7免疫细胞化学综合应用

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免疫细胞化学染色技术在胸腹水诊断中的应用(吉林医学定稿)

免疫细胞化学染色技术在胸腹水诊断中的应用宋东明朱安峰（长春市中心医院病理科，吉林长春，130051）【摘要】目的通过借助于抗原抗体的特异性结合，达到识别组织和细胞中某些化学成分的目的，并明确其在细胞内的定位。

方法统计2011年全年间门诊、病房已出现胸腹水症状的患者经过脱落细胞学免疫化学染色技术方法处理标本。

结果采用半定量法以确定免疫反应的强度，阳性细胞数目及确定抗原存在的部位。

结论免疫细胞化学已经成为细胞学诊断最常使用的特殊诊断手段。

【关键词】免疫细胞化学；细胞学；抗原修复技术细胞学诊断主要依赖于细胞涂片常规染色检查，取决于其形态学的基本特点。

但经常会遇到一些诊断困难病例，对于细胞工作者一个极大的挑战是间皮细胞、组织细胞与癌细胞，特别是腺癌细胞的鉴别诊断，也就是胸腹水中良性间皮细胞与转移癌的诊断问题。

此时辅助诊断方法或特殊诊断技术则十分重要。

近代研究证实，免疫细胞化学（Immunocytochemistry）已经成为最常使用的特殊诊断手段。

该方法是借助于抗原抗体的特异性结合，达到识别组织和细胞中某些化学成分的目的，并能明确其在细胞内的定位。

通常将抗体做酶标记以显示颜色，即酶标技术。

目前已有多种商品化的单克隆及多克隆抗体，可用于肿瘤来源的鉴别诊断，常常能给诊断以很大帮助。

1 材料与方法1.1细胞涂片制备本文所检查的对象系我院2011年1年间门诊、病房的出现胸腹水症状的患者，由临床医师在直视或B超、X线、CT引导下进行穿刺抽取浆膜腔积液，每人送检1-2次，经高速（1500—2000r/min）离心10分钟后，撇去上清液，收集沉渣，涂抹法每次制备3张涂片，待涂片潮干时，95%酒精固定15—30分钟，最长不超过3天，经苏木素、伊红（HE）染色，中性树胶封片后，进行光学显微镜下观察。

阅片后登记在册，阳性标本归档保存，以备复查比较。

1.2免疫化学染色技术方法1.2.1涂片：各种细胞涂片、印片、微量细胞离心涂片及细胞组织微小组织片等均要求均匀，平薄，并保证足够的细胞数。

细胞(组织)化学和免疫化学染色技术

细胞（组织）化学和免疫化学染色技术细胞化学（cytochemistry）或组织化学（histochemistry），是细胞学（cytology）或组织学与生物化学（biochemistry）相结合的一门科学。

细胞化学染色（cytochemical staining）是在血细胞的原位上研究其化学成分的性质，包括蛋白、脂类、糖类、无机盐和酶等，在保持细胞形态的基础上进行化学的定位、定性及半定量的观察，是血液病形态学诊断中的一个重要手段。

细胞免疫化学（immunocytochemistry）又称免疫细胞化学或免疫组织化学（immunohistochemistry）染色，是鉴定某些细胞或组织的病态细胞（如微小巨核细胞）和白血病的重要的辅助性检验技术。

一、涂片细胞化学和免疫化学染色技术（一）细胞化学染色1.铁染色正常骨髓中存在一定量的贮存铁，以含铁血黄素的形式贮存，多分布在巨噬细胞内，称为贮存铁。

骨髓中幼红和晚幼红细胞含有铁颗粒，为细胞内铁，含内铁的细胞称为“铁粒幼细胞”，少数成熟红细胞也含有小的铁颗粒，称为“铁粒红细胞”。

以上铁质均可用普鲁士蓝反应加以显示。

（1）原理：骨髓内含铁血黄素的铁离子和幼红细胞内的铁颗粒，在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用，生成蓝色的亚铁氰化铁沉淀（普鲁士蓝反应），定位于含铁粒的部位。

（2）试剂：铁染色液（临用时配制）：200g/L亚铁氰化钾溶液5份加浓盐酸1份混合；复染液：1g/L沙黄溶液。

（3）操作：取新鲜含骨髓小粒的骨髓涂片，于铁染色架上，滴满铁染色液；室温下染色30分钟，流水冲洗，复染液复染30秒；流水冲洗，晾干后镜检。

（4）结果判定1）细胞外铁：细胞外铁呈蓝色的颗粒状、小珠状或团块状，细胞外铁主要存在巨噬细胞胞质内，有时也见于巨噬细胞外。

“-”为涂片骨髓小粒全无蓝色反应；“+”为骨髓小粒呈浅蓝色反应或偶见少许蓝染的铁小珠；“++”为骨髓小粒有许多蓝染的铁粒、小珠和蓝色的片状或弥散性阳性物；“+++”为骨髓小粒有许多蓝染的铁粒、小珠和蓝色的密集小块或成片状；“++++”为骨髓小粒铁粒极多，密集成片。

病理检验技术模拟考试题与答案

病理检验技术模拟考试题与答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、尸体剖检完成后的处理，下面的方法不正确的是A、尸体剖检后不需对尸体做任何修复工作B、尸检人员在专用卫生间内淋浴C、认真清洗尸检台和尸检室，进行环境消毒D、尸体剖检后需对尸体做适当的修复工作E、进行器械消毒，并按照有关规定处理尸检污物正确答案：A2、疑似印戒细胞癌组织可选用下列哪种染色方法明确其黏液性质A、马休黄猩红蓝染色法B、Schiff阿尔辛蓝地衣红染色法C、过碘酸希夫染色法D、Jurgens甲基紫染色法E、刚果红染色法正确答案：B答案解析：Schiff阿尔辛蓝地衣红染色法用于手术标本及胃肠道上皮黏液内镜活检组织染色。

胃黏膜肠化生上皮和胃肠肿瘤的酸性黏多糖呈蓝色，中性黏多糖呈棕色。

3、关于苦味酸固定液的描述错误的是A、不能软化火棉胶B、穿透慢，组织收缩明显C、能沉淀一切蛋白质D、固定组织时间不宜超过24小时E、对脂肪和类脂无固定作用正确答案：A4、下列不是免疫组织化学染色中修复抗原的方法的是A、微波加热B、蛋白酶消化C、高压加热D、冷冻E、水浴加热正确答案：D5、关于荧光显微镜图像的记录方法，下列错误的是A、要结合形态学特征和荧光的颜色和亮度综合判断B、要及时摄影记录结果C、曝光速度要慢D、荧光显微镜可用CCD与计算机连接，可将图像存在计算机硬盘上E、暂时不观察时，应用挡板遮盖激发光正确答案：C答案解析：因紫外光对荧光淬灭作用大，因此曝光速度太慢，就不能将荧光图像拍摄下来。

6、下面的组织透明剂可作为骨组织石蜡切片透明剂的是A、水杨酸甲酯B、氯仿C、松油醇D、丁香油E、香柏油正确答案：A7、凝集素在免疫细胞化学中的应用，以下正确的是A、直接法是将凝集素直接与切片反应B、间接法是将生物素化的凝集素与切片反应后，再与ABC复合物结合C、糖一凝集素一糖法是用微量的凝集素与切片进行反应，然后与过氧化物酶标记的特异性糖基结合D、对照试验是将凝集素预先与相应的糖在室温孵育，再将此凝集素进行孵育，结果应为阳性E、凝集素法特异性差，但是灵敏度高正确答案：B8、欲显示各种酶的组织切片，应选择的固定液是A、AF液B、10％中性甲醛C、丙酮D、95％乙醇E、75％乙醇正确答案：C答案解析：丙酮的作用是沉淀蛋白质和糖，对组织穿透性很强，保存抗原的免疫活性较好。

免疫细胞化学染色技术在胸水、腹水诊断中的应用

的，务人员应该尽可能减少这种影响，护卵巢储备功能。医保４参考文献
目前为止，相关研究觉得ＦＨ、Ｈ、２ＳＬＥ等指标能够很好的评价患者的卵巢储备功能Ｊ。患者的卵巢功能如果出现下降的现象，那么ＦＨ和ＬＳＨ都会出现上升，并且ＦＨ比ＬＳＨ要更早一
须能识别出仍有阳性的内源性酶细胞，防止误认为阳性细胞；
多数抗原在组织细胞中的分布是不规则性的，阳性细胞的数
量不等，着色深浅不一，呈不均一性；阳性细胞的标准，ＡＰＢ显
１１细胞涂片制备：．本文所检查的对象系我院２１０１年１年间门诊、房的出现胸水、水症状的患者，病腹由临床医师在直
１００％的肿瘤细胞的染色均为Ｄ（阳性）而 “ ” 代表强，０则
助于抗原抗体的特异性结合，达到识别组织和细胞中某些化
学成分的目的，能明确其在细胞内的定位。通常将抗体做并酶标记以显示颜色，即酶标技术。目前已有多种商品化的单克隆及多克隆抗体，可用于肿瘤来源的鉴别诊断，常常能给诊
确的评估有利于在早期发现患者是否有卵巢衰竭的现象。到
正常的皮质结构。在手术之后，如果卵巢功能出现下降现象，
也有可能是卵巢血管出现变异引起的Ｊ。通过该研究结果可以发现，腹腔镜双侧卵巢肿瘤剥除术比单侧卵巢肿瘤剥除术患者在手术之后卵巢功能更易发生异常，能由于单侧卵巢可肿瘤患者另外一侧卵巢功能正常，以对ＦＨ、Ｈ、所ＳＬＥ等指标的影响不明显，而双侧卵巢肿瘤剥除术后卵巢功能受到影响，术后３个月监测ＦＨ、Ｈ指标与术前比较差异具有统计学意ＳＬ义（００）因此，Ｐ＜．５，手术对卵巢储备功能的短期影响是存在

免疫组织化学技术的应用

免疫组织化学技术的应用免疫组织化学技术概述免疫组织化学技术是一种利用免疫学原理进行生物分子检测和定位的技术。

它采用抗体与特定抗原结合的顺反应原理，在组织切片中检测和定位某一特定分子。

原理免疫组织化学技术利用抗体与特定抗原结合的顺反应原理，即对一种特定抗原有高度选择性的抗体与组织样品中的该抗原相结合产生可见的信号。

这种信号可以是产生光学、荧光或颜色改变等形式。

应用1.生物医学研究：免疫组织化学技术可以检测组织中特定蛋白质的分布和表达，是研究生物医学领域中蛋白质分子组学的基础技术之一。

2.临床诊断：免疫组织化学技术可以应用于肿瘤诊断、流行病学调查等领域。

通过检测某些肿瘤标志物、细胞表面分子和内分泌指标等，可以帮助医生进行正确诊断。

3.药物制剂：免疫组织化学技术可以帮助研究药物分布和作用机制。

例如，在研究心血管药物时，可以用抗体检测受体的表达和分布，从而了解药物作用机制和药效。

优点1.高度特异性：免疫组织化学技术可以准确地检测特定分子，避免了其他分子的干扰。

2.高灵敏度：可以检测极微量的分子，并精确定位其位置。

3.多样性：可以应用于不同分子种类的检测和定位，有很大的应用前景。

局限性1.抗体交叉反应：某些抗体可能对多种分子有交叉反应，导致误判。

2.样品制备：样品的制备和处理对结果产生影响，需要更加严格的标准化。

3.价格昂贵：用于免疫组织化学技术的抗体相对价格较高，加上试剂盒和设备的购买，成本较高。

结论免疫组织化学技术作为一种重要的实验室技术，具有广泛的应用前景。

这种技术可以在细胞和分子层面上全面解析生物体的结构和功能，是生物医学领域中不可或缺的技术之一。

免疫组织化学技术的操作步骤1.标本制备：首先需要采集组织样本，处理后制成组织切片。

2.抗体处理：挑选合适的抗体，经过处理（如荧光标记、酶标记等），制成特定的抗体试剂。

3.特定抗原检测：在组织切片上滴加特定抗体试剂，进行特定抗原的检测。

4.反应信号检测：根据抗体的标记方式，进行相应信号的检测。

免疫组织化学在兽医临床诊断的应用

免疫组织化学在兽医临床诊断的应用摘要:免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。

随着免疫组织化学技术的不断发展和成熟，该技术已经被广泛的应用在兽医临床疾病的病原体诊断上。

免疫组织化学技术不仅能够准确地检测病原体，而且也广泛应用于病原在机体组织中的定位和动态分布特点研究、新病原的发现、活体动物中病原的检测、以及对固定组织进行回顾性研究等，也早已成为现代病理学研究手段之一。

关键词：免疫组织化学技术；兽医临床诊断；组织分布；定位正文：免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用免疫学的核心抗原与抗体特异性结合的原理，用标记抗体追踪抗原，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂, 如酶、金属离子、同位素等显示一定的颜色，并借助显微镜、荧光显微镜、电镜对其颜色进行观察，以达到检测抗原物的目的一门细胞化学技术。

免疫化学技术具有特异性强、敏感性性高，定位准确的优点，因此，该技术可以应用于提高临床病理诊断的准确度。

免疫组织化学技术可以在石蜡切片、冰冻切片以及细胞制品上检测组织中广泛的病原体，从而可以分析出动物体内病原在组织中的动态分布情况，这些都使得IHC在兽医临床诊断中成为了一个重要的便捷、高效精确地检测病原体的检测及辅助诊断工具。

1对特殊病原的检测张静【1】以SPF 雏鸡为研究对象，新城疫中等毒力活疫苗，人工发病，利用免疫组织化学方法中的ABC（抗生物素－生物素－过氧化物酶复合物）法来检测。

结果在实验鸡组织切片中可见到阳性染色，背景较清晰，说明实验鸡组织中含有鸡新城疫病毒。

利用免疫组织免疫法中的ABC法成功建立了人工病例，NDV抗原分布于实验鸡组织中。

王泽、夏志平等人【2】应用抗狂犬病病毒的特异性抗体及免疫组织化学方法检测接种了狂犬病病毒SRV一9毒株感染的小鼠脑组织，并对狂犬病病毒抗原进行了组织定位分析。

免疫组织化学在肿瘤诊断和治疗中的应用

免疫组织化学在肿瘤诊断和治疗中的应用随着肿瘤的不断发展和进步，现代医学技术也得到了飞速的发展，其中免疫组织化学被广泛应用于肿瘤的诊断和治疗。

免疫组织化学是一种使用特异性抗体来检测和识别分子的技术，因为癌细胞在细胞膜、核糖体和其他细胞结构上具有特异性表达的蛋白质，因此这种技术可以确定癌细胞的特征和性质，从而为肿瘤的治疗和预防提供了可靠的依据。

一、免疫组织化学在肿瘤诊断中的应用免疫组织化学在肿瘤诊断中发挥着重要的作用，其最主要的用途是用于肿瘤病理学的诊断和分类。

通过对癌细胞表面和核内标志物的检测，可以明确一种癌症的类型和级别，从而为治疗提供依据。

例如，通过检测鳞状细胞癌中的角蛋白和基底细胞癌中的细胞角蛋白可以确定其类型，通过检测HER2蛋白质的表达可以确定其对激素治疗的敏感性。

此外，免疫组织化学也可以用于肿瘤的分期，例如检测Ki67和PCNA的表达可以判断肿瘤细胞的增殖指数，从而判断肿瘤的活跃程度和预后。

二、免疫组织化学在肿瘤治疗中的应用免疫组织化学在肿瘤治疗中也有着广泛的应用，主要是通过抗体治疗、免疫细胞治疗和癌症疫苗等方式进行。

目前最常用的是抗体治疗，即通过抗体对靶向分子的结合来抑制或杀死肿瘤细胞。

例如，通过单克隆抗体治疗HER2阳性的乳腺癌或腺癌。

此外，免疫细胞疗法也正在逐渐发展，这种疗法使用体内产生或外部培育的免疫细胞来抵抗肿瘤细胞，并且目前已经证实在某些肿瘤治疗中的有效性。

最后，癌症疫苗是一种通过刺激宿主免疫系统来杀死或抑制肿瘤细胞的免疫疗法，目前也在不断发展和完善。

三、免疫组织化学的局限性和发展免疫组织化学在肿瘤诊断和治疗中的应用虽然比较广泛，但其还存在一些局限性。

首先，抗体对特异性分子的识别和结合具有一定的局限性，可能无法覆盖细胞表面和核内所有的蛋白质和标志物。

其次，某些蛋白质的表达可能会影响不同治疗方案的效果，因此在肿瘤治疗中肿瘤标志物的选择非常重要。

最后，抗体治疗、免疫细胞治疗和癌症疫苗等免疫治疗的发展离不开高质量、高特异性抗体的发展及其特异性的验证，这需要不断的研究和发展。

第七章免疫组织化学技术【实用资料】

（immunofluorescence cytochemistry）
免疫组化
原位杂交技术
膀胱癌和癌旁组织上用ADAM12 T3 反义探针检测到阳性杂交信号(C,D)，而正义探针在癌旁的正常组织中只见到很弱或阴性信号(E,F)。D和F分别是 C和D的黑视野图像。
定量免疫组化技术
免疫组织化学技术基本流程
（protein A immunocytochemistry）（7）生物素-亲合素系统介导的免疫组织化学方法
（biotin-avidin system cytochemistry）
3．按应用方式不同分类
（1）免疫电镜组化技术（immunoelectromicroscopy cytochemistry）
固定剂选择
• 血涂片：丙酮，福尔马林（胞质蛋白，BCR） • 细胞涂片：95%乙醇、carbowax. • 冰冻切片：乙醇、丙酮、多聚甲醛 • 石蜡切片：福尔马林（需抗原修复）、氯化汞（胞浆蛋白）
PLP/PLDP（糖类、脂类）、乙醇、丙酮
固定方法
• 浸泡法 • 蒸汽法 • 注射、灌注法 • 微波固定
• 注意事项： • 自然冷却、避免蒸干、条件统一，结构改
变，适当加入螯合剂
免疫组织化学技术基本流程
一、样品的制备二、抗原抗体反应三、化学呈色反应四、免疫组织化学结果及其分析
染色策略
ABC PROCEDURE UTILIZING CATALYZED SIGNAL AMPLIFICATION (CSA)
组织细胞的固定
（Fixation）
➢ 要求：
➢ 完整性、天然性、抗原性、便于后期操作
➢ 策略：
➢ 快速脱水、阻断酶活、保持抗原性

免疫组织化学及其在病理诊断中的应用

3. 改善组织的透过性原因：当待检抗原是存在细胞内或有膜
被、而抗体是大分子的时候，抗体就很难通过细胞的质膜顺利达到接触抗原。
办法：用净化剂（即表面活性剂三硝基甲苯）TritonX－100溶解于PBS中，液体浸洗组织切片或涂片。
第二部分
免疫组化在临床中的应用
一、免疫组化临床应用的范围及意义
各1支；相应的吸嘴。磨砂玻片；空调1台；恒温箱1台； pH计1台(PHS-25型)。
免疫组化室常用设备
全自动免疫组化染色机
二、免疫酶标技术
20世纪70年代建立 80年代为发展高峰 90年代在国、内外病理科广泛应用
1.免疫酶标技术原理：
将抗原和抗体反应与酶的催化反应相结合而建立的一种免疫检测技术。
对肿瘤临床有意义的主要有： c-erbB：肿瘤恶性度高→阳性率↑ c-myc：核内瘤蛋白，高表达预示促进肿瘤生长、发展→ 易出现浸润、转移 p53：通常检测的为突变型，高表达→ 预后差。
组织脱水、浸蜡、包埋等）缓冲液及有关试剂的配制抗体的稀释内源性过氧化物酶的阻断非特异性染色的消除实验对照及结果的观察分析等。
基本过程（SP法）
1.切片脱蜡至水。 2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。 3.水洗。 4.抗原修复。 5.PBS洗3次，1分钟/次。 6.加入血清孵育10分钟。 7.摔去血清，加入一抗孵育30-60分钟。 8.PBS洗3次，每次2分钟。 9.加入二抗，孵育20分钟。
1.基本原理
维生素H（biotin，生物素）缺乏症：给动物喂养大量卵蛋白，会导致动物出现维生素H缺乏症，即蛋白质伤害。
卵蛋白（avidin）与生物素有极高的亲和力，且具有与其它示踪物质（荧光素、铁蛋白、过氧化酶等）相结合的能力。

免疫组化原理、步骤及要注意的事项.

免疫组化一，免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。

它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。

二，免疫组化技术的基本原理免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。

在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。

免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。

直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。

目前通常选用免疫酶组化间接染色法。

三，免疫组化步骤1，切片，烤片60℃，1h；2，脱蜡及复水二甲苯10min，100％乙醇5min，95％乙醇5min，90％乙醇5min，85％乙醇5min，80％乙醇5min， 75％乙醇5min，60％乙醇5min，50％乙醇5min，30％乙醇5min，自来水1min，双氧水1min；3，1份30％H2O2加10份蒸馏水，室温10min，蒸馏水洗3次，每次3min；4，微波修复将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液，微波中最大火力（98℃-100℃）加热至沸腾，冷却（约5-10min），反复两次；5，将切片自然冷却至室温，PBS洗涤3次，每次5min；6，封闭，5％BSA，室温20min，甩去多余液体；7，滴加一抗，37℃，1h，或者4℃过夜；8，PBS洗涤3次，每次3min；9，滴加二抗，37℃，15-30min；10，PBS洗涤3次，每次3min；11，滴加SABC，37℃， 30min；12，PBS洗涤3次，每次5min；13，1ml蒸馏水中分别滴加显色剂，混匀；14，DAB显色剂配置好后，滴加于切片，室温，镜下检测反应时间（约5min）；15，自来水冲洗干净，过蒸馏水；16，苏木素复染2min，自来水冲洗；17，脱水30％乙醇3min，50％乙醇3min，70％乙醇3min，80％乙醇3min，90％乙醇3min，95％乙醇3min，100％乙醇3min，二甲苯20min；18，树胶封片，镜检。

免疫治疗和化学治疗联合治疗的研究进展

免疫治疗和化学治疗联合治疗的研究进展目前，癌症已经成为世界上最主要的致命疾病之一，每年都会有数百万人因癌症而死亡。

尽管如此，医疗技术的不断发展为癌症患者带来了越来越多的治疗选择，其中免疫治疗和化学治疗的联合治疗被广泛研究。

本文将介绍免疫治疗和化学治疗联合治疗的研究进展。

免疫治疗是指利用人体免疫系统来对抗癌症的治疗方法。

目前，有很多种免疫治疗方法，例如使用免疫检查点抑制剂或细胞免疫治疗等。

这些治疗方法的基本原理都是通过增强或激活人体免疫系统来攻击癌细胞。

化学治疗是指使用化学药物来杀死癌细胞的治疗方法。

这些化学药物可以通过口服、静脉注射或肌肉注射等不同的途径来给予患者。

化学治疗一般会对快速分裂的癌细胞产生影响，从而导致其死亡。

虽然免疫治疗和化学治疗都具有很大的优势，但是它们也存在一些限制和缺点。

例如，免疫治疗可能会引起人体免疫系统过度激活，导致自身免疫疾病。

而化学治疗则会对身体其他正常细胞产生影响，从而导致一系列副作用。

考虑到这些局限性，研究人员开始探索将免疫治疗和化学治疗联合使用的可能性。

通过这种联合治疗，可以进一步提高治疗效果，并减少患者所需的治疗时间和剂量，从而减少副作用。

许多最新的研究数据表明，这种联合治疗方法已经开始显示出很大的潜力。

例如，在晚期结直肠癌患者中，使用福马汀和普利司通（两种免疫检查点抑制剂）联合奥沙利铂和草酸氟尿嘧啶（两种化学药物）进行治疗后，患者的无进展生存期和总生存期都显著提高。

进一步的研究数据表明，在多种癌症类型中，联合使用免疫治疗和化学治疗可以显著提高治疗效果。

此外，一些研究还发现，将电疗和免疫治疗与化学治疗联合使用，也可以显著提高治疗效果。

例如，在经过化学治疗的前列腺癌患者中，使用光动力疗法和免疫治疗联合治疗后，患者的治疗效果显著提高。

总的来说，免疫治疗和化学治疗联合治疗的研究已经取得了一些非常鼓舞人心的进展。

这些进展为癌症患者提供了更多的治疗选择，并为未来的治疗方法的发展奠定了基础。

答案系统解剖学试题

9.有关免疫组织（细胞）化学技术的表述中，哪一项是错误的（ C ）
A.以抗原抗体结合反应为基础，显微镜下查知细胞内某抗原的技术
B.显微镜下见不到抗原抗体反应
C.用可见标记物标记的抗体与抗原反应，即可直接确定抗原所在
D.用可见标记物标记的抗体与抗原反应，镜下见到的标记物所在，即间接证实抗原所在
D.不断排除细胞产生的有害代谢产物
E.必要的电解质和适宜的渗透压
9.电镜标本中电子密度高的结构是（ABD ）
A.被重金属盐所染的部位
B.照片上图象较黑的部位
C.物体本身较淡而周围染色较暗的部位
D.在荧光屏上显得较暗的部位
4.人体的四大基本组织为（上皮）,（结缔）,（神经）和（肌）。
5.光学显微镜下所见的结构称（光镜结构）,电子显微镜下所见的结构称（超微结构）。
6.光镜的放大倍率是（0.2um ），电镜的放大倍率是（0.2nm ）。
7.电镜技术常采用重金属盐电子染色增加超微结构黑白反差，被重金属盐浸染显深色的结构称（电子密度高），浅色结构称（电子密度低）。
(七)、思考题
1. 如何用石蜡切片术制备组织切片？
（1）石蜡切片术是最常用的技术，包括石蜡包埋切片与苏木精、伊红染色法两部分。（2）其基本程序包括：取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片与烤片、染色、脱水、透明、封片。
二、答案与题解
(一)、填空题
1.微细结构相关功能
D.脂肪 E.蛋白质
2.扫描电镜术主要用于观察（C ）
A.生物膜内部结构
B.细胞器的内部结构
C.组织和细胞的表面结构
D.细胞内的多糖

免疫细胞化学染色方法

免疫细胞化学染色方法免疫细胞化学染色方法是一种在细胞中检测特定蛋白质的常用方法。

在此方法中，采用一种特定抗体来与蛋白质结合，并进行可视化。

这种方法具有许多应用，其中包括检测疾病、药物研究以及生命科学。

下面，我将就免疫细胞化学染色方法作进一步介绍。

一、原理免疫细胞化学染色方法基于抗原与抗体的结合原理。

抗体是一种分子，它们会与细胞中的特定蛋白质结合。

当抗体与特定蛋白质结合时，我们可以用一种特定的染料或荧光来可视化蛋白质。

二、步骤免疫细胞化学染色方法具有多个步骤。

其中，主要步骤包括：1. 固定细胞：这一步骤不仅使细胞附着在载玻片上，同时大大提高了抗体对目标蛋白质的特异性绑定能力。

2. 渗透处理：为了使抗体可以渗透细胞膜并进入细胞中，这一步骤非常必要。

一般使用0.1% Triton X-100来处理。

3. 抗原处理：细胞中的某些蛋白质可能需要通过抗原处理来使其变得特异性更好。

这一步骤可通过形成复合物或溶菌酶等方法来实现。

4. 抗体染色：在这一步骤中，使用一种特定的抗体来与蛋白质结合。

这种抗体可以经过标记过，例如象氨基甲酸酯（FITC）等可以用来可视化的染料。

5. 正负对照组实验：为了保证结果的可靠性，需要制备正负对照组实验。

6. 可视化：使用荧光显微镜或者光镜来观察细胞的染色结果。

三、应用免疫细胞化学染色方法在许多领域具有重要的应用。

其中，主要应用领域包括：1. 检测疾病：这种方法可以使用抗体来检测各种疾病。

这是基本的免疫学原理，许多疾病可通过免疫细胞化学染色方法来检测。

2. 药物研究：在药物研究中，利用免疫细胞化学染色方法可以检测混合物中成分的分布情况，还可以检测药物是否进入细胞。

3. 生命科学：在生命科学领域，免疫细胞化学染色方法可以用来研究细胞中蛋白质的本地化，以及检测蛋白质在细胞发育和生化反应过程中的变化。

总结：免疫细胞化学染色方法是一种简单而有效的方法，可以使用抗体来检测特定蛋白质。

该方法具有广泛的应用，包括疾病检测，药物研究以及生命科学研究。

化学在免疫学和疫苗开发中的应用

化学在免疫学和疫苗开发中的应用
化学在免疫学和疫苗开发中的应用主要体现在以下几个方面：
1.抗体和免疫治疗：抗体是机体免疫系统中的一种蛋白质，能够识别和结合
特定的抗原物质，进而激活或抑制免疫反应。

通过对抗体的研究，科学家
们成功地开发出了一些能够增强机体免疫系统攻击肿瘤的药物。

生物化学
方法为抗体研究提供了重要手段，例如研发出了名为“单克隆抗体”的药物，这种药物可以精确地识别并结合肿瘤细胞表面的特定抗原，从而激活免疫
系统对这些细胞进行攻击。

2.疫苗研发：疫苗是一种预防传染病的重要手段，它通过激活人体免疫系统
来抵御病原体的入侵。

在疫苗研发过程中，化学起到了关键作用。

通过对
病原体的认识和研究，药物化学家可以针对不同的疾病选择合适的抗原，
并进行合成和修饰。

他们可以通过对抗原化合物的结构进行合理改造，增
强其免疫原性和稳定性，从而提高疫苗的效果和安全性。

此外，生物化学
的发展也为疫苗的研发提供了更精确和高效的技术手段。

总的来说，化学在免疫学和疫苗开发中的应用主要体现在对抗体和免疫治疗的研究以及疫苗的研发过程中，这些应用为疾病的治疗和预防提供了重要的帮助。

免疫组织化学常用方法大全.pdf

● HRP/POD（辣根过氧化物酶）
显色原理：
HRP + H2O2 体）
HRP ·H2O2 + 供氢体（电子供
型）
HRP + H2O + 供氢体（氧化
DAB（二氢基联苯胺）棕褐色 AEC（3-氢-9-乙基咔唑）红色 TMB（四甲基联苯氨）深蓝色
● ALP/AP（碱性磷酸酶）底物：萘酚（As-Mx）发色团：Fast Blue Fast Red BCIP/NBT
6. ABC复合物， 45 min 7. PBS洗涤 5 min × 3次 8. 显色（H2O2/DAB）、复染、封片 9. 观察、记录
second antibody-biotin + Avidin + biotinHRP
ABC复合物的配制： biotin：avidin 1：4 avidin 10μg/ml biotin 2.5μg/ml 临用前30分钟配制
一、SP法（ Streptavidin Peroxidase conjugated method ）
生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶结合。
操作步骤： ● 石蜡切片，脱蜡至水； ● 过氧化酶阻断溶液，以阻断内源性过
氧化酶的活性； ● 第一抗体； ● 生物素标记的第二抗体； ● 链霉菌抗生物蛋白-过氧化物酶溶液； ● 显色、复染、封片、观察。
基本原理与操作步骤
第一节免疫酶细胞化学
免疫酶细胞化学是免疫组织化学中最常用的方法，它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下，借助于酶细胞化学手段，检测某种物质（抗原／抗体）在组织细胞内的存在部位。即预先将抗体与酶连结（酶标抗体），再使其与组织内特异性抗原反应，经细胞化学染色后，在光镜或电镜下观察分析。

免疫细胞化学染色在骨髓涂片诊断中的应用

免疫细胞化学染色在骨髓涂片诊断中的应用【摘要】目的：分析免疫细胞化学染色在骨髓涂片诊断中的应用价值。

方法：在骨髓涂片上直接进行免疫细胞化学标记进行明确诊断。

结果：结合免疫细胞化学，可达到准确鉴别诊断的要求。

结论：应用免疫细胞化学技术对肿瘤性骨髓涂片进行抗原标记，取得了良好的效果，有助于明确疾病的鉴别诊断。

【关键词】骨髓检查；免疫组织化学；诊断免疫组化在外科病理学上已经被广泛应用，但常规应用于细胞学上还不多，而在细胞病理学中面临的主要问题是弄清细胞的来源和性质，传统的形态学方法和标准能满足多数分化细胞的分类和诊断，但对难以辨认的肿瘤细胞，免疫细胞化学（ICC）在细胞病理学中是一很有用的辅助诊断方法，结合免疫细胞化学，可达到准确鉴别诊断的要求。

但多数免疫细胞化学在胸腹水恶性肿瘤的应用，在骨髓涂片上直接进行免疫细胞化学标记进行明确诊断少见报道。

笔者应用免疫细胞化学技术对肿瘤性骨髓涂片进行抗原标记，取得了良好的效果，有助于明确疾病的鉴别诊断。

1 临床资料1.1 一般资料选取我院10例患者恶性骨髓涂片，骨髓涂片诊断尚有困难或怀疑有其他转移性肿瘤但又无法活检明确诊断的骨髓涂片。

1.2 试剂小鼠抗人CK、CD20、CD79a、CD3、CD43、CD45RO、CD56、Syn、LCA、及MaxVision试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 免疫细胞化学方法（1）根据临床病史及常规HE初步诊断，对抗体筛选不同抗体的标记；（2）观察骨髓涂片细胞量（除红细胞）较多的区域，并用免疫组化笔划圈直径约1cm，太小细胞量少且玻片容易干燥，过大浪费抗体；（3）骨髓涂片放入乙醇乙醚固定液固定5min，水洗5min，PBS液冲洗，一抗室温孵育1h；PBS液冲洗，二抗室温孵育15min；PBS液冲洗，DAB显色；PBS代替一抗作阴性对照。

最后苏木精复染，中性树胶封固。

取骨髓液3-5ml肝素抗凝，Ficoll液分离单个核细胞，用PBS洗涤3次，调细胞浓度为1-2×106/ml，甩片凉干。

免疫化学技术在疾病诊断中的应用

免疫化学技术在疾病诊断中的应用免疫化学技术是指利用免疫学原理，利用抗原与抗体间的特异性相互作用，进行检测、识别和定量化疾病的化学技术。

它的诞生为人类健康事业的发展带来了不可估量的贡献。

在现代疾病诊断中，免疫化学技术起到了重要的作用，因此本文将从原理、应用价值、常见检测等方面谈谈免疫化学技术在疾病诊断中的应用。

一、原理免疫化学技术的原理是建立在抗原与抗体间的特异性作用之上，即当特定的抗原与相应的抗体结合时，会出现抗原抗体复合物的形成。

而这种特异性结合是基于抗原与抗体之间的化学互相识别作用。

具体而言，抗原是病原体或非病原体，可以是蛋白质、多肽、糖蛋白、脂质、核酸等细胞成分。

而抗体，通常是指人体内特异性识别抗原的分子，在人体免疫系统中起着非常重要的作用。

二、应用价值1. 疾病诊断通过免疫化学技术，我们可以检测诊断多种疾病。

例如，通过检测抗体，可以诊断某些传染病，如艾滋病、乙型肝炎等。

而通过检测抗原，则可以发现流感病毒、单纯疱疹病毒等病毒的感染情况。

因此，免疫化学技术可以更快地发现疾病，并提供提供更加准确的诊断结果。

2. 临床医学在临床上，免疫化学技术可以检测一些特定的生物标志物，例如肿瘤 Marker 的检测。

近年来，随着科技的不断进步，肿瘤Marker 的检测证明越来越重要，可以用于早期诊断和疗效监测。

在临床上，肿瘤 Marker 的应用非常广泛。

3. 生物工程免疫化学技术在生物工程方面的应用也非常广泛。

例如，可以利用单克隆抗体生产药物，用来治疗癌症、炎症等疾病。

此外，也可以利用该技术生产高纯度的蛋白质和大量的同一抗体，用于科学实验和医学研究中。

三、常见检测1. ELISAELISA，全称为酶联免疫吸附试验，是目前最常用的免疫化学检测法之一。

它是利用酶作为信号产生器，检测或定量测定样品中的抗原或抗体。

这种方法极为敏感，可以检测到非常低浓度的抗原或抗体，并且在特异性和准确性方面非常高。

2. 免疫印迹法免疫印迹法，全称为Western blot，是一种检测蛋白质的方法。

《免疫学》免疫组织化学的应用ppt课件

05
免疫组织化学的优缺点与展望
优点
高特异性
免疫组织化学技术能够针对特定的抗原进行高特异性识别，
减少非特异性染色。
高灵敏度
通过使用酶或其他标记物，可以检测到极低浓度的抗原，提高检测灵敏度。
定位准确
通过标记特定抗体，可以精确定位抗原在组织中的位置，有助于疾病的诊断和病理研究。
多参数同时检测
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contents
目录
• 免疫组织化学概述 • 免疫组织化学的基本原理 • 免疫组织化学在病理诊断中的应用 • 免疫组织化学在研究中的应用 • 免疫组织化学的优缺点与展望
01
免疫组织化学概述
定义与特点
定义
免疫组织化学是一种利用抗原-抗体反应原理，通过标记抗体来检测和定位组织或细胞内特定抗原物质的技术。
成本较高
需要针对不同的抗原制备特定的抗体，因此成本较高。
展望与未来发展方向
优化技术流程
多技术联合应用
通过改进实验流程和缩短实验时间，提高实验效率和准确性。
将免疫组织化学与其他技术如基因测序、蛋白质组学等相结合，以更全面地了解组织样本中的分子表达情况。
自动化与标准化
临床应用拓展
开发自动化免疫组织化学分析系统，实现标准化操作，减少人为误差。
20世纪80年代
建立了免疫酶标技术，提高了检测的灵敏度和特异性。
20世纪70年代
建立了免疫荧光技术，成为最早的免疫组织化学技术。
20世纪90年代至今
免疫组织化学技术不断改进和完善，应用范围不断扩大。
02
免疫组织化学的基本原理
抗原-抗体反应
抗原和抗体结合的特异性

免疫细胞化学的名词解释

免疫细胞化学的名词解释免疫细胞化学是研究免疫细胞分子成分及其在免疫应答中的相互作用和功能调控的一门科学。

它通过利用化学技术，特别是免疫组化、免疫荧光等方法，对免疫系统中的细胞分子进行定位、鉴定和表征，以揭示免疫应答的机制和调控过程。

一、抗原与抗体抗原是指能够激发机体免疫应答的物质。

它可以是病原体的分子结构如细菌的脂多糖、病毒的表面蛋白等，也可以是伪抗原，如小分子化合物结合到大分子载体上形成的复合物。

抗原通过和机体免疫系统中的抗原特异性的B细胞或T细胞受体结合，引发免疫应答。

抗体是由机体B淋巴细胞分泌的一种免疫球蛋白分子。

它由两个亚单位链和两个轻链组成，通过特定的抗原结合位点与抗原结合。

免疫细胞化学中的抗体常用于特异性检测和定位免疫细胞中的分子成分。

二、免疫组化免疫组化是通过使用抗体对免疫组织或细胞进行染色和可视化的技术。

它可以用于检测和定位细胞或组织中的特定抗原成分。

免疫组化技术常用的方法包括免疫组化组织化学染色、间接免疫荧光染色和冷冻切片免疫染色等。

免疫组化技术的核心是抗原-抗体反应。

通过将标记有荧光物质或酶给体的抗体与待检测抗原结合，再经过适当的显色或荧光检测，使染色反应产生的信号可见。

这样可以检测到细胞或组织中抗原的存在与空间分布。

三、免疫荧光免疫荧光是利用抗体与荧光标记物相结合来检测和定位细胞或组织中的抗原成分。

它是一种非常敏感和特异的免疫细胞化学技术。

免疫荧光常用于检测免疫细胞表面的分子或细胞内的特定蛋白成分。

在免疫荧光实验中，通过将用荧光染料标记的抗体与待检测抗原结合，可以在显微镜下观察到荧光信号。

通过对荧光的颜色、强度和分布进行观察和分析，可以确定抗原的存在和分布情况。

四、细胞表面标记细胞表面标记是指将特定的抗原或抗体标记在细胞膜上，以区分不同类型或状态的细胞。

这种标记可以通过免疫荧光等方法来实现。

细胞表面标记在免疫细胞化学中发挥重要作用。

通过对具有不同表面标记的细胞进行分离和鉴定，可以研究细胞的发育、分化状态以及免疫应答中细胞的亚群分布和调控。