内毒素清除剂使用说明
京聚合美生物科技有限公司 M5 Endofree Pureplasmid Maxi Kit 使用说明
M5Endofree Pureplasmid Maxi Kit使用说明书产品名称单位货号M5Endofree Pureplasmid Maxi Kit10T MF032-01【储存条件】本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
内毒素清除剂可以常温运输，4˚C保存一个月，长期保存请放-20˚C。
【产品简介】本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，粗提物通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
【产品特色】1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用Whatman特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
2.不需要苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀，快速方便。
从100-200ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取0.2-0.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90%。
3.独特工艺配方清除内毒素，内毒素含量极低（<0.1EU/μg DNA），细胞转染效果极佳。
也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
【产品组份】10T注意事项细胞悬浮液（S1）77ml初次使用前请按瓶标说明加入所有的RNase A于S1中，4˚C保存细胞裂解液（S2）77ml用毕立即盖紧瓶盖；如有结晶析出，可于55˚C水浴加热助溶中和缓冲液（S3）77ml有刺激性，请勿直接接触皮肤浓缩漂洗液（WB）2x25ml初次使用前请按瓶标说明加入无水乙醇混匀洗脱缓冲液（EB）20mlRNase A溶液（10mg/ml）750μl-20˚C长期保存内毒素清除剂25ml-20˚C长期保存离心吸附柱DC10个室温密闭干燥保存50ml收集管10个室温密闭干燥保存【实验准备】用户需自行准备的材料：含适当抗生素的LB培养基，无水乙醇，台式离心机。
去内毒素质粒小提试剂盒说明书
去内毒素质粒小提试剂盒说明书试剂盒组成50次100次RNase A 100ul 200ul内毒素清除剂20ml 40ml溶液P1 10ml 20ml溶液P2 10ml 20ml溶液P3 10ml 20ml结合液30ml 60ml漂洗液15ml 15ml×2洗脱液10ml 20ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份注：该试剂盒置于室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2℃-8℃。
产品简介：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，同时加入Solarbio公司特制的内毒素清除剂，可最大限度地去除内毒素。
从1-5ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取5-15μg纯净地高拷贝质粒DNA，提取率达85-90％。
使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高，可直接用于细胞转染等要求较高的试验，以及其它一些常规试验如酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。
操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
溶液P1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入200μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入200ul溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
内毒素指示剂 说明书
内毒素指示剂使用说明书【产品标准号】ECV【名称】内毒素指示剂，Endotoxin Challenge Vial，ECV【用途】内毒素指示剂系大肠杆菌O111:B4内毒素冻干品。
应用于验证干热除热原系统的效果。
安瓿内装有极微量内毒素，不含任何赋形剂, 因而外观近似空瓶。
本品为致热原，严禁以任何途径进入机体。
【效价】见出厂检验报告。
ECV效价系参照中国药品生物制品所的细菌内毒素国家标准品和相应批号的鲎试剂标定，标示于安瓿。
请注意选用与其相匹配的鲎试剂批号。
【贮存】常温。
【有效期限】见出厂检验报告。
【注意事项】①本品为致热原，严禁以任何途径进入机体。
需要适当防护，避免接触眼睛、皮肤、或吸入。
如不慎入眼、或皮肤接触，立即用大量水冲洗；如不慎经口摄入，饮用大量水；若有任何不适，请立即就医。
绝对禁止以任何注射方式进入机体。
②试验所用的器皿必需经过有效的除热原处理，以保证试验的准确、有效。
玻璃器皿常用的除热原方法是在250ºC干烤至少60分钟。
③试验过程应防止微生物的污染。
【操作步骤】1. 内毒素指示剂的效价验证内毒素的溶解稀释参见《内毒素工作标准品使用说明书》。
溶解的内毒素溶液每一步的稀释倍数小于等于10，每稀释一步均应在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟。
稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟，用前在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟，放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。
1.1任取1-2支未烤过的ECV, 用1.0 ml细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上剧烈振摇15分钟。
1.2 如果用定量法鲎试剂，将步骤1.1所得内毒素溶液稀释P/C m倍，使其理论值在内毒素标准曲线线性范围内，确定ECV的效价。
其中，P为ECV标示值，C m为内毒素标准曲线线性范围内接近中间点的值。
如内毒素标准曲线线性范围为0.01-100 EU/ml，C m取1.0 EU/ml；如内毒素标准曲线线性范围为0.1-1.0 EU/ml，C m取0.25 EU/ml或0.5 EU/ml。
生物制剂中内毒素去除方法概述
（6）其他亲和吸附配基。 除以上所述配基之外还有很多 种配基如壳聚糖、季铵盐、胺类、多肽类等对 LPS 的去除也有 较好的效果。
三 展望 近年来，LPS 的去除研究已经取得了很大进展，生物技术 产品在制药工业中的比重越来越大，其 LPS 去除工艺的研发
以及工业化规模扩大仍是今后研究的热点。 参考文献： [1]焦炳华.分子内毒 素 学[M].上 海:上 海 科 学 技 术 文 献 出
（5）氨基酸。 自 20 世纪 80 年代起组胺(Him)、组氨酸(His) 就开始作为配基去除 LPS。由于 His 生物活性较高、价格和毒 副作用都较小而更受欢迎，其作用主要来自于连接载体与配 体 的 间 隔 臂(如 己 二 胺)和 组 氨 酸 上 的 咪 唑 环 ，但 受 pH 的 影 响较大。 除组氨酸外，赖氨酸、精氨酸等氨基酸也被认为能与 LPS 发生作用。
98
２０15 年第 4 期
LPS 血症中的 LPS。 免疫亲和具有高度特异性，但是这种配基 制备困难，应用范围狭窄，同时还有价格昂贵、洗脱困难的问 题。
（2）多粘菌素 B(PMX-B)。 PMX-B 能 依 靠 其 环 形 肽 结 构 降解革兰氏阴性细菌的细胞壁，其阳离子与类脂 A 的磷酸基 团之间的静电作用力和疏水作用力使其能识别不同来源的 LPS 分子。 采用固定 PMX-B 的纤维素（或琼脂糖）载体 去 除 LPS，有良好的效果和稳定性。但是 PMX-B 的价格昂贵，且有 肾毒性和神经毒性，应谨慎应用。
如何去除内毒素
3.2.1原本法用于去除实验用玻璃器皿上的内毒素。
将玻璃器皿置于烤箱中，加热到250℃，持续30min，即可去除内毒素。
3.2.2方法与步骤1、内毒素去除效率的评估（1）制备浓度分别为1000和1000EU/mL 的CSE溶液。
按内毒素测量方法检测这些溶液。
（2）向所有待去除内毒素的玻璃器皿滴入1mL的CSE溶液。
（每种类型的玻璃器皿至少有3EU的CSE）。
（3）将玻璃器皿置放烤箱中，在60℃下，干烤持续30min，烘干，然后在烤箱中，250℃下，干烤30min。
（4）加入适量的LAL水，剧烈振荡5min，以清洗玻璃器皿，然后测量清洗后的LAL水中的内毒素的浓度。
（5）比较原来的内毒素含量和现存的内毒素浓度。
当内毒素含量至少减少了3—log时，该方法有效。
必要时，重复操作，去除内毒素。
用鲎度验法计算内毒素去除的百分比。
2、去除实验玻璃器皿上的内毒素确定可使内毒素玻璃器皿上的内毒素对于用来配置无同一内毒素溶液的玻璃器皿，重复操作，直至内毒素含量下降3—log。
（例如，1000 IEU和10000 10EU）数个加热循环后，用前述的鲎试验法，测定内毒素含量。
3、对照阴性对照：用只盛有LAL水的玻璃器皿，在250℃下，干烤30min并用LAL法测量内毒素的含量。
阳性对照：干燥（60℃，30min）每种玻璃器皿中的内毒素溶液，不经过干烤（250℃，30min）去内毒素的操作，然后测定其内毒素质量。
3.2.3质控与提示（1）保烤箱散热均匀，为此，在操作过程中，可将玻璃器皿放置在烤箱中的每一层上，当温度在250℃后，温度的波动不要超过±15℃。
（2）用含100EU的内毒素过行的检测，可用来确定去内毒素的效率。
用含10000EU的内毒素进行的检测，可用来确定对内毒素含量较高的器皿去除内毒素的效率。
（3）如果如果不理想，可增加每一次操作的时间和操作次数。
（4）其他技术适用于培养基的内毒素，例如，超滤，反向渗透，但比较昂贵。
QIAGEN-中文版去内毒素大提试剂盒
纯化高转染级别的质粒DNA 【工作台流程】BENCH PROTOCOL准备工作:1.将RNase A 溶液加入P1缓冲液(Buffer P1)2.加40ml96－100％乙醇(ethanol)于试剂盒的去内毒素水中(endotoxin-fre water)3.可选: 加 LyseBlue 试剂于 Buffer P14.检查 Buffer P2是否有SDS沉淀precipitation 有沉淀可在37摄氏度下暖化溶解5.Buffer P3 置于4摄氏度中预冷pre-chill6.细菌扩增培养1.补充:2.准备4-6个50ml新的或灭菌的离心管用于冷冻离心机下离心过夜菌液, 2个用于接下来的菌块重悬和与buffer混合3.1个无内毒素的30ml聚丙烯（不推荐聚碳酸酯, 因为不耐乙醇）管子（最好用圆底的离心管以利于高速离心）用于收集洗提的质粒DNA4.5个1.5ml的EP管用于收集抽提过程各步骤的产物用于实验后分析和质量控制5.准备1个冰浴盒用于步骤66.准备室温下的异丙醇10.5ml7.4摄氏度冰冻离心机和分光光度仪,琼脂糖凝胶电泳步骤: peocedureA.细菌培养、收获和裂解bacterial culture,harvest & lysis1.100ml高拷贝high-copy或250ml低拷贝low-copy过夜overnight LB培养菌液于冰冻离心机4摄氏度；6000×g；15min从新鲜的抗生素平板上挑取一个单菌落, 2-5ml抗生素LB液体初始培养基30摄氏度孵化约8小时（振荡300rpm, 注意孵化容器容积至少4倍于培养液）抗生素LB液体培养基稀释初始培养液到1:500-1000。
(高拷贝质粒100-200ul初始培养液加于100ml培养基；低拷贝质粒250-500ul初始培养液加于250ml培养基)37摄氏度300rpm振荡12-16小时。
(孵化容器容积至少4倍于培养液, 培养至细菌密度约3-4×109/ml, 即离心后菌块湿重约3g/L培养基)培养基配方：10g蛋白胨+5g酵母+10g氯化钠溶于800ml蒸馏水, 用1 N NaOH 调pH值至7.0, 用蒸馏水调整至1L。
无内毒素质粒中提试剂盒说明书
无内毒素质粒中提试剂盒EndoFree Midi Plasmid Kit(目录号：HS0105)产品包装试剂盒成分50 preps Bacterial Endotoxin Erasol300 ml Buffer P130 ml Buffer P230 ml Buffer P340 ml RNase A(10 mg/ml)300 ul Buffer PD60 ml Buffer EB10 ml Spin Columns PB50个 Collection Tubes (2 ml) 50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于无内毒素质粒DNA 的中量制备与纯化。
在高纯度质粒中提试剂盒的基础上，加入菌体内毒素清除剂（Bacterial Endotoxin Erasol ），在质粒提取前去除细菌的内毒素，从根本上避免了内毒素对转染等后续实验的影响。
使用本试剂盒可从5 ~ 15 ml 过夜培养的菌液中纯化得到高达40 ~ 100 ug 的高纯度质粒DNA ，所得质粒纯度高、无内毒素，质粒DNA 可直接用于培养细胞的转染等要求较高的分子生物学实验。
北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 菌体内毒素清除剂可在质粒DNA提取前去除细菌的内毒素，从根本上避免内毒素的污染。
2. 去除内毒素效率高，经过2 ~ 3次处理即可去除99%的内毒素，3. 质粒损失小于10%。
操作步骤1. 取5-15 ml过夜培养的菌液加入2 ml离心管中（自备），12,000 rpm离心1分钟，弃上清。
去除内毒素的方法总结
内毒素的去除是做蛋白表达时至关重要的一步,同时也是非常棘手的问题，本文就针对内毒素的去除方法以及各方法的注意事项进行了归纳总结。
一、什么是内毒素？内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的脂多糖。
内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。
所有能引起热原反应的物质称为热原。
药品中的热原主要是细菌内毒素。
一般可以认为：细菌内毒素是热原，但热原不等于细菌内毒素。
二、细菌内毒素的理化性质•耐热性：彻底灭活需250℃高温干烤一小时•水溶性：可溶于水，生产中可用无热原水冲洗以除去热原。
•不挥发性•被吸附性：可被活性碳吸附•被酸碱破坏： 0.1M HCl或0.1M NaOH 浸泡4小时•被氧化剂破坏：30%双氧水浸泡4小时，可完全破坏三、器皿中内毒素的去除:a.干热法•适用对象：耐热物品如玻璃制品、金属制品等生产过程中所用的容器•处理方法： 180℃3～ 4h 或 250℃ 30min～ 2h•注意事项：• 1.在干烤前，被加热的玻璃器皿上最好不要有水珠，否则可能会使玻璃器皿损坏。
• 2.烘烤结束后，玻璃器皿不要马上从电热烘箱中拿出，要等温度适度降低之后才可以拿出，以免因温差太大而造成玻璃器皿损坏。
• 3.器皿上不能含有纸质或塑料制品，以免烘烤时燃烧或熔化。
b.化学降解法•适用对象：主要用于去除玻璃、塑料和其它高分子材料器皿上的内毒素。
•处理方法：常用3～5％双氧水、重铬酸钾硫酸清洁液（重铬酸钾∶硫酸∶水常用配比1∶1∶10 或1∶2∶8 ）、0.1M HCl或0.1 M NaOH浸泡去除。
一般处理4h以上。
•注意事项：佩戴防护用具，防止皮肤直接接触。
四、溶液中内毒素的去除但是，各种去内毒素的方法不是孤立的，可以相互结合使用。
比如，如果液相分离法得到的蛋白内毒素水平未达标，可以接着利用分子筛法进一步去除内毒素。
五、作为目前去内毒素常用的方法，液相分离法的注意事项值得我们重视1.液相分离方法应用于蛋白纯化中内毒素的去除a.目的蛋白上样后，用预冷的基础溶液+1% Triton X-114缓慢淋洗柱子，直至A280数值稳定不变；b.用预冷的去内毒素基础溶液淋洗柱子，直至A280数值达到基线，稳定不变；c.用各梯度去内毒素的洗脱液洗脱，收集各洗脱液于去内毒素的收集管中。
内毒素除去填料操作流程
内毒素除去填料操作流程内毒素除去填料操作流程内毒素是细菌细胞壁分解产生的一种有害物质，可以导致人体免疫系统失调、炎症反应，甚至休克、多器官功能障碍综合征等危重症状。
在生物技术制药生产过程中，许多制剂和工艺均需要去除内毒素，以保证生产质量和生产安全，其中内毒素除去填料操作是重要的一环。
以下是该流程的详细过程。
一、装备准备1.1 验证设备清洁状态，确认无杂质和残留；1.2 确定用于内毒素除去的填料类型、数量与规格；1.3 检查系统的肝素或其他抗凝剂的添加和有效性；1.4 确定后续操作的条件和参数，如温度、pH值等。
二、填料投入和平衡2.1 将干燥的填料通过口径合适的漏斗、箱、塔等设备中填充到提前清洗并灭菌的内毒素除去设备（如脱色树脂、离子交换树脂、高效蛋白等）中；2.2 使用预定容积的缓冲液洗数组，直到液体流出无色；2.3 使用预定容积的样品处理液洗数组以平衡填料。
二次洗涤、平衡的次数及洗涤液配比必须按照操作手册中的要求执行，以确保填料质量和操作效率。
三、样品处理和内毒素除去3.1 使用灭菌的取样器、管和工具采集待处理样品；3.2 将样品送到内毒素除去装置中，按照操作手册中给定的操作流程，并根据生产要求严格控制洗柿剂、缓冲液的质量和色度；3.3 保持填料床深度，并注意搅拌速度和时间，冷却系统应该及时跟进；3.4 所处理的样品通过滤器或其他装置从除去装置中收集；四、检测与结果分析4.1 将处理后的样品送往实验室，对样品内毒素含量进行检测；4.2 根据检测结果，分析数据；4.3 对于不符合要求的样品通过重复操作，重新进行去除内毒素的操作；4.4 处理效果和操作过程记录在操作手册中。
以上为内毒素除去填料操作流程的详细介绍，有效、规范的操作可以保证产品质量和生产效率，在生物技术制药等生产过程中有着广泛的应用。
内毒素清除剂成分
内毒素清除剂成分内毒素是革兰阴性细菌细胞壁中的一种成分，它在细菌死亡裂解后释放出来，是引起人体发热、炎症和休克等内毒素血症的主要病原体。
内毒素清除剂是一种能够中和内毒素活性的物质，可以有效减轻内毒素引起的病理反应。
本文主要介绍内毒素清除剂的主要成分。
1.活性炭：活性炭是一种非常有效的吸附剂，能够吸附内毒素、细菌和其他杂质，从而将其从血液中清除。
2.琼脂：琼脂是一种多糖，能够与内毒素结合，减缓内毒素的生物学活性，从而减轻其毒性作用。
3.胆酸：胆酸能够与内毒素结合，形成水溶性的复合物，进而通过胆道排出体外，达到清除内毒素的目的。
4.磷脂：磷脂是一种细胞膜的成分，可以结合并清除内毒素，减轻其毒性作用。
5.IgG抗体：IgG抗体是一种能够识别并结合内毒素的免疫球蛋白，通过与内毒素结合，降低其生物学活性，从而减轻其毒性作用。
6.α-氨基正丁酸：α-氨基正丁酸是一种氨基酸，可以与内毒素结合，抑制其生物学活性，从而减轻其毒性作用。
7.益生菌：益生菌可以通过调节肠道菌群平衡，抑制内毒素的产生和释放，从而降低内毒素的毒性作用。
8.巯基化合物：巯基化合物可以与内毒素结合，抑制其生物学活性，从而减轻其毒性作用。
9.超氧化物歧化酶：超氧化物歧化酶可以清除内毒素释放的自由基，从而抑制其毒性作用。
10.金属螯合剂：金属螯合剂可以与内毒素结合，抑制其生物学活性，从而减轻其毒性作用。
11.氨基酸多肽：氨基酸多肽可以识别并结合内毒素，抑制其生物学活性，从而减轻其毒性作用。
12.中药提取物：中药提取物中的某些成分可以抑制内毒素的产生和释放，从而降低内毒素的毒性作用。
13.其他天然物质：其他天然物质如壳聚糖、透明质酸等也可以结合并清除内毒素，减轻其毒性作用。
总之，内毒素清除剂的成分多样，包括活性炭、琼脂、胆酸、磷脂、IgG抗体、α-氨基正丁酸、益生菌、巯基化合物、超氧化物歧化酶、金属螯合剂、氨基酸多肽、中药提取物以及其他天然物质等。
GENMED液相法去内毒素试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS20067.2 v.A GENMED液相法去内毒素试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED液相法去内毒素试剂是一种旨在通过特殊溶剂结合和包围内毒素分子，达到清除内毒素分子的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种质粒DNA样品纯化的制备。
产物可用于各种后续分子生物学操作。
产品即到即用，性能稳定，操作方便迅速，清除效率高。
技术背景内毒素（Endotoxin）是一种脂多糖（Lipopolysaccharides；LPS），革兰氏阴性细菌细胞膜的组成成分。
在质粒纯化过程中，细菌裂解释放出内毒素，伴随着质粒，严重干扰后续真核细胞的转染，尤其对于敏感的细胞株。
GENMED去内毒素技术采用了特异亲和树脂充分有效地清除内毒素（低达<0.1 EU/微克）和其它亲脂性物质。
产品内容GENMED浓缩液（Reagent A）毫升GENMED去毒液（Reagent B）毫升GENMED沉淀液（Reagent C）毫升GENMED净化液（Reagent D）毫升GENMED保存液（Reagent E）毫升产品说明书 1份保存方式保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于沉淀核酸涡旋震荡仪：用于混匀反应物恒温水槽：用于孵育反应物实验步骤1．移取500微升用户自备的质粒DNA到1.5毫升离心管2．加入微升GENMED浓缩液（Reagent A），混匀3．置于冰槽里孵育5分钟4．加入微升GENMED去毒液（Reagent B）5．涡旋震荡15秒6．置于冰槽里孵育30分钟7．放进37℃恒温水槽孵育30分钟，或直至液相分离8．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为3000g（或6000RPM，例如eppendorf5415D）9．小心移取450微升上层液相到新的1.5毫升离心管10．加入微升GENMED沉淀液（Reagent C）11．涡旋震荡15秒12．放进微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415D）13．小心抽去上清液14．加入毫升GENMED净化液（Reagent D）15．放进微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415D）16．小心抽去上清液17．空气中晾干18．加入微升GENMED保存液（Reagent E）19．溶解后保存在4℃冰箱里备用或即刻进行后续实验注意事项1．本产品为20次操作2．本产品采用特殊溶剂法3．建议使用无热源性离心管和枪头4．建议用户质粒DNA原液一次用量不超过1毫升，质粒含量不超过1毫克5．液相法操作简易，但会造成一定的质粒损失6．去内毒素程度取决于样品的内毒素高低，如果样品内毒素过高，可以重复操作，达到彻底清除的目的7．本公司提供系列质粒纯化试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定去内毒素程度高使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
无内毒素质粒大量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://EndoFree Plasmid Maxi Kit无内毒素质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL13试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1301)RNaseA（10mg/ml）-20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml内毒素清除剂-20℃25 ml漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
内毒素清除剂常温运输，4度可以保存一个月，长期保存放-20℃。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会混杂有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，粗提物通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速，方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90 %。
内毒素去除试剂盒说明书(1)[1]
![内毒素去除试剂盒说明书(1)[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/d796620652ea551810a68795.png)
内毒素去除试剂盒说明书内毒素去除试剂盒说明书I. DESCRIPTION细菌内毒素(脂多糖，LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。
人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中，发现细菌内毒素在其中起着关键的作用，内毒素使机体免疫功能严重受损，进一步的发展可能引发脓毒性休克，弥散性血管内凝血，急性呼吸窘迫综合症，全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。
因此，内毒素的去除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的，尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。
本试剂盒使用的是一类高效内毒素去除树脂，它以修饰过的多粘菌素B（PMB）为配体，进行特异性的内毒素去除。
经此亲和树脂纯化，样品最终的内毒素水平可低于0.1 EU/ml。
亲和树脂的主要特性如下表：规格 1.5 ml预装柱结合能力高达2,000,000 EU/ml 树脂配基修饰的多粘菌素B (PMB)pH 范围pH 5-10基质4% 交联的琼脂糖凝胶颗粒大小90 µm保存温度2°C-8°C使用寿命18个月平衡缓冲液磷酸盐缓冲液，pH 8.0适合纯化对象蛋白，多肽，抗体，多糖等离子条件0.1-0.5 M NaCl可耐受试剂20% DMSO, 20% 乙醇, 20% 甘油;1 M 尿素, 300 mM 咪唑; 0.05% 吐温-20, 10 mM DTT 等II. KEY FEATURES·高稳定性，高去除效率·高结合力：> 2, 000, 000 EU / ml (CV)·无需恒流泵即可调节流速·重复使用5次不会改变柱子效果·使用方便，试剂盒中提供无热源缓冲液，无热源收集管，无热源枪头等III. CONTENTS试剂盒内容 3 – 5个测试亲和树脂 1.5 ml 预装柱再生缓冲液125 ml平衡缓冲液125 ml流速控制器1个无热源接收管 1 包(3个/包)无热源枪头(1 ml) 2包(6个/包) 说明书1份IV . MATERIALS AND EQUIPMENT NEEDED BUT NOT PROVIDED 1. 铁架台2. 0.1 M 的氢氧化钠和0.1M 盐酸, 用于调节样品pH 值V . ENDOTOXIN REMOVAL PROTOCOL样品处理：样品的pH 值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。
细菌内毒素(凝胶法)操作SOP
1.目的建立血清内毒素检验操作规程，以确保内毒素控制效果。
2.适用范围初制、精制血清的内毒素检验操作。
3.职责3.1．质量管理部：负责本规程的起草。
3.2．质量管理部检验人员：负责本规程的操作。
3.3．总经理:负责本规程的起草。
4.定义无5.引用标准《中华人民共和国药典》四部2015版6.材料及设备6.1.1.鲎试剂，应具有国家主管部门的批准文号。
6.1.2. 试管架、洗耳球、医用胶布、时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀、砂轮等。
6.1.3. 刻度吸管6.1.4. 细菌内毒素国家标准品（NSE）、细菌内毒素工作标准品（WSE）6.1.5. 细菌内毒素检查用水（BET水）6.1.6. 试管架、洗耳球、医用胶布、时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀、砂轮等。
6.1.7. 电热干燥箱：温度应能维持250℃以上。
6.1.8. 恒温试管仪应能在（37±1）℃保持1h。
9.1.9. 旋涡混合器7.流程图无8.内容8.1. 供试品细菌内毒素的检查。
8.1.1. 计算MVD值：MVD＝C· L／λ根据《中国药典》现行版L＝10 EU／ml，故C为1.0ml／ml。
当λ=0.06EU／ml时。
MVD＝C·L／λ＝1.0×10／0.06＝160制备供试品溶液其稀释倍数不得超过160倍。
8.1.2. 阳性对照溶液的制备，用 BET水制成4λ(0.25)内毒素标准溶液。
8.1.3. 供试品阳性对照液的制备用被测供试品将WSE制成 0.25EU/ml内毒素标准溶液。
8.1.4. 鲎试剂的制备：取0.lml／支的鲎试剂5支，加入0.lml BET水复溶，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
8.2. 加样复溶后的0.lml／支规格的鲎试剂安培5支，其中2支加入0.1ml最大有效稀释的供试品溶液作为供试品管,1支加入0.1ml用BET水将WSE制成的0.25EU/ml浓度的内毒素溶液作为阳性对照， l支加入0.1mlBET水作为阴性对照，1支加入0.1ml供试品阳性对照溶液作为供试品阳性对照管。
KIT1 去内毒素试剂盒操作步骤
1 5ml大肠杆菌(导入质粒)接种到10-20毫升LB液体培养基（含有氨苄青霉素（50μ克/毫升））中培养12~16 h，37℃2 放入1.5ml离心管中10000 ×g 1min3 弃去废液，加入250μL Solution l/RNase A. 悬浮菌液4 加入250μL Solution II 轻轻上下翻转4-6次，充分混匀，直至溶液清澈（可以在室温下孵育2min）5 加入150μL冰浴Buffer N3轻轻上下翻转4-6次，直到出现絮状白色沉淀物。
在＞12000 x g离心10分钟，在室温下（最好在4°C）。
6 吸出上清至一个新的EP管中，加入0.1体积的ETR溶液的澄清裂解液。
轻轻上下翻转7-10倍，在冰上孵育10分钟。
ETR溶液加入后，裂解液出现浑浊，但应该培养放在冰上后变得透明。
7 溶菌液在42℃水浴5min 溶液出现浑浊，在在25℃，12000 x g离心3分钟。
出现蓝色沉淀物。
8 将澄清裂解液换到一个新的1.5毫升EP管加入0.5体积的无水乙醇（室温，96-100%）轻轻上下翻转6-7次。
室温孵化1-2min.9 将8步骤中的700μL溶液转入到吸附柱上，室温下10000×g离心1分钟10 弃去废液11 500μL BUFFER HB ，离心12 弃去废液加入700 μL DNA Wash Buffer ，离心，弃去废液13 重新加入700 μL DNA Wash Buffer，重复1214 13，000 x g ，空离2min15 换入新的1.5ml的EP管，加入30-50μL的ndotoxin-Free Elution Buffer 或者是水，13,000 x g 离心1min，也可以再洗脱一次。
解毒丹的功效与作用
解毒丹的功效与作用解毒丹是一种草药制剂，通常用于清除人体内的毒素和宿便，并促进新陈代谢，提供综合的保健效果。
它主要通过调理肝脏、促进血液循环和排泄系统的功能，起到解毒、养肝和排宿便的作用。
本文将详细介绍解毒丹的功效与作用，以及使用方法和注意事项。
一、解毒丹的功效与作用1. 清除体内毒素：人体日常摄入的食物、空气和饮水中存在着各种有毒物质，如重金属、农药残留、化学添加剂等。
这些毒素会在体内积累，对健康产生负面影响。
解毒丹中的有效成分可以与这些毒素结合，帮助身体排出体外，从而净化血液和细胞，促进身体的健康。
2. 修复肝脏功能：肝脏是人体内最大的解毒器官，负责过滤血液中的毒素和废物。
长期饮酒、吸烟、高脂饮食等不良生活习惯会导致肝脏功能受损，引发肝炎、脂肪肝等疾病。
解毒丹可以刺激肝脏的再生，促进肝细胞的修复和再生，从而改善肝脏功能，保护肝脏健康。
3. 改善肠道环境：肠道是人体内最重要的消化和排泄系统，也是排除体内废物和毒素的主要途径。
长期饮食不规律、过量摄入肉类和脂肪、缺乏膳食纤维等因素会导致肠道内积累宿便，影响身体的健康。
解毒丹可以增强肠道蠕动，加速宿便的排出，改善肠道环境，促进肠道功能的恢复和健康。
4. 提高免疫力：身体内的毒素如果不能及时清除，会对免疫系统产生负面影响，降低人体的免疫力。
解毒丹所含的多种植物提取物富含抗氧化剂和免疫增强物质，可以增强免疫系统的功能，提升抵抗力，减轻疾病发生的可能性。
5. 促进新陈代谢：解毒丹中的成分可以促进身体新陈代谢的进行，加速脂肪燃烧，阻断脂肪的堆积，有助于减肥和防止疾病的发生。
二、使用方法解毒丹一般以丸剂或者颗粒剂的形式出售。
根据个人需要，通常每次服用10克-15克的解毒丹，用开水冲服。
一天分两次服用，早晨和晚上饭前空腹服用效果更佳。
使用时需要遵循以下几点注意事项：1. 遵医嘱使用：在使用解毒丹之前，最好咨询医生的建议，了解是否适合自己的身体状况，并根据医生的指导进行剂量和使用时间的调整。
内毒素清除剂成分
内毒素清除剂成分摘要：I.引言A.内毒素清除剂的重要性B.内毒素清除剂的成分II.内毒素清除剂成分的种类A.活性炭B.硫酸铁C.硅藻土D.离子交换树脂III.各种成分的作用A.活性炭1.物理吸附作用2.化学吸附作用B.硫酸铁1.铁离子螯合作用2.氧化还原作用C.硅藻土1.物理吸附2.离子交换作用D.离子交换树脂1.离子交换作用2.选择性吸附作用IV.内毒素清除剂成分的应用A.医疗行业B.食品工业C.环境保护D.其他领域V.结论A.内毒素清除剂成分的重要性B.内毒素清除剂成分的未来发展趋势正文：内毒素清除剂在许多领域都发挥着重要的作用，它能够有效地去除内毒素，保障人们的健康。
那么，内毒素清除剂的成分有哪些呢？它们又分别具有什么样的作用呢？首先，我们来看看内毒素清除剂的成分。
一般来说，内毒素清除剂的成分主要有活性炭、硫酸铁、硅藻土和离子交换树脂等。
这些成分各具特色，能够针对不同的内毒素发挥清除作用。
活性炭是一种常用的内毒素清除剂成分，它具有很强的物理吸附能力和化学吸附能力，可以有效地去除水中的内毒素。
硫酸铁则主要通过其铁离子螯合作用和氧化还原作用来去除内毒素。
此外，硅藻土也是一种有效的内毒素清除剂，它通过物理吸附和离子交换作用去除内毒素。
离子交换树脂则以其离子交换作用和选择性吸附作用成为内毒素清除剂的重要组成部分。
在实际应用中，内毒素清除剂成分被广泛应用于医疗行业、食品工业、环境保护等领域。
在医疗行业中，内毒素清除剂可以帮助去除手术器械、输液器等设备中的内毒素，保障医疗安全。
在食品工业中，内毒素清除剂可以用于食品的净化处理，防止食品污染。
在环境保护领域，内毒素清除剂可以用于水处理、土壤修复等环境治理工程，保护环境免受内毒素污染。
总的来说，内毒素清除剂成分在保障人类健康和环境保护方面发挥着重要的作用。
随着科技的发展，未来内毒素清除剂成分的应用将会更加广泛，其技术也将更加成熟。
内毒素清除剂成分
内毒素清除剂成分摘要：1.内毒素的概念与作用2.内毒素清除剂的必要性3.内毒素清除剂的主要成分4.内毒素清除剂的分类与作用5.如何选择合适的内毒素清除剂6.使用内毒素清除剂的注意事项正文：在我们的生活中，毒素无处不在，它们可能存在于空气、食物、水源甚至我们使用的日常用品中。
毒素对我们的身体造成严重危害，内毒素就是其中一种。
内毒素是一类具有强烈生物活性的化学物质，通常来源于细菌、真菌、病毒等微生物。
内毒素对人体健康的影响极大，轻则导致疲劳、消化不良，重则引发炎症、肿瘤等疾病。
因此，内毒素清除剂应运而生，成为我们维护身体健康的必备工具。
内毒素清除剂的作用主要表现在以下几个方面：1.增强免疫力：内毒素清除剂能有效提高人体免疫力，抵抗外来毒素的侵袭。
2.促进新陈代谢：内毒素清除剂有助于改善人体新陈代谢，促使毒素及时排出体外。
3.保护肝脏：内毒素清除剂可以减轻肝脏负担，保持肝脏功能正常。
4.改善肠胃：内毒素清除剂有助于维护肠道微生态平衡，改善肠胃功能。
5.抗氧化：内毒素清除剂具有抗氧化作用，延缓衰老过程。
要实现内毒素的清除，我们需要选择具有良好效果的内毒素清除剂。
内毒素清除剂的主要成分包括：1.膳食纤维：膳食纤维能促进肠道蠕动，增加排便量，有助于毒素的排出。
2.植物活性成分：如绿茶、葡萄籽、山楂等，这些成分具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种作用，有助于清除内毒素。
3.益生菌：益生菌能调节肠道菌群平衡，抑制有害细菌的生长，从而减少内毒素的产生。
4.微量元素：如硒、锌、铜等，这些微量元素具有抗氧化、抗炎、抗病毒等作用，有助于清除内毒素。
在选择内毒素清除剂时，要注意以下几点：1.选择正规厂家生产的内毒素清除剂，确保产品质量和安全。
2.根据自己的身体状况和需求选择适合的内毒素清除剂，如肠胃不适者可选择以膳食纤维为主要成分的清除剂。
3.注意产品的保质期，避免使用过期产品。
4.内毒素清除剂不能替代药物治疗，患者在使用内毒素清除剂时，仍需遵循医生的建议。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
内毒素清除剂使用说明
货号：E1040
规格：20ml/100ml
保存：4℃半年有效，-20℃长期储存。
产品简介：
内毒素清除剂主要用于清除DNA、蛋白质或其他液体样品中的内毒素。
在特定的pH值、盐浓度和温度条件下，内毒素清除剂能与DNA、重组蛋白以及液体样品中的内毒素特异性结合，经过室温高速离心后，DNA或蛋白质等保留在水相，而内毒素则被浓缩到极小体积的下层相而被清除。
经过3次以上重复抽提后可将活性为5000～50000EU/ml的内毒素水平降低到5～0.5EU/ml以下，即降低1000～10000倍。
操作步骤：
提取前请将内毒素清除剂放在冰上冰浴5min，期间翻转瓶子数次使试剂均匀预冷。
1、a)已纯化的质粒DNA内毒素清除：吸取500μl DNA溶液于微型离心管，加入1/10体积3M NaAc pH5.2或1/20体积5M NaCl溶液，冰浴5min。
b)在提取质粒DNA过程中清除内毒素：以碱裂解法提取质粒为例，在加入裂解液和中和液并离心去除碎片之后，吸取含质粒DNA的上清于新离心管中，冰浴5min。
2、加入1/5体积预冷的内毒素清除剂，振荡混匀，溶液变浑浊。
3、冰浴5min，溶液应变清亮。
4、37℃水浴5min，不时振荡，溶液又变浑浊。
5、12000rpm室温离心5min，溶液应分为两相，上层水相含DNA，下层油状相含内毒素。
6、将含DNA的上层水相转移到新管，弃油状相，重复抽提三次，即重复步骤2-6三次。
7、加入 2.5体积无水乙醇，-20℃沉淀30min或过夜；12000rpm离心10min，弃上清；加入70％乙醇洗涤沉淀，12000rpm离心5min弃上清；空气干燥沉淀，加入100～200μl无内毒素的高纯水或TE溶解沉淀。
8、用内毒素检测试剂测定样品中内毒素活性，并与初始样品比较。
注意事项：
1、DNA浓度>1mg/ml时清除内毒素效率降低。
由于DNA和蛋白质本身的性质，清除程序可导致10-20％的DNA丢失，所幸的是与清除内毒素的艰难相比DNA更容易提取制备。
2、所有溶液应用无内毒素的高纯水配制，所有器械材料均应不含内毒素，玻璃器皿可高温烘烤，非挥发性水溶液可高压120℃高温处理。
相关试剂：
D1140无内毒素质粒小量提取试剂盒
D1150无内毒素质粒大量提取试剂盒
12100DMEM(H)
24800通用细胞冻存液Solarbio。