分离线粒体
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从细胞、组织中分离线粒体——差速离心法
所需缓冲液：
RSB（使细胞膨胀的低渗缓冲液）
10mM NaCl（Mr=58.44）
2.5mM MgCl2（Mr=20
3.3）
10mM Tris-Cl（PH8.0）
调PH值至7.4
配法：0.5844g NaCl，0.5083g MgCl2·6H2O，10ml 1M Tris-Cl（PH8.0），调PH值至7.4，加水定容至1000ml。
2.5×MS缓冲液（MS缓冲液是用来保持细胞器张力的等渗缓冲液）
525mM甘露醇（Mr=182.17）
175mM 蔗糖（Mr=342.3）
12.5mM Tris-Cl（PH8.0）
2.5mM EDTA（PH8.0）
调PH值至7.4
配法：19.13g甘露醇，11.98g蔗糖，加150ml水溶解，加2.5ml 1M Tris-Cl（PH8.0），1ml 0.5M EDTA（PH8.0），用1M HCl调PH值至7.4，加水定容至200ml。
1×MS缓冲液
210mM甘露醇
70mM 蔗糖
5mM Tris-Cl（PH8.0）
1mM EDTA（PH8.0）
调PH值至7.4
配法：38.26g甘露醇，23.96g蔗糖，加800ml水溶解，加5ml 1M Tris-Cl（PH8.0），2ml 0.5M EDTA（PH8.0），用1M HCl调PH值至7.4，加水定容至1000ml。
注意事项：
溶液、离心管应在冰上预冷，所有离心步骤都要在40C进行。
从细胞中分离线粒体：
1．消化贴壁细胞，加5ml培液，转入10ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，加5ml PBS，1000rpm离心5min，弃上清；悬浮细胞直接转入10ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，加5ml PBS，1000rpm离心5min，弃上清。
2．用3ml冰上预冷的RSB重悬细胞，让细胞膨胀10min，加3×61uL PMSF贮液，在冰上匀浆，转速不宜过快。
3．细胞一破碎，立刻加入2ml 2.5×MS缓冲液至终浓度为1×MS。
4．750g离心10min以去除细胞核、未破碎的细胞和大的膜碎片。
5．将上清转移至另一离心管中，重沉淀细胞核一次。
6．将上清转移至另一离心管中，10000g离心20min沉淀线粒体。
7．弃上清，用1 ml 1×MS缓冲液重悬沉淀，750g离心10min，取上清，10000g离心20min，弃上清，用适当体积的1×MS缓冲液重悬沉淀。
从组织中分离线粒体
1．取组织，切成小块，用1×MS缓冲液漂洗以除去血液，转移至10ml离心管中，加入5ml 1×MS匀浆缓冲液，再加5×61uL PMSF贮液，在冰上匀浆。
2．750g离心10min，将上清转移至另一离心管中，重沉淀细胞核两次。
3．收集上清，10000g离心20min以沉淀线粒体。
4．弃上清，用1 ml 1×MS缓冲液重悬沉淀，750g离心10min，取上清，10000g离心20min，弃上清，用适当体积的1×MS缓冲液重悬沉淀。