微生物-金黄色葡萄球菌
食品微生物学检验金黄色葡萄球菌
引用的作品
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血浆凝固酶实验
血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到5 mLBHI和营养琼脂小斜面，36 ±1℃培养18 h～24 h 。 取新鲜配置兔血浆0.5 mL ，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2mL～0.3mL ，振荡摇匀，置 36 ±1℃温箱或水浴箱内。 每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置 时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。 同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为 对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36±1℃培 养18 h～48h ，重复试验。
第二法金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计 数
结果
列出完成实验所使用的所有步骤。 切记要为步骤加编号。 添加实验照片。
第三法 金黄色葡萄球菌MPN计数
最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释 培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优 势，但却具有特殊生理功能的类群 其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆 脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断 该类群微生物的存在和丰度。本法特别适合于测定土壤微生 物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫 化和反硫化细菌等。）的数量和检测污水、牛奶及其他食品 中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进 行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因 不能使用平板计数时才采用。 MPN法原理与局限C:\Users\华侃\Desktop\MPN法的原理与局 限性分析.pdf
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌1 简述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为葡萄球菌属中的一种，广泛分布于自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。
本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中重要的病原菌。
本菌抵抗力较强，干燥情况下能生存数月，80℃30min的条件下尚能存活，5%石炭酸或0.1%升汞溶液10～15min才会被杀死。
金黄色葡萄球菌检查按增菌、分离、纯培养、革兰染色、镜检和血浆凝固酶试验等步骤进行。
本法使用于外用药品及一般滴眼剂、眼膏剂的检查。
2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。
3 试液、指示液3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2无菌磷酸盐缓冲液[附录3.1，3.5]。
3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[附录3.2]。
3.3 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。
3.4 无菌枸橼酸纳氯化钠溶液[附录2.7]。
3.5 血浆的制备以无菌注射器吸取灭菌的5%枸橼酸纳的0.9%的氯化钠溶液1ml，用无菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml，轻轻混匀数分钟。
待血液不凝固时，徐徐放入灭菌离心管中，及时离心（500r/min离心5min0，分离血浆，用灭菌吸管将血浆转移至灭菌试管中，置冰箱备用。
临用前必须用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌（如金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]测试，证明血浆合格后，方可用于试验。
3.6 1%酚磺酞指示液[附录4.4]。
4 培养基4.1 营养肉汤培养基[附录5.1]。
4.2 营养琼脂培养基[附录5.2]。
4.3 亚碲酸盐肉汤培养基[附录5.15]。
4.4 卵黄氯化钠琼脂培养基[附录5.16]。
4.5 甘露醇氯化钠琼脂培养基[附录5.17]。
5 对照用菌液取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基中，36℃±1℃培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液，按10倍递增稀释至1:106，加入含10～100cfu的对照菌菌液（一般用量为1:1060.1ml），同时用营养琼脂平板计数。
实验十二金黄色葡萄球菌(共40张PPT)
公式二
A1B1/C1=155×3÷5=93 A2B2/C2=17×4÷5=14
T=(93+14)/1.1d=127÷1.1÷0.1=970
结果报告
单位:cfu/g或cfu/mL 如T值为0，报告 ＜1× d cfu/mL
（g）。
检样
检样25g(mL)+ 225ml灭菌生理盐水，均质。
取新鲜配置兔血浆 0.
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比 3 mL，振荡摇匀，置 36 ±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积
大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙 并干燥。
典型菌落计数和确认
品匀液接种到10%NaCl 胰蛋白胨大豆肉汤管，每个稀释度接种3管，将上述接种物36℃±1℃培养，45h～48h。
平板和血平板， 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h A2B2/C2=17×4÷5=14
Baird-Parker平板
～24 h。Baird-Parker平板 36 ℃±1 ℃培养 18 Baird-Parker平板，血平板
B-P平板18h~24h或45h~48h 也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 用于做血浆凝固酶的菌落数
将上述培养物， 分别划线接种到 Baird-Parker 取新鲜配置兔血浆 0.
根据对样品污染状况的估计，选择3个适宜稀释度 的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样
3.9 革兰氏染色液：见附录 A中 。 3.10 无菌生理盐水：见附录 A中 。
四、实验内容及操作
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图
医学金黄色葡萄球菌PPT
表皮剥落脱毒素B 1971
33000
7.0
染色体 质粒
烫伤样皮肤 综合症
剥落性皮炎
中毒性休克综合症 1981
24000
7.0
毒素 （TSST-1）
转座子
毒性休克综 合症
金黄色葡萄球菌肺炎（staph
ylococcus aureus pneumonia） 是由 金黄色葡萄球菌（一般为凝固酶阳性） 所致的肺炎。由于滥用抗生素的结果， 抗药性金黄色葡萄球菌的菌株明显增加， 金黄色葡萄球菌感染也见增多。本病大 多并发于葡萄球菌败血症，多见于幼婴 及新生儿，年长儿也可发生。
生物学特性
❖ 形态与染色
典型的金黄色葡萄球菌为球 型，直径0.8μm左右，显微 镜下排列成葡萄串状。
A蛋白已广泛应用于细菌、 病毒等病原诊断及分析等方 面。
其细胞壁含有3种主要成分： 核糖醇磷壁酸、肽聚糖和A 蛋白（SPA）。
金黄色葡萄球菌A蛋白
金黄色葡萄球菌无芽 孢、鞭毛，大多数无 荚膜。
革兰氏染色阳性。
❖ 为检测食品中的SAU, 国内外常用的微生物定量方法有平板 计数法、细菌磷酸酶活性定量法、MPN-PCR 法等, 这些方 法耗时费力、特异性不强、需要PCR后处理。
❖ 另一种定量方法是荧光定量PCR , 该方法能够定量测定DNA 的含量, 因此也具有对微生物进行计数的能力。但许多食品 基质、培养基等都可能对PCR 有抑制作用, 导致假阴性结果, 这是荧光定量PCR全面引入常规食品分析的一大障碍。
金
分类地位
黄 色
生物学特性
葡 萄
功能/危害
球
作用机理
菌
最新研究进展
球菌 金黄色葡萄球菌
细菌 杆菌
金黄色葡萄球菌的检查
金黄色葡萄球菌的检查同学们，这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。
金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。
本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤。
看，这就是金黄色葡萄球菌，它是一种革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。
该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。
所以，国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌，检验金黄色葡萄球菌有重要意义。
金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示，与之前讲述过的其他控制菌的检查一样：在完成培养基的配制和供试品的处理后，用营养肉汤于30～35℃增菌培养18～24小时，必要时可延至48小时。
增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。
接着，进行分离纯化，其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。
以接种环沾取以接种环沾取1～2环培养液，划线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置30～35℃培养24～72小时。
当阳性对照平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表中所列特征，可判为未检出金黄色葡萄球菌。
若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别接种于营养琼脂斜面上，于30～35℃培养18～24小时，取其培养物做以下检查。
1. 革兰染色镜检革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征：金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，无荚膜。
排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列，菌体较小。
2. 血浆凝固酶试验金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血浆凝固。
检查时，轻轻将试管倾斜（动作勿大），仔细观察，阴性对照管血浆应流动自如，阳性对照管血浆应凝固状，若试验管液血浆凝固为血浆凝固酶试验阳性；否则为阴性。
食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
免疫学方法
抗原制备
从金黄色葡萄球菌中提取特异性抗原，制备 成免疫原。
抗体制备
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过凝集 反应、沉淀反应等方法检测样品中的金黄色
葡萄球菌。
抗原抗体反应
将免疫原注射到动物体内，刺激机体产生特 异性抗体。
结果判定
根据反应结果判断样品中是否含有金黄色葡 萄球菌。
分子生物学方法
食品中微生物的检测-金黄 色葡萄球菌检验
目录
• 引言 • 金黄色葡萄球菌概述 • 样品采集与处理 • 微生物学检测方法 • 理化检测方法 • 结果分析与报告 • 质量控制与实验室安全
01
引言
目的和背景
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是一种常见的食品污染源，可引起食物中毒，对公众健康构成威胁。因此，检测食品中的金黄 色葡萄球菌对于保障食品安全具有重要意义。
适量性
根据检测方法和目的，采 集适量样品，以满足检测 需求。
样品保存与运
低温保存
样品应尽快放入低温环境 （如4℃冰箱）中保存，以 减缓微生物的生长速度。
避免反复冻融
尽量避免样品在保存过程 中反复冻融，以免影响微 生物的存活和检测结果的 准确性。
快速运输
样品在运输过程中应保持 低温，并尽快送达实验室 进行检测。
04
微生物学检测方法
传统培养法
增菌培养
将液体样品接种到选择性增菌液 中，于适宜温度下培养一定时间 ，使金黄色葡萄球菌得以增殖。
鉴定
通过观察菌落形态、革兰氏染色 、血浆凝固酶试验等生化特征进 行鉴定。
01
02
样品处理
取适量食品样品，进行均质化处 理，得到均匀一致的液体样品。
03
04
金黄色葡萄球菌(牛肉膏蛋白胨培养基)
金黄色葡萄球菌（牛肉膏蛋白胨培养基）一、生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 ^m左右，显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37。
C，最适生长pH7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15% NaCI肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素, 还原硝酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
二•流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因而，食品受其污染的机会很多。
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占4 5% ,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83% ,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。
肠毒素形成条件：存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。
具体步骤如下：
1. 培养：将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。
金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。
2. 鉴定：通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。
金黄色葡萄球菌一般具有以下特征：
- 革兰氏染色：呈阳性，即菌体呈紫色。
- 非运动性：无鞭毛或鞭毛不活跃。
- 产生黄色色素：金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素，使得菌落呈现金黄色。
3. 确认：通过进一步的检测，如凝胶酶试验和DNA鉴定等，来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。
通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。
GB金黄色葡萄球菌检验
GB使用的培养 基（中文名称） Baird-Parker琼 脂 GB使用的培养基（ 英文名称）
Oxoid英文名称
Baird-Parker Agar Base Egg Yolk Tellurite Emulsion Blood Agar Plate Brain Heart Infusion Broth Nutrient Agar
R21051 冻干凝固酶血浆 R21052 R21060 Staphytect Plus加强型金葡 菌鉴定试剂盒
鉴定 Staphytect Plus
DR0850M
RapID STAPH Plus
7
Dryspot 加强型金 黄色葡萄球菌检测 DR0100M 试剂盒 RapID STAPH Plus 葡萄球菌鉴 R8311009 定系统
GB 金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)
• 革兰氏阳性球菌 • 在自然界中无处不在，食品受其 污染机会多 • 中毒食品种类多，如奶、肉、蛋 、鱼及其制品 • 可导致急性肠胃炎
2
《GB 4789.10 -2010 食品卫生微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 》
Blood Agar Brain Heart Infusion Broth,BHI Nutrient Agar
10块/ 包
500g 500g 5ml 15ml 25ml 6×5m l 100试 验 120测试
兔血浆
Rabbit Plasma
Coagulase Plasma (lyophilised)
Oxoid中文名称
Baird-Parker琼 脂基础 卵黄亚碲酸盐乳 液 血琼脂平板 脑心浸出液肉汤 营养琼脂
货号
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界中，同时也是人体皮肤和黏膜的正常微生物。
金黄色葡萄球菌也是人体病原微生物中的一种，并且可以引起一系列的感染疾病，包括皮肤感染、肺炎、败血症等严重疾病。
及时、准确地检测金黄色葡萄球菌对于预防和控制与该菌相关的疾病具有重要意义。
金黄色葡萄球菌的检验技术主要包括细菌培养、生化鉴定、药敏试验等，下面将对这些技术进行介绍。
一、细菌培养1. 培养基金黄色葡萄球菌主要可在营养琼脂、大豆肉汤琼脂、牛肉心脏培养基等细菌培养基上生长。
营养琼脂是最常用的培养基，可用于对金黄色葡萄球菌的初步筛查。
2. 培养条件金黄色葡萄球菌在37°C下培养24-48小时，产生充分的菌落。
3. 形态特征金黄色葡萄球菌在琼脂培养基上可形成金黄色的圆形菌落，直径一般在1-2mm左右。
二、生化鉴定1. 皮肤试验皮肤试验是金黄色葡萄球菌的特异性鉴定方法之一，又称为凝集素试验。
通过皮肤试验，可以判断金黄色葡萄球菌是否具有产生凝集素的能力。
2. 协和试验协和试验又称凝集酶试验，是用于检测金黄色葡萄球菌产生凝集酶的一种生化试验。
该试验通过将金黄色葡萄球菌的培养液加入到含有凝集酶专一底物的试管中，观察底物被溶解的情况，用于判断金黄色葡萄球菌是否产生凝集酶。
3. 床旋试验床旋试验又称为巯基甲酸盐试验，是一种利用巯基甲酸盐来检测金黄色葡萄球菌的特异性试验。
通过观察琼脂培养基上金黄色葡萄球菌菌落周围出现的红色环的形成情况，判断金黄色葡萄球菌是否产生巯基甲酸盐酶。
4. 溶血酶试验溶血酶试验是一种通过检测金黄色葡萄球菌产生的溶血酶来鉴定其特性的生化试验。
溶血酶试验主要有两种方法：血凝素试验和牛血红蛋白试验。
这两种方法都是通过观察金黄色葡萄球菌对红细胞造成的溶血现象来判断其产生的溶血酶。
三、药敏试验药敏试验是检测金黄色葡萄球菌对抗生素的敏感性的一种方法。
金黄色葡萄球菌护理
患者康复情况
感染控制：金黄色 葡萄球菌感染的控 制情况
症状缓解：患者症 状的缓解程度
康复时间：患者康 复所需的时间
并发症发生率：患 者康复过程中并发 症的发生情况
1
2
3
4
护理质量评价
护理效果评估：评估护
01
理措施对金黄色葡萄球
菌感染的治疗效果
护理质量指标：包括感
04
加强营养支持： 保证患者摄入足 够的营养和水分， 增强抵抗力
03
合理使用抗生素： 根据病情和药敏 试验结果选择合
适的抗生素
护理效果评估
感染控制情况
感染率降低：金黄 色葡萄球菌感染的 发生率降低
患者康复速度加快： 患者康复速度加快， 缩短住院时间
抗生素使用减少： 抗生素使用量减少， 降低耐药性风险
金黄色葡萄球菌护理
刀客特万
目录
01. 金 黄 色 葡 萄 球 菌 简 介
02. 护 理 策 略 与 方 法
03. 护 理 效 果 评 估
金黄色葡萄球菌简介
微生物分类
属于革 兰氏阳
性菌
属于葡 萄球菌
属
常见于皮 肤、呼吸 道、消化 道等部位
具有较强 的耐药性， 容易引起
感染
生长环境
02
适宜生长温度： 37℃
治疗方案
抗生素治疗：选择敏感抗生 素，如青霉素、头孢类等
A
营养支持：补充营养，提高 免疫力
C
B
局部护理：保持伤口清洁， 避免感染扩散
D
观察病情：密切观察病情变 化，及时调整治疗方案
护理操作要点
保持清洁卫生： 勤洗手、勤换衣、 勤消毒
微生物检测技术-金黄色葡萄球菌检测
国内检测标准
GB 4789.10-2010
食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
GB/T 20944.32008
食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素的测定 第3部分：黄曲霉毒素 M1的测定
GB/T 23511.42008
食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定 第4部分：脱氢乙酸含量的 测定
样品中的快速检测。
纳米技术
纳米材料如纳米金、纳米孔等在 金黄色葡萄球菌检测中展现出巨 大潜力，具有高灵敏度、低检测
限和快速响应等优点。
未来研究方向
开发更高效、特异性的检测方法
01
针对金黄色葡萄球菌的不同表型和基因型，开发更高效、特异
性的检测方法，提高检测的准确性和可靠性。
集成化与自动化
02
将多种检测方法集成于一体，实现金黄色葡萄球菌的自动化检
治疗方案的选择。同时，对于流行病学调查和疾病监测也具有重要意义。
05
CATALOGUE
金黄色葡萄球菌检测技术展望
新技术发展与应用
基因组学技术
利用全基因组测序技术，能够快 速准确地检测金黄色葡萄球菌，
并识别其耐药性和毒力基因。
生物传感器技术
生物传感器能够实时、快速地检 测金黄色葡萄球菌，具有高灵敏 度和特异性，适用于食品和环境
测，提高检测效率，降低人工误差。
多重耐药性研究
03
深入研究金黄色葡萄球菌的多重耐药性机制，为遏制耐药性的
传播提供科学依据和技术支持。
对公共卫生的影响与意义
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，通过改进检测技 术，能够及时发现和控制食品中的污染，保障公众的食品 安全。
预防疾病传播
金黄色葡萄球菌简介
金黄色葡萄球菌【微生物特征】金黄色葡萄球（Staphylococcus aureus）菌隶属于萄球菌属，为凝固酶阳性葡萄球菌，革兰染色阳性，呈单、双、短链或不规则葡萄串样排列（图1A，XXX倍下电镜照片）。
在血琼脂平板上菌落通常呈金黄色（图1B，37℃条件下平板培养几天），周围有明显的β溶血环（图1C）。
C图1. 金黄色葡萄球菌图1-1-1 A: 金黄色葡萄球菌。
B：血琼脂平板培养菌落照片；C：血琼脂平板培养菌落的β溶血环【临床意义】金黄色葡萄球菌主要寄生在人鼻腔，尤其是鼻前庭后部，是一种重要的机会性病原菌，其引起的人类疾病主要包括化脓性和毒素性两种类型：1.化脓性感染以脓肿形成为主，多数发生在皮肤组织，可表现为毛囊炎、疖、痈、伤口化脓以及脓肿等。
也可以引起深部脏器的脓肿或化脓性感染，如气管炎、肺炎、脓胸、中耳炎、骨髓炎等。
若皮肤原发化脓灶受到外力挤压或机体抵抗力下降，则会引起败血症，脓毒血症等；2.金黄色葡萄球菌产生外毒素可引起人体毒素性疾病。
如果摄入产生肠毒素的金黄色葡萄球菌污染的食物后，可造成急性胃肠炎的症状，即食物中毒。
其他还可引起烫伤样皮肤综合征以及毒性休克综合征，若不及时治疗病死率均较高。
【常见感染部位】皮肤、软组织、骨骼肌肉系统等。
【药物敏感性】“CHINET中国细菌耐药监测网”2021数据显示：甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的检出率为30%，该菌对青霉素、左氧氟沙星、克林霉素的耐药率为92.2%、14.2% 和32.6%，未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药的金黄色葡萄球菌。
【主要耐药机制】耐甲氧西林金黄色葡萄球（MRSA），因其获得mecA基因或其它同系物，编码青霉素结合蛋白（PBP）、形成PBP2a，降低β-内酰胺抗生素活性，表现出对所有β-内酰胺类药物包括青霉素类、碳青霉烯类和头孢菌素类（除外具有抗MRSA活性的第五代头孢菌素如头孢罗膦）耐药。
【临床治疗】1.葡萄球菌的治疗包括迅速予以抗菌治疗和控制感染源，如去除与感染有关的血管导管和在有脓肿时行手术引流等操作；2.甲氧西林(苯唑西林)敏感葡萄球菌认为对下列抗菌药物也敏感：（1）β-内酰胺合剂(阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦)；（2）口服头孢烯类(头孢克洛、头孢地尼、头孢氨苄、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢呋辛、氯碳头孢)；（3）注射头孢烯类包括一、二、三和四代头孢菌素类(头孢孟多、头孢唑林、头孢吡肟、头孢美唑、头孢尼西、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢替坦、头孢唑肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢罗膦、拉氧头孢)；（4）碳青霉烯类(多立培南、厄他培南、亚胺培南、美罗培南)；3.除头孢罗膦外，甲氧西林(苯唑西林)耐药金黄色葡萄球菌对目前所有β-内酰胺类药物耐药，其所致感染的治疗首选万古霉素，次选治疗药物包括替考拉宁、利奈唑胺、达托霉索、特拉万星，头孢罗膦等。
食品微生物检验：葡萄球菌
凝固酶较耐热，在l00℃
5、溶纤维蛋白酶
可使人、犬、豚鼠及家兔的已经凝固的纤维蛋白溶
解。溶纤维蛋白酶是一种激酶，可激活血浆蛋白酶原
成为血浆蛋白酶而使纤维蛋白溶解。
凝固酶及溶纤维蛋白酶可在含有血浆的琼脂平板内
同时测定。初次培养后，菌落周围若出现一个不透明 圈，表示产生凝固酶，继续培养时，不透明圈消失， 说明为溶纤维蛋白酶作用的结果。
（一）形态与染色
典型的葡萄球菌呈球形，直径0.4µm-1.2µm，致病性葡萄
球菌一般较非致病性菌小，且各个菌体的大小及排列也较整
齐。细菌繁殖时呈多个平面的不规则分裂，堆积成为葡萄串
状排列。
在液体培养基中生长，常呈双球或短链状排列，易误认为
链球菌。葡萄球菌无鞭毛及芽胞，一般不形成荚膜，易被碱 性染料着色，G+，当衰老、死亡或被白细胞吞噬后常转为革
食品中致病性球菌的检验
一、金黄色葡萄球菌的检验 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲 料、食品（剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动 物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病的腐物 寄生菌，也有一些致病的球菌。
食品中生长有金黄色葡萄球菌，是食品卫生的一种 潜在危险，因为金黄色葡萄球菌可以产生肠毒素，食 后能引起食物中毒。因此，检查食品中金黄色葡萄球 菌有实际意义。
葡萄球菌的致病力决定于细菌产生的毒素
溶血毒素、杀白血球毒素、肠毒素、 血浆凝固酶、溶纤维蛋白酶、透明质酸酶、脱
和酶的能力。
氧核糖核酸酶
1、溶血毒素
多数致病菌株能产生该毒素，使血琼脂平板菌落周 溶血毒素是一种外毒素，根据其对动物细胞的溶血
食品微生物之检验方法-金黄色葡萄球菌之检验
食品微生物之檢驗方法－金黃色葡萄球菌之檢驗1. 適用範圍：本方法適用於食品中金黃色葡萄球菌及其腸毒素（enterotoxins）之檢驗。
2. 檢驗方法2.1. 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。
每15分鐘落菌數不得超過15 CFU／培養皿。
2.2. 器具及材料2.2.1. 乾熱滅菌器。
2.2.2. 高壓滅菌釜。
2.2.3. 冰箱：能維持5 ±3℃者。
2.2.4. 培養箱：能維持內部溫度溫差±1.0℃以內者。
2.2.5. 水浴：能維持水溫溫差±0.2℃以內者。
2.2.6. 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）：能適用於無菌操作者。
2.2.7. 天平：可稱量到2000 g，靈敏度為0.1 g；可稱量到120 g，靈敏度為5 mg。
2.2.8. 顯微鏡：能放大至1000倍之一般光學顯微鏡。
2.2.9. 旋渦混合器（Vortex mixer）。
2.2.10. 離心機：轉速可達3000 rpm以上。
2.2.11. pH測定儀。
2.2.12. 加熱器。
2.2.13. 吸管輔助器（Pipette aid）。
2.2.14. 微量吸管（Micropipette）：10 μL、20 μL、200 μL及1000 μL。
2.2.15. 吸管（Pipette）：已滅菌。
1 mL吸管應有0.01 mL之刻度、5及10 mL吸管應有0.1 mL刻度。
2.2.16. 吸管尖（Tip）：可滅菌。
10 µL、20 µL、200 µL及1000 µL。
2.2.17. 培養皿：已滅菌，內徑約90 mm，深度約15 mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。
2.2.18. 稀釋用容器：無菌袋或有1000 mL、500 mL、99 m及90 mL標記附蓋（栓）之可滅菌廣口瓶。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌， 临床表现多种多样，可引起局部化脓感染，也可引起肺 炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
葡萄球菌皮肤感染
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序——分离培养
BP（贝尔德- 帕克）平板：
✓ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素 和矿物元素
✓ 丙酮酸钠是一种生长促进剂 ✓ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有
毒性，并使菌落产生黑色 ✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 ✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制
葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾 病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最 为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。
当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品， 如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经810小时即可相当数量的肠毒素。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 二、检验程序与操作方法
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
一、生物学特性——菌体形态及培养特征
革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.0微米，镜检时呈单个、成 对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色 到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄 色葡萄球菌。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大多数菌株最适生长温度30-37℃，最适pH为7.0-7.5； 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长。
一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或7.5% 氯化钠肉汤增菌。
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Hale Waihona Puke 食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
方法一：试管法 吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入培
养24h的金黄色葡萄球肉浸液肉汤培养物0.5mL，振荡摇 匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观 察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者， 被认为阳性结果。
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作用。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
在BP平板上典型菌落为：灰色到黑玉色，圆形，光 滑突起，湿润，直径2-3mm，边缘常为淡色（米黄色或 灰色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用 接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落，其黑 色常较典型菌落淡些，且外观可能粗燥，质地较干燥。
试管法
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阴性反应
阳性反应
不凝固
少量、 零散凝
固
明显的块 状凝固
巨大块 凝固
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完全凝固， 倒置不流动
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌 株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和 溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放 脂肪酸。在BP平板产生磷脂环。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
生物学特性 ——致 病 性
金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主 要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 d.脱氧核糖核酸酶（DNA酶） e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
根据中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准： 《食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验》 GB 4789.10-94
金黄色葡萄球菌检验
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食品安全检验技术（微生物部分检）样 金色葡萄球菌检验
25g(ml)+225ml灭菌生理盐水
国标：金黄色葡 萄球菌检验程序
直接计数方法
增菌培养方法
Baird-parker（贝尔德- 帕克） 0.3ml、0.3ml、0.4ml
大而突起，圆形，不透明， 表面光滑，有溶血环
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 血平板制作
成分：豆粉琼脂（或营养琼脂）100mL，脱纤维 羊血（或兔血）5-10mL。 制法：加热融化琼脂，冷至50℃，以无菌操作加 入脱纤维羊血或兔血，摇匀，倾注平板。或分装 灭菌试管，摆成斜面。
置37摄氏度培养箱培养24小时。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——分离培养
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血 平板上产生明显的溶血环。 典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆 形，不透明，表面光滑，有溶血环。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 B-P平板
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——鉴定之革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，组成葡萄状
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——鉴定之凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别 的主要试验是测定其凝固酶。
36± 1℃ 24hr
血平板
36± 1℃ 24hr
7．5％氯化钠肉汤或 胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 24hr
血平板 ，Baird-parker
涂片染色
观察溶血
血浆凝固酶试验
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——增菌培养
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15%的 氯化钠），用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤或7.5% 氯化钠肉汤增菌。