结核分枝杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解结核分枝杆菌的生物学特性及致病机理；2. 掌握结核分枝杆菌的培养、分离、鉴定及检测方法；3. 增强实验室操作技能，提高对结核病的防控能力。
二、实验原理结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种革兰氏阳性细菌，是引起结核病的病原体。
本实验通过培养、分离、鉴定及检测结核分枝杆菌，了解其生物学特性及致病机理。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）结核分枝杆菌菌种；（2）牛肉浸液；（3）鸡蛋；（4）石炭酸复红染液；（5）无菌生理盐水；（6）无菌试管；（7）酒精灯；（8）高压蒸汽灭菌器；（9）显微镜；（10）生物安全柜。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）电热恒温水浴锅；（3）无菌操作台；（4）超净工作台；（5）显微镜。
四、实验方法与步骤1. 菌种复苏（1）将冷冻保存的结核分枝杆菌菌种复苏于牛肉浸液中，37℃恒温培养24小时；（2）观察菌落生长情况，记录结果。
2. 分离纯化（1）将复苏后的菌液涂布于牛肉浸液琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（2）挑取单菌落进行纯化，重复涂布、培养，直至获得纯化菌落。
3. 鉴定（1）挑取纯化菌落，用无菌生理盐水洗涤，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于石炭酸复红染液中，37℃恒温染色30分钟；（3）用无菌生理盐水冲洗，观察菌体形态及染色特性；（4）挑取染色阳性菌落，进行生化试验，如氧化酶试验、触酶试验等，以鉴定结核分枝杆菌。
4. 检测（1）挑取纯化菌落，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于含有药物的琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（3）观察药物对菌落的抑制作用，判断药物对结核分枝杆菌的敏感性。
五、实验结果与分析1. 菌种复苏：复苏后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
2. 分离纯化：纯化后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
3. 鉴定：挑取染色阳性菌落，进行生化试验，结果显示氧化酶试验、触酶试验均为阳性，符合结核分枝杆菌的生物学特性。
结核分枝杆菌镜检执行标准
结核分枝杆菌镜检执行标准背景：结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，世界各国都面临着结核病的威胁。
结核分枝杆菌的镜检是结核病的常用检测方法之一，对于早期诊断和治疗监测具有重要意义。
以下是关于结核分枝杆菌镜检的执行标准。
1. 目的本标准旨在规范结核分枝杆菌镜检的操作流程，保证检测结果的准确性和可靠性，提高结核病的早期诊断率，并为治疗和预防提供依据。
2. 材料与仪器2.1 高质量显微镜及放大镜。
2.2 结核分枝杆菌涂片，可通过刮取痰液等方式制备。
2.3 阳性和阴性对照材料，用于质控。
3. 操作流程3.1 准备工作3.1.1 根据个人卫生要求，佩戴洁净外科口罩、手套和实验服。
3.1.2 准备所需材料和仪器。
3.1.3 对显微镜进行预检和校正并清洁。
3.2 样本处理3.2.1 从痰液中取适量样本，将其涂布于玻璃载玻片上，并晾干。
3.2.2 经过染色和脱色处理，使结核分枝杆菌显现出红色的链状或弯曲形态。
3.2.3 加盖干净的盖玻片。
3.3 镜检操作3.3.1 将涂片放在显微镜台上。
3.3.2 使用低倍镜进行初步扫描，找到适当的漏光区域。
3.3.3 切换到高倍镜，检查漏光区域的细胞形态及聚集情况。
3.3.4 在偏光下检查结核分枝杆菌的阳性特征。
包括：红色、链状或弯曲形态、长度及宽度相对较长等。
3.3.5 对疑似结核分枝杆菌进行进一步确认，如需要，可使用特殊染色技术或其他特异性检测方法。
3.4 结果判读3.4.1 对每个涂片进行镜检，详细记录结果。
3.4.2 根据阳性和阴性对照材料进行质控。
3.4.3 结果判读包括：阴性（未发现结核分枝杆菌）、阳性（发现结核分枝杆菌）及鉴定结核分枝杆菌数量。
4. 质量控制4.1 定期对实验人员进行技术培训和考核。
4.2 定期校准显微镜并保持其清洁和良好状态。
4.3 定期对阳性和阴性对照材料进行质控。
5. 报告与记录5.1 根据检测结果生成报告，并进行传达和归档。
5.2 记录检测样本的信息和结果。
分枝杆菌属及检验考点总结
分枝杆菌属及检验考点总结一、结核分枝杆菌引起人和动物结核病的病原菌。
目前已知在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆菌。
（一）生物学特性1.形态与染色G+，细长或略带弯曲的杆菌，在培养基中可呈球状或丝状，陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状。
抗酸菌。
既往在组织中曾发现革兰阳性的非抗酸颗粒，接种动物可产生典型的结核病变，后被称为Much颗粒。
2.培养特性◆专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%～10%C02环境中可刺激其生长。
需适当的湿度。
本菌生长缓慢，最快的分裂速度为18h一代。
◆固体培养基：2～6周才能长出菌落，呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄色，表面呈皱纹状，形似菜花。
◆液体培养基中生长较快，多为表面生长，形成菌膜，且干燥易碎而沉于管底。
有毒力菌株在液体培养基中可呈索状生长，无毒株则无此现象。
◆营养要求较高，必须在血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能生长。
3.生化反应◆不发酵糖类，能产生过氧化氢酶，耐热触酶试验、聚山梨酯-80水解试验和耐热磷酸酶试验均为阴性，脲酶试验和中性红试验均为阳性。
◆人型结核分枝杆菌：烟酸试验、硝酸盐还原和烟酰胺酶试验均为阳性；牛型结核分枝杆菌均阴性。
4.抵抗力：对酒精敏感。
5.变异性：形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性等变异。
毒力变异：卡介苗（BCG）——将有毒的牛型结核分枝杆菌培养。
于含有甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年传种230代，获得减毒菌株，再接种动物，不能致病而使其获得免疫力。
用于预防结核病。
（二）临床意义1.致病性◆不产生内毒素和外毒素，也无荚膜和侵袭性酶。
◆主要致病物质：脂质。
索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）、磷脂（形成结核结节）、硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）、蜡质D（引起迟发性过敏反应）。
◆主要通过呼吸道、消化道和受损伤的皮肤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起的肺结核最多见。
◆肺外感染可发生在脑、肾、肠及腹膜。
结核病的分子检测
• 可自动孵育、自动检测、 自动报告阳性或阴性结果
• 培养周期42天，MGIT系 统平均报阳时间4-11天
比固体培养方法更为敏感－提高10%的阳性检出率 可进行后续的菌型鉴定和药敏实验 相较固体培养更短的报告时间： 培养：10天 vs 28-42天 药敏：11天 vs 28天 缺陷：液体培养污染率更高。
自动染片机和显微扫描仪提高 工作效率和结果的准确性
常用培养基：罗氏培养基，37℃培养 培养周期：56天 结果观察： 培养第3天、第7天各观察1次，以后每周观 察一次。发现有菌生长，立刻进行抗酸染色 菌落特征：典型菌落为干燥、坚硬、表面呈 颗粒状，乳酪色或淡黄色，形似菜花样。
•准确，灵敏度略高于涂片法； •可以鉴别死菌与活菌； 优点 •可进一步进行菌种鉴定和药敏试验 •历史悠久，使用广泛（１９００年从 •Ｌｏｗｅｎｓｔｅｉｎ鸡蛋培养基开始使用）
临床问题及需求
临床问题
结核病疫情严重
结核病疫情严重，中国的结核病疫情全球 位列第二位，仅次于印度。
结核病的现有诊断水平低下
传统的痰涂片抗酸染色阳性率仅16%，痰 结核分枝杆菌培养阳性率30%-40%，但是 耗时6-8周，时间太长！
新型的诊断工具缺乏 分子生物学诊断技术比如普通DNA、RNA分 子检测技术已经应用于临床，但存在污染， 联合现有的DNA/RNA诊断技术快速诊断阳 性率仅40%，且无法行耐药检测。 17
上海市结核病分级诊疗文件
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第一类：结核杆菌种特异性的分子检测 • 实时荧光定量PCR检测DNA（IS6110、HSP65、rpoB等） • 半巢式全自动实时荧光定量PCR检测（Xpert MTB/RIF） • 环介导等温扩增法(LAMP） • 实时荧光核酸恒温扩增检测技术 • 交叉引物扩增技术（CPA） • 线性探针技术
几种常见的结核分枝杆菌快速检测方法
肺结核属于肺部慢性传染疾病，临床发病率高，该病的主要致病菌为结核分枝杆菌，病程相对较长，会向全身多个脏器累及。
菌阴肺结核指的是通过一次结核杆菌培养以及三次痰涂片检查，结果均显示为阴性的肺结核患者，具有较低的传染性。
大多数患者不了解菌阴肺结核的相关性知识，如果没有采取及时有效的诊断、治疗，患者的病情就会延误，继而转变为阳性，对患者的预后造成不利影响。
目前，临床中对于菌阴肺结核的特异性诊断措施相对缺乏，最常用的方法就是痰或呼吸道采集标本中结核分枝杆菌的检验。
近年来，结核病的发病率及死亡率呈现逐年上升的趋势。
筛选出一种能有效确诊早期结核病的检验方法十分重要。
目前临床上应用于辅助结核病诊断的检验方法以结核分枝杆菌培养和抗酸染色涂片为主，其中培养法作为结核疾病诊断的金标准具有准确性高、特异性高的优势。
结核分枝杆菌痰的分离培养，消耗时间较长，如果利用固体改良罗氏培养基进行培养，一般会需要至少20d，最长可需要60d，如果使用先进的全自动分枝杆菌进行检测，至少需要7d，至多需要20d。
实验室一般会通过痰涂片法进行检测，该方法的操作相对简单，价格较低，但是，操作费时，在基层痰检实验室涂片量过大的时候，一天内无法得到实验结果，这种现象无法满足目前的结核病防治工作。
近些年来，随着染色技术的逐渐先进，荧光染色技术作为新型的实验手段，已经在医学科学领域中广泛应用。
目前，涂片染色法已经成为无菌体液的主要检查方法，但是，通过传统制片以及染色法的检出率相对较低，误诊率以及漏诊率较高。
主要是因为染色时制片以及标本固定环节容易出现误差，而细胞沉淀仪法、改良的抗酸染色法、萋-尼氏抗酸染色法、金胺O荧光染色法、PCR等技术的应用越来越多。
传统方法：获取痰标本后，排除口水痰，然后纳入研究范围，确认纳入的当天，需要在每份痰标本相同位置，取两份，制成痰涂片。
离心处理标本，再在洁净的玻片上涂抹沉渣，涂完一层之后，使其自然干燥，再次涂抹，形成厚涂片，先使用萋尼抗酸染色法进行染色，随后使用石炭酸复红溶液初染，再使用盐酸酒精脱色，然后用美兰复染，寻找红色区域，待涂片干燥后置于显微镜镜检，于蓝色背景中寻找红色的杆状、分枝状细菌。
分枝杆菌检测方法总结
分枝杆菌检测方法总结分枝杆菌检测方法主要有以下几种：1. 痰涂片：这是最常用的方法，优点是快速、低廉、操作简便，但无法区分死活菌，尤其是无法区分结核分枝杆菌（MTB）和非结核分枝杆菌（NTM），而且受制于痰液中分枝杆菌数量，敏感性较低，漏检率很高。
2. 结核培养：与痰涂片相比，培养法灵敏度增加了不少，结核培养阳性是诊断抗酸杆菌的金标准，但缺点在于培养时间周期过长，一般需要8周左右时间，这样很耽误医生用药和患者及时治疗。
3. 结核杆菌IgG抗体检测：感染结核分枝杆菌后，体内可产生特异性抗体。
将结核分枝杆菌抗原包被在固相载体上，与待测血清反应，血清中相应的抗体可结合于其上，再以胶体金（或酶）标记，显示反应，可检出血清中结核分枝杆菌抗体。
结核杆菌IgG抗体检测特异性较好，对于排除结核阳性有利，但无法确诊活动性结核。
4. Xpert MTB/RIF：通过检测MTB基因组中的rpoB基因及其突变情况，实现MTB核酸和利福平耐药检测的全自动实时荧光定量核酸扩增技术。
具有以下优势：特异性好，能准确区分MTB和NTM；灵敏度高，检测快速，仅需要两个小时就完成检查了；适用于各种标本，痰液、肺泡灌洗液、肺组织、脑脊液、淋巴结、关节液以及尿液等均可用于检测；同时可以检测利福平耐药，检测对一线抗结核药物利福平的耐药情况，敏感性特异性极高，可及时为临床用药提供有效参考。
5. IGRA：γ-干扰素释放试验（IGRA）是检测结核分枝杆菌（MTB）特异性抗原刺激T细胞产生的γ-干扰素（IFN-γ），以判断是否存在MTB感染。
IGRA适应证主要包括结核潜伏感染（LTBI）的诊断和活动性结核（ATB）的辅助诊断。
与结核菌素皮肤试验（TST）相比具有明显优势：特异度高，不受卡介苗接种及大多数非结核分枝杆菌（NTM）的干扰；使用单一阈值作为阳性判断标准；作为体外诊断方法，更适用于疫情检测和流行病学调查。
IGRA是世界卫生组织（WHO）推荐的用于诊断MTB感染的体外免疫学方法。
结核分枝杆菌的耐药性及检测方法
结核分枝杆菌的耐药性及检测方法结核病是一种由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引起的慢性传染病，主要累及肺部，但也可侵犯其他器官。
然而，近年来出现了结核分枝杆菌对抗生素的耐药性问题，给结核病的防治带来了巨大挑战。
本文将就结核分枝杆菌的耐药性机制以及常用的检测方法进行论述。
一、耐药性机制1.多重耐药（MDR）多重耐药是指结核分枝杆菌对两种最主要的抗结核药物——异烟肼和利福平同时产生耐药现象。
这种耐药形式使得传统治疗手段无法有效控制感染，并且增加了传播风险。
2.延迟耐药（XDR）延迟耐药是在MDR基础上，又产生对氟喹诺酮类等二线抗结核药物的耐药性。
这使得治疗选择更加有限，且通常需要使用更昂贵和毒副作用更大的抗结核药物。
3.全耐药（TDR）全耐药是指对所有一线和二线抗结核药物都产生耐药现象，这种情况下仅能依靠其他的药物才能进行治疗。
然而，这些替代治疗方案费用昂贵且可行性有限。
二、检测方法1.传统的抗生素敏感性测试传统的抗生素敏感性试验使用培养分枝杆菌，并将其接种于含有抗生素的琼脂平板上。
通过观察细菌在不同浓度抗生素下的生长情况来判断其对该抗生素是否具有耐药性。
尽管这种方法简单易行，但其确诊时间较长，且容易出现误判。
2.分子检测方法随着分子生物学技术的进步，利用PCR技术可以更快速地检测结核分枝杆菌的耐药基因突变。
这种方法通过检测与耐药性相关基因序列的存在与否来确定细菌对特定抗生素是否具有耐药性。
由于PCR技术高灵敏度和高特异性，它已成为常用的结核分枝杆菌耐药性检测方法之一。
3.流式细胞术流式细胞术利用荧光标记的结核分枝杆菌单个细胞对特定抗生素的反应进行测定。
通过测量细胞内荧光信号的变化来判断其对抗生素是否产生了耐药性。
这种方法具有高通量和快速的优势，但需要对样本进行前期处理以获得单个菌落。
4.质谱法质谱法利用MALDI-TOF质谱仪检测结核菌代谢产物图谱与数据库匹配，从而快速确定结核分枝杆菌的耐药类型。
结核抗体三项的标准
结核三项指标一般是指结核抗体检测、结核分枝杆菌培养、结核菌素试验。
1、结核抗体检测
结核抗体检测是指通过采取受试者的静脉血，检测体内是否存在结核抗体，以此判断是否感染结核分枝杆菌。
如果检测结果为阴性，提示未感染结核分枝杆菌，如果检测结果为阳性，提示感染结核分枝杆菌。
2、结核分枝杆菌培养
结核分枝杆菌培养是指将分离出的结核分枝杆菌进行培养，从而判断结核分枝杆菌的生长情况，对于结核病的诊断具有较高的价值。
3、结核菌素试验
结核菌素试验是指通过皮内注射结核菌素，并根据注射部位的皮肤状况，来判断是否感染结核分枝杆菌。
如果确诊感染结核分枝杆菌，建议及时到医院就诊，积极配合医生进行针对性治疗。
平时需要注意加强营养，适当进食富含蛋白质的食物，如牛奶、鸡蛋等，同时还需要注意保持居住环境的清洁卫生。
结核分枝杆菌的核酸检测
结核分枝杆菌的核酸检测结核病是一种由结核分枝杆菌引起的严重传染病，对人类健康构成了重大威胁。
准确、快速地检测结核分枝杆菌对于结核病的诊断、治疗和防控至关重要。
在众多检测方法中，核酸检测技术凭借其高特异性和敏感性，成为了结核病诊断的重要手段。
一、什么是结核分枝杆菌核酸检测结核分枝杆菌核酸检测是一种通过检测样本中结核分枝杆菌的核酸（DNA 或 RNA）来确定是否存在感染的方法。
核酸是生物体遗传信息的携带者，每种生物都有其独特的核酸序列。
结核分枝杆菌也不例外，通过检测其特有的核酸片段，可以准确地判断样本中是否有这种病原菌的存在。
二、核酸检测的原理常见的结核分枝杆菌核酸检测方法包括聚合酶链反应（PCR）、荧光定量 PCR、环介导等温扩增技术（LAMP）等。
以 PCR 为例，其基本原理是先从样本中提取核酸，然后利用特定的引物（一小段与目标核酸序列互补的 DNA 片段），在 DNA 聚合酶的作用下，经过多次循环的变性、退火和延伸过程，使目标核酸序列得到大量扩增。
扩增后的产物可以通过琼脂糖凝胶电泳、荧光检测等方法进行检测和分析。
荧光定量 PCR 则是在 PCR 反应体系中加入荧光染料或荧光标记的探针，随着 PCR 反应的进行，荧光信号不断累积，通过实时监测荧光信号的变化，可以实现对核酸的定量检测。
LAMP 技术则是利用一种特殊的酶和引物设计，在恒温条件下就能快速扩增目标核酸，具有操作简便、快速的优点。
三、检测样本的类型结核分枝杆菌核酸检测的样本类型多样，常见的有痰液、支气管肺泡灌洗液、胸水、脑脊液、血液等。
痰液是最常用的样本之一，对于肺结核患者，痰液中往往含有较多的结核分枝杆菌。
但对于一些不排痰或排痰困难的患者，如儿童、肺外结核患者，就需要采集其他类型的样本。
支气管肺泡灌洗液对于肺部病变部位的检测具有较高的准确性。
胸水和脑脊液则常用于结核性胸膜炎和结核性脑膜炎的诊断。
血液样本常用于检测潜伏性结核感染。
四、核酸检测的优势1、高特异性：能够准确识别结核分枝杆菌特有的核酸序列，减少误判。
结核分枝杆菌的微生物学检查程序 -回复
结核分枝杆菌的微生物学检查程序-回复结核分枝杆菌是一种引起结核病的病原菌，它具有潜伏感染和活动性感染两种状态。
为了准确诊断结核病，需要进行微生物学检查。
以下将详细介绍结核分枝杆菌的微生物学检查程序。
第一步：标本采集结核分枝杆菌的标本可以采集自患者的呼吸道、淋巴结、组织等部位。
常见的标本包括痰、胸腔积液、脑脊液等。
标本采集应严格遵循无菌操作原则，避免污染和细菌的死亡。
第二步：标本处理采集到的标本需要进行适当的处理，以提高分枝杆菌的检出率。
对于痰标本，应先进行离心，将上清液（上清液中含有较高浓度的分枝杆菌）分装入多个收集器中。
对于其他标本，如胸腔积液、脑脊液等，可以进行直接涂片或离心浓缩处理。
第三步：分枝杆菌培养分枝杆菌培养是诊断结核病的关键步骤。
常用的培养基有Lowenstein-Jensen（LJ）固体培养基、麦康奈尔（Middlebrook）液体培养基等。
将经过标本处理的标本接种到培养基上，并在适宜的温度（通常为35-37摄氏度）下培养2-8周。
培养期间需要定期观察菌落的形态，并进行常规的结核分枝杆菌鉴定。
第四步：分枝杆菌鉴定通过观察分枝杆菌的形态特征，如形状、颜色等，可以初步鉴定分枝杆菌。
进一步的鉴定需要进行生化试验，如尼氏染色、热酸洗脱法、硝酸盐还原试验等。
这些试验可以确定菌株是否为结核分枝杆菌。
第五步：药敏试验药敏试验用于检测结核分枝杆菌对抗结核药物的敏感性。
常用的药敏试验包括比值法（MIC测定）、比例法、临界浓度法等。
通过药敏试验可以确定分枝杆菌对抗结核药物的敏感性，以指导临床治疗。
第六步：核酸检测核酸检测是近年来发展起来的一种快速、准确的检测方法。
常用的核酸检测技术有PCR（聚合酶链反应）、LAMP（环介导等温扩增法）等。
通过检测结核分枝杆菌特定的基因序列，可以快速准确地诊断结核病。
综上所述，结核分枝杆菌的微生物学检查程序包括标本采集、标本处理、分枝杆菌培养、分枝杆菌鉴定、药敏试验和核酸检测。
结核分枝杆菌完整鉴定流程
结核分枝杆菌完整鉴定流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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结核分枝杆菌分子生物学检测技术介绍
2
交叉引物设计
5’
置换引物
3’ 5’
交叉引物 1
交叉引物 2
5’ 3’
置换引物 5’
BST DNA 聚合酶 具有链置换功能
全封闭式核酸扩增产物快速检测装置
免疫层析显色法技术：核酸检测试纸条包被上特异性的核酸纳米级胶体金颗粒和特 别标记的核酸探针，使扩增后的检测产物和胶体金颗粒结合，在试纸条的检测线 （T线）上显色来检测DNA扩增产物；如果无目标DNA，特异性探针则将无法把扩 增产物与标记物连接，结果无显色。
广州迪澳LAMP
三种LAMP检测试剂盒比较
荣研
华峰
迪澳
样品前处理及 简易装置进行痰标本 手工痰标本液化处理，手工痰标本液化处理，
核酸提取
前处理及核酸提取 煮沸法提取核酸
煮沸法提取核酸
反应温度/时间
67℃/40min
65℃/60min
63℃/30min
操作流程
装置提取核酸后直接 加入到反应管进行扩 增反应。
分子生物学检测技术主要分类
PCR技术：通过控制温度的变化来实现DNA扩增，包括模板变性 （95℃）、 引物杂交（58℃）和DNA合成（72℃） 。
恒温扩增检测技术： DNA在60 ～ 65℃处于动态平衡状态，任何一个引物 向双链DNA的互补部位进行碱基配对延伸时，另一条链就会解离，变成单 链。
闭扩增产物。
产物。
产物。
是
否
是
交叉引物恒温扩增检测（CPA）
模板序列和交叉引物设计
生物素标记探针
5’AGGGACATAACAATGGTATTTGTTGGGGTAATCAACTGTTTGTTACTGTGGTAGATACCACACGCAGTACCAACATGACATTATGTGCATCCGTAACTACATCTTCCACATACACCAATTCTGATTATAAAGAGTACATGCGTCATGTGGAAGAGTATG3’
聚合酶链反应检测结核分枝杆菌
聚合酶链反应检测结核分枝杆菌结核分枝杆菌可以导致全身性疾病，特别是在发展中国家，其发病率较高，危害性极大。
近几年结核杆菌的变异性较大，对抗结核药物的耐药性增加，从而使结核病的发病大幅度增高。
虽然传统的涂片抗酸染色、细菌培养以及胸片检查对大部分结核能作出正确的诊断，但对某些患者亦可造成误诊或漏诊；动物接种虽特异性较高，但因时间较长，不能满足临床快速诊断的需要。
近几年也出现了几种快速诊断方法，但也存在较大的缺陷，如短期培养后抗原免疫原性分析，即用放免方法或酶联免疫吸附试验（ELISA）检测BACTEC培养瓶中被培养标本所分泌的抗原，该方法可在BACTEC瓶本身鉴定出细菌之前，结合ELISA和涂片抗酸染色有效地鉴别典型和非典型分枝杆菌，敏感性较高，但存在培养时间长，重复性尚差的缺点。
另一种是短期培养后核酸探针杂交法，即用特异性DNA探针与BACTEC瓶中培养的细菌染色体DNA杂交。
该方法能有效地防止培养的假阴性结果，但却易发生假阳性结果，加之采用的方法较为复杂和繁琐，又有涉及放射性核素操作之嫌等，因而近来已较少应用。
上面两种方法都要借助细菌培养来进行，虽然在时间上比传统培养大大缩短，但缺乏快速诊断的优势。
近几年兴起的PCR方法基本实现了快速、灵敏、准确地诊断结核（TB）的目的，并且该方法正趋于常规化地应用于临床一般实验室。
应用PCR方法检测结核杆菌的首要条件是设计一对特异性DNA引物，该引物所引导的DNA扩增序列应是结核分枝杆菌独有的，且是结核分枝杆菌的保守序列，这样才能保证检测结果的特异性。
一、标本的采集（一）痰液标本的收集1.患者清晨刷牙漱口。
2.用力咳出气管深部第一口痰于一次性干燥无菌的50ml带盖痰杯内，1小时内送检。
3.对于无痰或少痰的患者，可用45℃加温的100g/L NaCl水溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出。
4.小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集标本。
结核分枝杆菌的耐药性检测方法
结核分枝杆菌的耐药性检测方法简介：结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，全球范围内广泛存在。
然而，随着抗生素的滥用和不当使用，耐药性分枝杆菌株的出现成为一个严峻的问题。
因此，准确、快速地检测耐药性对于结核病防控至关重要。
本文将介绍几种常用的结核分枝杆菌耐药性检测方法。
传统涂布法：传统涂布法是一种经典而常用的结核分枝杆菌耐药性检测方法。
该方法需要将分离得到的结核杆菌培养在含有不同抗生素的琼脂平板上，并进行48小时以上培养。
通过观察菌落生长情况和对比试验，可以确定其耐药类型。
然而，这种方法操作复杂、时间较长且结果受到人为判断主观因素影响，已逐渐被新型技术所取代。
PCR扩增法：聚合酶链反应（PCR）扩增法是一种高效、敏感且特异性强的结核分枝杆菌耐药性检测方法。
它基于DNA的扩增原理，通过引物特异性靶向结核分枝杆菌核酸片段进行扩增，并通过特定技术判断结核杆菌是否存在耐药基因。
PCR可以在短时间内得到结果，并且可以同时检测多个抗生素的耐药性。
然而，PCR方法需要专业实验室设备和一定的操作技巧，不适合于基层医疗机构。
快速涂片法：快速涂片法是一种经济简便、结果迅速的结核分枝杆菌耐药性检测方法。
该方法利用亲水性阳离子染料对细胞壁进行着色，分析红细胞上色素的扩散情况，从而确定是否存在抗药型结核分枝杆菌。
这种方法操作简单、成本低廉且结果直观可靠。
然而，在高密度培养物中检出阳性样本可能会受到其他非结核分枝杆菌污染的影响。
气质联用仪法：气质联用仪法是一种新兴的结核分枝杆菌耐药性检测技术。
该方法基于结核杆菌产生的气体代谢产物，通过检测气相色谱和质谱的联用技术来分析结核分枝杆菌对抗生素的耐药性。
这种方法具有高效、快速、无需培养的优势，并且可以同时检测多种抗生素。
然而，由于设备昂贵且操作复杂，需要专业实验室支持。
基因测序法：基因测序法是一种准确度极高的结核分枝杆菌耐药性检测方法。
它通过对整个细菌基因组进行全序列测定，包括靶区的引物设计、DNA提取、文库构建以及高通量测序技术等步骤，可以获得详尽的耐药性信息。
结核分枝杆菌镜检执行标准(一)
结核分枝杆菌镜检执行标准(一)
结核分枝杆菌镜检执行标准
引言
•结核分枝杆菌镜检是一种常用的结核病的检测方法，能够快速、简便地检测结核分枝杆菌的存在。
•为了确保该检测方法的准确性和可靠性，制定了一系列的执行标准。
标准内容
1.标本采集标准
–根据结核病患者的症状及体征，采集合适的标本进行检测。
–标本采集应遵循无菌技术，避免污染或交叉感染。
2.标本处理标准
–获得标本后，要迅速进行处理，确保标本中的结核分枝杆菌数量不发生明显变化。
–标本的处理应遵循严格的操作规程，防止污染和误诊。
3.染色方法标准
–使用适当的染色方法对标本中的结核分枝杆菌进行染色，以便于观察和鉴定。
–染色方法应符合相关的规范，并在操作过程中保持稳定且一致。
4.显微镜检查标准
–使用显微镜对染色后的标本进行观察和检查。
–操作人员应具备一定的显微镜操作技巧和解读能力，保证结果的准确性。
5.结果判读标准
–对观察到的结核分枝杆菌进行判读，并进行相应的结果记录。
–结果判读应由专业人员进行，避免误判和误诊。
总结
•结核分枝杆菌镜检的执行标准对于准确检测结核病起着重要的作用。
•只有严格遵守执行标准，才能保证结果的准确性和可靠性，提高结核病的早期诊断率。
•各医疗机构和从业人员应加强对执行标准的学习和培训，确保标准的全面贯彻。
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（二）分离培养
2.荧光染色法（金胺O法） （1）染色剂：金胺0.01g溶于95％乙醇 10ml内，加5 ％ 石炭酸至100ml。 脱色剂：3 ％ 盐酸乙醇。 复染剂：0.5 ％ 高锰酸钾水溶液。 （2）染色步骤：痰涂片火焰固定，加染色剂， 10~15分钟水洗。脱色剂脱色3~5分钟，至无黄 色，水洗。复染剂染2分钟，水洗，干后用荧光显 微镜镜检。 （3）结果：结核分枝杆菌呈金黄色荧光。如下图。
（二）集菌涂片法
取深咳痰10ml于消毒处理过的广口瓶中，加5倍 量的无菌蒸馏水，经121℃高压蒸汽灭菌20min， 待用。 离心集菌法：取上述痰液10ml放入50ml离心管内 加蒸馏水至50ml， 3000r/min离心30min，取沉 淀物涂片。 漂浮集菌法：取上述痰液10ml放入100ml细口玻 璃容器内，加蒸馏水30ml，加入二甲苯0.3ml， 振荡10min，加蒸馏水至满，静置15min，取载 玻片盖于瓶口，静置15min，取下玻片，干后染 色。 目前我们实验室采用BaSO溶痰剂与痰检体2：1 或3：1混合均匀，静置10~20min，待其完全溶 化，离心取沉淀涂片染色。简化了操作过程。
控制结核 人人有责
3月24日是第13个“世界防治结核病日”， 今年卫生部的宣传主题是“控制结核、人 人有责”。疾病预防控制中心提出，目前 结核病仍然是严重危害人类健康的主要传 染病之一，75%的病人为中青年，每年死 亡13万人。
结核分枝杆菌检测及 相关内容
张东华
一、结核名称的由来
结核病是一种古老的疾病，也许有了人类 不久就已有了它的存在。1973年，湖南长 沙马王堆汉墓出土的2100年前的女尸身上 发现左上肺门均有结核病灶。1965年，法 国学者Sylvius根据解剖了死于所谓“消耗 病”或“痨病”人的尸体，发现肺脏及其 它器官有颗粒状的病变，根据其形态特征 称之为“结核”。因而，结核的名称就此 而被应用至今。
（三）染色方法
1.抗酸染色 第一液：碱性复红乙醇溶液 10ml 5％石炭酸溶液 90ml 第二液：浓盐酸 3ml 95 ％乙醇 97ml 第三液：美蓝乙醇饱和溶液 100 ml 10 ％KOH 0.1ml 蒸馏水 100ml 染色步骤：⑴涂片经火焰固定后加第一液约5min，水洗。⑵第二液脱 色，至涂片无红色脱出为止，水洗。⑶第三液复染约30s，水洗，自然 干燥后镜检。 结果：抗酸杆菌呈红色，背景为蓝色。 报告方式；﹙﹚未发现抗酸菌/300个油镜视野 (±)1～ 2个抗酸菌/300个油镜视野 (1+) 3～9个抗酸菌/100个油镜视野 (2+) 10～99个抗酸菌/100个油镜视野 (3+) 1～10个抗酸菌/每个油镜视野 (4+) ＞10个抗酸菌/每个油镜视野
2.尿液 留取12小时尿液，静置，倾去上清，留取沉淀部 分30ml，以3000r/min离心30min，弃上清，取沉 淀物涂片. 3.脑脊液 无菌收集脑脊液，放置24小时后，取网膜状蛋白 质涂片，或以3000r/min离心30min，取沉淀物涂 片。 4.胸腹水与尿液同。 5.胃液标本 将标本置冰箱内20分钟，取浓厚部分进行涂片。 6.病灶组织：先用组织磨碎器磨碎后，同痰标本涂 法。
PCR 技术
DNA 探针
染色
荧光染色
观察生长情况 抗酸染色 鉴定试验 耐药试验 报告群别或种别
报告分枝杆菌
报 告 群 别 或 种 别
（一）标本的收集及直接涂片法
1.痰标本 最好为清晨第一口痰，洁净水或冷开水漱口后， 用力咳嗽以获得2-3ml痰液置于标本盒内，直接涂 2.0cm×2.5cm的卵圆形痰膜，自然干燥后抗酸染 色镜检即可。涂片应使用干净无划痕的新玻片。 痰标本不能使用蜡盒，因为其可导致涂片结果假 阳性。
二、结核病
结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染 病，可以侵及很多脏器，以肺部受累形成 肺结核〔pulmonary tuberculosis〕最为常 见；其次有肠结核、淋巴结结核、泌尿系 结核、骨结核、结核性脑膜炎、全身粟粒 性结核、结核性腹膜炎等。
三、我国结核病疫情现状
据2000年全国结核病流行病学抽样调查结果显示，我国 结核病疫情现状为： （1）结核病感染率高：目前全年龄组结核菌感染率为 44.5%，全国约5.5亿人受到了结核菌感染，结核菌感染 率高于全球人口感染率为1/3的水平。 （2）结核病患病率高：全国活动性肺结核患病率为 367/10万，涂阳肺结核患病率为122/10万，菌阳肺结核 患病率为160/10万；估算全国现有活动性肺结核病人数 450万，其中涂阳肺结核病人150万，菌阳肺结核病人 200万。 （3）结核病耐药率高：肺结核病人结核菌初始耐药率为 18.6/10万, 继发耐药率为46.5/10万。按照全国菌阳肺结 核病人200万计算，全国有耐药病人55.5万。 （4）结核病死亡率高：全国结核病死亡专率为9.8/10万, 每年因结核病死亡13万人，为各种其他传染病和寄生虫 病死亡总和的2倍。
五、结核分枝杆菌检测方法
（一）涂片检查 （二）分离培养 （三）动物试验 （四）基因诊断
结核分枝杆菌检验程序
标本
涂片 动物试验 分离培养 基因诊断
直接涂片
集菌涂片 再接种豚鼠 或小白鼠 观察脏器病变涂 抗酸染色 片染色或培接种液体培养基 （Bactec 系统） 接种固体培 养基4~8周
四、肺结核的主要症状
肺结核是由结核杆菌引起的一种慢性肺部感染性疾病。 病初有轻微咳嗽或咯痰，或有四肢结节性红斑。部分病人 表现为胸痛、咯血。常见的全身症状有周身不适，精神萎 靡，易倦乏力，性情烦躁，心悸，食欲减退，体重减轻， 盗汗，不规则低热，两颧潮红，妇女月经不调。也有无明 显症状，仅在胸部X线健康检查时才被发现。在慢性病程中， 病情恶化，可有高热畏寒，紫绀气促，肺萎缩，肺气肿， 渗出性胸膜炎，胸膜增厚等。本病的病因与结核杆菌感染 因素有关 。本病主要诊断依据结合局部和全身症状。痰液 检查找到结核杆菌可确诊 。