一种新的乙肝诊断血清免疫学指标 乙肝病毒大蛋白
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?Neurath AR, Kent SB, Strick N, Parker K. Delineation of contiguous determinants essential for biological functions of the pre-S sequence of the hepatitis B virus envelope protein: its antigenicity, immunogenicity and cell-receptor recognition. Ann Inst Pasteur Virol. 1988 Jan-Mar;139(1):13-38.
一种新的乙肝诊断血清免疫学指标 －－－－乙肝病毒大蛋白
乙型肝炎流行现状
? 乙型肝炎是一个严重的公共卫生问题。 ? 全球60亿人口中，约 1/2人口生活在 HBV高流行区， ? 约20亿人证明有HBV感染，3～4亿人为HBV慢性感
染，其中25%～40% 最终将死于肝硬化和肝癌。 ? 全球前10位疾病死因中乙肝占第 7位，每年因乙肝死
抗病毒治疗效果监测
? 临床上用于抗病毒治疗的药物
?干扰素 ?核苷类似物
抗病毒治疗效果监测
? 临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。
? 以HBV DNA阴转作为治疗的终点不恰当， 此时停药病情易反复。
乙肝病毒实验室检测的缺陷
抗病毒治疗效果评价血清学指标缺乏
临床上评价抗乙肝病毒治疗效果时存在一个很大的问题，即其评价指标 主要是肝功能的改善与否、血清乙肝病毒DNA水平的变化以及肝组织的病理学 改变等。诚然，这些指标对临床医生判断患者病情而言非常重要和实用，也 是临床医生选用抗乙肝病毒药物时的依据，
蛋白 ? 2004年 实验室成功构建针对构象型抗原的单克隆抗
体 ? 2005年 国内公司成功研制乙肝表面抗原大蛋白酶联
免疫定量试剂盒
Hepatitis B——乙型肝炎
源自文库
HBV模型
HBV包膜蛋白
HBV的表面抗原的组成
HBV病毒结构成分
HBV-LP 与病毒复制密切相关
HBV
Dane 管形
L-HBs 大蛋白 存在 存在
?(1) 持续免疫压力导致突变株选择； ? (2)长期治疗导致病毒变异； ?(3) 前C和C启动子变异； ?(4) 检测方法的灵敏度提高。
HBeAg阴性活动期肝炎
HBeAg 阴性活动期肝炎临床诊断现状：
? (1) 传统“两对半”指标不能反映此类患者HBV复制程度； ? (2) 缺乏指导合理治疗的指标； ? (3) HBV DNA检测不易于各级医疗机构广泛开展； ? (4) 临床上急需能够反映HBV复制程度及指导治疗的指标。
? 采用病毒样颗粒制作针对构象结构的高活性抗体 ? 同时检测前 S1和前S2 ? 进行定量检测，用于评估抗病毒治疗效果和预后 ? 诊断HBeAg阴性活动期肝炎的唯一血清学指标 ? 评估治疗效果及判定治疗终点唯一血清学指标 ? 大蛋白完全消退意味患者预后良好
乙肝病毒包膜蛋白研究进展
? 1995-2004 年 发现大蛋白前 S区有复杂构象结构 ? 1996年 发现大蛋白具有反式激活病毒复制的作用 ? 2002年 发现导致肝细胞病变及凋亡的主要原因是大
乙肝病毒大蛋白和 Pre-S区的研究
? HBV病毒颗粒表面的PreS已经被证实具有独立 的结构域和天然构象
? 很多研究致力于表达并观测PreS的结构，但是 极少成功。其原因是单独表达的PreS很容易被 蛋白酶所降解。
?Prange R, Streeck RE. Novel transmembrane topology of the hepatitis B virus envelope proteins. EMBO J 1995; 14: 247- 256 ?Lambert C.et al. Assessment of determinants affecting the dual topology of hepadnaviral lare envelope proteins J.General Virology 2004 85,1221-1225.
HBeAg阴性活动期肝炎
? HBeAg阴性乙肝与HBeAg阳性乙肝不同点：
? (1)慢性肝炎病情不减轻； ? (2)生化学和病毒学标志反复升高； ?(3) 可30～40年无症状； ?(4) 约45岁左右发生肝硬化； ?(5) 10年后约25%发生并发症。
HBeAg阴性活动期肝炎
HBeAg 阴性的慢性乙肝流行率升高原因：
亡约75万例
中国乙型肝炎流行现状
? (一) HBeAg阴性活动期肝炎增多 ? (二) HBV变异株增加HBV的突变率较高，
HBeAg阴性活动期肝炎
? 临床特点：
?(1) 转为肝硬化和肝癌比例较大； ?(2) 与年龄相关：患者年龄较大； ?(3) 疾病自发或持续减轻极少发生； ?(4) 何时停药难以确定； ?(5) 治疗后复发率高。
球型 不含
M-HBs中蛋白 存在 存在 1%含量 S-HBs小蛋白 存在 存在 存在
血流中的分布
仅病毒复制期存 在
非复制期少量存 在 存在
根据检测血液中大蛋白的有无，判断病毒携带者体内的HBV病毒是否在进行复制。
乙肝病毒大蛋白和 Pre-S区的研究
乙肝病毒包膜蛋白 preS特性:
(1)暴露在病毒颗粒表面 (2)高免疫原性 (3)参与了病毒与细胞受体的相互作用 (4)诱导抗感染的保护性抗体的产生
乙肝病毒大蛋白和 Pre-S区的研究
(A)内质网（ER）膜上乙肝大蛋白的拓扑结构模型 。 (B)病毒体包膜上的乙肝大蛋白的拓扑结构模型。
Volker Bruss, Xuanyong Lu1, Reiner Thomssen and Wolfram H.Gerlich'.Post-translational alterations in transmembrane topology of the hepatitis B virus large envelope protein. The EMBO Journal vol.13 no.10 pp.2273-2279, 1994
然而对于何时停用抗病毒药物、停用抗病毒药物后 乙肝病毒是否会重新复制活跃导致乙肝复发则缺乏客观 而有效的指标。
乙型肝炎血清学诊断技术 新突破
乙肝病毒大蛋白（HBV-LP）前S区 酶免定量试剂盒
?
-------直接定量检测乙肝大蛋白
?
-------不用分开检测前S1和前S2
HBV-LP 诊断试剂新颖之处
一种新的乙肝诊断血清免疫学指标 －－－－乙肝病毒大蛋白
乙型肝炎流行现状
? 乙型肝炎是一个严重的公共卫生问题。 ? 全球60亿人口中，约 1/2人口生活在 HBV高流行区， ? 约20亿人证明有HBV感染，3～4亿人为HBV慢性感
染，其中25%～40% 最终将死于肝硬化和肝癌。 ? 全球前10位疾病死因中乙肝占第 7位，每年因乙肝死
抗病毒治疗效果监测
? 临床上用于抗病毒治疗的药物
?干扰素 ?核苷类似物
抗病毒治疗效果监测
? 临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。
? 以HBV DNA阴转作为治疗的终点不恰当， 此时停药病情易反复。
乙肝病毒实验室检测的缺陷
抗病毒治疗效果评价血清学指标缺乏
临床上评价抗乙肝病毒治疗效果时存在一个很大的问题，即其评价指标 主要是肝功能的改善与否、血清乙肝病毒DNA水平的变化以及肝组织的病理学 改变等。诚然，这些指标对临床医生判断患者病情而言非常重要和实用，也 是临床医生选用抗乙肝病毒药物时的依据，
蛋白 ? 2004年 实验室成功构建针对构象型抗原的单克隆抗
体 ? 2005年 国内公司成功研制乙肝表面抗原大蛋白酶联
免疫定量试剂盒
Hepatitis B——乙型肝炎
源自文库
HBV模型
HBV包膜蛋白
HBV的表面抗原的组成
HBV病毒结构成分
HBV-LP 与病毒复制密切相关
HBV
Dane 管形
L-HBs 大蛋白 存在 存在
?(1) 持续免疫压力导致突变株选择； ? (2)长期治疗导致病毒变异； ?(3) 前C和C启动子变异； ?(4) 检测方法的灵敏度提高。
HBeAg阴性活动期肝炎
HBeAg 阴性活动期肝炎临床诊断现状：
? (1) 传统“两对半”指标不能反映此类患者HBV复制程度； ? (2) 缺乏指导合理治疗的指标； ? (3) HBV DNA检测不易于各级医疗机构广泛开展； ? (4) 临床上急需能够反映HBV复制程度及指导治疗的指标。
? 采用病毒样颗粒制作针对构象结构的高活性抗体 ? 同时检测前 S1和前S2 ? 进行定量检测，用于评估抗病毒治疗效果和预后 ? 诊断HBeAg阴性活动期肝炎的唯一血清学指标 ? 评估治疗效果及判定治疗终点唯一血清学指标 ? 大蛋白完全消退意味患者预后良好
乙肝病毒包膜蛋白研究进展
? 1995-2004 年 发现大蛋白前 S区有复杂构象结构 ? 1996年 发现大蛋白具有反式激活病毒复制的作用 ? 2002年 发现导致肝细胞病变及凋亡的主要原因是大
乙肝病毒大蛋白和 Pre-S区的研究
? HBV病毒颗粒表面的PreS已经被证实具有独立 的结构域和天然构象
? 很多研究致力于表达并观测PreS的结构，但是 极少成功。其原因是单独表达的PreS很容易被 蛋白酶所降解。
?Prange R, Streeck RE. Novel transmembrane topology of the hepatitis B virus envelope proteins. EMBO J 1995; 14: 247- 256 ?Lambert C.et al. Assessment of determinants affecting the dual topology of hepadnaviral lare envelope proteins J.General Virology 2004 85,1221-1225.
HBeAg阴性活动期肝炎
? HBeAg阴性乙肝与HBeAg阳性乙肝不同点：
? (1)慢性肝炎病情不减轻； ? (2)生化学和病毒学标志反复升高； ?(3) 可30～40年无症状； ?(4) 约45岁左右发生肝硬化； ?(5) 10年后约25%发生并发症。
HBeAg阴性活动期肝炎
HBeAg 阴性的慢性乙肝流行率升高原因：
亡约75万例
中国乙型肝炎流行现状
? (一) HBeAg阴性活动期肝炎增多 ? (二) HBV变异株增加HBV的突变率较高，
HBeAg阴性活动期肝炎
? 临床特点：
?(1) 转为肝硬化和肝癌比例较大； ?(2) 与年龄相关：患者年龄较大； ?(3) 疾病自发或持续减轻极少发生； ?(4) 何时停药难以确定； ?(5) 治疗后复发率高。
球型 不含
M-HBs中蛋白 存在 存在 1%含量 S-HBs小蛋白 存在 存在 存在
血流中的分布
仅病毒复制期存 在
非复制期少量存 在 存在
根据检测血液中大蛋白的有无，判断病毒携带者体内的HBV病毒是否在进行复制。
乙肝病毒大蛋白和 Pre-S区的研究
乙肝病毒包膜蛋白 preS特性:
(1)暴露在病毒颗粒表面 (2)高免疫原性 (3)参与了病毒与细胞受体的相互作用 (4)诱导抗感染的保护性抗体的产生
乙肝病毒大蛋白和 Pre-S区的研究
(A)内质网（ER）膜上乙肝大蛋白的拓扑结构模型 。 (B)病毒体包膜上的乙肝大蛋白的拓扑结构模型。
Volker Bruss, Xuanyong Lu1, Reiner Thomssen and Wolfram H.Gerlich'.Post-translational alterations in transmembrane topology of the hepatitis B virus large envelope protein. The EMBO Journal vol.13 no.10 pp.2273-2279, 1994
然而对于何时停用抗病毒药物、停用抗病毒药物后 乙肝病毒是否会重新复制活跃导致乙肝复发则缺乏客观 而有效的指标。
乙型肝炎血清学诊断技术 新突破
乙肝病毒大蛋白（HBV-LP）前S区 酶免定量试剂盒
?
-------直接定量检测乙肝大蛋白
?
-------不用分开检测前S1和前S2
HBV-LP 诊断试剂新颖之处