生物、化学-常用试剂配制
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常规试剂配制和测定方法
一、溶液的配制
1. Mandels营养盐溶液（1000 mL）
名称重量（g）
硫酸铵（(NH
4)
2
SO
4
）14
磷酸二氢钾（KH
2PO
4
）20
尿素（H
2NCONH
2
）3
硫酸镁（MgSO
4·7H
2
O）3
氯化钙（CaCl
2·2H
2
O）4
注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。
2. Mandels微量元素溶液（1000 mL）
名称重量（g）
氯化钴（CoCl
2·6H
2
O）
硫酸锌（ZnSO
4·7H
2
O）
硫酸锰（MnSO
4·H
2
O）
硫酸亚铁（FeSO
4·7H
2
O）
注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。
3. DNS试剂的配制（1000 mL）
（1）取：3,5-二硝基水杨酸（C
7H
4
N
2
O
7
）7.5 g
氢氧化钠（NaOH ）14.0 g 充分溶解于1000 mL 水中（水预先煮沸10 min）
（2）加入：酒石酸钾钠（C
4H
4
O
6
KNa·4H
2
O）216.0 g
苯酚（在50 ℃水浴中融化） mL
偏重亚硫酸钠（Na
2S
2
O
5
） 6.0 g
（3）充分溶解后盛于棕色瓶中，放置5天后便可使用，平时盛一小瓶(250 mL)使用，要放在冰箱中冷藏。此溶液每月配制一次。
注意：倒入瓶中时要尽量装满！！
4. 考马斯亮蓝G-250的配制（1000 mL）
称考马斯亮蓝G-250 100 mg即0.1g溶于50mL 95%乙醇中，加入100 mL 85 %磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL ，滤纸过滤。最终试剂中含 %（w/v）考马斯亮蓝G-250， %（w/v）乙醇， %（w/v）磷酸。
5. 1.0 M柠檬酸缓冲溶液的配制（1000 mL）
名称分子量Mn重量(g)
柠檬酸（C
6H
8
O
7
·H
2
O）210210
NaOH40
准确称取柠檬酸210 g，溶于约750 mL煮沸（10 min）蒸馏水中，待柠檬酸充分溶解后加入氢氧化钠74.5 g，完全溶解后将上述溶液转移到1000 mL容量瓶中，冷却后将容量瓶定容到1000 mL（原始）。（检验方法：取1.0 M柠檬酸缓冲溶液稀释20倍，测定稀释液的pH值，pH值应为）
6. 标准糖溶液的配制和标准方程的测定
（1）标准糖溶液的配制
准确称取2.000 g葡萄糖/木糖（葡萄糖/木糖需105 ℃烘干3 h），蒸馏水溶解，全部转移至1 L容量瓶内，摇匀，配制成2 g/L葡萄糖/木糖溶液。
取9个100 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖/木糖溶液10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL依次加入容量瓶，蒸馏水定容，摇匀。即为0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、2.0 g/L葡萄糖/木糖标准溶液。
取6个30 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖溶液10 mL、12 mL、14 mL、16 mL、18 mL、20 mL依次加入容量瓶，每瓶再加入 mL柠檬酸缓冲液，蒸馏水定容，摇匀。即为1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解葡萄糖。
（2）标准方程的测定：
①葡萄糖/木糖标准方程的测定
取10支25mL刻度管，10支1mL刻度吸管，分别加入0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、2.0 g/L葡萄糖/木糖标准溶液1 mL，DNS溶液3 mL。100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后定容至25 mL，摇匀。以蒸馏水作为空白对照，550 nm测定吸光度A。以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。（7230型分光光度计输出方程为：A = MC + N，723型分光光度计输出方程为：C = KA + B）
②酶解木糖标准方程测定（测定木聚糖酶活力）
取6支25 mL刻度管，6支2 mL刻度吸管，分别加入1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解木糖标准溶液 mL，DNS溶液3 mL，100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后定容至25 mL，摇匀。以蒸馏水作为空白对照，550 nm测定吸光度A。以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。（7230型分光光度计输出方程为：A = MC + N，723型分光光度计输出方程为：C = KA + B）
③酶解葡萄糖标准方程测定（测定滤纸酶活力、CMC酶活力）
取6支小试管，6支2 mL刻度吸管，分别加入1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解葡萄糖标准溶液 mL，DNS溶液3 mL，100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后，量筒定容至50 mL（定容至25 mL，测定CMC酶活力），摇匀。以蒸馏水作为空白对照，550 nm测定吸光度A。以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。（7230型分光光度计输出方程为：A = MC + N，723型分光光度计输出方程为：C = KA + B）